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苏云金芽孢杆菌Rpp02菌株cry1 Ac20基因的克隆及表达(英文)
1
作者 谭芙蓉 李平 +2 位作者 郑爱萍 周华强 郑秀丽 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期950-954,共5页
Rpp02菌株是本实验室分离的一株对鳞翅目等多种害虫具有高毒力的苏云金芽孢杆菌莫里逊亚种(Bacillus thuringiensis subsp.morrisoni),经PCR检测,它含有cry1Ac基因。对其基因组DNA进行PCR扩增,得到大约4kb的产物。测序结果表明,该片段... Rpp02菌株是本实验室分离的一株对鳞翅目等多种害虫具有高毒力的苏云金芽孢杆菌莫里逊亚种(Bacillus thuringiensis subsp.morrisoni),经PCR检测,它含有cry1Ac基因。对其基因组DNA进行PCR扩增,得到大约4kb的产物。测序结果表明,该片段含有一个较大的ORF框,基因编码区为3534bp,编码1177个氨基酸,分子量为133.144kD,pI4.952,为弱酸性蛋白质,亮氨酸(Leu)、丝氨酸(Ser)、谷氨酸(Glu)3种氨基酸含量最高,分别为8.0%、7.8%、7.7%。该基因序列与cry1Ac序列同源性达到99%,并被国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会命名为cry1Ac20。生物测定表明,该基因在大肠杆菌中得到了表达,表达产物具有较强的杀虫效果,试喂菜青虫48h后,校正死亡率为88.78%。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry1ac20基因 克隆 表达 菜青虫
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苏云金芽孢杆菌cry1Ac28基因的克隆及原核表达 被引量：2
2
作者 曲步云 李海涛 +1 位作者 李明 高继国 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期61-67,共7页
研究旨在克隆苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)Q-12的cry1Ac28基因并在原核载体中表达。应用PCR-RFLP法鉴定出Bt Q-12中含有cry1Ac基因,根据已知的cry1Ac全长基因序列设计特异引物,以Bt Q-12基因组DNA为模板扩增cry1Ac全长基... 研究旨在克隆苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)Q-12的cry1Ac28基因并在原核载体中表达。应用PCR-RFLP法鉴定出Bt Q-12中含有cry1Ac基因,根据已知的cry1Ac全长基因序列设计特异引物,以Bt Q-12基因组DNA为模板扩增cry1Ac全长基因,与大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pEB相连接获得含有cry1Ac全长基因的重组质粒pEB-cry1Ac,经过序列分析表明,该基因编码区为3 537 bp,编码1 178个氨基酸,分子质量为133.3176 ku,pI为4.885,为弱酸性蛋白质,亮氨酸(Leu)、丝氨酸(Ser)、谷氨酸(Glu)三种氨基酸含量最高,分别为8.06%、7.80%、7.72%,该基因在大肠杆菌BL21(DE3)菌株能够正常表达133.3176 ku蛋白。该基因核苷酸序列已在GenBank中登录,登录号为FJ610439,并由Btδ-内毒素基因国际命名委员会正式命名为cry1Ac28。为进一步研究cry1Ac28蛋白功能和活性打下了良好的基础。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry1ac28 克隆 原核表达
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表面等离子共振传感器检测转基因植物中苏云金芽孢杆菌cry1Ac蛋白的方法研究 被引量：2
3
作者 杜方 纪淑娟 黄新 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期482-486,共5页
为建立表面等离子共振传感器检测转基因植物中苏云金芽孢杆菌cry1Ac蛋白的方法,根据生物分子间的相互作用,在金片表面修饰cry1Ac蛋白的特异性单克隆抗体,对不同稀释梯度的cry1Ac蛋白进行检测研究。结果表明:该方法可有效的检测到cry1Ac... 为建立表面等离子共振传感器检测转基因植物中苏云金芽孢杆菌cry1Ac蛋白的方法,根据生物分子间的相互作用,在金片表面修饰cry1Ac蛋白的特异性单克隆抗体,对不同稀释梯度的cry1Ac蛋白进行检测研究。结果表明:该方法可有效的检测到cry1Ac蛋白,检测灵敏度可达到10ng·mL-1,与cry2A蛋白及CP4-EPSPS蛋白无交叉反应。说明利用表面等离子共振方法检测cry1Ac蛋白操作简单,省时且灵敏度高,特异性强,可用于对cry1Ac蛋白的定量检测。 展开更多
