苎麻香豆酸–3–羟化酶基因的原核表达 被引量：1

1

作者 袁有美 郭清泉 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期157-161,共5页

以湘苎3号为材料,采用RT–PCR克隆,获得苎麻香豆酸–3–羟化酶(Bn C3H)基因的开放阅读框(ORF)序列,测序正确后将该基因片段连接到原核表达载体p ET–22b中,将构建成功的重组子p ET–22b–C3H转入BL21并诱导表达。结果显示:Bn C3H基因OR... 以湘苎3号为材料,采用RT–PCR克隆,获得苎麻香豆酸–3–羟化酶(Bn C3H)基因的开放阅读框(ORF)序列,测序正确后将该基因片段连接到原核表达载体p ET–22b中,将构建成功的重组子p ET–22b–C3H转入BL21并诱导表达。结果显示:Bn C3H基因ORF区大小为1 536 bp,编码511个氨基酸,推测蛋白相对分子质量为57 800,理论等电点为8.61,编码的蛋白质为亲水性蛋白质;重组子在IPTG浓度为1 mmol/L时,融合蛋白的表达量在诱导2 h后达到最高,经IPTG诱导和SDS–PAGE检测,获得的融合蛋白与预期蛋白相符。 展开更多

关键词 苎麻 苎麻香豆酸–3–羟化酶 基因克隆 原核表达

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金银花香豆酸3-羟化酶基因LjC3H2的生物信息学分析 被引量：1

2

作者 冯唐锴 雷群 +1 位作者 罗丽萍 蓝玉 《安徽农学通报》 2024年第2期16-21,共6页

香豆酸3-羟化酶广泛存在于植物中,属于细胞色素P450家族的CYP98A亚家族。该酶能在植物苯丙素代谢中催化苯环C3位置的羟基化反应,是绿原酸生物合成的关键酶之一。本文以金银花香豆酸3-羟化酶基因LjC3H2为研究对象,采用生物信息学方法进... 香豆酸3-羟化酶广泛存在于植物中,属于细胞色素P450家族的CYP98A亚家族。该酶能在植物苯丙素代谢中催化苯环C3位置的羟基化反应,是绿原酸生物合成的关键酶之一。本文以金银花香豆酸3-羟化酶基因LjC3H2为研究对象,采用生物信息学方法进行分析。结果表明,LjC3H2无信号肽,无跨膜结构域,偏亲水,定位于内质网上;二级结构以α螺旋为主,无规则卷曲较多。LjC3H2与其他植物同源蛋白氨基酸序列比对和系统发育分析表明,LjC3H2与蓟、桔梗的C3H亲缘关系较近,与同属于金银花的LjC3H亲缘关系较远;该蛋白的三级结构与细胞色素P450三级结构相似。 展开更多

关键词 香豆酸3-羟化酶 金银花 生物信息学 细胞色素P450

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烟草苯丙烷代谢途径关键酶肉桂酸-4-羟化酶、4-香豆酸-辅酶A基因的分离及表达特性分析 被引量：17

3

作者 于利 张彦 +4 位作者 陈爱国 梁洪波 Qamaruddin Jogi 徐文玲 许娜 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1067-1073,共7页

