期刊文献+
共找到89篇文章
< 1 2 5 >
每页显示 20 50 100
寿光鸡腺苷酸琥珀酸裂解酶ADSL基因的表达与克隆化细胞株的筛选 被引量:3
1
作者 刘长青 张洪海 +3 位作者 文杰 马月辉 关伟军 唐学玺 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期982-991,共10页
利用RT-PCR与RACE方法检测寿光鸡心、肝、脾、肺、肾、脑、腿肌与胸肌8种组织腺苷酸琥珀酸裂解酶(ADSL)基因mRNA的差异表达水平,构建ADSL基因融合表达载体pGEX-ADSL,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性克隆,IPTG诱导表达,通过构... 利用RT-PCR与RACE方法检测寿光鸡心、肝、脾、肺、肾、脑、腿肌与胸肌8种组织腺苷酸琥珀酸裂解酶(ADSL)基因mRNA的差异表达水平,构建ADSL基因融合表达载体pGEX-ADSL,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性克隆,IPTG诱导表达,通过构建真核表达载体pEGFP-ADSL,利用脂质体介导法转染寿光鸡成纤维细胞,并进行阳性细胞的克隆化筛选与检测。结果表明:ADSL基因开放阅读框序列长为1455 bp,编码485个氨基酸;5′端非转录调控区具有典型管家基因的特征,在邻近起始密码子-28 bp处发生C→T突变,该突变使该位点变为核呼吸因子2(NRF-2)结合位点;经SDS-PAGE电泳显示,pGEX-ADSL重组融合蛋白在分子量约为80.5 ku处有特异的蛋白条带出现,与预期分子量大小一致,等电点为6.79,纯化后用Western-blot检测为寿光鸡ADSL蛋白。pEGFP-ADSL转染寿光鸡成纤维靶细胞后24、48和72 h,转染率在26.4%~41.2%之间,绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中,随表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状,经药物筛选和克隆化培养,获得表达pEGFP-ADSL融合蛋白的阳性克隆细胞株,经RT-PCR扩增与Western-blot检测确认ADSL融合蛋白基因已经整合到寿光鸡成纤维细胞的基因组中,获得正常表达。研究结果为揭示我国优良地方鸡种的风味基因结构,研究其生物学功能奠定基础。 展开更多
关键词 寿光鸡 腺苷酸琥珀酸 基因结构 基因表达 基因定位
在线阅读 下载PDF
球炭疽菌果胶酸裂解酶基因CcPL20552克隆及表达分析
2
作者 王婷 王一丹 +3 位作者 任姝锦 马婷 金梦军 杨成德 《生物技术通报》 北大核心 2025年第5期290-299,共10页
【目的】基于RNA-Seq数据,果胶酸裂解酶候选效应蛋白基因CcPL20552为球炭疽菌致病过程中致病基因之一,且具有效应蛋白的特征。研究CcPL20552基因信号肽功能及其蛋白表达特点,为揭示其基因功能提供依据,也为揭示球炭疽菌的分子致病机制... 【目的】基于RNA-Seq数据,果胶酸裂解酶候选效应蛋白基因CcPL20552为球炭疽菌致病过程中致病基因之一,且具有效应蛋白的特征。研究CcPL20552基因信号肽功能及其蛋白表达特点,为揭示其基因功能提供依据,也为揭示球炭疽菌的分子致病机制奠定基础。【方法】以球炭疽菌侵染的马铃薯茎秆cDNA为模板,克隆CcPL20552基因CDS编码区全长以及去除信号肽(-SP)序列,构建带有His标签的全长融合表达载体pET28a-PL20552和去信号肽融合表达载体pET28a-SP20552,于大肠杆菌BL21(DE3)中通过自诱导和IPTG诱导表达,纯化蛋白后测定其浓度及活性。【结果】CcPL20552基因编码区全长为720 bp,蛋白质预测分子量为24.48 kD,且包含一段由18个氨基酸组成的信号肽序列,蛋白主要以包涵体形式存在于裂解后的菌体沉淀中,通过变复性并利用His标签纯化出目的蛋白,相同诱导条件下全长蛋白表达量显著高于去除信号肽蛋白表达量,100mmol/L浓度的咪唑洗脱液为最适洗脱浓度,全长和去信号肽蛋白浓度分别为224.25和174.02μg/mL,活性分别为0.6346和0.9520 U/mL。【结论】CcPL20552基因可通过自诱导和IPTG诱导表达,温度越低蛋白表达量越高,信号肽对该蛋白表达影响较大,且信号肽具有分泌功能。 展开更多
关键词 球炭疽菌 果胶酸基因 克隆 信号肽 原核表达
在线阅读 下载PDF
鸡腺苷琥珀酸裂解酶(Adsl)基因多态性及其与肌苷酸含量相关研究 被引量:16
3
作者 张学余 季从亮 +3 位作者 陈国宏 秦洁 束婧婷 苏一军 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第2期231-234,共4页
腺苷琥珀酸裂解酶是嘌呤核苷酸合成过程中的关键酶之一,催化嘌呤核苷酸合成过程中的两个重要反应:(1)由SAC IAR生成AICAR的反应;(2)由腺苷酸琥珀酸生成腺苷酸单磷酸的反应。本研究对泰和乌骨鸡、隐性白羽肉鸡腺苷琥珀酸裂解酶基因的cDN... 腺苷琥珀酸裂解酶是嘌呤核苷酸合成过程中的关键酶之一,催化嘌呤核苷酸合成过程中的两个重要反应:(1)由SAC IAR生成AICAR的反应;(2)由腺苷酸琥珀酸生成腺苷酸单磷酸的反应。本研究对泰和乌骨鸡、隐性白羽肉鸡腺苷琥珀酸裂解酶基因的cDNA进行了克隆,并对序列进行了分析,共发现有6处碱基突变:249G→A(TH),717 C→G(TH),985 A→G(TH)仅在泰和乌骨鸡中出现;992 T→C(RW),1400 C→T(RW)仅在隐性白羽肉鸡中出现;而在泰和乌骨鸡和隐性白羽肉鸡中均检测到突变1179 A→C(TH,RW)。其中985 A→G(TH),1400 C→T(RW)处突变导致两处氨基酸突变:Thr→A la(305),A la→Val(443),其它4处碱基突变均为同义突变。 展开更多
