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“玛瑙红”樱桃花变绿植原体鉴定及快速检测体系构建
1
作者
王林
朱淑珠
+3 位作者
王雅丽
何梅
李燏
宋常美
《中国南方果树》
北大核心
2025年第3期118-124,共7页
为确定导致贵州“玛瑙红”樱桃花变绿的植原体种类并构建快速的检测方法,通过使用tuf基因通用引物进行PCR扩增,并对扩增片段进行测序、Blast比对和同源性分析,进而构建系统进化树,确定了引起花变绿的植原体的分类地位。基于获得的tuf基...
为确定导致贵州“玛瑙红”樱桃花变绿的植原体种类并构建快速的检测方法,通过使用tuf基因通用引物进行PCR扩增,并对扩增片段进行测序、Blast比对和同源性分析,进而构建系统进化树,确定了引起花变绿的植原体的分类地位。基于获得的tuf基因序列,设计了一对特异性引物,并对dNTPs、MgSO_(4)、Bst2.0 DNA聚合酶浓度、引物比例以及反应程序进行了优化,构建环介导等温扩增(LAMP)反应体系,同时结合滤纸条DNA快速提取方法,建立了一种不依赖PCR仪、高灵敏度、简便快捷且可视化的检测技术。结果表明,“玛瑙红”樱桃花变绿植原体被鉴定为属于16SrV-B亚组;优化的LAMP体系为DNTPs最终浓度1.4 mmol/L,MgSO_(4)最终浓度10.0 mmol/L,内外引物浓度比1∶10(外侧引物浓度固定为0.2μmol/L),Bst2.0 DNA聚合酶最终浓度0.32 U/μL,DNA模板量31.7 ng/μL,1×Isothermal Amplification Buffer(等温扩增缓冲液),在60℃下恒温反应50 min,对“玛瑙红”樱桃花变绿植原体检测灵敏度达到3.96×10^(-4)ng/μL,是传统PCR的100倍,且通过反应液颜色变化实现了检测结果的可视化。研究不仅明确了贵州“玛瑙红”樱桃花变绿植原体的分类地位,还建立了一种无需依赖高端设备的快速检测技术,为樱桃植原体疾病的快速诊断提供了新方法,有助于田间病害的早期监测与控制。
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关键词
植原体
序列比对
LAMP可视化
纤维素滤纸条法
樱桃
花变绿
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职称材料
玛瑙红樱桃花变绿病害病原鉴定及qPCR检测体系建立
2
作者
何梅
朱淑珠
+3 位作者
王雅丽
王林
李燏
宋常美
《中国南方果树》
北大核心
2025年第3期125-131,共7页
为确定贵州玛瑙红樱桃花变绿病害病原分类地位及构建快速有效的检测体系,开展了研究。利用植原体16S rRNA基因引物R16m F2/R16m R1对感病玛瑙红樱桃总DNA进行常规PCR扩增、克隆和测序,通过同源性比较、系统进化分析和在线虚拟RFLP分析,...
为确定贵州玛瑙红樱桃花变绿病害病原分类地位及构建快速有效的检测体系,开展了研究。利用植原体16S rRNA基因引物R16m F2/R16m R1对感病玛瑙红樱桃总DNA进行常规PCR扩增、克隆和测序,通过同源性比较、系统进化分析和在线虚拟RFLP分析,确定其属于植原体16SrV-B亚组。根据16S rRNA基因设计并合成引物对MN16SF-2/MN16SR-2,用重组质粒pEASY-T1-MN16S为模板建立标准曲线,构建了玛瑙红樱桃花变绿植原体实时荧光定量PCR检测体系。运用该体系检测喷施了外源茉莉酸甲酯、褪黑素、四环素和未施外源物质的患病苗木体内植原体含量,发现施加外源物质组体内植原体含量与未施组相比均大幅下降。研究明确了玛瑙红樱桃花变绿植原体的分类地位并成功建立了qPCR检测体系,为玛瑙红樱桃植原体检测提供了技术支持。
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关键词
玛瑙红樱桃
花变绿
病原鉴定
实时荧光PCR检测
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职称材料
题名
“玛瑙红”樱桃花变绿植原体鉴定及快速检测体系构建
1
作者
王林
朱淑珠
王雅丽
何梅
李燏
宋常美
机构
贵阳学院生物与环境工程学院
出处
《中国南方果树》
北大核心
2025年第3期118-124,共7页
基金
国家自然科学基金地区基金(32160693)
贵州省林业科学技术研究项目(黔林科合[2020])