肉桂酸-4-羟化酶(C4H)、4-香豆酸-辅酶A(4CL)是烟草苯丙烷代谢途径的关键酶,其多酚类产物与烟草品质密切相关。本研究以酚类物质含量合成差异较大的2个烤烟品种红花大金元(HD)和K326为试验材料,利用同源克隆技术获得这2种烟草Ntc4h和Nt... 肉桂酸-4-羟化酶(C4H)、4-香豆酸-辅酶A(4CL)是烟草苯丙烷代谢途径的关键酶,其多酚类产物与烟草品质密切相关。本研究以酚类物质含量合成差异较大的2个烤烟品种红花大金元(HD)和K326为试验材料,利用同源克隆技术获得这2种烟草Ntc4h和Nt4cl基因的cDNA序列并进行表达特性分析。结果表明,在2个品种中Ntc4h和Nt4cl各有2个同源基因,Ntc4h1、Ntc4h2、Nt4cl1和Nt4cl2的ORF长度分别为1518 bp、1518 bp、1644 bp和1629 bp。Nt4cl1、Ntc4h1和Ntc4h2在编码序列上存在品种间差异。实时荧光定量PCR分析结果表明,该2种酶的基因在烟草中具有明显的时空表达特异性,2种酶基因在根、茎、叶、花和萼片中都有表达,在茎的木质部和韧皮部中的表达量均显著高于其他组织;在圆顶期和适熟期表达水平较高,在适熟期达到最高;且两品种中的表达模式存在差异。 展开更多

关键词 烟草 肉桂酸-4-羟化酶(C4H) 4-香豆酸-辅酶A(4CL) 基因分离 表达分析

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毛竹香豆酸-3-羟基化酶基因的克隆与表达研究 被引量：11

4

作者 杨学文 彭镇华 +1 位作者 高志民 李雪平 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第29期14051-14053,14197,共4页

香豆酸-3羟-基化酶(C3H)是木质素单体合成中的一个关键酶。采用文库筛选的方法从毛竹萌发种子全长cDNA文库中克隆了1个C3H基因,命名为PheC3H。PheC3H基因全长1842bp,包括1个完整的开放阅读框,编码1个由513个氨基酸残基组成的蛋白(PheC3H... 香豆酸-3羟-基化酶(C3H)是木质素单体合成中的一个关键酶。采用文库筛选的方法从毛竹萌发种子全长cDNA文库中克隆了1个C3H基因,命名为PheC3H。PheC3H基因全长1842bp,包括1个完整的开放阅读框,编码1个由513个氨基酸残基组成的蛋白(PheC3H),C端具有1个细胞色素P450蛋白(CYP450)特异的保守结构域。相似性比对显示,PheC3H与其他植物的C3H有着较高的相似性,其中与小麦的CYP98A蛋白相似性最高,达91.2%;聚类分析表明,PheC3H属于CYP98A亚家族蛋白;实时定量PCR结果表明,PheC3H在一年生实生毛竹叶鞘中表达量最高,其次是在根中,在叶片和茎中表达量相对较低。 展开更多

关键词 毛竹 香豆酸-3-羟基化酶 表达 木质素

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双白莲合剂中对香豆酸的含量测定及其抑制食管癌细胞生长的机制 被引量：2

5

作者 郑伊琳 姚笑睿 +2 位作者 辛淑波 李庆南 黄国鑫 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期918-925,共8页

目的 建立双白莲合剂中主要成分对香豆酸(p-coumaric acid, PCA)的含量测定方法,并探索其抗癌机制。方法 采用高效液相色谱法建立双白莲合剂中PCA的含量测定方法;采用CCK8法检测PCA对食管癌细胞的抗肿瘤活性作用,测定PCA对食管癌细胞的... 目的 建立双白莲合剂中主要成分对香豆酸(p-coumaric acid, PCA)的含量测定方法,并探索其抗癌机制。方法 采用高效液相色谱法建立双白莲合剂中PCA的含量测定方法;采用CCK8法检测PCA对食管癌细胞的抗肿瘤活性作用,测定PCA对食管癌细胞的半抑制浓度;采用裸鼠成瘤实验研究PCA的体内抗肿瘤作用;采用Western blotting检测食管癌细胞和裸鼠肿瘤组织凋亡相关蛋白(cleaved caspase 3、cleaved PARP、Bad、Bcl-2、PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT)的表达。结果 双白莲合剂中PCA含量为16.84μg/mL,PCA线性回归方程为y=204 402x+360 904(15~40μg/mL),精密度实验标准偏差(relative standard deviation, RSD)为2.66%,稳定性实验RSD分别为2.35%、3.22%、1.58%、4.08%,重复性实验RSD为4.01%,加样回收率均值为97.83%,RSD值为6.16%。CCK8实验结果显示,PCA在食管癌细胞KYSE30和KYSE140的半数抑制率(IC)分别为36μg/mL和55μg/mL;裸鼠荷瘤实验结果显示,给药30 d后,空白对照组小鼠的移植瘤体持续增大,而顺铂组(100μg/mL)、PCA组以及PCA联合顺铂给药均可有效抑制荷瘤小鼠移植瘤体的生长。此外,Western blotting结果显示,顺铂、PCA以及PCA联合顺铂均可以有效地提高瘤体组织和KYSE30、KYSE140食管癌细胞中cleaved caspase 3、cleaved PARP以及Bad的蛋白表达含量,同时降低瘤体组织和食管癌细胞中Bcl-2、p-PI3K和p-AKT的蛋白表达。结论 双白莲合剂中主要成分PCA含量为16.84μg/mL,液相色谱含量测定方法条件灵敏稳定;PCA可能通过调节PI3K/AKT/Bcl-2信号通路,诱导食管癌细胞凋亡,从而产生抗肿瘤活性作用。 展开更多

