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重组人骨形成蛋白2基因转染大鼠自体骨髓基质细胞成骨能力研究 被引量:1
1
作者 陈希哲 杨连甲 +1 位作者 田卫东 杨维东 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期419-421,共3页
目的 在构建的SD大鼠骨组织工程模型中 ,观察以含孔磷酸钙陶瓷为支架的基因转染自体骨髓基质细胞异位骨形成能力。方法 成年雄性SD大鼠 2 0只 ,全麻及无菌条件下取其左侧股骨及胫骨 ,将骨髓冲入75ml培养瓶中并在常规培养条件下进行体... 目的 在构建的SD大鼠骨组织工程模型中 ,观察以含孔磷酸钙陶瓷为支架的基因转染自体骨髓基质细胞异位骨形成能力。方法 成年雄性SD大鼠 2 0只 ,全麻及无菌条件下取其左侧股骨及胫骨 ,将骨髓冲入75ml培养瓶中并在常规培养条件下进行体外扩增 ;5d后将部分骨髓基质细胞消化并通过LipofectAMINETM2 0 0 0介导进行重组人骨形成蛋白 (rhBMP2 )基因转染及G_4 18连续筛选 14d ;再将转染和未转染的自体细胞一同接种于经纤连蛋白表面修饰的含孔磷酸钙陶瓷上继续培养 10d,并将细胞陶瓷复合体对应地种植于大鼠背部皮下及肌肉内。分别于 2~ 2 0周处死动物 ,从形态学及组织学角度观察异位骨形成情况。结果 基因转染细胞陶瓷复合体无论种植于皮下或肌肉内均表现明显的异位骨形成能力 ;其同期骨形成与早期实验中的经诱导骨髓基质细胞陶瓷复合体异位骨形成相似。结论 应用以含孔磷酸钙陶瓷为支架的rhBMP2 基因转染自体骨髓基质细胞移植 ,可获得与诱导分化的自体骨髓基质细胞相同的成骨能力 ,说明基因转染自体骨髓基质细胞再次植入体内后 ,可相当于生物反应器 ,在增殖的同时促进干细胞的分化和成骨潜能。 展开更多
关键词 重组人蛋白2 因转染 大鼠 自体骨髓基质细胞成骨能力 磷酸钙陶瓷
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低频振动对骨髓基质细胞成骨能力影响及机制的研究 被引量:5
2
作者 叶超群 纪树荣 +2 位作者 杨键 潘立冬 王子羲 《中国康复理论与实践》 CSCD 2007年第3期248-251,共4页
目的了解低频振动对骨髓基质细胞(BMSCs)成骨能力及其OPG基因、RANKL基因表达的影响。方法分离、培养10周龄雌性SD大鼠BMSCs,随机分为静止培养对照组和振动组,振动组于培养的第11天开始接受振动干预7d;振动结束后对两组BMSCs的增殖、碱... 目的了解低频振动对骨髓基质细胞(BMSCs)成骨能力及其OPG基因、RANKL基因表达的影响。方法分离、培养10周龄雌性SD大鼠BMSCs,随机分为静止培养对照组和振动组,振动组于培养的第11天开始接受振动干预7d;振动结束后对两组BMSCs的增殖、碱性磷酸酶(ALP)、钙化结节及OPGmRNA、RANKLmRNA进行检测。结果振动组BMSCs增殖能力较对照组明显提高(P<0.05),但ALP活性、钙化结节无明显改变。振动组BMSCsOPG基因表达明显上调(P<0.05),RANKL基因表达无明显变化。结论低频振动可促进BMSCs的增殖,可能与其促进OPG基因表达上调有关;但未发现能使BMSCs成骨能力出现明显改变。 展开更多
关键词 低频振动 骨髓细胞(BMSCs) 能力 OPG RANKL
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骨髓基质细胞体外培养的生物学特性和成骨能力初步鉴定 被引量:2
3
作者 涂小丽 刘宏伟 +1 位作者 李才良 任肖华 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期111-113,110,共4页
目的体外分离培养狗的骨髓基质细胞(BMSCs),诱导其向成骨细胞分化,初步鉴定其成骨潜能和生物学特性。方法抽取毕格犬髂骨骨髓体外分离培养获得BMSCs,DMEM、新生牛血清培养基进行原代培养,部分传代细胞以含10 mmol/L地塞米松、50μg/m... 目的体外分离培养狗的骨髓基质细胞(BMSCs),诱导其向成骨细胞分化,初步鉴定其成骨潜能和生物学特性。方法抽取毕格犬髂骨骨髓体外分离培养获得BMSCs,DMEM、新生牛血清培养基进行原代培养,部分传代细胞以含10 mmol/L地塞米松、50μg/ml抗坏血酸和10 mmol/L β-甘油磷酸钠的矿化培养液诱导其向成骨细胞增殖分化。倒置相差显微镜进行细胞形态学和细胞生长增殖观察,Von Kossa法染色检测体外矿化结节形成,细胞碱性磷酸酶染色检测BMSCs 的成骨活性。结果体外分离培养的BMSCs经条件培养基诱导后表现出明显的成骨活性,体外矿化(骨样)结节的Von Kossa染色阳性;传代BMSCs碱性磷酸酶染色阳性。结论体外分离培养的BMSCs中含有骨源性前体细胞,传代细胞具有较强的成骨潜能。 展开更多
