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Streptomyces maritimus苯丙氨酸变位酶的制备、表征及催化合成β-芳香丙氨酸被引量：1: 1; 作者朱龙宝陶玉贵 +3 位作者葛飞李婉珍刘义堵国成《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2017年第2期206-211,共6页; 克隆Streptomyces maritimus来源的苯丙氨酸变位酶(Sm PAM)基因,并进行异源表达,制备了重组Sm PAM,用于一步合成高附加值的β-芳香丙氨酸.提取S.maritimus的基因组,设计1对特异性引物,采用PCR扩增编码Sm PAM的结构基因pam,与表达载体p E... 展开更多; 关键词苯丙氨酸变位酶 β-芳香丙氨酸基因克隆异源表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

产β-苯丙氨酸变位酶基因工程菌的构建及其发酵条件优化被引量：1: 2; 作者葛飞唐尧 +4 位作者朱龙宝李艺雯段振超马琪森陶玉贵《食品与机械》 CSCD 北大核心 2017年第1期16-21,共6页; 构建β-苯丙氨酸变位酶基因表达重组质粒pET-28apam,并转化大肠杆菌BL21,获得β-苯丙氨酸变位酶基因重组菌。考察培养基初始pH、摇床转速、种龄、发酵时间以及装液量5个因素对β-苯丙氨酸变位酶基因工程菌产酶活性的影响,确定较佳发酵... 展开更多; 关键词重组大肠杆菌产酶条件 β-苯丙氨酸变位酶发酵; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组Taxus chinensis苯丙氨酸变位酶性质表征及R-β-芳香丙氨酸合成被引量：1: 3; 作者丰国强徐文亮 +4 位作者宋平李婉珍陶玉贵葛飞朱龙宝《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第6期82-87,共6页; 为实现酶法合成高附加值的β-苯丙氨酸,首先化学合成来源于紫衫(Taxus chinensis)的苯丙氨酸变位酶(phenylalanine aminomutase,PAM)基因(Tcpam),构建大肠杆菌重组质粒Pet-sumo-Tcpam,转入大肠杆菌中进行异源诱导表达,采用镍柱亲和层析... 展开更多; 关键词紫衫苯丙氨酸变位酶 β-芳香丙氨酸; 在线阅读下载PDF 职称材料

成团泛菌苯丙氨酸氨基变位酶的热稳定性改造被引量：1: 4; 作者刘辉张苇苗 +2 位作者徐建周丽周哲敏《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第13期59-64,共6页; 来源于原核生物成团泛菌(Pantoea agglomerans)的苯丙氨酸氨基变位酶(PaPAM)可催化α-苯丙氨酸转变为药用价值更高的(S)-β-苯丙氨酸,然而其酶活较低,热稳定性较差,限制其工业应用。本研究突变苯丙氨酸氨基变位酶酶活中心上方loop环上... 展开更多; 关键词苯丙氨酸氨基变位酶热稳定性酶活定点突变蛋白质改造; 在线阅读下载PDF 职称材料

成团泛菌苯丙氨酸氨基变位酶的性质表征及用于合成β-苯丙氨酸被引量：1: 5; 作者朱龙宝杨瑾 +2 位作者葛飞陶玉贵宋平《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第3期449-454,460,共7页; 克隆来源于Pantoea agglomerans的苯丙氨酸氨基变位酶基因(pam),构建表达载体,转入大肠杆菌中进行异源表达,采用亲和层析制备电泳纯的重组酶(PaPAM),用于催化合成β-苯丙氨酸。结果表明:成功克隆得到基因pam,长度为1626bp,编码541个氨... 展开更多; 关键词成团泛菌苯丙氨酸氨基变位酶 β-苯丙氨酸基因克隆异源表达生物工程; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名Streptomyces maritimus苯丙氨酸变位酶的制备、表征及催化合成β-芳香丙氨酸被引量：1: 1; 作者朱龙宝陶玉贵葛飞李婉珍刘义堵国成; 机构安徽工程大学生物与化学工程学院西华大学食品与生物工程学院江南大学工业生物技术教育部重点实验室; 出处《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2017年第2期206-211,共6页; 基金国家自然科学基金(批准号:31671797 21506172) 安徽省高校自然科学基金(批准号:KJ2016A801)资助~~; 文摘克隆Streptomyces maritimus来源的苯丙氨酸变位酶(Sm PAM)基因,并进行异源表达,制备了重组Sm PAM,用于一步合成高附加值的β-芳香丙氨酸.提取S.maritimus的基因组,设计1对特异性引物,采用PCR扩增编码Sm PAM的结构基因pam,与表达载体p ET28a连接,构建重组表达质粒p ET28a-pam,转入E.coli BL21中表达,采用亲和层析柱分离纯化重组酶Sm PAM.