关键词 表面等离子共振传感器 cry1ac蛋白 苏云金芽孢杆菌 转基因植物
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稻米内生贝莱斯芽孢杆菌BR-1的安全性评估
4
作者 张鑫宇 赖泽萍 +4 位作者 石鸿辉 王婷 于雅君 朱军莉 赵艳 《食品与生物技术学报》 北大核心 2025年第2期112-121,共10页
【目的】对从稻米中分离的一株稻米内生贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis,B.velezensis)BR-1进行安全性评估。【方法】在全基因组测序的基础上,应用综合抗生素耐药数据库(CARD)和毒力因子数据库(VFDB)对BR-1的抗生素耐药基因和毒力... 【目的】对从稻米中分离的一株稻米内生贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis,B.velezensis)BR-1进行安全性评估。【方法】在全基因组测序的基础上,应用综合抗生素耐药数据库(CARD)和毒力因子数据库(VFDB)对BR-1的抗生素耐药基因和毒力基因进行注释,同时对BR-1进行抗生素药敏试验和溶血试验,并利用KEGG数据库注释贝莱斯芽孢杆菌BR-1与益生菌相关的基因。【结果】该稻米内生贝莱斯芽孢杆菌BR-1总碱基对为1071550432 bp,平均GC占比46.3%,包含4027个蛋白质编码基因,含有14个CRISPR-Cas;不含有编码溶血素BL(Hbl)、非溶血性肠毒素(Nhe)、肠毒素(细胞毒素K)和催吐毒素(cereulide-Ces)等毒素基因;KEGG数据库注释到可耐酸、耐高温、耐胆盐等具有良好的胃肠耐受性、抗氧化活性和优异益生菌特性的基因;预测到菌株BR-1含有2个耐药基因vmlR和clbA,对9种抗生素高度敏感且不含有耐药质粒。【结论】贝莱斯芽孢杆菌BR-1不含有编码毒素的基因,不具有广谱耐药性,不具有溶血活性,含有益生菌特性相关的基因,符合GB/T 41728—2022《微生物肥料质量安全评价通用准则》的安全性要求,可以作为微生物肥料。 展开更多
关键词 稻米内生贝莱斯芽孢杆菌BR-1 全基因组测序 毒力基因 抗生素耐药基因 抗生素药敏试验 溶血试验
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Cry1 Ac基因载体构建及其在枯草芽孢杆菌中的杀虫活性表达 被引量：2
5
作者 刘济宁 刘贤进 +1 位作者 余向阳 彭正强 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期342-346,共5页
根据苏云金芽孢杆菌BacillusthuringiensisHD_73基因Cry1Ac和枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis木糖诱导型启动子PxylR序列,分别设计2对特异引物Cry1AcFR和PxyFR,扩增获得了完整的启动子PxylR和Cry1Ac基因序列,进一步以上述产物混合物为模板... 根据苏云金芽孢杆菌BacillusthuringiensisHD_73基因Cry1Ac和枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis木糖诱导型启动子PxylR序列,分别设计2对特异引物Cry1AcFR和PxyFR,扩增获得了完整的启动子PxylR和Cry1Ac基因序列,进一步以上述产物混合物为模板,以PxyFCry1AcR作引物进行重迭PCR,获得了载体PxylR_Cry1Ac,经SphⅠ和BamHⅠ完全酶切后,将PxylR_Cry1Ac插入大肠杆菌_苏云金芽孢杆菌穿梭载体pHT315,重组表达质粒pCry1Ac315转化枯草芽孢杆菌感受态细胞。工程菌株质粒酶切电泳分析、SDS_PAGE电泳分析和杀虫生物活性测定结果证实了Cry1Ac基因的导入及其在枯草芽孢杆菌JAAS01D中的有效表达。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌 重迭PCR cry1ac基因 杀虫活性
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苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因cry1A的克隆及生物信息学分析 被引量：3
