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用简并引物快速克隆苛求芽孢杆菌尿酸酶的编码序列
被引量：
2
1
作者
赵运胜
卜友泉
廖飞
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第2期219-224,共6页
目的:从头克隆苛求芽孢杆菌尿酸酶基因的编码序列。方法:据Edman降解所得N端氨基酸序列(AERTMFYGKGDV)用BLASTp搜索N端相似性>70%细菌尿酸酶;多序列联配比对发现靠近N端和C端的2个保守肽段。据N端已知序列和2个保守肽段设计简并引物...
目的:从头克隆苛求芽孢杆菌尿酸酶基因的编码序列。方法:据Edman降解所得N端氨基酸序列(AERTMFYGKGDV)用BLASTp搜索N端相似性>70%细菌尿酸酶;多序列联配比对发现靠近N端和C端的2个保守肽段。据N端已知序列和2个保守肽段设计简并引物进行PCR扩增;将所得片段连接到T载体,转化后筛选阳性克隆测序。结果:据密码子偏好性调整简并引物,获得该尿酸酶从第六位氨基酸到终止密码子之间的编码序列;此尿酸酶共含322个氨基酸残基,原核尿酸酶靠近N端的保守序列ATDSMKNFI从该尿酸酶第70位氨基酸残基左右开始,另一保守序列GKVYTEPR从该尿酸酶第290位氨基酸残基开始但变为GAVFTEPR。结论:用简并引物PCR快速克隆获得了苛求芽孢杆菌尿酸酶的编码序列。
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关键词
苛求芽孢杆菌尿酸酶
简并引物PCR
基因测序
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职称材料
诊断用苛求芽孢杆菌尿酸酶的剂型与储存方法
被引量：
1
2
作者
陈远翔
姜海蓉
+3 位作者
彭方毅
廖娟
杨晓兰
廖飞
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期228-231,共4页
目的:考察重组苛求芽孢杆菌尿酸酶作为诊断试剂的剂型和储存方法。方法:将此重组尿酸酶制成干粉和液体剂型于-18℃和4℃储存,定期测定酶活性;在干粉制剂时加入保护剂于-18℃储存,在液体制剂时加入防腐剂于4℃储存,间隔适当时间监测酶活...
目的:考察重组苛求芽孢杆菌尿酸酶作为诊断试剂的剂型和储存方法。方法:将此重组尿酸酶制成干粉和液体剂型于-18℃和4℃储存,定期测定酶活性;在干粉制剂时加入保护剂于-18℃储存,在液体制剂时加入防腐剂于4℃储存,间隔适当时间监测酶活性。聚丙烯酰胺凝胶电泳分离此尿酸酶四聚体和二聚体,染色检测蛋白和酶活性。结果:此尿酸酶干粉和液体制剂在4℃储存28 d后对应的剩余酶活性分别为12%和100%,在-18℃冻存28 d后对应的剩余酶活性分别为24%和92%。在干粉制剂时加海藻糖、蔗糖或甘露醇作为保护剂于-18℃储存56 d后,剩余酶活性对应分别为100%、76%和43%。加叠氮钠或苯甲酸的液体制剂,在4℃储存56 d后对应的剩余酶活性分别为99%和82%。在-18℃储存至无活性的冻干粉制剂经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,发现此尿酸酶主要以无活性二聚体存在而活性四聚体很少。结论:此尿酸酶作为诊断试剂,可加入叠氮钠制成液体剂型在4℃储存。
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关键词
苛求芽孢杆菌尿酸酶
制剂与储存方法
酶活性
储存稳定性
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职称材料
苛求芽孢杆菌胞外尿酸酶的表征及其在血清尿酸测定中的应用
被引量：
5
3
作者
赵运胜
赵利娜
+3 位作者
杨根庆
陶佳
卜友泉
廖飞
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期239-242,共4页
目的考察苛求芽孢杆菌（ATCC 26904）分泌型尿酸酶的特性和将其应用于直接动力学尿酸酶法测定血清尿酸的有效性。方法苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶经DEAE-cellulose层析纯化后，用于以积分法分析尿酸酶反应曲线预测反应体系本底的直接动力...
