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诊断用苛求芽孢杆菌尿酸酶的剂型与储存方法被引量：1: 1; 作者陈远翔姜海蓉 +3 位作者彭方毅廖娟杨晓兰廖飞《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期228-231,共4页; 目的:考察重组苛求芽孢杆菌尿酸酶作为诊断试剂的剂型和储存方法。方法:将此重组尿酸酶制成干粉和液体剂型于-18℃和4℃储存,定期测定酶活性;在干粉制剂时加入保护剂于-18℃储存,在液体制剂时加入防腐剂于4℃储存,间隔适当时间监测酶活... 展开更多; 关键词苛求芽孢杆菌尿酸酶制剂与储存方法酶活性储存稳定性; 在线阅读下载PDF 职称材料

苛求芽孢杆菌胞外尿酸酶的表征及其在血清尿酸测定中的应用被引量：5: 2; 作者赵运胜赵利娜 +3 位作者杨根庆陶佳卜友泉廖飞《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期239-242,共4页; 目的考察苛求芽孢杆菌（ATCC 26904）分泌型尿酸酶的特性和将其应用于直接动力学尿酸酶法测定血清尿酸的有效性。方法苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶经DEAE-cellulose层析纯化后，用于以积分法分析尿酸酶反应曲线预测反应体系本底的直接动力... 展开更多; 关键词直接动力学尿酸酶法血清尿酸测定苛求芽孢杆菌分泌型尿酸酶; 在线阅读下载PDF 职称材料

共表达分子伴侣蛋白提高III型普鲁兰水解酶在短小芽孢杆菌中的分泌表达及发酵优化被引量：1: 3; 作者曾静郭建军 +1 位作者王通袁林《食品工业科技》 CAS 北大核心 2024年第10期149-157,共9页; 本研究旨在通过共表达分子伴侣蛋白以及优化发酵条件来提高III型普鲁兰水解酶(TK-PUL)在短小芽孢杆菌中的分泌表达水平。通过构建共表达TK-PUL和分子伴侣蛋白的多种重组短小芽孢杆菌,并以胞外酶活为指标对其进行筛选,确定最有利于TK-PU... 展开更多; 关键词 III型普鲁兰水解酶短小芽孢杆菌胞外分子伴侣蛋白发酵优化分泌表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

用简并引物快速克隆苛求芽孢杆菌尿酸酶的编码序列被引量：2: 4; 作者赵运胜卜友泉廖飞《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期219-224,共6页; 目的:从头克隆苛求芽孢杆菌尿酸酶基因的编码序列。方法:据Edman降解所得N端氨基酸序列(AERTMFYGKGDV)用BLASTp搜索N端相似性>70%细菌尿酸酶;多序列联配比对发现靠近N端和C端的2个保守肽段。据N端已知序列和2个保守肽段设计简并引物... 展开更多; 关键词苛求芽孢杆菌尿酸酶简并引物PCR 基因测序; 在线阅读下载PDF 职称材料

3种渗透剂对转基因烟草根系枯草芽孢杆菌纤溶酶(BSFE)分泌的调节被引量：6: 5; 作者王瑞刚张艳春 +2 位作者张子义吴自荣王水平《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 2005年第2期1-5,共5页; 用0.05%～8.00%的甘露醇、山梨醇和聚乙二醇6000等3种渗透调节剂可提高转枯草芽孢杆菌纤溶酶(Bacillussubtilisfibrinolyticenzyme,BSFE)转基因烟草(NicotianatabacumL.)根系BSFE的分泌表达水平,其水培液BSFE活性在15d内基本呈抛物线型... 展开更多; 关键词枯草芽孢杆菌烟草根系纤溶酶渗透剂聚乙二醇6000 分泌表达渗透调节剂转基因烟草化学调节剂变化趋势抛物线型时间比对甘露醇山梨醇 E基因活性水培; 在线阅读下载PDF 职称材料

地衣芽孢杆菌感受态细胞的诱导形成及其高效电转化方法被引量：10: 6; 作者唐雪明邵蔚蓝 +2 位作者王正祥方惠英诸葛健《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》 CSCD 北大核心 2002年第5期460-463,共4页; 通过体外处理诱导地衣芽孢杆菌产生感受态性能 ,同时调整参数 ,建立了感受态细胞对质粒 pAPR的高效电转化方法 .当质粒DNA为 1.5 μg/mL、转化时电压为175 0V时 ,可得到 2 6 1个转化子 ,经鉴定均为阳性克隆子 .此为以芽孢杆菌为宿主进... 展开更多; 关键词地衣芽孢杆菌感受态细胞诱导形成高效电转化方法分泌型表达载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