贵阳学院学科团队建设项目(2022-xk12)资助。
文摘
为确定导致贵州“玛瑙红”樱桃花变绿的植原体种类并构建快速的检测方法,通过使用tuf基因通用引物进行PCR扩增,并对扩增片段进行测序、Blast比对和同源性分析,进而构建系统进化树,确定了引起花变绿的植原体的分类地位。基于获得的tuf基因序列,设计了一对特异性引物,并对dNTPs、MgSO_(4)、Bst2.0 DNA聚合酶浓度、引物比例以及反应程序进行了优化,构建环介导等温扩增(LAMP)反应体系,同时结合滤纸条DNA快速提取方法,建立了一种不依赖PCR仪、高灵敏度、简便快捷且可视化的检测技术。结果表明,“玛瑙红”樱桃花变绿植原体被鉴定为属于16SrV-B亚组;优化的LAMP体系为DNTPs最终浓度1.4 mmol/L,MgSO_(4)最终浓度10.0 mmol/L,内外引物浓度比1∶10(外侧引物浓度固定为0.2μmol/L),Bst2.0 DNA聚合酶最终浓度0.32 U/μL,DNA模板量31.7 ng/μL,1×Isothermal Amplification Buffer(等温扩增缓冲液),在60℃下恒温反应50 min,对“玛瑙红”樱桃花变绿植原体检测灵敏度达到3.96×10^(-4)ng/μL,是传统PCR的100倍,且通过反应液颜色变化实现了检测结果的可视化。研究不仅明确了贵州“玛瑙红”樱桃花变绿植原体的分类地位,还建立了一种无需依赖高端设备的快速检测技术,为樱桃植原体疾病的快速诊断提供了新方法,有助于田间病害的早期监测与控制。
关键词
植原体
序列比对
LAMP可视化
纤维素滤纸条法
樱桃
花变绿
Keywords
phytoplasma
sequence alignment
LAMP visualization
cellulose filter paper strip method
cherry
virescence
分类号
S436.621.2 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
玛瑙红樱桃花变绿病害病原鉴定及qPCR检测体系建立
2
作者
何梅
朱淑珠
王雅丽
王林
李燏
宋常美
机构
贵阳学院生物与环境工程学院
出处
《中国南方果树》
北大核心
2025年第3期125-131,共7页
基金
国家自然科学基金地区基金(32160693)
贵州省林业科学技术研究项目(黔林科合[2020])
贵阳学院学科团队建设项目(合同号2022-xk12)资助。
文摘
为确定贵州玛瑙红樱桃花变绿病害病原分类地位及构建快速有效的检测体系,开展了研究。利用植原体16S rRNA基因引物R16m F2/R16m R1对感病玛瑙红樱桃总DNA进行常规PCR扩增、克隆和测序,通过同源性比较、系统进化分析和在线虚拟RFLP分析,确定其属于植原体16SrV-B亚组。根据16S rRNA基因设计并合成引物对MN16SF-2/MN16SR-2,用重组质粒pEASY-T1-MN16S为模板建立标准曲线,构建了玛瑙红樱桃花变绿植原体实时荧光定量PCR检测体系。运用该体系检测喷施了外源茉莉酸甲酯、褪黑素、四环素和未施外源物质的患病苗木体内植原体含量,发现施加外源物质组体内植原体含量与未施组相比均大幅下降。研究明确了玛瑙红樱桃花变绿植原体的分类地位并成功建立了qPCR检测体系,为玛瑙红樱桃植原体检测提供了技术支持。
关键词
玛瑙红樱桃
花变绿
病原鉴定
实时荧光PCR检测
Keywords
Prunus pseudocerasus‘Manaohong’
virescence
pathogen identification
real-time fluorescence PCR detection
分类号
S662.5 [农业科学—果树学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
“玛瑙红”樱桃花变绿植原体鉴定及快速检测体系构建
王林
朱淑珠
王雅丽
何梅
李燏
宋常美
《中国南方果树》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
玛瑙红樱桃花变绿病害病原鉴定及qPCR检测体系建立
何梅
朱淑珠
王雅丽
王林
李燏
宋常美
《中国南方果树》
北大核心
2025
0
在线阅读
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职称材料
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