关键词 双白莲合剂 对香豆酸 食管癌 PI3K/AKT/Bcl-2通路

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3-(4-羟基苯基)丙酸在酿酒酵母中的生物合成

6

作者 江晶洁 庄以彬 +2 位作者 殷华 刘涛 刘少伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期184-190,共7页

3-(4-羟基苯基)丙酸(HPPA)是一种芳香类化合物,作为中间体主要应用于医药、食品、化学领域,具有重要的经济价值。旨在实现HPPA在酿酒酵母中的从头合成,通过在酿酒酵母中过表达约氏黄杆菌来源的酪氨酸转移酶(Fj TAL)、拟南芥来源的对香... 3-(4-羟基苯基)丙酸(HPPA)是一种芳香类化合物,作为中间体主要应用于医药、食品、化学领域,具有重要的经济价值。旨在实现HPPA在酿酒酵母中的从头合成,通过在酿酒酵母中过表达约氏黄杆菌来源的酪氨酸转移酶(Fj TAL)、拟南芥来源的对香豆酰辅酶A连接酶(At4CL),同时利用酿酒酵母BY4742自身来源的超长链烯酰辅酶A还原酶(Sc TSC13)、硫酯水解酶,实现了在酿酒酵母中从头合成HPPA,产量约为70 mg/L左右。在以4 mmol/L酪氨酸为前体、半乳糖诱导Fj TAL过表达、30℃发酵培养72 h的条件下,约36%的酪氨酸转化生成对香豆酸;在以4 mmol/L对香豆酸或咖啡酸为前体,半乳糖诱导At4CL过表达,同时利用酵母内源Sc TSC13、硫酯水解酶,30℃发酵培养72 h的条件下,约94%的对香豆酸被还原成HPPA,约91%的咖啡酸被还原成3,4-二羟基苯丙酸(DHPPA),为进一步生物合成HPPA及其衍生物奠定了基础。 展开更多

关键词 酿酒酵母 3-(4-羟基苯基)丙酸(HPPA) 生物合成 酪氨酸氨基转移酶 对香豆酰辅酶A连接酶

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茉莉酸甲酯处理对鲜切菠萝品质及抗氧化活性的影响 被引量：28

7

作者 季悦 李静 +2 位作者 王雷 金鹏 郑永华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第1期258-263,共6页

