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绿盲蝽膜结合型海藻糖酶ALTre-2基因表达、纯化及酶学特性
被引量：
6
1
作者
谭永安
肖留斌
+1 位作者
柏立新
孙洋
《棉花学报》
CSCD
北大核心
2013年第5期396-402,共7页
以绿盲蝽为材料,在前期获得绿盲蝽膜结合型海藻糖酶(ALTre-2)基因的基础上,构建了ALTre-2原核表达载体(pET28a-ALTre-2),经IPTG诱导表达、变性、复性和蛋白纯化后,获得具海藻糖酶活力的重组蛋白,最后在以海藻糖为底物及重组蛋白浓度为1....
以绿盲蝽为材料,在前期获得绿盲蝽膜结合型海藻糖酶(ALTre-2)基因的基础上,构建了ALTre-2原核表达载体(pET28a-ALTre-2),经IPTG诱导表达、变性、复性和蛋白纯化后,获得具海藻糖酶活力的重组蛋白,最后在以海藻糖为底物及重组蛋白浓度为1.1 mg·mL-1的条件下,对纯化得到的重组ALTre-2蛋白进行活性检测,确定了其酶促反应的最佳pH和最适温度。试验结果表明:ALTre-2基因在大肠杆菌BL21(DE3)中能够高效表达一个约60 kD大小的蛋白,SDS-PAGE显示该蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性及蛋白纯化获得了具海藻糖酶活力的重组蛋白;该重组ALTre-2蛋白在pH为7.0时活性最高,同时重组ALTre-2蛋白酶活性最适温度是50℃。研究结果为深入探讨绿盲蝽膜结合型海藻糖酶分子调控机制奠定基础。
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关键词
绿盲蝽
膜结合型海藻糖酶
原核表达
酶学特性
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职称材料
利用RNAi技术沉默稻纵卷叶螟膜结合型海藻糖酶基因
被引量：
4
2
作者
赵凤
杜娟
+1 位作者
李尚伟
张泽杰
《西南农业学报》
CSCD
北大核心
2020年第6期1105-1112,共8页
【目的】明确沉默稻纵卷叶螟膜结合型海藻糖酶基因(CmTre2)对其生长发育的影响,为稻纵卷叶螟的防治奠定理论基础。【方法】基于RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,针对稻纵卷叶螟膜结合型海藻糖酶基因(CmTre2)设计靶位点,体外合成双链...
【目的】明确沉默稻纵卷叶螟膜结合型海藻糖酶基因(CmTre2)对其生长发育的影响,为稻纵卷叶螟的防治奠定理论基础。【方法】基于RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,针对稻纵卷叶螟膜结合型海藻糖酶基因(CmTre2)设计靶位点,体外合成双链RNA(dsCmTre2),将其注射入稻纵卷叶螟3龄幼虫体内,观察试虫表型变化,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CmTre2的表达水平,测定酶活力。【结果】注射dsCmTre2的幼虫取食量明显下降,生长发育阻滞,体型变小,出现畸形和死亡现象。注射dsCmTre2后5 d,幼虫死亡率明显高于对照组,存活幼虫体重明显轻于对照组;CmTre2和几丁质合成酶B基因(CmCHSB)的表达量较对照分别下降53.70%和34.41%;膜结合型海藻糖酶活力较对照组下降35.61%。【结论】CmTre2基因对稻纵卷叶螟的生长发育具有重要作用,该基因的沉默影响几丁质合成,引起发育障碍。该研究结果为进一步利用RNAi技术在田间防治稻纵卷叶螟奠定了基础。
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关键词
稻纵卷叶螟
膜结合型海藻糖酶
RNA干扰
酶活力
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职称材料
转CmTreⅡ基因水稻RNAi效应的室内和田间抗性及遗传性鉴定
被引量：
2
3
作者
王爽
杜娟
李尚伟
《山地农业生物学报》
2017年第2期40-45,共6页
本研究采用农杆菌介导的遗传转化技术,将CmTreⅡ(膜结合型海藻糖酶基因一个靶位点)导入粳稻中花11号中,利用CmTreⅡ-dsRNA(含有膜结合型海藻糖酶基因一个靶位点的双链RNA)的沉默效应,沉默稻纵卷叶螟的膜结合型海藻糖酶,最终获得一批抗...