地衣芽孢杆菌耐高温α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆及表达被引量：2: 7; 作者蔡恒陈忠军 +1 位作者路福平杜连祥《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期15-18,共4页; 用PCR方法从地衣芽孢杆菌中扩增了耐高温α淀粉酶基因,将扩增的DNA片段插入到大肠杆菌载体pUC19中,构建重组分泌型表达载体pUAM。pUAM中的耐高温α淀粉酶基因在大肠杆菌JM109中得到表达。经SDSPAGE分析显示,蛋白表达产物的分子量为55ku... 展开更多; 关键词蛋白表达酶基因大肠杆菌扩增克隆 UC 核酸序列地衣芽孢杆菌分泌型表达载体 SDS-PAGE分析; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名诊断用苛求芽孢杆菌尿酸酶的剂型与储存方法被引量：1: 1; 作者陈远翔姜海蓉彭方毅廖娟杨晓兰廖飞; 机构重庆理工大学药学与生物工程学院重庆医科大学检验医学院; 出处《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期228-231,共4页; 基金国家自然科学基金资助项目(编号:30672009) 重庆市科委重点资助项目(编号:CSTC2011BA5039) 教育部科学技术研究重点资助项目(编号:210178); 文摘目的:考察重组苛求芽孢杆菌尿酸酶作为诊断试剂的剂型和储存方法。方法:将此重组尿酸酶制成干粉和液体剂型于-18℃和4℃储存,定期测定酶活性;在干粉制剂时加入保护剂于-18℃储存,在液体制剂时加入防腐剂于4℃储存,间隔适当时间监测酶活性。聚丙烯酰胺凝胶电泳分离此尿酸酶四聚体和二聚体,染色检测蛋白和酶活性。结果:此尿酸酶干粉和液体制剂在4℃储存28 d后对应的剩余酶活性分别为12%和100%,在-18℃冻存28 d后对应的剩余酶活性分别为24%和92%。在干粉制剂时加海藻糖、蔗糖或甘露醇作为保护剂于-18℃储存56 d后,剩余酶活性对应分别为100%、76%和43%。加叠氮钠或苯甲酸的液体制剂,在4℃储存56 d后对应的剩余酶活性分别为99%和82%。在-18℃储存至无活性的冻干粉制剂经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,发现此尿酸酶主要以无活性二聚体存在而活性四聚体很少。结论:此尿酸酶作为诊断试剂,可加入叠氮钠制成液体剂型在4℃储存。; 关键词苛求芽孢杆菌尿酸酶制剂与储存方法酶活性储存稳定性; Keywords bacillus fastidious uricase formulation and storage enzyme activity storage stability; 分类号 Q55 [生物学—生物化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名苛求芽孢杆菌胞外尿酸酶的表征及其在血清尿酸测定中的应用被引量：5: 2; 作者赵运胜赵利娜杨根庆陶佳卜友泉廖飞; 机构重庆医科大学重庆市生物化学与分子药理学重点实验室生物信息学与分子工程研究室重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室; 出处《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期239-242,共4页; 基金国家自然科学基金资助项目(No.30672009 No.30200266); 文摘目的考察苛求芽孢杆菌（ATCC 26904）分泌型尿酸酶的特性和将其应用于直接动力学尿酸酶法测定血清尿酸的有效性。方法苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶经DEAE-cellulose层析纯化后，用于以积分法分析尿酸酶反应曲线预测反应体系本底的直接动力学尿酸酶法测定血清尿酸。结果苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶只含1种肽链，分子量为34．7kD（1kD=0．9921ku），其米氏常数为（0．22±0．01）mmol／L（n=11），黄嘌呤抑制常数为（36±3）μmol／L（n=4）。用此尿酸酶，只要被分析反应曲线终点的底物浓度低于起点的30％，应用积分法就能可靠预测本底；直接测定反应前吸收，可使直接动力学尿酸酶法不受常见血清成分、酶活性变化和15μmol／L黄嘌呤等干扰。监测0．025U／ml尿酸酶反应5min的数据，其线性响应范围为1～50μmol／L；所得临床标本血清尿酸含量（Ct）与过氧化物酶偶联间接终点平衡法（Ce）正相关（Ck=-0．008＋1．046Ce，r=0．996，n=206），但Bland—Altman法分析表明两种方法不一致。结论苛求芽孢杆菌分泌的尿酸酶可用于直接动力学尿酸酶法测定尿酸，并可保障其优势。; 关键词直接动力学尿酸酶法血清尿酸测定苛求芽孢杆菌分泌型尿酸酶; Keywords direct kinetic uricase method serum uric acid assay Bacillus fastidious extracellular uricase; 分类号 Q555.8 [生物学—生物化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名共表达分子伴侣蛋白提高III型普鲁兰水解酶在短小芽孢杆菌中的分泌表达及发酵优化被引量：1: 3; 作者曾静郭建军王通袁林; 机构江西省科学院微生物研究所; 出处《食品工业科技》 CAS 北大核心 2024年第10期149-157,共9页; 基金国家自然科学基金地区科学基金项目(32160579) 江西省主要学科学术和技术带头人培养计划项目(20212BCJ23033,S2021GDQN2403) 江西省科学院基础研究项目(2022YJC2006)。