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重组色氨酸合成酶催化合成L-5-羟基色氨酸 被引量:3
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作者 徐礼生 高贵珍 +4 位作者 曹稳根 赵亮 张兴桃 焦庆才 鲍妮娜 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第1期47-51,68,共6页
利用重组色氨酸合成酶催化合成L-5-羟基色氨酸,采用单因素以及响应面分析方法考察了p H、反应温度、底物浓度和底物摩尔比对L-5-羟基色氨酸合成的影响。最佳转化条件为:反应温度为32℃,p H=8.6,5-羟基吲哚与工业角蛋白水解氨基酸液中L-... 利用重组色氨酸合成酶催化合成L-5-羟基色氨酸,采用单因素以及响应面分析方法考察了p H、反应温度、底物浓度和底物摩尔比对L-5-羟基色氨酸合成的影响。最佳转化条件为:反应温度为32℃,p H=8.6,5-羟基吲哚与工业角蛋白水解氨基酸液中L-丝氨酸的适宜底物摩尔比为1.1∶1,底物工业角蛋白水解氨基酸液中L-丝氨酸最适合浓度为180 mmol/L,反应平衡时间为18 h,工业角蛋白水解氨基酸液中L-丝氨酸摩尔转化率达到86.5%。 展开更多
关键词 合成酶 5-羟基 L-丝 5-羟基吲哚 生物工程
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水/有机溶剂双相体系中色氨酸合成酶酶法合成2-甲基-L-色氨酸 被引量:2
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作者 徐礼生 高贵珍 +5 位作者 曹稳根 赵亮 张兴桃 焦庆才 陈军 宋曼 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期547-552,共6页
本文作者研究了水/有机溶剂双相体系中利用色氨酸合成酶催化L-丝氨酸和2-甲基吲哚合成2-甲基-L-色氨酸,考察了有机溶剂、有机溶剂体积分数、p H、反应温度、表面活性剂、金属离子和底物浓度对色氨酸合成酶催化合成2-甲基-L-色氨酸的影... 本文作者研究了水/有机溶剂双相体系中利用色氨酸合成酶催化L-丝氨酸和2-甲基吲哚合成2-甲基-L-色氨酸,考察了有机溶剂、有机溶剂体积分数、p H、反应温度、表面活性剂、金属离子和底物浓度对色氨酸合成酶催化合成2-甲基-L-色氨酸的影响。有机溶剂包括二甲苯、甲苯、乙酸乙酯、乙酸丁酯和辛醇,表面活性剂包括吐温80、聚乙二醇辛基苯基醚(OP)、CTAB和Trion X-100,金属离子包括Mg2+、Ca2+、Cu2+、Co2+和Zn2+。结果表明,酶法最佳转化条件为:有机相溶剂为甲苯,甲苯体积分数为2%,反应温度为40℃,水相p H为8,底物L-丝氨酸浓度为150mmol/L,表面活性剂Trion X-100质量分数为2%,金属离子Ca2+浓度为0.1 mmol/L,色氨酸合成酶酶促反应5 h,2-甲基-L-色氨酸的质量浓度为21.17 g/L。重组大肠杆菌DM206可作为2-甲基-L-色氨酸生产菌,具有较好的2-甲基-L-色氨酸生产潜力。 展开更多
关键词 合成酶 2-甲基-L- L-丝 2-甲基吲哚
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色氨酸合成酶高产菌株的诱变选育 被引量:2
3
作者 辛智海 《贵州农业科学》 CAS 1998年第3期20-22,共3页
使用NTG为主要诱变剂,对出发菌株E.coliW31101进行多次连续的诱变和筛选,使其酶法合成色氨酸的产量由45g/l上升至695g/l。
关键词 合成酶 大肠杆菌 菌株 诱变 诱变剂 选育
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色氨酸合成酶酶法合成S-苯基-L-半胱氨酸
4
作者 徐礼生 高贵珍 +4 位作者 曹稳根 徐基贵 赵亮 史宏伟 焦庆才 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第6期707-710,共4页