研究茉莉酸甲酯处理对鲜切菠萝贮藏期间品质和抗氧化活性的影响。先将完整的菠萝果实在20℃条件下分别用浓度为0、1、10、100μmol/L的茉莉酸甲酯熏蒸12 h,然后进行鲜切加工并于15℃条件下贮藏48 h。结果表明,茉莉酸甲酯处理可促进鲜切... 研究茉莉酸甲酯处理对鲜切菠萝贮藏期间品质和抗氧化活性的影响。先将完整的菠萝果实在20℃条件下分别用浓度为0、1、10、100μmol/L的茉莉酸甲酯熏蒸12 h,然后进行鲜切加工并于15℃条件下贮藏48 h。结果表明,茉莉酸甲酯处理可促进鲜切菠萝总酚含量和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力上升,抑制可溶性固形物及可滴定酸含量下降,而对色泽及菌落总数无显著影响(P>0.05)。其中,10μmol/L茉莉酸甲酯处理效果最好,能显著地诱导鲜切菠萝贮藏期间苯丙氨酸解氨酶和肉桂酸-4-羟化酶活力的上升(P<0.05),延缓4-香豆酸辅酶A连接酶活力的下降(P<0.05),从而促进总酚和总黄酮的积累,提高DPPH自由基清除能力。这些结果表明,茉莉酸甲酯处理可保持鲜切菠萝的品质并提高其抗氧化活性。 展开更多

关键词 茉莉酸甲酯 鲜切菠萝 苯丙氨酸解氨酶 肉桂酸-4-羟化酶 4-香豆酸辅酶A连接酶 抗氧化活性

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木质素相关合成酶在甘蓝型黄、黑籽油菜中的表达差异 被引量：1

8

作者 冉秀芝 雷波 +3 位作者 梁颖 李加纳 李波 柴友荣 《重庆理工大学学报（自然科学）》 CAS 2012年第6期29-35,共7页

以1对甘蓝型黄籽(L2)、黑籽(L1)油菜的近等基因系为材料,研究了木质素生物合成的部分关键酶4CL、F5H和CAD在黄、黑籽油菜的不同组织中的表达差异。结果表明:4CL、F5H和CAD在甘蓝型黄、黑籽油菜不同器官和组织中的表达存在差异,特别是在... 以1对甘蓝型黄籽(L2)、黑籽(L1)油菜的近等基因系为材料,研究了木质素生物合成的部分关键酶4CL、F5H和CAD在黄、黑籽油菜的不同组织中的表达差异。结果表明:4CL、F5H和CAD在甘蓝型黄、黑籽油菜不同器官和组织中的表达存在差异,特别是在种子中。其中,在同一组织器官中,4CL的不同种皮颜色之间的甘蓝型油菜中的表达差异明显;F5H在甘蓝型黄、黑籽油菜中的花与在30 d种子中的表达差异明显;CAD在种子的不同发育期中的表达差异明显。因此,这几种酶在甘蓝型黄、黑籽油菜种子中的表达差异,特别是在甘蓝型黄籽油菜的30 d种子中的表达都明显低于相应的黑籽油菜,说明这些酶的转录水平是导致木质素在甘蓝型黄、黑籽油菜之间存在表达差异的主要原因之一,也可能是形成甘蓝型黄、黑籽油菜皮壳差异的重要原因之一。 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 对-香豆酸连接酶 5-羟基阿魏酸羟化酶 松柏醇脱氢酶 转录水平

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木质素生物合成中羟基化酶的研究进展 被引量：1

9

作者 聂会忠 薛永常 +1 位作者 高志芳 刘长斌 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2008年第4期5-9,共5页

介绍了3种调控木质素代谢的羟基化酶的遗传特性及其基因调控的研究进展,重点综述了香豆酸-3-羟基化酶(C3H)的最新研究进展,讨论了存在的问题并提出了相关策略。

关键词 木质素 细胞色素P450单氧化物酶 香豆酸-3-羟基化酶 羟基肉桂酰转移酶

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舞毒蛾取食诱导小黑杨苯丙烷代谢酶活性及其相关基因的表达 被引量：2

10

作者 周心怡 闫丽琼 +3 位作者 吕云彤 孙丽丽 朱靖闻 曹传旺 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第3期108-116,共9页