本研究采用农杆菌介导的遗传转化技术,将CmTreⅡ(膜结合型海藻糖酶基因一个靶位点)导入粳稻中花11号中,利用CmTreⅡ-dsRNA(含有膜结合型海藻糖酶基因一个靶位点的双链RNA)的沉默效应,沉默稻纵卷叶螟的膜结合型海藻糖酶,最终获得一批抗虫性较好的转基因纯合株系。研究中进一步检测了这些株系的室外卷叶率、白叶率以及室内抗虫性。采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测转基因水稻室内抗虫性CmTre2基因的相对表达量。通过RT-PCR技术检测了转CmTreⅡ基因水稻的遗传性。结果显示:在室外抗虫性试验中,稻纵卷叶螟对水稻的取食量明显下降,转CmTreⅡ基因水稻的卷叶率和白叶率分别为13.40%和12.47%,相比对照组分别下降了11.32%和10.10%;在室内抗虫性试验中,RT-q PCR检测结果表明,稻纵卷叶螟在取食转CmTreⅡ基因水稻的96 h后,CmTre2基因的相对表达量比对照组下降了29.00%;7 d后,实验组的死亡率为56.67%,相比对照组增加了46.67%。在遗传性试验中,检测发现转CmTreⅡ基因水稻的遗传性良好。因此本研究成功鉴定了转CmTreⅡ基因水稻对稻纵卷叶螟的抗虫性以及遗传性。
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关键词
稻纵卷叶螟
转基因
抗虫性
膜结合型海藻糖酶
RNA干扰
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职称材料
题名
绿盲蝽膜结合型海藻糖酶ALTre-2基因表达、纯化及酶学特性
被引量：
6
1
作者
谭永安
肖留斌
柏立新
孙洋
机构
江苏省农业科学院植物保护研究所
出处
《棉花学报》
CSCD
北大核心
2013年第5期396-402,共7页
基金
公益性行业(农业)科研专项(201103012)
现代农业产业技术体系建设专项资金
国家科技支撑计划项目(2012BAD19B05)
文摘
以绿盲蝽为材料,在前期获得绿盲蝽膜结合型海藻糖酶(ALTre-2)基因的基础上,构建了ALTre-2原核表达载体(pET28a-ALTre-2),经IPTG诱导表达、变性、复性和蛋白纯化后,获得具海藻糖酶活力的重组蛋白,最后在以海藻糖为底物及重组蛋白浓度为1.1 mg·mL-1的条件下,对纯化得到的重组ALTre-2蛋白进行活性检测,确定了其酶促反应的最佳pH和最适温度。试验结果表明:ALTre-2基因在大肠杆菌BL21(DE3)中能够高效表达一个约60 kD大小的蛋白,SDS-PAGE显示该蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性及蛋白纯化获得了具海藻糖酶活力的重组蛋白;该重组ALTre-2蛋白在pH为7.0时活性最高,同时重组ALTre-2蛋白酶活性最适温度是50℃。研究结果为深入探讨绿盲蝽膜结合型海藻糖酶分子调控机制奠定基础。
关键词
绿盲蝽
膜结合型海藻糖酶
原核表达
酶学特性
Keywords
Apolygus lucorum
membrane-bound trehalase
prokaryotic expression
enzymatic characteristic
分类号
S435.622 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
利用RNAi技术沉默稻纵卷叶螟膜结合型海藻糖酶基因
被引量：
4
2
作者
赵凤
杜娟
李尚伟
张泽杰
机构
贵州大学昆虫研究所/贵州山地农业病虫害重点实验室
遵义市第十八中学
出处
《西南农业学报》
CSCD
北大核心
2020年第6期1105-1112,共8页
基金
国家自然科学基金项目“利用RNAi技术防治稻纵卷叶螟的研究”(31360443)。
文摘