关键词 骨髓细胞 生物学特性 潜能 细胞培养
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拉布拉多犬骨髓基质干细胞与牙周干膜细胞裸鼠皮下成骨能力的比较性研究 被引量:2
4
作者 徐孟丹 周咏 邹多宏 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第9期1244-1247,共4页
目的观察比较拉布拉多犬骨髓基质干细胞(BMSCs)和拉布拉多犬牙周膜干细胞(PDLSCs)分别与支架材料β-磷酸三钙(β-TCP)复合后成骨能力的差异。方法实验分为3组:β-TCP组、犬BMSCs/β-TCP复合体组、犬PDLSCs/β-TCP复合体组。体外培养犬BM... 目的观察比较拉布拉多犬骨髓基质干细胞(BMSCs)和拉布拉多犬牙周膜干细胞(PDLSCs)分别与支架材料β-磷酸三钙(β-TCP)复合后成骨能力的差异。方法实验分为3组:β-TCP组、犬BMSCs/β-TCP复合体组、犬PDLSCs/β-TCP复合体组。体外培养犬BMSCs和犬PDLSCs,扩增后取第3代细胞分别接种于厚2 mm、6 mm的圆柱形β-TCP材料上,扫描电镜观察细胞与材料的黏附情况。裸鼠皮下植入各组细胞材料复合物。8周后取材,HE染色观察新骨形成,免疫组化检测成骨相关基因蛋白的表达。结果扫描电镜结果可见犬BMSCs和犬PDLSCs均可在β-TCP支架材料上正常生长。裸鼠皮下实验中,犬BMSCs/β-TCP复合体组和犬PDLSCs/β-TCP复合体组都有骨样组织形成,犬BMSCs/β-TCP复合体组中骨钙素(OCN)和骨形态发生蛋白(BMP-2)表达量略高于犬PDLSCs/β-TCP复合体组。结论两种细胞经体外诱导后都具有一定的成骨性能,其中BMSCs的成骨能力较PDLSCs的成骨能力强。 展开更多
关键词 骨髓细胞 牙周膜干细胞 Β-磷酸三钙 裸鼠 异位
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淫羊藿苷对体外培养骨髓基质干细胞成骨性分化的影响 被引量:38
5
作者 陈克明 葛宝丰 +4 位作者 马慧萍 刘兴炎 白孟海 马丽萍 吕明波 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2008年第9期642-645,632,共5页
目的研究淫羊藿苷对体外培养骨髓基质干细胞增殖与成骨性分化的影响,了解其是否具有促进骨形成活性。方法将10-8、10-7、10-6、10-5和10-4mol/L 5种浓度的淫羊藿苷分别加入原代培养大鼠骨髓基质干细胞(rBMSCs)中,采用MTT法分析细胞增殖... 目的研究淫羊藿苷对体外培养骨髓基质干细胞增殖与成骨性分化的影响,了解其是否具有促进骨形成活性。方法将10-8、10-7、10-6、10-5和10-4mol/L 5种浓度的淫羊藿苷分别加入原代培养大鼠骨髓基质干细胞(rBMSCs)中,采用MTT法分析细胞增殖情况。在成骨性诱导培养条件下,比较淫羊藿苷组和不加药的对照组间在碱性磷酸酶阳性克隆数(CFU-FALP)、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素分泌量、钙盐沉积量和钙化结节数等方面的差异,采用RT-PCR和实时荧光定量PCR分析成骨性分化的标志蛋白和细胞因子的基因表达差异。结果淫羊藿苷无促进细胞增殖活性,但10-5mol/L及更高浓度抑制细胞增殖。10-5mol/L淫羊藿苷强烈促进原代培养rBMSCs的成骨性分化,表现在加药组的CFU-FALP数量、胞内ALP活性、骨钙素分泌量、钙盐沉积量和钙化结节数等在培养不同阶段均高于或显著高于对照组,包括骨涎蛋白、骨桥素、类胰岛素-I和BMP2等在内的多种标志蛋白和细胞因子基因表达水平也显著提高。结论淫羊藿苷强烈促进骨髓基质干细胞的成骨性分化,表明其具有促进骨形成生理活性。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 骨髓细胞 性分化 增殖
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阿伦磷酸钠对小鼠骨髓基质细胞成骨和成脂分化的影响 被引量:14
6
作者 李湘辉 陆志坚 +3 位作者 张金超 陈瑶 隋森芳 杨梦甦 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期671-674,共4页
