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膦丝菌素乙酰转移酶的表达及单克隆抗体制备
被引量：
5
1
作者
高旭东
王永志
+8 位作者
时圣凤
李忠鹏
李小宇
徐文静
张正坤
路扬
张佳诗
李启云
王金刚
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第5期500-503,共4页
目的表达有生物活性的膦丝菌素乙酰转移酶(PAT),制备PAT蛋白单克隆抗体(mAb)。方法通过PCR克隆bar基因编码区全长,将bar基因与原核表达载体pET28a(+)连接,构建重组质粒pET28-bar并转化大肠杆菌菌株BL21(DE3),经IPTG诱导目的蛋白表达,利...
目的表达有生物活性的膦丝菌素乙酰转移酶(PAT),制备PAT蛋白单克隆抗体(mAb)。方法通过PCR克隆bar基因编码区全长,将bar基因与原核表达载体pET28a(+)连接,构建重组质粒pET28-bar并转化大肠杆菌菌株BL21(DE3),经IPTG诱导目的蛋白表达,利用镍离子亲和层析纯化PAT蛋白,分析PAT蛋白活性。免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾脏与Sp2/0细胞融合,经间接ELISA筛选分泌抗PAT蛋白抗体杂交瘤细胞。结果在大肠杆菌中以可溶形式表达出重组PAT蛋白,纯化的重组PAT蛋白具有乙酰转移酶活性,制备了9株抗PAT蛋白mAb。结论表达的PAT蛋白可以用于除草剂解除剂研究,制备的mAb可能用于转基因产品的检测研究。
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关键词
膦丝菌素乙酰转移酶
BAR基因
蛋白表达
活性
抗体制备
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职称材料
抗除草剂Bar基因的优化及PAT蛋白的表达
2
作者
李葱葱
李飞武
+3 位作者
谭喜昌
夏蔚
邵改革
龙丽坤
《湖北农业科学》
2015年第10期2516-2518,2521,共4页
利用生物信息学方法优化了适用于原核表达的Bar基因序列密码子,克隆了Bar基因序列并构建了p ET28a-Bar融合表达载体,并转入大肠杆菌宿主菌BL21(DE3)。结果表明,融合表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中以包涵体形式表达膦丝菌素乙酰转移...
利用生物信息学方法优化了适用于原核表达的Bar基因序列密码子,克隆了Bar基因序列并构建了p ET28a-Bar融合表达载体,并转入大肠杆菌宿主菌BL21(DE3)。结果表明,融合表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中以包涵体形式表达膦丝菌素乙酰转移酶(PAT蛋白质),并通过镍离子亲和层析纯化后获得了PAT蛋白质,该纯化蛋白质的获得为利用酶联免疫法定量检测和筛选转基因植物提供了必要前提。
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关键词
BAR基因
膦丝菌素乙酰转移酶
原核表达
分离纯化
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职称材料
题名
膦丝菌素乙酰转移酶的表达及单克隆抗体制备
被引量：
5
1
作者
高旭东
王永志
时圣凤
李忠鹏
李小宇
徐文静
张正坤
路扬
张佳诗
李启云
王金刚
机构
东北农业大学园艺学院
吉林省农业科学院
吉林农业大学生命科学院
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第5期500-503,共4页
基金
农业部转基因专项"抗病虫转基因大豆新品种培育"(2011ZX08004-004)
中青年科技领军人才及优秀创新团队项目"吉林省农业微生物研究与利用研究创新团队"(20121812)
吉林省农业微生物重点实验室平台建设项目(20122105)
文摘
目的表达有生物活性的膦丝菌素乙酰转移酶(PAT),制备PAT蛋白单克隆抗体(mAb)。方法通过PCR克隆bar基因编码区全长,将bar基因与原核表达载体pET28a(+)连接,构建重组质粒pET28-bar并转化大肠杆菌菌株BL21(DE3),经IPTG诱导目的蛋白表达,利用镍离子亲和层析纯化PAT蛋白,分析PAT蛋白活性。免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾脏与Sp2/0细胞融合,经间接ELISA筛选分泌抗PAT蛋白抗体杂交瘤细胞。结果在大肠杆菌中以可溶形式表达出重组PAT蛋白,纯化的重组PAT蛋白具有乙酰转移酶活性,制备了9株抗PAT蛋白mAb。结论表达的PAT蛋白可以用于除草剂解除剂研究,制备的mAb可能用于转基因产品的检测研究。
关键词
膦丝菌素乙酰转移酶
BAR基因
蛋白表达
活性
抗体制备
Keywords
phosphinothricin acetyltransferase
bar gene
protein expression
activity
monoclonal antibody
分类号
R392.121 [医药卫生—免疫学]
S41 [农业科学—植物保护]
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职称材料
题名
抗除草剂Bar基因的优化及PAT蛋白的表达
2
作者
李葱葱
李飞武
谭喜昌
夏蔚
邵改革
龙丽坤
机构
吉林省农业科学院
出处
《湖北农业科学》
2015年第10期2516-2518,2521,共4页
基金
全国博士后面上项目(2011M500626)
文摘
利用生物信息学方法优化了适用于原核表达的Bar基因序列密码子,克隆了Bar基因序列并构建了p ET28a-Bar融合表达载体,并转入大肠杆菌宿主菌BL21(DE3)。结果表明,融合表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中以包涵体形式表达膦丝菌素乙酰转移酶(PAT蛋白质),并通过镍离子亲和层析纯化后获得了PAT蛋白质,该纯化蛋白质的获得为利用酶联免疫法定量检测和筛选转基因植物提供了必要前提。
关键词
BAR基因
膦丝菌素乙酰转移酶
原核表达
分离纯化
Keywords
Bar gene
phosphinothricin acetyltransferase
prokaryotic expression
separation and purification
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
膦丝菌素乙酰转移酶的表达及单克隆抗体制备
高旭东
王永志
时圣凤
李忠鹏
李小宇
徐文静
张正坤
路扬
张佳诗
李启云
王金刚
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013
5
在线阅读
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职称材料
2
抗除草剂Bar基因的优化及PAT蛋白的表达
李葱葱
李飞武
谭喜昌
夏蔚
邵改革
龙丽坤
《湖北农业科学》
2015
0
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职称材料
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