目的探究分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)在DNA错配修复(MMR)功能正常与MMR功能缺陷的Ⅱ期结肠癌中的表达及意义。方法收集新鲜的Ⅱ期结肠癌组织标本,并根据MMR状态分为pMMR和dMMR组。利用Affymetrix Human oeLncRNA基因芯片检测两组不同MM...目的探究分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)在DNA错配修复(MMR)功能正常与MMR功能缺陷的Ⅱ期结肠癌中的表达及意义。方法收集新鲜的Ⅱ期结肠癌组织标本,并根据MMR状态分为pMMR和dMMR组。利用Affymetrix Human oeLncRNA基因芯片检测两组不同MMR状态结肠癌组织中差异表达的mRNA情况。通过q-PCR和Westernblot技术检测dMMR和pMMR肠癌组织、细胞株中SFRP4的表达并分析两组间表达差异情况;通过免疫组化技术检测增殖标志物Ki-67的表达并分析SFRP4与Ki-67表达的相关关系。利用HCT116细胞株,干扰SFRP4的表达,通过流式细胞术检测干扰SFRP4前与干扰后HCT116细胞株的凋亡率并分析其差异。结果 PCR和Western blot的结果提示SFRP4在dMMR状态的肠癌组织、细胞株中的表达明显高于pMMR的肠癌组织(P=0.014)、细胞株(P=0.0079),免疫组化结果提示SFRP4与Ki-67蛋白在肠癌组织的表达呈负相关关系(P=0.041)。siRNA干扰SFRP4的表达后HCT116细胞株凋亡率下降,包括早期凋亡(P=0.003)和晚期凋亡率(P=0.024)。结论 SFRP4在dMMR型肠癌表达较pMMR型表达增高,促进肠癌细胞凋亡、抑制增殖,可能有助于改善MMR缺陷型Ⅱ期肠癌预后。展开更多
目的识别华支睾吸虫新基因,并将所发现的华支睾吸虫表膜相关蛋白(tegumental protein ofClonorchis sinensis,CsTP)的cDNA序列克隆到原核载体中,为进一步的研究奠定基础。方法对华支睾cDNA质粒文库进行随机筛选并测序,用在线生物信息学...目的识别华支睾吸虫新基因,并将所发现的华支睾吸虫表膜相关蛋白(tegumental protein ofClonorchis sinensis,CsTP)的cDNA序列克隆到原核载体中,为进一步的研究奠定基础。方法对华支睾cDNA质粒文库进行随机筛选并测序,用在线生物信息学工具进行序列分析,识别CsTP基因,并对其进行同源性、物理性质及结构分析。设计引物,从华支睾cD-NA质粒文库中扩增目的基因cDNA序列,并构建原核重组质粒,相同引物从华支睾吸虫基因组中扩增出CsTP的DNA序列。结果发现CsTP基因,其cDNA完整阅读框含555个碱基,编码184个氨基酸,理论分子量为20.7kDa;其DNA序列含1393个碱基,含有3个外显子、2个内含子。序列分析表明,CsTP蛋白与其它物种的表皮蛋白或膜相关蛋白有一定的同源性。所构建的重组原核表达质粒PGEX-4T-1-CsTP经PCR、双酶切及测序证实与目的基因相符。结论发现华支睾吸虫表膜相关蛋白基因,成功构建其重组原核表达质粒为进一步研究该基因的功能提供了条件。展开更多
文摘目的识别华支睾吸虫新基因,并将所发现的华支睾吸虫表膜相关蛋白(tegumental protein ofClonorchis sinensis,CsTP)的cDNA序列克隆到原核载体中,为进一步的研究奠定基础。方法对华支睾cDNA质粒文库进行随机筛选并测序,用在线生物信息学工具进行序列分析,识别CsTP基因,并对其进行同源性、物理性质及结构分析。设计引物,从华支睾cD-NA质粒文库中扩增目的基因cDNA序列,并构建原核重组质粒,相同引物从华支睾吸虫基因组中扩增出CsTP的DNA序列。结果发现CsTP基因,其cDNA完整阅读框含555个碱基,编码184个氨基酸,理论分子量为20.7kDa;其DNA序列含1393个碱基,含有3个外显子、2个内含子。序列分析表明,CsTP蛋白与其它物种的表皮蛋白或膜相关蛋白有一定的同源性。所构建的重组原核表达质粒PGEX-4T-1-CsTP经PCR、双酶切及测序证实与目的基因相符。结论发现华支睾吸虫表膜相关蛋白基因,成功构建其重组原核表达质粒为进一步研究该基因的功能提供了条件。