目的在离体条件下研究阿伦磷酸钠对小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)成骨和成脂分化的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测阿伦磷酸钠对骨髓基质细胞增殖的影响,碱性磷酸酶(ALP)活性测定法检测阿伦磷酸钠对骨髓基质细胞(MSCs)成骨分化的影... 目的在离体条件下研究阿伦磷酸钠对小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)成骨和成脂分化的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测阿伦磷酸钠对骨髓基质细胞增殖的影响,碱性磷酸酶(ALP)活性测定法检测阿伦磷酸钠对骨髓基质细胞(MSCs)成骨分化的影响,油红O染色形态学及定量测定法检测阿伦磷酸钠对骨髓基质细胞成脂分化的影响。结果1×10-10,1×10-9,1×10-8,1×10-7,1×10-6和1×10-5mol.L-1的阿伦磷酸钠可以促进小鼠原代骨髓基质细胞增殖,抑制骨髓基质细胞的成骨分化及成脂分化。结论阿伦磷酸钠对骨质疏松症的预防和治疗作用可能通过抑制骨髓基质细胞的成脂分化,进而减少脂肪细胞细胞因子的分泌而抑制破骨细胞的形成、激活以及骨吸收功能。 展开更多
关键词 阿伦磷酸钠 骨髓细胞 分化 脂分化
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松质骨基质-骨髓基质成骨细胞复合物的异位成骨作用 被引量:14
7
作者 陶凯 毛天球 +4 位作者 杨维东 陈富林 顾晓明 陈书军 李媛 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期383-385,共3页
目的:观察松质骨基质- 骨髓基质成骨细胞复合移植皮下成骨作用,以探索松质骨基质作为骨组织工程支架材料的可行性。方法:新生兔骨髓细胞体外培养、诱导后,接种于藻酸盐/松质骨基质中,形成松质骨基质/藻酸盐/骨髓基质成骨细胞... 目的:观察松质骨基质- 骨髓基质成骨细胞复合移植皮下成骨作用,以探索松质骨基质作为骨组织工程支架材料的可行性。方法:新生兔骨髓细胞体外培养、诱导后,接种于藻酸盐/松质骨基质中,形成松质骨基质/藻酸盐/骨髓基质成骨细胞复合物,并植入裸鼠背部皮下,对照组单纯植入松质骨基质。植入4、8 周后行 X线摄片和组织学检查,观察骨形成情况。结果:松质骨基质/骨髓基质成骨细胞复合物皮下成骨效果明显优于松质骨基质。前者兼有纤维成骨和软骨成骨,以纤维成骨为主;后者仅见少量软骨成骨。结论:松质骨基质可以作为一种良好的骨组织工程支架材料。 展开更多
关键词 骨髓 细胞 异位
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成骨生长肽对大鼠骨髓基质细胞增殖分化的影响 被引量:13
8
作者 王璐 徐凌 +4 位作者 梁星 任乃华 付钢 李苏伶 江晓峰 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第18期1783-1786,共4页
目的研究成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)在体外对骨髓基质细胞增殖和成骨向分化的影响。方法在体外培养的大鼠骨髓基质细胞中加入不同浓度的OGP(10-11~10-7mol/L),用MTT法检测细胞增殖,酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶(ALP... 目的研究成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)在体外对骨髓基质细胞增殖和成骨向分化的影响。方法在体外培养的大鼠骨髓基质细胞中加入不同浓度的OGP(10-11~10-7mol/L),用MTT法检测细胞增殖,酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶(ALP)的表达,RT-PCR法检测细胞内核心结合因子1(Cbfa1)mRNA的表达。结果OGP对骨髓基质细胞增殖有促进作用(P<0.05),最大效应浓度为10-9mol/L;能增加细胞内ALP活性(P<0.05),最大效应浓度为10-8mol/L;可诱导Cbfa1mRNA的表达(P<0.05)。结论OGP可促进骨髓基质细胞的增殖,并通过诱导其内Cbfa1mRNA的表达促进其成骨向的分化。 展开更多
关键词 生长肽 骨髓细胞 细胞增殖 碱性磷酸酶 核心结合因子1
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大鼠骨髓基质细胞体外定向诱导成骨 被引量:9
9
作者 陈克明 葛宝丰 +2 位作者 刘兴炎 白孟海 郑荣梁 《兰州大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期69-73,共5页