利用重组色氨酸合成酶催化合成S-苯基-L-半胱氨酸,考察了反应温度、pH、底物摩尔比和底物浓度对色氨酸合成酶酶活的影响。最佳转化条件为:反应温度为37℃,pH=8,苯硫酚与L-丝氨酸的适宜底物摩尔比为1.2∶1,底物最适合浓度为400 mmol/L,... 利用重组色氨酸合成酶催化合成S-苯基-L-半胱氨酸,考察了反应温度、pH、底物摩尔比和底物浓度对色氨酸合成酶酶活的影响。最佳转化条件为:反应温度为37℃,pH=8,苯硫酚与L-丝氨酸的适宜底物摩尔比为1.2∶1,底物最适合浓度为400 mmol/L,反应达到平衡时间为16 h,底物L-丝氨酸摩尔转化率达到91%,苯硫酚与色氨酸合成酶活性位点Ser 235和Gly 233形成稳定的氢键。 展开更多
关键词 合成酶 S-苯基-L-半胱 L-丝 苯硫酚 生物工程
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菘蓝色氨酸合成酶基因的克隆与生物信息学分析 被引量:2
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作者 杨树 潘淑琴 +2 位作者 张丽红 王喆之 李焘 《陕西师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期66-70,共5页
对菘蓝色氨酸合成酶基因IiTSA进行克隆,并对其进行生物信息学分析.结果表明:菘蓝IiTSA基因全长2 111bp,包含8个外显子和7个内含子;cDNA全长1 035bp,编码311个氨基酸,编码的蛋白定位在叶绿体基质中,是一种无信号肽和跨膜结构域的疏水性蛋... 对菘蓝色氨酸合成酶基因IiTSA进行克隆,并对其进行生物信息学分析.结果表明:菘蓝IiTSA基因全长2 111bp,包含8个外显子和7个内含子;cDNA全长1 035bp,编码311个氨基酸,编码的蛋白定位在叶绿体基质中,是一种无信号肽和跨膜结构域的疏水性蛋白;二级结构主要由α-螺旋、β-转角、延伸链和不规则卷曲组成;序列比对结果显示,菘蓝IiTSA核酸序列和氨基酸序列与其他多种植物的TSA核酸序列和氨基酸序列均具有较高的同源性. 展开更多
关键词 菘蓝 靛蓝 合成酶 生物信息学
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基于7-异戊二烯色氨酸合成酶催化合成C-7异戊烯化的吲哚二酮哌嗪生物碱 被引量:1
6
作者 刘瑞 张弘弛 +1 位作者 李慧 周凤 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期413-421,共9页
以L-色氨酸系的二酮哌嗪为底物,7-异戊二烯色氨酸合成酶催化合成异戊烯化的吲哚二酮哌嗪;采用分子对接方法分析底物与酶的亲和关系;采用MTT法测定合成的异戊烯化吲哚二酮哌嗪对3种肿瘤细胞的抑制活性;单因素法优化活性最高的异戊烯化吲... 以L-色氨酸系的二酮哌嗪为底物,7-异戊二烯色氨酸合成酶催化合成异戊烯化的吲哚二酮哌嗪;采用分子对接方法分析底物与酶的亲和关系;采用MTT法测定合成的异戊烯化吲哚二酮哌嗪对3种肿瘤细胞的抑制活性;单因素法优化活性最高的异戊烯化吲哚二酮哌嗪的酶催化条件。结果表明,催化合成7个C-7异戊烯化的吲哚二酮哌嗪生物碱,分子对接结果验证酶催化效率;体外抗肿瘤活性筛选出cyclo-L-7-dimethylallyl-Trp-L-Pro的活性最高,其最佳酶催化条件为:反应时间18 h,温度为35℃,pH为8.0(Tris-HCl缓冲液),添加5 mmol·L^(-1)的MgCl_(2)。 展开更多
关键词 吲哚二酮哌嗪 7-异戊二烯合成酶 分子对接 抗肿瘤活性
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色氨酸合成酶基因工程菌合成S-甲基-L-半胱氨酸 被引量:1
7
作者 徐礼生 高贵珍 +5 位作者 曹稳根 赵亮 张兴桃 焦庆才 鲍妮娜 宋曼 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期655-660,共6页