; 文摘本研究旨在通过共表达分子伴侣蛋白以及优化发酵条件来提高III型普鲁兰水解酶(TK-PUL)在短小芽孢杆菌中的分泌表达水平。通过构建共表达TK-PUL和分子伴侣蛋白的多种重组短小芽孢杆菌,并以胞外酶活为指标对其进行筛选,确定最有利于TK-PUL分泌表达的分子伴侣蛋白及对应的重组短小芽孢杆菌。在此基础上采用单因素实验和响应面法优化重组短小芽孢杆菌的发酵条件。结果表明,共表达分子伴侣蛋白PrsA^(Ba)的重组短小芽孢杆菌的胞外酶活达到98.79 U/mL,提高了0.31倍。该重组短小芽孢杆菌的最佳培养基包括19.65 g/L葡萄糖、21.46 g/L酵母提取物、12.01 g/L MgCl_(2)·6H_(2)O、9.02 g/L脯氨酸、0.01 g/L FeSO4·7H_(2)O、0.01 g/L MnSO4·4H_(2)O、0.001 g/L ZnSO4·7H_(2)O。在发酵温度为35℃、起始发酵pH为7.0的条件下,该重组短小芽孢杆菌于最佳培养基中培养66 h时,其胞外酶活达到192.68 U/mL,提高了1.56倍。本研究通过共表达分子伴侣蛋白和发酵优化实现了TK-PUL在短小芽孢杆菌的高效分泌表达,为TK-PUL的应用提供了基础。; 关键词 III型普鲁兰水解酶短小芽孢杆菌胞外分子伴侣蛋白发酵优化分泌表达; Keywords type III pullulan hydrolase Brevibacillus choshinensis extracytoplasmic molecular chaperone fermentation optimization secretory expression; 分类号 TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名用简并引物快速克隆苛求芽孢杆菌尿酸酶的编码序列被引量：2: 4; 作者赵运胜卜友泉廖飞; 机构秦皇岛市第一医院检验科重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室; 出处《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期219-224,共6页; 文摘目的:从头克隆苛求芽孢杆菌尿酸酶基因的编码序列。方法:据Edman降解所得N端氨基酸序列(AERTMFYGKGDV)用BLASTp搜索N端相似性>70%细菌尿酸酶;多序列联配比对发现靠近N端和C端的2个保守肽段。据N端已知序列和2个保守肽段设计简并引物进行PCR扩增;将所得片段连接到T载体,转化后筛选阳性克隆测序。结果:据密码子偏好性调整简并引物,获得该尿酸酶从第六位氨基酸到终止密码子之间的编码序列;此尿酸酶共含322个氨基酸残基,原核尿酸酶靠近N端的保守序列ATDSMKNFI从该尿酸酶第70位氨基酸残基左右开始,另一保守序列GKVYTEPR从该尿酸酶第290位氨基酸残基开始但变为GAVFTEPR。结论:用简并引物PCR快速克隆获得了苛求芽孢杆菌尿酸酶的编码序列。; 关键词苛求芽孢杆菌尿酸酶简并引物PCR 基因测序; Keywords Bacillus fastidious uricase degenerated primer PCR gene cloning; 分类号 Q523 [生物学—生物化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名3种渗透剂对转基因烟草根系枯草芽孢杆菌纤溶酶(BSFE)分泌的调节被引量：6: 5; 作者王瑞刚张艳春张子义吴自荣王水平; 机构内蒙古农业大学生物工程学院华东师范大学生命科学学院; 出处《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 2005年第2期1-5,共5页; 基金上海市科学技术委员会重大项目(9854190003); 文摘用0.05%～8.00%的甘露醇、山梨醇和聚乙二醇6000等3种渗透调节剂可提高转枯草芽孢杆菌纤溶酶(Bacillussubtilisfibrinolyticenzyme,BSFE)转基因烟草(NicotianatabacumL.)根系BSFE的分泌表达水平,其水培液BSFE活性在15d内基本呈抛物线型变化趋势。经3种渗透剂处理后转BSFE基因烟草水培液的BSFE活性峰值明显高于对照,且出现时间比对照相对延迟1-2d。甘露醇、山梨醇和聚乙二醇6000可作为该转基因烟草根系BSFE分泌表达的有效化学调节剂。