6
作者 赵直 吴钢 +5 位作者 王闵霞 朱旭东 蒲志刚 张志勇 彭正松 蔡平钟 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第2期393-398,共6页
以分离的3株苏云金芽孢杆菌质粒为模板,通过设计一对特异引物,PCR扩增得到3条全长3.6 kb的基因序列,其各自都包含一个完整的开放阅读框,编码序列全长分别是3468、3450、2697 bp(Genebank登录号分别为GQ385073,GQ385074,GQ385075);它们与... 以分离的3株苏云金芽孢杆菌质粒为模板,通过设计一对特异引物,PCR扩增得到3条全长3.6 kb的基因序列,其各自都包含一个完整的开放阅读框,编码序列全长分别是3468、3450、2697 bp(Genebank登录号分别为GQ385073,GQ385074,GQ385075);它们与cry1A类基因同源性都高达95%以上;分别编码1159、1150和902个氨基酸。并在此基础上采用生物信息学方法对这3个基因编码蛋白从氨基酸组成、理化性质、跨膜结构域、疏水性/亲水性、亚细胞定位、跨膜结构域以及功能域等方面进行了预测和分析。为转基因抗虫植物和微生物杀虫工程菌的构建提供了基因来源。 展开更多
关键词 cry1A基因 苏云金芽孢杆菌 克隆 生物信息学
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苏云金芽孢杆菌cry1Aα核心毒素基因转化烟草及其杀虫活性 被引量：4
7
作者 韩蓓 袁志明 陈士云 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期62-66,共5页
将苏云金芽孢杆菌cry1Aα的C端编码区截短，获得编码N端609个氨基酸约1.8kb的核心毒素基因，将其构建到植物表达载体转化烟草，研究直接表达的活性ICP核心毒素被昆虫取食后的杀虫效果。T1代种子发芽的抗生素抗性分离和PCR检测证实cry1A... 将苏云金芽孢杆菌cry1Aα的C端编码区截短，获得编码N端609个氨基酸约1.8kb的核心毒素基因，将其构建到植物表达载体转化烟草，研究直接表达的活性ICP核心毒素被昆虫取食后的杀虫效果。T1代种子发芽的抗生素抗性分离和PCR检测证实cry1Aα核心毒素基因整合到了烟草基因组，Western杂交检测表明转化烟草能够正常表达大小为75．6kD的核心毒素蛋白。生物测定结果表明，转化烟草对初孵棉铃虫平均有高于60％的致死率，对初孵甜菜夜蛾平均达到70％的致死率，最高致死率均可达到90％以上，并对昆虫的生长发育有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry1Aα 核心毒素 烟草 杀虫活性 基因转化 毒素基因 Western 植物表达载体 PCR检测 抗生素抗性
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苏云金芽孢杆菌菌株B-Hm-16的生物学特性及cry基因型鉴定 被引量：7
8
作者 李长友 李国勋 +2 位作者 张杰 宋福平 黄大昉 《青岛农业大学学报（自然科学版）》 2007年第1期1-4,共4页
B-Hm-16是我室从患病昆虫体内分离的一株苏云金芽孢杆菌,对小菜蛾、甜菜夜蛾、棉铃虫、粘虫和甘蓝夜蛾等多种害虫均具有较高活性;主要形成钝菱形晶体,杀虫蛋白晶体主要由130kDa的蛋白组成;酯酶型与标准菌株蜡螟亚种(B.t.subsp.galleriae... B-Hm-16是我室从患病昆虫体内分离的一株苏云金芽孢杆菌,对小菜蛾、甜菜夜蛾、棉铃虫、粘虫和甘蓝夜蛾等多种害虫均具有较高活性;主要形成钝菱形晶体,杀虫蛋白晶体主要由130kDa的蛋白组成;酯酶型与标准菌株蜡螟亚种(B.t.subsp.galleriae)和库斯塔克亚种(B.t.subsp.kurstaki)一致,属于galleriae型;10项生理生化反应结果同标准菌株鲇泽(B.t.subsp.aizawai)亚种一致;经PCR-RFLP鉴定该菌株含有cry1Ab和cry9Ea基因,不含有cry2、cry3、cry4、cry5、cry8和cry11等基因。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 杀虫活性 酯酶型 生理生化反应 基因鉴定
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转化cry3A基因对苏云金芽孢杆菌YBT-803-1生长特性的影响 被引量：2
9
作者 乐超银 邵伟 +1 位作者 徐世谨 喻子牛 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2001年第2期6-7,25,共3页
