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粘质沙雷氏菌膜结合葡萄糖酸脱氢酶的分离纯化及其酶学特性
被引量：
1
1
作者
王贝贝
李昊聪
+4 位作者
孙文敬
崔凤杰
王大明
钱静亚
齐向辉
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2019年第24期101-109,共9页
经超声破碎细胞、TritonX-114相分离、盐析、DEAE-sepharose离子交换层析和Hydroxyapatite吸附层析等步骤,从2-酮基葡萄糖酸(2-keogluconic acid,2KGA)生产菌株粘质沙雷氏菌JUIM03中获得比活力91.43 U/mg、纯化倍数160.4 倍的膜结合葡...
经超声破碎细胞、TritonX-114相分离、盐析、DEAE-sepharose离子交换层析和Hydroxyapatite吸附层析等步骤,从2-酮基葡萄糖酸(2-keogluconic acid,2KGA)生产菌株粘质沙雷氏菌JUIM03中获得比活力91.43 U/mg、纯化倍数160.4 倍的膜结合葡萄糖酸脱氢酶(gluconate dehydrogenase,GADH)。研究结果表明,粘质沙雷氏菌膜结合GADH由3 个亚基组成,其分子质量分别为65.0、45.0 kDa和23.0 kDa左右,是一种含有细胞色素C的黄素蛋白,能够催化氧化葡萄糖酸为2KGA。粘质沙雷氏菌膜结合GADH的最适反应温度为40 ℃,最适反应pH 5.0,在30 ℃以下、pH 5.0~6.0的条件下较为稳定;该酶具有严格的底物特异性,只有在D-葡萄糖酸作为底物时才具有催化活性,其Km值为1.33 mmol/L;一些金属离子(如Fe3+、Cu2+ 和Zn2+ )、有机溶剂(乙醇、异丙醇、甲醇和丙酮)、变性剂(十二烷基硫酸钠和巯基乙醇)以及有机酸(草氨酸和草酸)对膜结合GADH的催化活性具有明显的抑制作用。研究为粘质沙雷氏菌2KGA生物合成的过程优化与控制提供了一定的理论依据。
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关键词
粘质沙雷氏菌
2-酮基
葡萄糖
酸
膜
结合
葡萄糖
酸
脱
氢
酶
分离纯化
酶
学特性
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职称材料
氧化葡萄糖酸杆菌DHA3-9的葡萄糖代谢酶系
2
作者
李倩延
卢向锋
+3 位作者
张鹏程
孙玲艳
刘于
马晓航
《浙江大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期133-140,共8页
研究氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)对细胞内葡萄糖代谢除直接氧化途径外可能存在的其他途径.以G.oxydans DHA3-9菌株为研究对象,利用同源重组构建G.oxydans DHA3-9膜结合的葡萄糖脱氢酶(membrane-bound glucose dehydrogenas...
研究氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)对细胞内葡萄糖代谢除直接氧化途径外可能存在的其他途径.以G.oxydans DHA3-9菌株为研究对象,利用同源重组构建G.oxydans DHA3-9膜结合的葡萄糖脱氢酶(membrane-bound glucose dehydrogenase,mGDH)基因敲除的突变株,以阻断该菌的葡萄糖直接氧化途径,研究其在葡萄糖培养基中的生长速率、葡萄糖降解与葡萄糖酸转化、代谢产物成分等主要生理生化特性的变化.结果表明:实验成功地筛选到1株G.oxydans mgdh突变菌,该菌丧失了90%以上利用葡萄糖转化为葡萄糖酸的能力,其二羟基丙酮(dihydroxyacetone,DHA)转化量4倍于野生菌;同时,在该突变菌代谢产物中检测出丙酮酸和乙酸,且乙酸对野生菌和突变菌的生长抑制差异极显著.表明葡萄糖在G.oxydans DHA3-9△mgdh菌株细胞内依赖的代谢途径为糖酵解途径,而非2-酮-3-脱氧-6-磷酸葡萄糖酸裂解途径或磷酸戊糖途径.其中,丙酮酸作为糖酵解途径产物通过丙酮酸脱羧酶和乙醛脱氢酶转化为乙酸,而乙酸积累过多将对菌株生长产生抑制.