; 关键词枯草芽孢杆菌烟草根系纤溶酶渗透剂聚乙二醇6000 分泌表达渗透调节剂转基因烟草化学调节剂变化趋势抛物线型时间比对甘露醇山梨醇 E基因活性水培; Keywords Bacillus subtilis fibrinolytic enzyme (BSFE) transgenic tobacco (Nicotiana tabacum L.) osmoregulation secretion of root system; 分类号 S572.01 [农业科学—烟草工业] Q936 [生物学—微生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名地衣芽孢杆菌感受态细胞的诱导形成及其高效电转化方法被引量：10: 6; 作者唐雪明邵蔚蓝王正祥方惠英诸葛健; 机构江南大学工业生物技术教育部重点实验室; 出处《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》 CSCD 北大核心 2002年第5期460-463,共4页; 基金教育部高等学校骨干教师资助项目课题; 文摘通过体外处理诱导地衣芽孢杆菌产生感受态性能 ,同时调整参数 ,建立了感受态细胞对质粒 pAPR的高效电转化方法 .当质粒DNA为 1.5 μg/mL、转化时电压为175 0V时 ,可得到 2 6 1个转化子 ,经鉴定均为阳性克隆子 .此为以芽孢杆菌为宿主进行高效电转化及为建立适合工业应用的分泌型表达载体提供参考 .; 关键词地衣芽孢杆菌感受态细胞诱导形成高效电转化方法分泌型表达载体; Keywords Bacillus licheniformis competent cells efficiency electrotransformation; 分类号 Q939.9 [生物学—微生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名地衣芽孢杆菌耐高温α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆及表达被引量：2: 7; 作者蔡恒陈忠军路福平杜连祥; 机构天津科技大学食品科学与生物工程学院; 出处《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期15-18,共4页; 文摘用PCR方法从地衣芽孢杆菌中扩增了耐高温α淀粉酶基因,将扩增的DNA片段插入到大肠杆菌载体pUC19中,构建重组分泌型表达载体pUAM。pUAM中的耐高温α淀粉酶基因在大肠杆菌JM109中得到表达。经SDSPAGE分析显示,蛋白表达产物的分子量为55ku,同核酸序列测定所推导的值相符。; 关键词蛋白表达酶基因大肠杆菌扩增克隆 UC 核酸序列地衣芽孢杆菌分泌型表达载体 SDS-PAGE分析; Keywords Bacillus licheniformis, heat-stable α-amylase, gene cloning and expression, E.coli; 分类号 TQ925 [轻工技术与工程—发酵工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	诊断用苛求芽孢杆菌尿酸酶的剂型与储存方法	陈远翔姜海蓉彭方毅廖娟杨晓兰廖飞	《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2012	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	苛求芽孢杆菌胞外尿酸酶的表征及其在血清尿酸测定中的应用	赵运胜赵利娜杨根庆陶佳卜友泉廖飞	《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2007	5	在线阅读下载PDF 职称材料
3	共表达分子伴侣蛋白提高III型普鲁兰水解酶在短小芽孢杆菌中的分泌表达及发酵优化	曾静郭建军王通袁林	《食品工业科技》 CAS 北大核心	2024	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	用简并引物快速克隆苛求芽孢杆菌尿酸酶的编码序列	赵运胜卜友泉廖飞	《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2017	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	3种渗透剂对转基因烟草根系枯草芽孢杆菌纤溶酶(BSFE)分泌的调节	王瑞刚张艳春张子义吴自荣王水平	《植物资源与环境学报》 CAS CSCD	2005	6	在线阅读下载PDF 职称材料
6	地衣芽孢杆菌感受态细胞的诱导形成及其高效电转化方法	唐雪明邵蔚蓝王正祥方惠英诸葛健	《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》 CSCD 北大核心	2002	10	在线阅读下载PDF 职称材料
7	地衣芽孢杆菌耐高温α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆及表达	蔡恒陈忠军路福平杜连祥	《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心	2004	2	在线阅读下载PDF 职称材料