将携带基因cry3A的质粒通过电脉冲法转入苏云金芽孢杆菌野生菌株YBT 80 3 1后 ,对该菌的生长产生了一定的影响。结果表明 ,转入cry3A基因后 ,转化子BMBY 0 0 3的生长速度与出发菌株YBT 80 3 1相比虽无明显变化 ,但产生杀虫晶体蛋白的时... 将携带基因cry3A的质粒通过电脉冲法转入苏云金芽孢杆菌野生菌株YBT 80 3 1后 ,对该菌的生长产生了一定的影响。结果表明 ,转入cry3A基因后 ,转化子BMBY 0 0 3的生长速度与出发菌株YBT 80 3 1相比虽无明显变化 ,但产生杀虫晶体蛋白的时间较出发菌株延迟 6～ 8h ,且最适温度提高为 33℃ ,而对葡萄糖等 14种碳源和谷氨酸等 12种氮源的利用能力与出发菌株无明显差异。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 基因cry3A 转化子 生长特性
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初始碳源对苏云金芽孢杆菌cry—lacZ融合基因表达的影响
10
作者 程萍 Aronson +2 位作者 Arthur I 喻子牛 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2001年第1期7-9,12,共4页
分别采用携带cry1A上游区、突变或缺失上游区的重组穿棱载体pHT/pSGMU-P,电转化到苏云金芽孢杆菌不同菌株中,并经含不同初始碳源的Gtris培养基培养,检测BtI-lacZ融合基因的表达.结果表明,各种转化子的β-半乳糖苷酶活性随着培养基中初... 分别采用携带cry1A上游区、突变或缺失上游区的重组穿棱载体pHT/pSGMU-P,电转化到苏云金芽孢杆菌不同菌株中,并经含不同初始碳源的Gtris培养基培养,检测BtI-lacZ融合基因的表达.结果表明,各种转化子的β-半乳糖苷酶活性随着培养基中初始碳源的不同而异,在以丙酮酸钠为初始碳源的培养基中,BtI-lacZ的表达量最高,以葡萄糖为初始碳源的次之,在琥珀酸钠中最低,说明cry基因的表达与初始碳源的种类和细胞的代谢有关. 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 杀虫晶体蛋白 基因表达 初始碳源 β-关乳糖苷酶活性
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枯草芽孢杆菌XF1菌株中XFsacA基因的克隆及功能验证 被引量：3
11
作者 贾凡 毛自朝 +3 位作者 王志远 赵静 吴毅歆 何月秋 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期154-158,共5页
枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis XF1是从土壤中分离的一株利用蔗糖快、能高效防治根肿病的专利菌株.为探明其高效的蔗糖代谢机制,用PCR从该菌中扩增到蔗糖代谢关键基因蔗糖-6-磷酸水解酶基因(XFsacA基因),其编码的蛋白质氨基酸序列与枯... 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis XF1是从土壤中分离的一株利用蔗糖快、能高效防治根肿病的专利菌株.为探明其高效的蔗糖代谢机制,用PCR从该菌中扩增到蔗糖代谢关键基因蔗糖-6-磷酸水解酶基因(XFsacA基因),其编码的蛋白质氨基酸序列与枯草芽孢杆菌B168菌株中的XFsacA基因有97%的相似性,且发生了12个氨基酸突变.将该基因中约1.4 kb的编码框序列连接到表达载体pQE30上,构建了重组表达质粒pQE30-XFsacA,该质粒转入到不能利用蔗糖的Escherichia coli BL21中,后者能在以蔗糖为唯一碳源的M9无机离子培养基中正常生长,并表达出了一条约54 000蛋白条带.结果预示XFsacA基因氨基酸序列的替代可能是XF1高效利用蔗糖的基础,同时XFsacA基因的克隆与其在E.coli中的表达研究,为利用蔗糖发酵的工程E.coli构建奠定了基础. 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌XF1 蔗糖 代谢 基因克隆
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基于cry1Ac表达调控元件的苏云金芽孢杆菌表达载体构建 被引量：5
12
作者 郑文 叶伟星 +1 位作者 彭东海 孙明 《湖北农业科学》 北大核心 2012年第2期400-405,共6页