【目的】探究舞毒蛾取食对小黑杨苯丙氨酸代谢途径中关键酶诱导防御的影响,为明确杨树抗虫性分子机制提供理论依据,并为利用基因工程手段提高寄主抗虫性提供基因材料。【方法】通过RT-PCR法获得小黑杨C4H和4CL基因全长序列,并进行基因... 【目的】探究舞毒蛾取食对小黑杨苯丙氨酸代谢途径中关键酶诱导防御的影响,为明确杨树抗虫性分子机制提供理论依据,并为利用基因工程手段提高寄主抗虫性提供基因材料。【方法】通过RT-PCR法获得小黑杨C4H和4CL基因全长序列,并进行基因特性分析;采用邻接法构建C4H和4CL系统进化树;利用分光光度计法比较舞毒蛾取食和机械损伤处理下小黑杨C4H和4CL活性,并运用实时荧光定量RT-PCR技术测定2种损伤处理对C4H和4CL基因表达量的影响。【结果】从小黑杨转组文库中克隆鉴定获得2个属于p450家族的C4H基因(命名为C4H-1和C4H-2)以及1个多结构域蛋白超家族(AFD_class_I)4CL基因,全长基因开放阅读框大小为1518~1740 bp,编码505~579个氨基酸,蛋白质分子质量为58.00~63.03 kDa,理论等电点pI为5.63~9.09。系统进化树分析表明,小黑杨C4H-1与银白杨亲缘关系近聚为一类;而C4H-2与毛白杨、欧洲山杨、毛果杨×美洲黑杨和毛果杨具有较高同源性聚为一类,小黑杨4CL与毛果杨×美洲黑杨和毛果杨亲缘关系较近。舞毒蛾取食诱导小黑杨C4H-1、C4H-2和4CL基因表达量增加,分别为对照组的6.86、1.15和1.50倍;而机械损伤诱导C4H-1基因表达上调,抑制C4H-2和4CL基因表达下调,分别为对照组的1.80、0.71和0.60倍。取食和机械损伤均能诱导小黑杨C4H和4CL活性增加,且取食诱导显著高于机械损伤。【结论】舞毒蛾取食显著诱导小黑杨C4H和4CL活性增加,可能分别来源于C4H-1、C4H-2和4CL基因表达量增加。舞毒蛾取食参与诱导小黑杨苯丙氨酸生物合成途径防御反应,可为进一步明确小黑杨诱导抗性机制以及探讨小黑杨木质素合成防御昆虫取食提供基础理论。 展开更多

关键词 舞毒蛾 取食 小黑杨 肉桂酸-4-羟化酶 4-香豆酸CoA连接酶 机械损伤 基因表达

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星宿菜的黄酮类化学成分 被引量：4

11

作者 夏欣 刘梅芳 林立东 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期93-95,共3页

为了解星宿菜(Lysimachia fortunei Maxim.)的化学成分,利用溶剂萃取和色谱分离手段,从星宿菜全草的乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位分离得到了5个黄酮类化合物。经波谱分析及与文献数据对照,分别鉴定为:槲皮素(1)、异鼠李素-3-O-(6-香豆... 为了解星宿菜(Lysimachia fortunei Maxim.)的化学成分,利用溶剂萃取和色谱分离手段,从星宿菜全草的乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位分离得到了5个黄酮类化合物。经波谱分析及与文献数据对照,分别鉴定为:槲皮素(1)、异鼠李素-3-O-(6-香豆酸酯)-β-D-葡萄糖苷(2)、山奈酚-3-O-β-D-半乳糖苷(3)、金丝桃苷(4)和山奈酚-3-O-[6-(3-羟基-3-甲基戊二酸单酯)]-β-D-葡萄糖苷(5),其中化合物2和5为首次从珍珠菜属植物中分离获得。 展开更多

关键词 星宿菜 黄酮类成分 异鼠李素-3-O-(6-香豆酸酯)-β-D-葡萄糖苷 山奈酚-3-O-［6-(3-羟基-3-甲基戊二酸单酯)]-β-D-葡萄糖苷

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