通过密码子优化设计构建色氨酸合成酶基因工程菌,单因素以及响应面法研究色氨酸合成酶基因工程菌制备S-甲基-L-半胱氨酸。结果表明,温度39℃、pH 8.5、L-丝氨酸浓度360mmol/L,反应平衡时间20 h,S-甲基-L-半胱氨酸的质量浓度为40.49 g/L。
关键词 合成酶 S-甲基-L-半胱 L-丝 甲硫醇
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色氨酸合成酶基因工程菌的研究 被引量:1
8
作者 于巧玲 徐礼生 +4 位作者 张兴桃 李婷婷 叶静 孙玥 于婷 《农产品加工》 2020年第5期59-61,共3页
随着L-色氨酸在食品工业和医药保健等领域的开拓,市场需求日益增长,色氨酸合成酶能合成L-色氨酸,使得色氨酸合成酶逐渐成为研究热点。通过阐述色氨酸合成酶的性质、作用机理、酶固定化及应用,为进一步色氨酸合成酶研究提供理论基础。
关键词 合成酶 基因工程菌 固定化 亚基
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谷氨酸棒杆菌3-脱氧-α-阿拉伯庚酮糖酸-7磷酸合成酶基因的克隆与过量表达 被引量:1
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作者 王玉华 于含松 +2 位作者 刘加欢 刘回民 胡耀辉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第5期162-165,共4页
本实验对谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)AS10111及其亚硝基胍诱变获得的丙氨酸和酪氨酸双营养缺陷型、抗3-甲基色氨酸突变菌株JLC1中3-脱氧-α-阿拉伯庚酮糖酸-7磷酸合成酶(DS)基因进行克隆和序列分析,将突变体来源DS基因构... 本实验对谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)AS10111及其亚硝基胍诱变获得的丙氨酸和酪氨酸双营养缺陷型、抗3-甲基色氨酸突变菌株JLC1中3-脱氧-α-阿拉伯庚酮糖酸-7磷酸合成酶(DS)基因进行克隆和序列分析,将突变体来源DS基因构建pZ8-1-DSM重组质粒,在谷氨酸棒杆菌突变株JLC1中进行表达,重组菌株JLC1(pZ8-1-DSM)DS酶活力分别是宿主菌和野生型菌株DS酶活力的5.9和7.3倍,色氨酸产量达到14.90g/L,较宿主菌提高了65%。这表明通过在谷氨酸棒杆菌中过量表达3-脱氧-α-阿拉伯庚酮糖酸-7磷酸合成酶基因可以有效提高该酶活力和色氨酸的产量。 展开更多
关键词 棒杆菌 L-3-脱氧-α-阿拉伯庚酮糖-7磷合成酶 过量表达
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植物中邻氨基苯甲酸合成酶的研究进展 被引量:8
10
作者 钱旭 于可济 +3 位作者 袁冠绅 杨航宇 潘秋红 朱保庆 《热带生物学报》 2015年第4期504-511,共8页
综述了邻氨基苯甲酸合成酶(anthranilate synthase,AS)的相关代谢途径,ASα和β亚基的特性,AS基因的调控机理以及AS在提高植物营养品质等方面的相关研究进展,并对AS的研究前景进行了展望。
关键词 基苯甲合成酶 调控 应用
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人纤维蛋白溶酶原中色氨酸残基的化学修饰 被引量:6
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作者 赵陈光 刘兰英 +1 位作者 邱爱东 刘淑英 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1997年第5期744-747,共4页
以N-溴代琥珀酰亚胺为修饰剂,对人纤维蛋白溶酶原(HPg)中色氨酸(Trp)残基的分布及其与酶活力的关系进行了研究,发现每个HPg分子有19个Trp残基,5个位于分子表面;有2个是快反应残基,其中1个是活性必需的氨基酸.酶被修饰后其荧... 以N-溴代琥珀酰亚胺为修饰剂,对人纤维蛋白溶酶原(HPg)中色氨酸(Trp)残基的分布及其与酶活力的关系进行了研究,发现每个HPg分子有19个Trp残基,5个位于分子表面;有2个是快反应残基,其中1个是活性必需的氨基酸.酶被修饰后其荧光光谱及圆二色谱发生了变化. 展开更多