将大鼠骨髓单细胞悬液静置培养 36h,利用骨髓基质细胞贴壁能力强的特点对其进行纯化和扩增培养 .采用爬片培养、HE染色、组化染色以及碱性磷酸酶活性和钙含量测定等手段研究培养骨髓基质细胞的形态、分化和分泌基质情况 .结果表明 ,非... 将大鼠骨髓单细胞悬液静置培养 36h,利用骨髓基质细胞贴壁能力强的特点对其进行纯化和扩增培养 .采用爬片培养、HE染色、组化染色以及碱性磷酸酶活性和钙含量测定等手段研究培养骨髓基质细胞的形态、分化和分泌基质情况 .结果表明 ,非诱导培养条件下骨髓基质细胞呈梭形 ,部分传代细胞中可观察到脂肪细胞和肌细胞 .经成骨性诱导培养后 ,骨髓基质细胞发生明显的形态学变化 ,碱性磷酸酶活性上升 ,钙含量增加 ,最终形成典型的矿化结节 .提示培养大鼠骨髓基质细胞具有分化成脂肪细胞和肌细胞的能力 ,但其分化成骨的潜能最为强大 .本实验诱导骨髓基质细胞分化为成骨细胞的模式有可能适用于骨组织工程研究 . 展开更多
关键词 大鼠 骨髓细胞 细胞 细胞分化 组织工程 细胞培养 体外定向诱导
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兔骨髓基质细胞在诱导条件下的成骨特性 被引量:12
10
作者 顾祖超 李起鸿 +1 位作者 赵玉峰 周红星 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期527-530,共4页
目的 观察兔骨髓基质细胞的生长特点及诱导条件下的成骨能力。方法 使用密度梯度离心分离兔骨髓基质细胞进行培养 ,保留贴壁细胞传代 ,观察在培养液中添加地塞米松、维生素C、β 甘油磷酸钠条件下骨髓基质细胞生长及成骨分化情况。结... 目的 观察兔骨髓基质细胞的生长特点及诱导条件下的成骨能力。方法 使用密度梯度离心分离兔骨髓基质细胞进行培养 ,保留贴壁细胞传代 ,观察在培养液中添加地塞米松、维生素C、β 甘油磷酸钠条件下骨髓基质细胞生长及成骨分化情况。结果 骨髓基质细胞呈成纤维细胞样表现 ,增殖能力强。诱导条件下第 2代细胞的碱性磷酸酶活性明显增高 ,10~ 12d达到最高峰 ,并且出现矿化结节。结论 使用本实验方法 ,获得的骨髓基质细胞成骨能力肯定 ,增殖能力强 ,可作为骨组织工程的种子细胞。 展开更多
关键词 骨髓细胞 地塞米松 诱导 分化
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低强度脉冲超声波对体外培养的兔骨髓基质细胞成骨作用的影响 被引量:7
11
作者 梁伟 苟三怀 +3 位作者 齐进 魏立 欧阳跃平 刘岩 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期603-606,共4页
目的:研究低强度脉冲超声波(LIPUS)对体外培养的兔骨髓基质细胞(BMSCs)成骨能力的影响。方法:抽取新西兰白兔的骨髓,体外分离纯化获取BMSCs,加入条件培养基后随机分为实验组和对照组:实验组应用LIPUS对BMSCs每天作用20 min,对照组未予... 目的:研究低强度脉冲超声波(LIPUS)对体外培养的兔骨髓基质细胞(BMSCs)成骨能力的影响。方法:抽取新西兰白兔的骨髓,体外分离纯化获取BMSCs,加入条件培养基后随机分为实验组和对照组:实验组应用LIPUS对BMSCs每天作用20 min,对照组未予作用。通过倒置相差显微镜观察细胞增殖分化情况,分别于1、2、3周后停止LIPUS作用,应用碱性磷酸酶(ALP)和Von Kossa染色的方法鉴定细胞成骨性能。结果:BMSCs经LIPUS刺激后.细胞形态变大.核增大.核质比减小;而对照组细胞相对扁平.折光率降低。BMSCs经LIPUS刺激1、2、3周后,ALP活性均较对照组明显增高(P<0.05)。LIPUS刺激3周后,实验组钙结节像素值较对照组像素值明显增多(P<0.05)。结论:LIPUS能促进条件培养基中的BMSCs向成骨细胞转化。 展开更多
关键词 低强度脉冲超声波 骨髓细胞 细胞培养 能力
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辛伐他汀促进骨髓基质细胞的成骨分化 被引量:8
12
作者 宋纯理 党耕町 +2 位作者 贾弘湜 郭昭庆 马庆军 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期533-536,共4页