【目的】明确沉默稻纵卷叶螟膜结合型海藻糖酶基因(CmTre2)对其生长发育的影响,为稻纵卷叶螟的防治奠定理论基础。【方法】基于RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,针对稻纵卷叶螟膜结合型海藻糖酶基因(CmTre2)设计靶位点,体外合成双链RNA(dsCmTre2),将其注射入稻纵卷叶螟3龄幼虫体内,观察试虫表型变化,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CmTre2的表达水平,测定酶活力。【结果】注射dsCmTre2的幼虫取食量明显下降,生长发育阻滞,体型变小,出现畸形和死亡现象。注射dsCmTre2后5 d,幼虫死亡率明显高于对照组,存活幼虫体重明显轻于对照组;CmTre2和几丁质合成酶B基因(CmCHSB)的表达量较对照分别下降53.70%和34.41%;膜结合型海藻糖酶活力较对照组下降35.61%。【结论】CmTre2基因对稻纵卷叶螟的生长发育具有重要作用,该基因的沉默影响几丁质合成,引起发育障碍。该研究结果为进一步利用RNAi技术在田间防治稻纵卷叶螟奠定了基础。
关键词
稻纵卷叶螟
膜结合型海藻糖酶
RNA干扰
酶活力
Keywords
Cnaphalocrocis medinalis
Membrane-bound trehalase
RNA interference
Enzyme activity
分类号
Q966 [生物学—昆虫学]
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职称材料
题名
转CmTreⅡ基因水稻RNAi效应的室内和田间抗性及遗传性鉴定
被引量：
2
3
作者
王爽
杜娟
李尚伟
机构
贵州大学昆虫研究所/贵州山地农业病虫害重点实验实
贵州大学昆虫资源开发利用特色重点实验室
出处
《山地农业生物学报》
2017年第2期40-45,共6页
基金
国家自然科学基金项目(31360443)
贵州省科技创新人才团队项目(黔科合人才团队[2014]4001号)
文摘
本研究采用农杆菌介导的遗传转化技术,将CmTreⅡ(膜结合型海藻糖酶基因一个靶位点)导入粳稻中花11号中,利用CmTreⅡ-dsRNA(含有膜结合型海藻糖酶基因一个靶位点的双链RNA)的沉默效应,沉默稻纵卷叶螟的膜结合型海藻糖酶,最终获得一批抗虫性较好的转基因纯合株系。研究中进一步检测了这些株系的室外卷叶率、白叶率以及室内抗虫性。采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测转基因水稻室内抗虫性CmTre2基因的相对表达量。通过RT-PCR技术检测了转CmTreⅡ基因水稻的遗传性。结果显示:在室外抗虫性试验中,稻纵卷叶螟对水稻的取食量明显下降,转CmTreⅡ基因水稻的卷叶率和白叶率分别为13.40%和12.47%,相比对照组分别下降了11.32%和10.10%;在室内抗虫性试验中,RT-q PCR检测结果表明,稻纵卷叶螟在取食转CmTreⅡ基因水稻的96 h后,CmTre2基因的相对表达量比对照组下降了29.00%;7 d后,实验组的死亡率为56.67%,相比对照组增加了46.67%。在遗传性试验中,检测发现转CmTreⅡ基因水稻的遗传性良好。因此本研究成功鉴定了转CmTreⅡ基因水稻对稻纵卷叶螟的抗虫性以及遗传性。
关键词
稻纵卷叶螟
转基因
抗虫性
膜结合型海藻糖酶
RNA干扰
Keywords
Cnaphalocrocis medinalis
transgenosis
insect resistance
the membrane - bound trehalase
RNAi
分类号
Q958.1 [生物学—动物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
绿盲蝽膜结合型海藻糖酶ALTre-2基因表达、纯化及酶学特性
谭永安
肖留斌
柏立新
孙洋
《棉花学报》
CSCD
北大核心
2013
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
利用RNAi技术沉默稻纵卷叶螟膜结合型海藻糖酶基因
赵凤
杜娟
李尚伟
张泽杰
《西南农业学报》
CSCD
北大核心
2020
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
转CmTreⅡ基因水稻RNAi效应的室内和田间抗性及遗传性鉴定
王爽
杜娟
李尚伟
《山地农业生物学报》
2017
2
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