关键词 纤维蛋白溶酶原 残基 化学修饰 HPg trp
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色氨酸可以减少猪的攻击性 被引量:1
12
作者 李凯年(译) 《中国动物保健》 2010年第6期86-86,共1页
美国普渡大学的研究人员发现,在日粮中额外添加色氨酸(Trp)可以减少青年猪混群时的攻击性。由于攻击可以损害猪的健康和福利,成为养猪生产中的一个突出问题。增加Trp摄入量可以提高控制攻击性的大脑血清素(5-HT)水平。
关键词 养猪生产 攻击性 研究人员 血清素 摄入量 trp 混群
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色氨酸可以减少猪的攻击性
13
作者 李凯年(摘译) 《中国动物保健》 2010年第3期117-117,共1页
美国普渡大学的研究人员发现,在日粮中额外添加色氨酸(Trp)可以减少青年猪混群时的攻击性。由于攻击可以损害猪的健康和福利,成为养猪生产中的一个突出问题。增加Trp摄入量可以提高控制攻击性的大脑血清素(5-HT)水平。用48头青年... 美国普渡大学的研究人员发现,在日粮中额外添加色氨酸(Trp)可以减少青年猪混群时的攻击性。由于攻击可以损害猪的健康和福利,成为养猪生产中的一个突出问题。增加Trp摄入量可以提高控制攻击性的大脑血清素(5-HT)水平。用48头青年母猪进行试验,其中一半猪饲喂高Trp日粮,一半猪饲喂对照日粮。 展开更多
关键词 养猪生产 攻击性 研究人员 青年母猪 trp 日粮 血清素
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大肠埃希菌trp operon的克隆与表达 被引量:1
14
作者 林维平 刘晓影 +2 位作者 武敬亮 高志芹 孙同毅 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第4期58-60,共3页
色氨酸操纵子所表达酶的高效表达和酶活性的提高,从而构建高产色氨酸菌株。利用PCR的方法从大肠埃希菌基因组中直接克隆色氨酸操纵子,并将其连接到原核表达载体pBV220中,得到重组质粒pBV220-trp operon,转化大肠埃希菌DH5α,温度诱导重... 色氨酸操纵子所表达酶的高效表达和酶活性的提高,从而构建高产色氨酸菌株。利用PCR的方法从大肠埃希菌基因组中直接克隆色氨酸操纵子,并将其连接到原核表达载体pBV220中,得到重组质粒pBV220-trp operon,转化大肠埃希菌DH5α,温度诱导重组蛋白表达,表达产物经SDS-PAGE分析并用比色法测定其活性。通过凝胶电泳观察PCR扩增产物大小约为7 kb,SDS-PAGE鉴定目的蛋白得到了高效表达,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性分别比对照提高了3.4倍和2.5倍。成功构建了重组质粒pBV220-trp operon,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的表达量和表达活性在大肠埃希菌中得到了提高,为高产色氨酸基因工程菌的构建奠定基础。 展开更多
关键词 trp OPERON 克隆 表达 基苯甲合成酶 合成酶
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7个水稻线粒体tRNA^(Trp)突变体的克隆和活力测定
15
作者 金晓玲 巩菊芳 乌云塔娜 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期256-260,共5页