通过克隆cry1Ac基因BtI-BtII启动子、SD序列以及终止子,并引入pET28a的His标签和多克隆位点,在穿梭载体pHT304的基础上构建了一个苏云金芽孢杆菌表达载体pBMB1A。将cry1Ac以及具有非典型BtI-BtII启动子的cry2Ab、cry5Ba、cry6Aa、cry7Ba... 通过克隆cry1Ac基因BtI-BtII启动子、SD序列以及终止子,并引入pET28a的His标签和多克隆位点,在穿梭载体pHT304的基础上构建了一个苏云金芽孢杆菌表达载体pBMB1A。将cry1Ac以及具有非典型BtI-BtII启动子的cry2Ab、cry5Ba、cry6Aa、cry7Ba、cry55Aa 6个基因装载到该表达载体上,转入BMB171构建了重组菌株,通过复红简单染色后的显微镜镜检结果表明,重组菌株BMB1A-1Ac、BMB1A-5Ba、BMB1A-7Ba和BMB1A-55Aa均能形成正常晶体,SDS-PAGE结果也证实这4个重组菌株的重组质粒均能表达出目的蛋白。同时,选取重组菌株BMB1A-1Ac来考察His标签对Cry1Ac杀虫活性的影响,生物活性测定结果显示重组菌株的LC50值与对照菌株相比无明显差异。该载体可用于快速克隆表达不同类别的Cry蛋白。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 表达载体 CRY基因 BtI-BtII启动子
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碳源对苏云金芽胞杆菌融合基因cry1D-lacZ表达的影响 被引量：1
13
作者 张利莉 Aronson I.Arthur 喻子牛 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期301-304,共4页
本研究检测了在不同遗传背景的苏云金芽胞杆菌菌株中不同碳源对杀虫晶体蛋白cry1D -lacZ融合基因表达的影响。研究表明 ,cry1D -lacZ在同一菌株中的表达因碳源不同而异 ,在碳源相同的条件下不同菌株的表达也不相同 ,而衍生菌株HD - 133... 本研究检测了在不同遗传背景的苏云金芽胞杆菌菌株中不同碳源对杀虫晶体蛋白cry1D -lacZ融合基因表达的影响。研究表明 ,cry1D -lacZ在同一菌株中的表达因碳源不同而异 ,在碳源相同的条件下不同菌株的表达也不相同 ,而衍生菌株HD - 133- 5的代谢途径非常特殊。琥珀酸钠作碳源时导致芽胞形成提前 ,cry1D -lacZ融合基因表达也随之提前。而以乙酸钠作碳源时 ,在不同亚种的菌株中都能高水平、持续稳定地表达。 展开更多
关键词 碳源 苏云金芽胞杆菌 融合基因 cry1D-lacZ 表达
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苏云金芽孢杆菌达姆斯塔特亚种新菌株Btd61的鉴定及其晶体蛋白基因型的初步分析 被引量：3
14
作者 林风 连云阳 +3 位作者 程元荣 Smirnova TA Minenkova IB Azizbekyan RR 《福建农业大学学报》 CSCD 1996年第2期177-181,共5页
用选择性培养基从舞毒蛾（Ｌｙｍａｎｔｒｉａｄｉｓｐａｒ）死虫体中分离到苏云金芽孢杆菌新菌株Ｂ－６１，经分类鉴定属苏云金芽孢杆菌达姆斯塔特亚种（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｓｕｂｓｐ．ｄａｒｍｓｔａｄｉｅ... 用选择性培养基从舞毒蛾（Ｌｙｍａｎｔｒｉａｄｉｓｐａｒ）死虫体中分离到苏云金芽孢杆菌新菌株Ｂ－６１，经分类鉴定属苏云金芽孢杆菌达姆斯塔特亚种（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｓｕｂｓｐ．ｄａｒｍｓｔａｄｉｅｎｓｉｓ），简称Ｂｔｄ６１．该菌株有８种质粒，４种晶体蛋白，合成二锥体小晶体和不规则大晶体２种伴孢晶体颗粒，对大蜡螟（Ｇａｌｅｒｉａｍｅｌｏｎｅｌａ）和舞毒蛾皆具强毒性．Ｂｔｄ６１携带Ｂ１型的溶原性噬菌体，但又对Ｂ１型的Ｔｂ１０噬菌体有抗性． 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 达姆斯塔特亚种 晶体蛋白基因型
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苏云金芽孢杆菌cry1Da5基因的克隆与表达 被引量：1
15
作者 关鹏 秦培钢 +1 位作者 代小娟 宋金东 《江苏农业科学》 2020年第2期118-122,共5页