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关键词
氧化
葡萄糖
酸杆菌
膜结合葡萄糖脱氢酶
基因敲除
葡萄糖
代谢
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职称材料
题名
粘质沙雷氏菌膜结合葡萄糖酸脱氢酶的分离纯化及其酶学特性
被引量：
1
1
作者
王贝贝
李昊聪
孙文敬
崔凤杰
王大明
钱静亚
齐向辉
机构
江苏大学食品与生物工程学院
江西省德兴市百勤异VC钠有限公司
江南大学生物工程学院
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2019年第24期101-109,共9页
基金
国家自然科学基金面上项目（31571885）
江苏高校优势学科建设工程资助项目（PAPD）
+5 种基金
国家高技术研究发展计划（863计划）项目（2012AA022103）
“十三五”国家重点研发计划重点专项（2017YFC1600806）
江西省科技计划项目（赣知发[2015]64号）
江西省创新团队建设计划项目（20142BCB24024）
江西省科技平台建设计划项目（2010DTZ01900）
德兴市科技计划项目（德科发[2015]44号）
文摘
经超声破碎细胞、TritonX-114相分离、盐析、DEAE-sepharose离子交换层析和Hydroxyapatite吸附层析等步骤,从2-酮基葡萄糖酸(2-keogluconic acid,2KGA)生产菌株粘质沙雷氏菌JUIM03中获得比活力91.43 U/mg、纯化倍数160.4 倍的膜结合葡萄糖酸脱氢酶(gluconate dehydrogenase,GADH)。研究结果表明,粘质沙雷氏菌膜结合GADH由3 个亚基组成,其分子质量分别为65.0、45.0 kDa和23.0 kDa左右,是一种含有细胞色素C的黄素蛋白,能够催化氧化葡萄糖酸为2KGA。粘质沙雷氏菌膜结合GADH的最适反应温度为40 ℃,最适反应pH 5.0,在30 ℃以下、pH 5.0~6.0的条件下较为稳定;该酶具有严格的底物特异性,只有在D-葡萄糖酸作为底物时才具有催化活性,其Km值为1.33 mmol/L;一些金属离子(如Fe3+、Cu2+ 和Zn2+ )、有机溶剂(乙醇、异丙醇、甲醇和丙酮)、变性剂(十二烷基硫酸钠和巯基乙醇)以及有机酸(草氨酸和草酸)对膜结合GADH的催化活性具有明显的抑制作用。研究为粘质沙雷氏菌2KGA生物合成的过程优化与控制提供了一定的理论依据。
关键词
粘质沙雷氏菌
2-酮基
葡萄糖
酸
膜
结合
葡萄糖
酸
脱
氢
酶
分离纯化
酶
学特性
Keywords
Serratia marcescens
2-ketogluconic acid
membrane-bound gluconate dehydrogenase
purification
enzymatic properties
分类号
Q814.1 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
氧化葡萄糖酸杆菌DHA3-9的葡萄糖代谢酶系
2
作者
李倩延
卢向锋
张鹏程
孙玲艳
刘于
马晓航
机构
浙江大学生命科学学院
出处
《浙江大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第2期133-140,共8页
文摘
研究氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)对细胞内葡萄糖代谢除直接氧化途径外可能存在的其他途径.以G.oxydans DHA3-9菌株为研究对象,利用同源重组构建G.oxydans DHA3-9膜结合的葡萄糖脱氢酶(membrane-bound glucose dehydrogenase,mGDH)基因敲除的突变株,以阻断该菌的葡萄糖直接氧化途径,研究其在葡萄糖培养基中的生长速率、葡萄糖降解与葡萄糖酸转化、代谢产物成分等主要生理生化特性的变化.结果表明:实验成功地筛选到1株G.oxydans mgdh突变菌,该菌丧失了90%以上利用葡萄糖转化为葡萄糖酸的能力,其二羟基丙酮(dihydroxyacetone,DHA)转化量4倍于野生菌;同时,在该突变菌代谢产物中检测出丙酮酸和乙酸,且乙酸对野生菌和突变菌的生长抑制差异极显著.表明葡萄糖在G.oxydans DHA3-9△mgdh菌株细胞内依赖的代谢途径为糖酵解途径,而非2-酮-3-脱氧-6-磷酸葡萄糖酸裂解途径或磷酸戊糖途径.其中,丙酮酸作为糖酵解途径产物通过丙酮酸脱羧酶和乙醛脱氢酶转化为乙酸,而乙酸积累过多将对菌株生长产生抑制.
关键词
氧化
葡萄糖
酸杆菌
膜结合葡萄糖脱氢酶
基因敲除
葡萄糖
代谢
Keywords
Gluconobacter oxydans
membrane-bound glucose dehydrogenase
gene knockout
glucose metabolism
分类号
Q81 [生物学—生物工程]
Q935 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
粘质沙雷氏菌膜结合葡萄糖酸脱氢酶的分离纯化及其酶学特性
王贝贝
李昊聪
孙文敬
崔凤杰
王大明
钱静亚
齐向辉
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
氧化葡萄糖酸杆菌DHA3-9的葡萄糖代谢酶系
李倩延
卢向锋
张鹏程
孙玲艳
刘于
马晓航
《浙江大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
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职称材料
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