目的 :观察辛伐他汀对骨髓基质细胞成骨分化的影响 ,探讨其刺激成骨的作用机制。方法 :体外培养成年小鼠骨髓基质细胞 ,不同浓度的辛伐他汀作用 72h后 ,RT PCR检测骨钙素 (osteocalcin ,OCN)mRNA水平的变化 ,Westernblot检测OCN和骨桥蛋... 目的 :观察辛伐他汀对骨髓基质细胞成骨分化的影响 ,探讨其刺激成骨的作用机制。方法 :体外培养成年小鼠骨髓基质细胞 ,不同浓度的辛伐他汀作用 72h后 ,RT PCR检测骨钙素 (osteocalcin ,OCN)mRNA水平的变化 ,Westernblot检测OCN和骨桥蛋白 (osteopontin ,OPN)表达水平的变化 ,细胞碱性磷酸酶 (alkalinephosphatase,ALP)细胞化学染色及酶比活性测定。结果 :辛伐他汀作用 72h后 ,OCN的mRNA表达水平增高 ,OCN、OPN蛋白表达水平增高 ,呈剂量依赖关系 ,细胞ALP染色增强 ,ALP比活性显著增高。结论 :辛伐他汀促进骨髓基质细胞的成骨分化 。 展开更多
关键词 辛伐他汀 骨髓细胞 分化 疏松
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人脱细胞骨复合骨髓基质细胞成骨活性的实验研究 被引量:7
13
作者 张旗涛 于有 +2 位作者 杨林 姚猛 陶天遵 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2004年第1期35-38,共4页
目的 研究人脱细胞骨(HAB)复合经诱导的骨髓基质细胞的实验效果,观察细胞的黏附和生长情况,并对其成骨活性进行检测。方法 用15%的过氧化氢和乙醚去除人髂骨块内的结缔组织和细胞成分,消毒后制备人脱细胞骨。取材活体或新鲜尸体的骨髓... 目的 研究人脱细胞骨(HAB)复合经诱导的骨髓基质细胞的实验效果,观察细胞的黏附和生长情况,并对其成骨活性进行检测。方法 用15%的过氧化氢和乙醚去除人髂骨块内的结缔组织和细胞成分,消毒后制备人脱细胞骨。取材活体或新鲜尸体的骨髓行骨髓基质细胞培养,细胞纯化后加入β-甘油酸钠,地塞米松和抗坏血酸等向成骨方向诱导,并进行对照培养。通过碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)检测来确定骨髓基质细胞的增殖和分化情况,将诱导的骨髓基质细胞浓缩后复合到制备好的脱细胞骨块内进行复合培养。8d后通过光镜和电镜等形态学观察以及生化指标检测来确定细胞的成骨活性。结果 人髂骨块内细胞清除干净,骨基质保存良好;诱导后的骨髓基质细胞ALP和OCN水平明显高于对照组(P<0.05);复合后的人脱细胞骨培养液中ALP和OCN检测呈阳性;骨髓基质细胞在HAB支架内附着紧密,生长良好。结论 人脱细胞骨复合经诱导的骨髓基质细胞在体外具有有效的成骨功能,是一种较为理想的骨组织工程材料。 展开更多
关键词 人脱细胞 骨髓细胞 活性 实验 检测 组织工程
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成骨细胞诱导骨髓基质细胞体外成骨的初步研究 被引量:5
14
作者 刘宁 查振刚 +2 位作者 王双利 林宏生 王国普 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期413-419,共7页
目的:探讨在不使用细胞因子或化学药物的情况下,成骨细胞(Osteoblast,OB)与骨髓基质细胞(Bone Marrow Stromal Cells,BMSCs)混合培养时,成骨细胞提供的成骨微环境能否在体外诱导BMSCs向成骨细胞分化,并复合支架形成成熟的骨组织。研究... 目的:探讨在不使用细胞因子或化学药物的情况下,成骨细胞(Osteoblast,OB)与骨髓基质细胞(Bone Marrow Stromal Cells,BMSCs)混合培养时,成骨细胞提供的成骨微环境能否在体外诱导BMSCs向成骨细胞分化,并复合支架形成成熟的骨组织。研究成骨细胞诱导BMSCs有效成骨的最小比值(指成骨细胞与骨髓基质干细胞数量的比值)。方法:分别培养SD乳鼠的成骨细胞与SD大鼠的BMSCs,将成骨细胞和BMSCs以1∶9、2∶8、3∶7、1∶0的不同比例进行混合培养,通过测定第3、6、9天培养液上清中的碱性磷酸酶(ALP)的含量,研究成骨细胞促BMSCs有效成骨的最小比值。将两种细胞以该最小浓度比混匀接种于涂附I型胶原壳聚糖材料支架上(直径9 mm,高3mm)作为混合培养组,相同终浓度的单纯成骨细胞和单纯BMSCs分别接种于相同支架作为阳性对照及阴性对照。另设置低比值成骨细胞对照组(仅含有共培养组中相同的成骨细胞数,但不含有共培养组中的BMSCs)。全部标本均于体外培养8周后取材,通过大体观察、组织学及免疫组织化学等相关检测对新生骨进行评价。结果:成骨细胞和BMSCs以3∶7的比例进行混合培养时已可实现有效成骨。3∶7比例的混合培养组及阳性对照组(成骨细胞组)体外培养8周后大体观察和苏木素-伊红染色(HE)、ALP染色基本相同,均表达骨特异性细胞外基质I型胶原,形成了较成熟的骨组织。阴性对照组(单纯BMSCs组)和低比值成骨细胞组,原细胞支架复合物变小、变形。低比值成骨细胞组在局部形成了少量的骨组织,阴性对照组(单纯BMSCs组)未能发现骨样组织形成。结论:在不使用细胞因子或化学药物的情况下,成骨细胞提供的成骨微环境能够在体外诱导BMSCs向成骨细胞分化并形成成熟的骨组织。混合细胞中成骨细胞与BMSCs的比例为3∶7时是有效成骨的最小比值。 展开更多