采用5对引物组合经2轮PCR扩增对苏云金芽孢杆菌QL75-2菌株中的cry基因进行鉴定,克隆得到1个cry1Da型基因片段。通过设计全长引物扩增得到该cry基因的全长序列,转入原核表达载体pET-28a中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,最后对表达蛋白... 采用5对引物组合经2轮PCR扩增对苏云金芽孢杆菌QL75-2菌株中的cry基因进行鉴定,克隆得到1个cry1Da型基因片段。通过设计全长引物扩增得到该cry基因的全长序列,转入原核表达载体pET-28a中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,最后对表达蛋白进行生物活性分析。序列分析结果表明,该cry1Da基因全长3495 bp,推测其编码1164个氨基酸,组成分子量约132.01 ku的蛋白质。该预测蛋白质与已知的Cry1Da3蛋白质具有最高的序列同源性(99.7%),该基因被国际杀虫晶体蛋白基因命名委员会正式命名为cry1Da5。生物活性分析结果表明,Cry1Da5蛋白质对鳞翅目的甜菜夜蛾幼虫具有较强的杀虫活性,其LC 50为21.47μg/mL,而对鳞翅目的棉铃虫幼虫无杀虫活性。因此,cry1Da5基因可作为一个新的cry基因资源在甜菜夜蛾的生物防治中应用。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 简并引物 cry1Da5基因 棉铃虫 甜菜夜蛾 杀虫活性
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苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因cry1 Ab22的克隆与表达
16
作者 伍金元 冯纪年 张兴 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2009年第1期151-154,共4页
【目的】克隆并表达苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiens,Bt)杀虫晶体蛋白cry1Ab22基因,为解决昆虫抗性问题提供有效途径,并为构建新型转基因工程菌和转基因植物提供基因材料。【方法】根据GenBank中cry1Ab型基因序列设计1对引物,并加... 【目的】克隆并表达苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiens,Bt)杀虫晶体蛋白cry1Ab22基因,为解决昆虫抗性问题提供有效途径,并为构建新型转基因工程菌和转基因植物提供基因材料。【方法】根据GenBank中cry1Ab型基因序列设计1对引物,并加入BamHⅠ和PstⅠ酶切位点。用全长基因PCR产物粘端定向克隆的方法,从苏云金芽孢杆菌S249菌株中扩增到1个苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白cry1Ab型基因cry1Ab22,将其克隆到表达载体pMAL-c2X中,转化大肠杆菌TB1,进行诱导表达,并对表达产物的杀虫活性进行检测。【结果】cry1Ab22基因长度约为3.5 kb;其与已知的cry1Ab3型基因同源性最高,所编码的蛋白质存在5个氨基酸差异。cry1Ab22基因已在GenBank中登录,登录号为EU220269,并被Bt毒素基因国际命名委员会正式命名为cry1Ab22。SDS-PAGE电泳结果表明,cry1Ab22基因表达了170 ku左右的融合蛋白。cry1Ab22蛋白对小菜蛾(Plutella xylostella)的LC50为225.1μg/mL。【结论】S249菌株含有新型的cry1Ab基因,且该基因表达的蛋白具有较强的杀虫活性。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 杀虫晶体蛋白基因cry1Ab22 生物杀虫活性
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苏云金芽胞杆菌可视化快速表达载体的构建与特性分析
17
作者 张静安 胡孝龙 +5 位作者 曹蓓蓓 廖敏 束长龙 张杰 王奎 操海群 《生物技术通报》 北大核心 2025年第1期95-102,共8页
【目的】构建可以快速高效表达苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫基因的表达载体,提高Bt杀虫基因发掘及功能研究效率。【方法】以pUC18载体为基础,构建一个以cry1Ac基因启动子p1Ac指导、融合绿色荧光蛋白GFP的可视化快速... 【目的】构建可以快速高效表达苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫基因的表达载体,提高Bt杀虫基因发掘及功能研究效率。【方法】以pUC18载体为基础,构建一个以cry1Ac基因启动子p1Ac指导、融合绿色荧光蛋白GFP的可视化快速表达载体p1Ac-GFP,并从生物活性、碱溶性、抗胰蛋白酶稳定性、培养条件等方面对其进行分析。【结果】p1Ac-GFP在大肠杆菌中指导表达的Cry1Ac蛋白与Bt来源的蛋白在杀虫活性方面无明显差异。同时,p1Ac-GFP表达的Cry1Ac蛋白能够溶解于50 mmol/L Na_(2)CO_(3)溶液中,可溶性组分可被胰蛋白酶消化为60 kD大小的核心活性片段。此外,p1Ac-GFP大肠杆菌宿主菌株可以发出绿色荧光,培养菌液荧光强度与所表达的Bt蛋白浓度呈较好的线性关系。培养条件优化结果显示,37℃、培养液与装瓶体积比为5/5、48 h的培养时间最适合p1Ac-GFP表达Bt Cry1Ac蛋白。【结论】p1Ac-GFP表达Bt蛋白时可以直接使用菌液荧光强度作为生物活性测定的浓度指示依据,有助于Bt基因杀虫活性功能的快速批量筛选。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 杀虫基因 cry1ac启动子 大肠杆菌 表达载体
