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成团泛菌苯丙氨酸氨基变位酶的热稳定性改造
被引量：
1
1
作者
刘辉
张苇苗
+2 位作者
徐建
周丽
周哲敏
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第13期59-64,共6页
来源于原核生物成团泛菌(Pantoea agglomerans)的苯丙氨酸氨基变位酶(PaPAM)可催化α-苯丙氨酸转变为药用价值更高的(S)-β-苯丙氨酸,然而其酶活较低,热稳定性较差,限制其工业应用。本研究突变苯丙氨酸氨基变位酶酶活中心上方loop环上...
来源于原核生物成团泛菌(Pantoea agglomerans)的苯丙氨酸氨基变位酶(PaPAM)可催化α-苯丙氨酸转变为药用价值更高的(S)-β-苯丙氨酸,然而其酶活较低,热稳定性较差,限制其工业应用。本研究突变苯丙氨酸氨基变位酶酶活中心上方loop环上的氨基酸及与其相互作用位点的氨基酸,降低loop环的柔性,以期稳定酶活中心的结构,提高酶的热稳定性。筛选得到热稳定性显著提高的突变体I91M,50℃保温1h后,剩余酶活达到83%(野生型酶酶活仅剩余30%左右)。该结果有助于苯丙氨酸氨基变位酶的理论研究和工业应用。
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关键词
苯丙氨酸氨基变位酶
热稳定性
酶
活
定点突
变
蛋白质改造
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职称材料
成团泛菌苯丙氨酸氨基变位酶的性质表征及用于合成β-苯丙氨酸
被引量：
1
2
作者
朱龙宝
杨瑾
+2 位作者
葛飞
陶玉贵
宋平
《精细化工》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2019年第3期449-454,460,共7页
克隆来源于Pantoea agglomerans的苯丙氨酸氨基变位酶基因(pam),构建表达载体,转入大肠杆菌中进行异源表达,采用亲和层析制备电泳纯的重组酶(PaPAM),用于催化合成β-苯丙氨酸。结果表明:成功克隆得到基因pam,长度为1626bp,编码541个氨...
克隆来源于Pantoea agglomerans的苯丙氨酸氨基变位酶基因(pam),构建表达载体,转入大肠杆菌中进行异源表达,采用亲和层析制备电泳纯的重组酶(PaPAM),用于催化合成β-苯丙氨酸。结果表明:成功克隆得到基因pam,长度为1626bp,编码541个氨基酸长度的PaPAM,构建了大肠杆菌表达载体pET28a-pam,转入E.coliBL21中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍柱亲和层析纯化获得电泳纯的重组PaPAM。MS和NMR表征结果表明,重组PaPAM能异构化a-苯丙氨酸为β-苯丙氨酸,在最适条件下(30℃、pH 9、1.5 mol/L NH_4^+),酶活力达到2.5 kU/g,在30～50℃、pH 8～10下PaPAM具有较高的稳定性,金属离子Na^+、Mg^(2+)、Ca^(2+)、Fe^(3+)对PaPAM的活性影响较小,表面活性剂SDS和Triton100对PaPAM有较强抑制作用,在最佳反应条件下,底物的转化率达到92%。
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关键词
成团泛菌
苯丙氨酸氨基变位酶
β-
苯丙
氨
酸
基因克隆
异源表达
生物工程
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职称材料
题名
成团泛菌苯丙氨酸氨基变位酶的热稳定性改造
被引量：
1
1
作者
刘辉
张苇苗
徐建
周丽
周哲敏
机构
江南大学生物工程学院
工业生物技术教育部重点实验室(江南大学)
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第13期59-64,共6页
文摘
来源于原核生物成团泛菌(Pantoea agglomerans)的苯丙氨酸氨基变位酶(PaPAM)可催化α-苯丙氨酸转变为药用价值更高的(S)-β-苯丙氨酸,然而其酶活较低,热稳定性较差,限制其工业应用。本研究突变苯丙氨酸氨基变位酶酶活中心上方loop环上的氨基酸及与其相互作用位点的氨基酸,降低loop环的柔性,以期稳定酶活中心的结构,提高酶的热稳定性。筛选得到热稳定性显著提高的突变体I91M,50℃保温1h后,剩余酶活达到83%(野生型酶酶活仅剩余30%左右)。该结果有助于苯丙氨酸氨基变位酶的理论研究和工业应用。
关键词
苯丙氨酸氨基变位酶
热稳定性
酶
活
定点突
变
蛋白质改造
Keywords
phenylalanine aminomutase
thermostability
enzyme activity
site-directed mutagenesis
protein modification
分类号
TQ426.97 [化学工程]
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职称材料
题名
成团泛菌苯丙氨酸氨基变位酶的性质表征及用于合成β-苯丙氨酸
被引量：
1
2
作者
朱龙宝
杨瑾
葛飞
陶玉贵
宋平
机构
安徽工程大学生物与化学工程学院
出处
《精细化工》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2019年第3期449-454,460,共7页
基金
国家自然科学基金(31671797)
安徽省高校自然科学基金(KJ2016A801)
安徽工程大学拔尖人才项目(2016BJRC006)~~
文摘
克隆来源于Pantoea agglomerans的苯丙氨酸氨基变位酶基因(pam),构建表达载体,转入大肠杆菌中进行异源表达,采用亲和层析制备电泳纯的重组酶(PaPAM),用于催化合成β-苯丙氨酸。结果表明:成功克隆得到基因pam,长度为1626bp,编码541个氨基酸长度的PaPAM,构建了大肠杆菌表达载体pET28a-pam,转入E.coliBL21中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍柱亲和层析纯化获得电泳纯的重组PaPAM。MS和NMR表征结果表明,重组PaPAM能异构化a-苯丙氨酸为β-苯丙氨酸,在最适条件下(30℃、pH 9、1.5 mol/L NH_4^+),酶活力达到2.5 kU/g,在30～50℃、pH 8～10下PaPAM具有较高的稳定性,金属离子Na^+、Mg^(2+)、Ca^(2+)、Fe^(3+)对PaPAM的活性影响较小,表面活性剂SDS和Triton100对PaPAM有较强抑制作用,在最佳反应条件下,底物的转化率达到92%。
关键词
成团泛菌
苯丙氨酸氨基变位酶
β-
苯丙
氨
酸
基因克隆
异源表达
生物工程
Keywords
Pantoea agglomerans
phenylalanine aminomutase
β-phenylalanine
gene cloning
heterogeneous expression
biological engineering
分类号
TQ460.4 [化学工程—制药化工]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
成团泛菌苯丙氨酸氨基变位酶的热稳定性改造
刘辉
张苇苗
徐建
周丽
周哲敏
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
成团泛菌苯丙氨酸氨基变位酶的性质表征及用于合成β-苯丙氨酸
朱龙宝
杨瑾
葛飞
陶玉贵
宋平
《精细化工》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
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职称材料
已选择
0
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