关键词 骨髓细胞 细胞 混合培养
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骨保护素和骨保护素配体在人骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中的表达 被引量:7
15
作者 杨林 海涌 +4 位作者 曲铁兵 陶天遵 刘忠厚 周君琳 杜心如 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2007年第5期339-342,共4页
目的研究骨保护素和骨保护素配体在人骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化过程中的表达情况,探讨其在骨重建过程中的调节作用。方法实验中采用梯度离心法和酶消化法分别获得人骨髓基质细胞和成骨细胞,并将骨髓基质细胞向成骨细胞方向诱导分... 目的研究骨保护素和骨保护素配体在人骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化过程中的表达情况,探讨其在骨重建过程中的调节作用。方法实验中采用梯度离心法和酶消化法分别获得人骨髓基质细胞和成骨细胞,并将骨髓基质细胞向成骨细胞方向诱导分化。通过形态学观察、生化指标检测、细胞染色和矿化结节测定等方法,确定骨髓基质细胞的功能状态和分化程度。采用RT-PCR和Westernblot方法,检测骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中骨保护素和骨保护素配体的表达情况。结果获得的骨髓基质细胞和成骨细胞生长状态良好,生化指标稳定。骨髓基质细胞分化后,碱性磷酸酶分泌明显增加,可以产生大量的矿化结节,具有成熟成骨细胞的表型特征。RT-PCR和Westernblot检测,在骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中,骨保护素在mRNA和蛋白质水平的表达明显升高,而骨保护素配体的表达则逐渐下降。细胞中OPGmRNA表达在第21天时达到最大,约为未分化时水平的2.5倍。而OPGLmRNA表达减少为未分化时1/2;细胞中OPG的蛋白质表达水平提高约为未分化细胞的6倍。统计学分析,P<0.01,差异有显著性。结论在人骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中,骨保护素表达逐渐升高而骨保护素配体表达显著降低,两者比值的逐渐增大,从而发挥促进骨形成,抑制骨吸收的作用,这可能是协调骨重建周期有序进行的重要机制之一。 展开更多
关键词 保护素 保护素配体 骨髓细胞 细胞
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三七总皂甙对骨髓基质细胞成骨分化及成骨作用的调节 被引量:15
16
作者 李学东 陈斌 +2 位作者 郑创义 刘钊勇 杜世新 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2009年第5期371-373,326,共4页
目的探讨三七总皂甙对骨髓基质细胞体外成骨分化及成骨作用的影响。方法分离、纯化大鼠骨髓基质细胞(bone marrow strowal cells,BMSCs),采用常规培养液、成骨诱导液及含100 mg/L PNS的成骨诱导液培养,对各组细胞进行形态学观察,采用... 目的探讨三七总皂甙对骨髓基质细胞体外成骨分化及成骨作用的影响。方法分离、纯化大鼠骨髓基质细胞(bone marrow strowal cells,BMSCs),采用常规培养液、成骨诱导液及含100 mg/L PNS的成骨诱导液培养,对各组细胞进行形态学观察,采用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、茜素红染色方法及ELISA法观察各组细胞增殖、ALP活性、矿化结节的形成及RANKL的表达。结果骨诱导组、PNS组较培养液组细胞增殖明显(P〈0.05),而PNS组高于骨诱导组(P〈0.05);骨诱导组、PNS组ALP活性、钙结节形成高于培养液组(P〈0.01),PNS组高于骨诱导组(P〈0.05);骨诱导组、PNS组RANKL表达低于培养液组(P〈0.05),PNS组低于骨诱导组(P〈0.05)。结论BMSCs成骨诱导过程中,PNS可促进其成骨分化、下调其RANKL表达从而具有抑制破骨细胞生成的潜能。 展开更多
