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草鱼呼肠孤病毒vp5基因诱饵重组载体的构建、转化与自激活作用检测
被引量：
7
1
作者
谢吉国
闫秀英
+1 位作者
简纪常
吴灶和
《广东海洋大学学报》
CAS
2012年第3期42-48,共7页
根据草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)的vp5基因设计特异性引物,并扩增其开放阅读框序列(open reading frame,ORF),然后连接至pGBKT7载体上构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-vp5,转化至酵母菌Y2HGold,并进行PCR鉴定以及自激活性...
根据草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)的vp5基因设计特异性引物,并扩增其开放阅读框序列(open reading frame,ORF),然后连接至pGBKT7载体上构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-vp5,转化至酵母菌Y2HGold,并进行PCR鉴定以及自激活性和毒性检测。PCR、酶切以及测序表明,pGBKT7-vp5重组诱饵载体构建成功。自激活性和毒性检测显示,阳性重组菌株pGBKT7-vp5/Y2HGold和阴性对照菌株pGBKT7/Y2HGold在SD/-Trp平板上出现大小相一致的乳白色菌落,且在SD/-Trp/X-α-Gel、SD/-Trp/AbA+/X-α-Gel平板上生长出蓝色菌落,而在SD/-Trp/-Ade/-His无菌落出现。表明重组菌株pGBKT7-vp5/Y2HGold表达的融合蛋白激活了报告基因AUR1-C和MEL1,没有激活报告基因ADE2和HIS3并且对宿主菌无毒性。该重组诱饵载体可用于酵母双杂交系统进一步筛选cDNA文库中与其相互作用的蛋白。
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关键词
草鱼呼肠孤病毒
酵母双杂交系统
诱饵载体
自激活性
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职称材料
题名
草鱼呼肠孤病毒vp5基因诱饵重组载体的构建、转化与自激活作用检测
被引量：
7
1
作者
谢吉国
闫秀英
简纪常
吴灶和
机构
广东海洋大学水产学院
仲恺农业工程学院
出处
《广东海洋大学学报》
CAS
2012年第3期42-48,共7页
基金
国家973计划(2009CB118704)
文摘
根据草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)的vp5基因设计特异性引物,并扩增其开放阅读框序列(open reading frame,ORF),然后连接至pGBKT7载体上构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-vp5,转化至酵母菌Y2HGold,并进行PCR鉴定以及自激活性和毒性检测。PCR、酶切以及测序表明,pGBKT7-vp5重组诱饵载体构建成功。自激活性和毒性检测显示,阳性重组菌株pGBKT7-vp5/Y2HGold和阴性对照菌株pGBKT7/Y2HGold在SD/-Trp平板上出现大小相一致的乳白色菌落,且在SD/-Trp/X-α-Gel、SD/-Trp/AbA+/X-α-Gel平板上生长出蓝色菌落,而在SD/-Trp/-Ade/-His无菌落出现。表明重组菌株pGBKT7-vp5/Y2HGold表达的融合蛋白激活了报告基因AUR1-C和MEL1,没有激活报告基因ADE2和HIS3并且对宿主菌无毒性。该重组诱饵载体可用于酵母双杂交系统进一步筛选cDNA文库中与其相互作用的蛋白。
关键词
草鱼呼肠孤病毒
酵母双杂交系统
诱饵载体
自激活性
Keywords
Grass Carp Reovirus （GCRV）
yeast two-hybrid system
bait vector
self-activation
分类号
S943.112.41 [农业科学—水产养殖]
Q782 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
草鱼呼肠孤病毒vp5基因诱饵重组载体的构建、转化与自激活作用检测
谢吉国
闫秀英
简纪常
吴灶和
《广东海洋大学学报》
CAS
2012
7
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