结果表明,克隆得到编码523个氨基酸长度的Sm PAM基因pam,并在大肠杆菌中实现了高效表达,制得电泳纯的重组Sm PAM.该酶在最适温度30℃,p H=9.0条件下活力达到2.5 U/mg,具有较高的热稳定性和p H稳定性,在60~70℃下保持3 h未见活性下降,在p H=9~11保持24 h,残余酶活力达到98%.Sm PAM具有较宽的底物谱,可催化苯环上携带不同基团的3-芳香丙烯酸合成β-芳香丙氨酸,当苯环上携带吸电子基团时催化反应更易完成,其中2-硝基-β-苯丙氨酸的产率最高,达到93%.; 关键词苯丙氨酸变位酶 β-芳香丙氨酸基因克隆异源表达; Keywords Phenylalanine aminomutase β-Arylalanine Gene cloning Heterologous expression; 分类号 O629 [理学—有机化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名产β-苯丙氨酸变位酶基因工程菌的构建及其发酵条件优化被引量：1: 2; 作者葛飞唐尧朱龙宝李艺雯段振超马琪森陶玉贵; 机构安徽工程大学生物与化学工程学院; 出处《食品与机械》 CSCD 北大核心 2017年第1期16-21,共6页; 基金国家自然科学基金面上项目(编号:31671797) 安徽省高等学校省级自然科学研究重点项目(编号:KJ2016A801) 国家级大学生创新创业训练计划项目(编号:201510363072); 文摘构建β-苯丙氨酸变位酶基因表达重组质粒pET-28apam,并转化大肠杆菌BL21,获得β-苯丙氨酸变位酶基因重组菌。考察培养基初始pH、摇床转速、种龄、发酵时间以及装液量5个因素对β-苯丙氨酸变位酶基因工程菌产酶活性的影响,确定较佳发酵条件为:培养基初始pH 7.0、摇床转速200r/min、发酵时间24h、装液量50mL/500mL、种龄10h。采用Box-Behnken试验设计,选择了种龄、初始pH、发酵时间3个对β-苯丙氨酸变位酶活力影响较大的因素进行响应面优化。优化结果为:在种龄12.8h、初始pH 6.7、发酵时间25.2h条件下,PAM活力达到11.15 U/mL,比优化前酶活4.87U/mL提高了128.9%。; 关键词重组大肠杆菌产酶条件 β-苯丙氨酸变位酶发酵; Keywords Recombinant E coli Enzyme production conditions β-phenylalanine aminomutase fermentation; 分类号 TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组Taxus chinensis苯丙氨酸变位酶性质表征及R-β-芳香丙氨酸合成被引量：1: 3; 作者丰国强徐文亮宋平李婉珍陶玉贵葛飞朱龙宝; 机构安徽工程大学生物与化学工程学院; 出处《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第6期82-87,共6页; 基金国家自然科学基金面上项目(31671797) 安徽工程大学拔尖人才项目(2016BJRC006)。; 文摘为实现酶法合成高附加值的β-苯丙氨酸,首先化学合成来源于紫衫(Taxus chinensis)的苯丙氨酸变位酶(phenylalanine aminomutase,PAM)基因(Tcpam),构建大肠杆菌重组质粒Pet-sumo-Tcpam,转入大肠杆菌中进行异源诱导表达,采用镍柱亲和层析制备电泳纯的重组酶TcPAM,用于催化合成R-β-苯丙氨酸。结果表明:重组质粒Pet-sumo-Tcpam成功在大肠杆菌中实现高效表达,获得可溶性的重组TcPAM,经过亲和层析制备出电泳纯的重组TcPAM。质谱和圆二色谱检测分析结果表明,TcPAM能够催化α-苯丙氨酸异构化为R构型的β-苯丙氨酸。TcPAM在最适温度30℃、pH 9的条件下,酶活力达到4.11 U/mg,金属离子K^(+)、Fe^(2+)和Ca^(2+)对TcPAM的活性影响较小,而Cu^(2+)和Zn^(2+)有强烈抑制性,表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵、十二烷基硫酸钠、Triton X-100和Tween 80对重组酶活力影响较小,相对酶活力保持在90%以上。进一步利用TcPAM催化α-芳香丙氨酸异构合成β-芳香丙氨酸,结果表明:苯环上携带不同基团的α-芳香丙氨酸为底物时,苯环上携带供电子基团比吸电子基团的底物转化率更高,底物的α-氨基容易转移至β位,其中4-MeO-β-苯丙氨酸的产率最高,达到45%,为建立酶法合成R-β-芳香丙氨酸提供了参考。; 关键词紫衫苯丙氨酸变位酶 β-芳香丙氨酸; Keywords Taxus chinensis phenylalanine ainomutase β-arylalanine; 分类号 Q814.9 [生物学—生物工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名成团泛菌苯丙氨酸氨基变位酶的热稳定性改造被引量：1: 4; 作者刘辉张苇苗徐建周丽周哲敏; 机构江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室(江南大学); 出处《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第13期59-64,共6页; 文摘来源于原核生物成团泛菌(Pantoea agglomerans)的苯丙氨酸氨基变位酶(PaPAM)可催化α-苯丙氨酸转变为药用价值更高的(S)-β-苯丙氨酸,然而其酶活较低,热稳定性较差,限制其工业应用。