目的考察苛求芽孢杆菌（ATCC 26904）分泌型尿酸酶的特性和将其应用于直接动力学尿酸酶法测定血清尿酸的有效性。方法苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶经DEAE-cellulose层析纯化后，用于以积分法分析尿酸酶反应曲线预测反应体系本底的直接动力学尿酸酶法测定血清尿酸。结果苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶只含1种肽链，分子量为34．7kD（1kD=0．9921ku），其米氏常数为（0．22±0．01）mmol／L（n=11），黄嘌呤抑制常数为（36±3）μmol／L（n=4）。用此尿酸酶，只要被分析反应曲线终点的底物浓度低于起点的30％，应用积分法就能可靠预测本底；直接测定反应前吸收，可使直接动力学尿酸酶法不受常见血清成分、酶活性变化和15μmol／L黄嘌呤等干扰。监测0．025U／ml尿酸酶反应5min的数据，其线性响应范围为1～50μmol／L；所得临床标本血清尿酸含量（Ct）与过氧化物酶偶联间接终点平衡法（Ce）正相关（Ck=-0．008＋1．046Ce，r=0．996，n=206），但Bland—Altman法分析表明两种方法不一致。结论苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶可用于直接动力学尿酸酶法测定尿酸，并可保障其优势。
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关键词
直接动力学
尿酸酶
法
血清
尿酸
测定
苛求
芽孢
杆菌
分泌型
尿酸酶
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职称材料
题名
用简并引物快速克隆苛求芽孢杆菌尿酸酶的编码序列
被引量：
2
1
作者
赵运胜
卜友泉
廖飞
机构
秦皇岛市第一医院检验科
重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室
重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室
出处
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第2期219-224,共6页
文摘
目的:从头克隆苛求芽孢杆菌尿酸酶基因的编码序列。方法:据Edman降解所得N端氨基酸序列(AERTMFYGKGDV)用BLASTp搜索N端相似性>70%细菌尿酸酶;多序列联配比对发现靠近N端和C端的2个保守肽段。据N端已知序列和2个保守肽段设计简并引物进行PCR扩增;将所得片段连接到T载体,转化后筛选阳性克隆测序。结果:据密码子偏好性调整简并引物,获得该尿酸酶从第六位氨基酸到终止密码子之间的编码序列;此尿酸酶共含322个氨基酸残基,原核尿酸酶靠近N端的保守序列ATDSMKNFI从该尿酸酶第70位氨基酸残基左右开始,另一保守序列GKVYTEPR从该尿酸酶第290位氨基酸残基开始但变为GAVFTEPR。结论:用简并引物PCR快速克隆获得了苛求芽孢杆菌尿酸酶的编码序列。
关键词
苛求芽孢杆菌尿酸酶
简并引物PCR
基因测序
Keywords
Bacillus fastidious uricase
degenerated primer PCR
gene cloning
分类号
Q523 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
诊断用苛求芽孢杆菌尿酸酶的剂型与储存方法
被引量：
1
2
作者
陈远翔
姜海蓉
彭方毅
廖娟
杨晓兰
廖飞
机构
重庆理工大学药学与生物工程学院
重庆医科大学检验医学院
出处
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期228-231,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(编号:30672009)
重庆市科委重点资助项目(编号:CSTC2011BA5039)
教育部科学技术研究重点资助项目(编号:210178)
文摘
目的:考察重组苛求芽孢杆菌尿酸酶作为诊断试剂的剂型和储存方法。方法:将此重组尿酸酶制成干粉和液体剂型于-18℃和4℃储存,定期测定酶活性;在干粉制剂时加入保护剂于-18℃储存,在液体制剂时加入防腐剂于4℃储存,间隔适当时间监测酶活性。聚丙烯酰胺凝胶电泳分离此尿酸酶四聚体和二聚体,染色检测蛋白和酶活性。结果:此尿酸酶干粉和液体制剂在4℃储存28 d后对应的剩余酶活性分别为12%和100%,在-18℃冻存28 d后对应的剩余酶活性分别为24%和92%。在干粉制剂时加海藻糖、蔗糖或甘露醇作为保护剂于-18℃储存56 d后,剩余酶活性对应分别为100%、76%和43%。加叠氮钠或苯甲酸的液体制剂,在4℃储存56 d后对应的剩余酶活性分别为99%和82%。在-18℃储存至无活性的冻干粉制剂经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,发现此尿酸酶主要以无活性二聚体存在而活性四聚体很少。结论:此尿酸酶作为诊断试剂,可加入叠氮钠制成液体剂型在4℃储存。
关键词
苛求芽孢杆菌尿酸酶
制剂与储存方法
酶活性
储存稳定性
Keywords
bacillus fastidious uricase
formulation and storage
enzyme activity
storage stability
分类号
Q55 [生物学—生物化学]
在线阅读
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职称材料
题名
苛求芽孢杆菌胞外尿酸酶的表征及其在血清尿酸测定中的应用
被引量：
5
3
作者
赵运胜
赵利娜
杨根庆
陶佳
卜友泉
廖飞
机构
重庆医科大学重庆市生物化学与分子药理学重点实验室生物信息学与分子工程研究室
重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室
出处
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第2期239-242,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30672009
No.30200266)
文摘
目的考察苛求芽孢杆菌（ATCC 26904）分泌型尿酸酶的特性和将其应用于直接动力学尿酸酶法测定血清尿酸的有效性。方法苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶经DEAE-cellulose层析纯化后，用于以积分法分析尿酸酶反应曲线预测反应体系本底的直接动力学尿酸酶法测定血清尿酸。结果苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶只含1种肽链，分子量为34．7kD（1kD=0．9921ku），其米氏常数为（0．22±0．01）mmol／L（n=11），黄嘌呤抑制常数为（36±3）μmol／L（n=4）。用此尿酸酶，只要被分析反应曲线终点的底物浓度低于起点的30％，应用积分法就能可靠预测本底；直接测定反应前吸收，可使直接动力学尿酸酶法不受常见血清成分、酶活性变化和15μmol／L黄嘌呤等干扰。监测0．025U／ml尿酸酶反应5min的数据，其线性响应范围为1～50μmol／L；所得临床标本血清尿酸含量（Ct）与过氧化物酶偶联间接终点平衡法（Ce）正相关（Ck=-0．008＋1．046Ce，r=0．996，n=206），但Bland—Altman法分析表明两种方法不一致。结论苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶可用于直接动力学尿酸酶法测定尿酸，并可保障其优势。
关键词
直接动力学
尿酸酶
法
血清
尿酸
测定
苛求
芽孢
杆菌
分泌型
尿酸酶
Keywords
direct kinetic uricase method
serum uric acid assay
Bacillus fastidious extracellular uricase
分类号
Q555.8 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
用简并引物快速克隆苛求芽孢杆菌尿酸酶的编码序列
赵运胜
卜友泉
廖飞
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
2
在线阅读
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职称材料
2
诊断用苛求芽孢杆菌尿酸酶的剂型与储存方法
陈远翔
姜海蓉
彭方毅
廖娟
杨晓兰
廖飞
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
苛求芽孢杆菌胞外尿酸酶的表征及其在血清尿酸测定中的应用
赵运胜
赵利娜
杨根庆
陶佳
卜友泉
廖飞
《华中科技大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2007
5
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