关键词 三七总皂甙 骨髓细胞 核因子κB受体激活蛋白配体 作用
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合成成骨生长肽对大鼠骨髓基质干细胞的促成骨作用 被引量:12
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作者 徐杨 施德源 +1 位作者 陈统一 崔大敷 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期309-314,共6页
目的研究合成成骨生长肽(sOGP)对体外培养的大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)的作用,并与经典的成骨诱导剂地塞米松相对比。方法取大鼠股骨骨髓,贴壁法分离骨髓基质干细胞进行体外培养,加入不同浓度的sOGP,观察细胞形态变化,细胞增殖率,细胞... 目的研究合成成骨生长肽(sOGP)对体外培养的大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)的作用,并与经典的成骨诱导剂地塞米松相对比。方法取大鼠股骨骨髓,贴壁法分离骨髓基质干细胞进行体外培养,加入不同浓度的sOGP,观察细胞形态变化,细胞增殖率,细胞内碱性磷酸酶(ALP)的表达,RT-PCR法检测3种主要成骨标志物(ALP、Ⅰ型胶原、骨钙素)的表达,组织化学染色检测碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原的表达及钙质的沉积并进行图像分析。结果sOGP对BMSCs增殖的影响随浓度不同呈现双向作用。sOGP和地塞米松在mRNA和蛋白水平均能促进各成骨标志物的表达,定量分析结果显示,sOGP在10-9mol/L浓度组促成骨的作用最强,明显高于对照组和地塞米松组。结论sOGP能明显促进大鼠BMSCs向成骨方向转化。这种促成骨能力与其浓度密切相关,以10-9mol/L浓度下促成骨能力最强。 展开更多
关键词 生长肽 骨髓细胞
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骨形态发生蛋白对人骨髓基质细胞的体外成骨分化影响 被引量:5
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作者 段小军 杨柳 +1 位作者 王铁翔 谭祖键 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期534-536,共3页
目的 提取牛骨形态发生蛋白 ,并观察其对人骨髓基质细胞的体外成骨分化作用 ,为将骨形态发生蛋白与骨髓基质细胞用于进一步的骨缺损修复研究提供实验依据。方法 从小牛骨中提取骨形态发生蛋白 ,配制条件培养液 ,并作用于培养状态的人... 目的 提取牛骨形态发生蛋白 ,并观察其对人骨髓基质细胞的体外成骨分化作用 ,为将骨形态发生蛋白与骨髓基质细胞用于进一步的骨缺损修复研究提供实验依据。方法 从小牛骨中提取骨形态发生蛋白 ,配制条件培养液 ,并作用于培养状态的人骨髓基质细胞 ,染色检测细胞碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原表达情况 ,放免法测定培养液中骨钙素含量。结果 人骨髓基质细胞经诱导培养后 ,碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、骨钙素表达明显增加。结论 体外培养时 ,天然骨形态发生蛋白可促进人骨髓基质细胞的成骨分化。 展开更多
关键词 形态发生蛋白 骨髓细胞 细胞培养 分化
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兔骨髓基质细胞体外成骨分化鉴定及与煅烧骨复合培养的实验研究 被引量:4
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作者 杨成林 毕郑钢 +3 位作者 王玉学 祁权 付春江 陶天遵 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2005年第3期329-332,共4页