为了研究tRNAs被相应的氨酰酶识别的种属特异性,构建了7个水稻线粒体tRNATrp3个碱基(G73,U72,A68)的单点或多点突变的突变体.突变基因,经体外转录后分别用枯草杆菌(B.subtilis)和人色氨酰tRNA合成酶(TrpRS)进行氨酰化反应,并测定动力学... 为了研究tRNAs被相应的氨酰酶识别的种属特异性,构建了7个水稻线粒体tRNATrp3个碱基(G73,U72,A68)的单点或多点突变的突变体.突变基因,经体外转录后分别用枯草杆菌(B.subtilis)和人色氨酰tRNA合成酶(TrpRS)进行氨酰化反应,并测定动力学常数.结果表明:与野生型水稻线粒体tRNATrp相比,7个突变体的转录产物被B.subtilisTrpRS氨酰化的活力分别下降了53.33%~99.79%;被人TrpRS氨酰化的活力则提高了4~330倍,其中以pMPH7的氨酰化活力改变最大.识别位碱基G73,G1/U72,U5/A68对水稻线粒体tRNATrp的种属特异性识别起重要作用. 展开更多
关键词 水稻线粒体tRNA 枯草杆菌酰tRNA合成酶 酰tRNA合成酶 突变体
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FgaPT2酶催化合成C-4异戊烯基化吲哚二酮哌嗪和定向诱变增强收率 被引量:1
16
作者 张弘弛 刘瑞 +2 位作者 高志慧 李慧 杨阳 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第3期633-643,共11页
在二甲基烯丙基二磷酸存在下,通过FgaPT2酶催化合成了一系列C-4异戊烯基化吲哚二酮哌嗪,测试了其生物活性,对生物活性最高的产物,探讨了通过定点诱变提高酶合成的可行性。结果表明,FgaPT2酶催化合成了7个C-4异戊烯基化吲哚二酮哌嗪,Fga... 在二甲基烯丙基二磷酸存在下,通过FgaPT2酶催化合成了一系列C-4异戊烯基化吲哚二酮哌嗪,测试了其生物活性,对生物活性最高的产物,探讨了通过定点诱变提高酶合成的可行性。结果表明,FgaPT2酶催化合成了7个C-4异戊烯基化吲哚二酮哌嗪,FgaPT2对底物具有一定的选择性,环-L-色氨酸-L-酪氨酸(Ⅰe)异戊烯基化催化效果最好,产物环-L-4-二甲基烯丙基-色氨酸-L-酪氨酸(Ⅱe)收率达36.1%。C-4异戊烯基化显著提高了吲哚二酮哌嗪的生物活性,尤其是环-L-4-二甲基烯丙基-色氨酸-L-色氨酸(Ⅱf)对A549和MCF-7细胞达到50%抑制效果时抑制剂的浓度(IC_(50)值)分别为54.6和30.7μmol/L,对测试细菌和真菌的最低抑制浓度(MIC值)在0.5~4 mg/L,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除活性的IC_(50)值为98μmol/L。Arg-244的定点诱变表明,在19个突变体中,52.6%的FgaPT2突变体提高了Ⅱf收率,动力学参数验证了环-L-色氨酸-L-色氨酸(Ⅰf)与突变FgaPT2之间的相互作用,可以提高Ⅱf收率,其中R244M对Ⅰf的亲和力最高,Michaelis-Menten常数(K_(M))为0.14 mmol/L,转化数(k_(cat))为0.06471/s,k_(cat)/K_(M)为462.14 L/(s·mmol),产物收率最高,为36.9%±1.2%。 展开更多
关键词 吲哚二酮哌嗪 异戊二烯合成酶 生物活性 定向诱变 精细化工中间体
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大肠埃希菌中λ-Red同源重组系统介导的trp和yfp基因融合表达的研究
17
作者 陈兴 姚玉峰 +1 位作者 周爱萍 倪进婧 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1406-1410,共5页