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苏云金芽孢杆菌的分类及生物活性蛋白基因 被引量：60
18
作者 喻子牛 孙明 +4 位作者 刘子铎 戴经元 陈亚华 喻凌 罗曦霞 《中国生物防治》 CSCD 1996年第2期85-89,共5页
本文综合叙述了苏云金芽孢杆菌鞭毛抗原血清亚种的分类、生理生化鉴定,伴孢晶体对无脊椎动物4个门中的生物以及节肢动物门中9个目昆虫的生物活性,生物活性蛋白及其编码这些蛋白基因原定位和分类等方面的新动态。
关键词 苏云金芽孢杆菌 血清型 生物活性 蛋白基因
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一株苏云金芽孢杆菌的分离与杀虫基因的鉴定 被引量：9
19
作者 苏旭东 马雯 +3 位作者 马晓燕 王雪静 李英军 檀建新 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第4期184-188,共5页
采用温度筛选从云南省刁苓山土壤中分离得到一株伴孢晶体为长菱形的苏云金芽孢杆菌BSH-1。利用PCR-RFLP鉴定体系和SDS-PAGE对菌株所含cry基因类型和晶体蛋白的构成进行鉴定、分析,结果表明:菌株BSH-1具有的cry基因组合为:cry1Aa,cry1Ac,... 采用温度筛选从云南省刁苓山土壤中分离得到一株伴孢晶体为长菱形的苏云金芽孢杆菌BSH-1。利用PCR-RFLP鉴定体系和SDS-PAGE对菌株所含cry基因类型和晶体蛋白的构成进行鉴定、分析,结果表明:菌株BSH-1具有的cry基因组合为:cry1Aa,cry1Ac,cry1Db,cry2Ab,cry1Ia,表达的晶体蛋白有130,70和56 kDa 3种,该蛋白对甜菜夜蛾具有较高杀虫活性,LC50为1.43 ng/mg。该菌株的基因组合类型对构建杀虫基因工程菌具有重要参考价值。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 分离 杀虫基因 鉴定
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我国不同森林立地带土壤中苏云金芽孢杆菌cry基因资源研究 被引量：6
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作者 张永安 宋福平 +2 位作者 戴莲韵 张杰 李长友 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2003年第1期19-25,共7页
利用PCR RFLP鉴定体系和SDS PAGE表达蛋白的分析方法,分析了来自我国不同森林立地带(寒温带、中温带、暖温带、北亚热带、中亚热带、南亚热带、高原亚热带、热带)自然保护区森林土壤中分离的72株苏云金芽孢杆菌的cry1、cry2、cry3、cry4... 利用PCR RFLP鉴定体系和SDS PAGE表达蛋白的分析方法,分析了来自我国不同森林立地带(寒温带、中温带、暖温带、北亚热带、中亚热带、南亚热带、高原亚热带、热带)自然保护区森林土壤中分离的72株苏云金芽孢杆菌的cry1、cry2、cry3、cry4、cry5、cry8、cry9、cry10、cry11、cry1I杀虫晶体蛋白基因类型,表达蛋白和杀虫活性的生物测定。研究表明:同时含有cry1、cry2、cry1I3类基因的有21株菌,6株菌含有cry1、cry2类基因,4株菌含有cry1和cry1I基因,只含有cry1基因的有1株,cry2基因的4株,36株菌不含所鉴定的10类基因。同时证明:绝大多数含有cry1基因的菌株表达了130kD蛋白,含有cry2基因的菌株表达了60kD的蛋白。对不同农、林害虫棉铃虫、杨扇舟蛾、舞毒蛾、马尾松毛虫、黄粉甲、榆兰叶甲、落叶松叶蜂等幼虫的杀虫活性进行了生物测定。进一步证明了苏云金芽孢杆菌cry基因,表达蛋白及杀虫活性三者的相关性。为生产和科研提供了生物治虫、抗虫育种新的苏云金芽孢杆菌cry基因资源。 展开更多
关键词 森林立地带 土壤 苏云金芽孢杆菌 杀虫晶体蛋白 CRY 基因 杀虫剂 杀虫活性
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