本研究突变苯丙氨酸氨基变位酶酶活中心上方loop环上的氨基酸及与其相互作用位点的氨基酸,降低loop环的柔性,以期稳定酶活中心的结构,提高酶的热稳定性。筛选得到热稳定性显著提高的突变体I91M,50℃保温1h后,剩余酶活达到83%(野生型酶酶活仅剩余30%左右)。该结果有助于苯丙氨酸氨基变位酶的理论研究和工业应用。; 关键词苯丙氨酸氨基变位酶热稳定性酶活定点突变蛋白质改造; Keywords phenylalanine aminomutase thermostability enzyme activity site-directed mutagenesis protein modification; 分类号 TQ426.97 [化学工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名成团泛菌苯丙氨酸氨基变位酶的性质表征及用于合成β-苯丙氨酸被引量：1: 5; 作者朱龙宝杨瑾葛飞陶玉贵宋平; 机构安徽工程大学生物与化学工程学院; 出处《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第3期449-454,460,共7页; 基金国家自然科学基金(31671797) 安徽省高校自然科学基金(KJ2016A801) 安徽工程大学拔尖人才项目(2016BJRC006)~~; 文摘克隆来源于Pantoea agglomerans的苯丙氨酸氨基变位酶基因(pam),构建表达载体,转入大肠杆菌中进行异源表达,采用亲和层析制备电泳纯的重组酶(PaPAM),用于催化合成β-苯丙氨酸。结果表明:成功克隆得到基因pam,长度为1626bp,编码541个氨基酸长度的PaPAM,构建了大肠杆菌表达载体pET28a-pam,转入E.coliBL21中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍柱亲和层析纯化获得电泳纯的重组PaPAM。MS和NMR表征结果表明,重组PaPAM能异构化a-苯丙氨酸为β-苯丙氨酸,在最适条件下(30℃、pH 9、1.5 mol/L NH_4^+),酶活力达到2.5 kU/g,在30～50℃、pH 8～10下PaPAM具有较高的稳定性,金属离子Na^+、Mg^(2+)、Ca^(2+)、Fe^(3+)对PaPAM的活性影响较小,表面活性剂SDS和Triton100对PaPAM有较强抑制作用,在最佳反应条件下,底物的转化率达到92%。; 关键词成团泛菌苯丙氨酸氨基变位酶 β-苯丙氨酸基因克隆异源表达生物工程; Keywords Pantoea agglomerans phenylalanine aminomutase β-phenylalanine gene cloning heterogeneous expression biological engineering; 分类号 TQ460.4 [化学工程—制药化工]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	Streptomyces maritimus苯丙氨酸变位酶的制备、表征及催化合成β-芳香丙氨酸	朱龙宝陶玉贵葛飞李婉珍刘义堵国成	《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心	2017	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	产β-苯丙氨酸变位酶基因工程菌的构建及其发酵条件优化	葛飞唐尧朱龙宝李艺雯段振超马琪森陶玉贵	《食品与机械》 CSCD 北大核心	2017	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	重组Taxus chinensis苯丙氨酸变位酶性质表征及R-β-芳香丙氨酸合成	丰国强徐文亮宋平李婉珍陶玉贵葛飞朱龙宝	《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心	2021	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	成团泛菌苯丙氨酸氨基变位酶的热稳定性改造	刘辉张苇苗徐建周丽周哲敏	《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心	2019	1	在线阅读下载PDF 职称材料
5	成团泛菌苯丙氨酸氨基变位酶的性质表征及用于合成β-苯丙氨酸	朱龙宝杨瑾葛飞陶玉贵宋平	《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心	2019	1	在线阅读下载PDF 职称材料