目的为研究大肠埃希菌中色氨酸合成酶α亚基编码基因(trpA)的表达,利用λ-Red系统将trpA、黄色荧光蛋白基因(yfp)、氯霉素抗性编码基因(cat)融合片段敲入基因组中。方法将trpA、yfp、cat基因进行融合PCR,获得重组片段,转化入MG1655菌株... 目的为研究大肠埃希菌中色氨酸合成酶α亚基编码基因(trpA)的表达,利用λ-Red系统将trpA、黄色荧光蛋白基因(yfp)、氯霉素抗性编码基因(cat)融合片段敲入基因组中。方法将trpA、yfp、cat基因进行融合PCR,获得重组片段,转化入MG1655菌株中,利用pKD46编码的λ-Red系统将片段重组入基因组中,经PCR验证及测序鉴定正确后,荧光显微镜观察融合蛋白表达。结果成功获得trpA-yfp-cat重组片段,转化入MG1655菌株中获得阳性克隆,经测序鉴定正确。荧光显微镜观察可见细菌胞质内弥散分布黄色荧光,表明trpA-yfp融合表达片段成功地在MG1655菌株中表达。结论运用λ-Red系统可将trpA-yfp融合片段敲入MG1655菌株基因组中原位替换trpA基因,通过观察YFP蛋白的表达间接反映trpA基因的表达,具有不改变trpA基因自身功能和细菌生长的优点,为进一步研究大肠埃希菌色氨酸合成途径奠定基础。 展开更多
关键词 λ-Red系统 融合PCR 荧光蛋白 合成酶α亚基
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高产IAA绿色木霉工程菌株的构建及其应用 被引量:2
18
作者 张豪 李哲 +2 位作者 郭凯 黄艳华 郝永任 《科学技术与工程》 北大核心 2022年第20期8623-8631,共9页
农药和化肥的滥用,对人类健康及生存环境构成极大威胁,研制出能够降低化肥用量新型肥料十分必要,符合农业可持续发展的新型肥料十分必要。木霉作为新型肥料的常用功能微生物,在农业领域有着广泛的用途。在众多的促生防病机制中,通过产... 农药和化肥的滥用,对人类健康及生存环境构成极大威胁,研制出能够降低化肥用量新型肥料十分必要,符合农业可持续发展的新型肥料十分必要。木霉作为新型肥料的常用功能微生物,在农业领域有着广泛的用途。在众多的促生防病机制中,通过产生吲哚乙酸(indole-3-acetic acid, IAA)来促进植株生长是木霉发挥作用的重要方式。为了进一步增强木霉的促生抗病能力,在绿色木霉Tv-1511中鉴定并克隆了IAA生物合成途径关键酶色氨酸合成酶(tryptophan synthase, TRPS)的编码基因TvTRPS以及色氨酸脱羧酶(L-Tryptophan decarboxylase, TDC)的编码基因TvTDC,构建了TvTRPS基因和TvTDC基因过表达的绿色木霉工程菌,并研究了其对木霉耐胁迫能力,产IAA能力,植物促生能力等的影响。结果表明:过表达TvTRPS基因和TvTDC基因的木霉工程菌合成IAA的能力显著提高,并且具有更强的耐胁迫能力和促生能力,为绿色木霉在农业生产上的进一步应用奠定了基础。 展开更多
关键词 绿木霉 吲哚乙(IAA) 合成酶(trps) 脱羧酶(TDC) 抗逆特性 促生能力
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用LCR法生产L-Trp
19
作者 孙国凤 《生物技术通报》 CAS CSCD 1990年第11期24-24,共1页
三菱油化公司通过利用乙醇作营养的黄短杆菌的活细胞作用(LCR)法生产 L-色氨酸(L-Trp),这项成果于4月在福冈召开的日本农艺化学会上发表.利用导入色氨酸合成酶(TS)基因而强化 TS 活性的重组菌,从葡萄糖和吲哚乙酸中生产 L-Trp.所谓 LCR... 三菱油化公司通过利用乙醇作营养的黄短杆菌的活细胞作用(LCR)法生产 L-色氨酸(L-Trp),这项成果于4月在福冈召开的日本农艺化学会上发表.利用导入色氨酸合成酶(TS)基因而强化 TS 活性的重组菌,从葡萄糖和吲哚乙酸中生产 L-Trp.所谓 LCR法,能从培养基中去除生物素,利用菌体停止增殖的特征。 展开更多
关键词 合成酶 重组菌 短杆菌 福冈 L-trp LCR法 重组大肠杆菌 吲哚乙 叫噪乙 复合反应
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食品上的应用
20
《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第11期95-101,共7页
关键词 淀粉培养基 混合培养物 多酶系统 基质浓度 短杆菌属 膜载体 最佳条件 合成酶 溶解氧浓度 人造细胞
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