目的研究兔骨髓基质细胞体外向成骨细胞分化的生物学特性及其与牛煅烧骨体外复合培养的生物相容性。方法将体外培养1周的兔骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化,于1、2、4周时提取RNA,采用RTPCR技术检测ALP和I型胶原mRNA表达,并对培养2周的... 目的研究兔骨髓基质细胞体外向成骨细胞分化的生物学特性及其与牛煅烧骨体外复合培养的生物相容性。方法将体外培养1周的兔骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化,于1、2、4周时提取RNA,采用RTPCR技术检测ALP和I型胶原mRNA表达,并对培养2周的细胞行VonKossa染色观察钙结节形成;另制备细胞煅烧骨复合物,继续培养1、7、14d后取出,扫描电镜观察及X射线衍射仪检测。结果体外诱导培养2、4周后,兔骨髓基质细胞成功表达ALT和I型胶原,VonKossa染色可见钙结节形成。扫描电镜及X射线衍射分析证实细胞在煅烧骨表面大量贴附成活,14d后细胞铺满支架表面,合成并分泌胶原纤维及钙盐。结论兔骨髓基质细胞体外可成功向成骨细胞诱导分化,成骨特性表达佳;与牛煅烧骨体外复合培养显示良好的生物相容性。 展开更多
关键词 骨髓细胞 细胞 煅烧 生物相容性 骨髓细胞 体外复合培养 牛煅烧 体外 分化鉴定 PCR技术检测 实验研 细胞诱导分化 mRNA表达
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PPARγ基因沉默的人骨髓基质细胞对骨髓抑制小鼠造血功能的影响 被引量:1
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作者 王雪梅 黄纯兰 +5 位作者 周铁军 李玉娇 魏梦宇 陈燕 陈晓敏 王万玥 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期6-12,共7页
目的 观察过氧化物酶体增殖激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor-gamma, PPARγ)基因沉默的人骨髓基质细胞HS-5对骨髓抑制小鼠造血功能的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法 用X射线进行全身照射构建骨髓抑制小... 目的 观察过氧化物酶体增殖激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor-gamma, PPARγ)基因沉默的人骨髓基质细胞HS-5对骨髓抑制小鼠造血功能的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法 用X射线进行全身照射构建骨髓抑制小鼠模型,造模后2 h,将小鼠随机分为3组,分别为实验组(尾静脉注射PPARγ RNAi干扰的HS-5细胞)、对照组(尾静脉注射未行PPARγ RNAi干扰的HS-5细胞)、空白组(尾静脉注射等量的生理盐水),每组5只。各组于放疗前、放疗后24 h、放疗后1周、放疗后2周进行外周血常规检测。对HS-5细胞在体外进行成骨、成脂诱导,分为实验组(PPARγ RNAi干扰的HS-5细胞)、对照组(未干扰PPARγ的HS-5细胞)、空白组(未行成骨/成脂诱导分化的HS-5细胞),观察成骨/成脂染色情况。采用CCK-8实验检测PPARγ基因沉默的HS-5细胞对小鼠骨髓造血干细胞(hemopoietic stem cell, HSC)增殖的影响,分为实验组(PPARγ RNAi干扰的HS-5细胞经成骨诱导分化3 d后,与小鼠HSC共培养)、阳性对照组(50μmol/L PPARγ抑制剂处理的HS-5细胞经成骨诱导分化3 d后,与小鼠HSC共培养)、阴性对照组(未干扰PPARγ的HS-5细胞经成骨诱导分化3 d后,与小鼠HSC共培养)、空白组(小鼠HSC单独培养,不与HS-5细胞共培养)。结果 放疗后,各组小鼠血常规指标均呈先降低后升高趋势,放疗后1周,三组小鼠血小板、白细胞水平差异显著,且实验组>对照组>空白组(均P<0.05);放疗后2周,三组小鼠脂肪空泡面积百分比差异显著,且实验组<对照组<空白组(均P<0.05),经Pearson相关分析显示,血常规各指标与血清PPARγ表达水平呈负相关(均P<0.05),与脂肪空泡面积百分比呈负相关(均P<0.05)。在体外成骨/成脂诱导分化后,实验组与对照组相比,橙红色的细胞比例明显降低,红色钙结节比例明显增高;成骨分化诱导3 d后,实验组、阳性对照组、阴性对照组人骨髓基质细胞均与小鼠HSC细胞进行共培养,空白组则单纯培养HSC细胞,结果显示共培养24、48、72 h后,实验组、阳性对照组小鼠HSC细胞增殖水平均高于阴性对照组和空白组(均P<0.05)。结论 PPARγ基因沉默的HS-5植入骨髓抑制小鼠后有助于小鼠造血功能增强。PPARγ基因被干扰沉默后,可增强HS-5细胞的成骨分化能力,减弱HS-5细胞的成脂分化能力,而成骨分化诱导的HS-5细胞能进一步增强小鼠HSC的增殖能力。 展开更多
关键词 过氧化物酶体增殖激活受体Γ 骨髓细胞 骨髓抑制小鼠 造血功能 /脂分化
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