关键词 腺苷琥珀酸基因 克隆 序列分析
在线阅读 下载PDF
草鱼腺苷酸基琥珀酸裂解酶克隆及序列分析 被引量:2
4
作者 屈刚 顾继锐 +4 位作者 辜文博 朱文漓 吴江 刘汉元 徐恒 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1105-1111,共7页
腺苷酸基琥珀酸裂解酶(Adenylosuccinate lyase,ADSL)是嘌呤核苷酸合成过程中的关键酶。研究以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道cDNA文库为基础,应用PCR、RT-PCR和RACE技术,成功获得了草鱼肠道组织腺苷酸基琥珀酸裂解酶基因的cDNA全... 腺苷酸基琥珀酸裂解酶(Adenylosuccinate lyase,ADSL)是嘌呤核苷酸合成过程中的关键酶。研究以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道cDNA文库为基础,应用PCR、RT-PCR和RACE技术,成功获得了草鱼肠道组织腺苷酸基琥珀酸裂解酶基因的cDNA全长和基因组DNA全长。该基因全长1584 bp,包含一个1449 bp的开放阅读框,编码482个氨基酸,与其他脊椎动物比对显示,其序列具有较高的保守性。草鱼腺苷酸基琥珀酸裂解酶基因组DNA由13个外显子和12个内含子组成,其外显子拼接位点非常保守,遵循GT-AG原则。 展开更多
关键词 草鱼 肠道 腺苷酸琥珀酸 克隆 序列分析
在线阅读 下载PDF
鸡腺苷琥珀酸裂解酶互作蛋白的筛选及其功能分析 被引量:1
5
作者 余欢 李辉 +4 位作者 陈友波 石钰仕 赵德鹏 龙霞 谭启松 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第3期515-526,共12页
通过探究鸡腺苷琥珀酸裂解酶(adenylosuccinate lyase)基因ADSL与其互作基因的调控关系,为进一步研究ADSL在肌肉中高表达的原因和ADSL影响肌肉风味的机制提供参考。本研究构建了鸡(gallus)ADSL基因的重组真核表达载体pEGFP-C1-ADSL,将pE... 通过探究鸡腺苷琥珀酸裂解酶(adenylosuccinate lyase)基因ADSL与其互作基因的调控关系,为进一步研究ADSL在肌肉中高表达的原因和ADSL影响肌肉风味的机制提供参考。本研究构建了鸡(gallus)ADSL基因的重组真核表达载体pEGFP-C1-ADSL,将pEGFP-C1-ADSL和pEGFP-C1质粒分别转染鸡成肌细胞,提取表达成功的细胞总蛋白,利用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)联合质谱分析鉴定与鸡ADSL蛋白互作的细胞蛋白,并对结果进行GO功能注释、KEGG通路和蛋白互作网络分析。通过分析筛选出RPL4、PDLIM5、ACTG1和SRSF10蛋白,检测在ADSL基因过表达和沉默状态下,RPL 4、PDLIM 5、ACTG 1和SRSF 10基因在成肌细胞中的表达情况。结果表明,与ADSL互作的蛋白共94个;生物信息学分析表明,这些蛋白定位于细胞结构体、胞内和含蛋白质的复合物上,它们主要参与细胞进程、生物调节和刺激反应等生物进程。间接免疫荧光结果显示,重组蛋白pEGFP-C1-ADSL主要定位于细胞核和细胞质。ADSL过表达时,成肌细胞内RPL 4基因和PDLIM 5基因的表达下调,ACTG 1和SRSF 10基因的表达上调;当ADSL被沉默后,成肌细胞内RPL 4和ACTG 1基因的表达上调。研究结果丰富了调控风味的ADSL蛋白,为进一步了解ADSL的功能及该基因在肌肉中高表达提供了参考。 展开更多
关键词 腺苷琥珀酸 赤水乌骨鸡 免疫共沉淀 互作蛋白
在线阅读 下载PDF
几种离子对豇豆根瘤腺苷酸琥珀酸裂解酶活性和最适pH值的影响 被引量:1
6
作者 周跃钢 《西南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 1997年第5期468-471,共4页
在含15%(v/v)甘油和pH8.0的100mmol/LTricine缓冲液中,当离子浓度<150mmol/L时,K+和Na+离子是豇豆根瘤腺苷酸琥珀酸裂解酶(ASAL)的激活剂,其最适浓度约为75mmol/L,可分... 在含15%(v/v)甘油和pH8.0的100mmol/LTricine缓冲液中,当离子浓度<150mmol/L时,K+和Na+离子是豇豆根瘤腺苷酸琥珀酸裂解酶(ASAL)的激活剂,其最适浓度约为75mmol/L,可分别提高酶活性40%和35%。Mg2+离子是ASAL的抑制剂,能拮抗K+和Na+离子的激活效应。HPO二4离子可显著降低酶活性,抑制效应与HPO二4离子浓度呈正相关。在含15%(v/v)甘油和pH6.6~8.0的100mmol/L磷酸盐缓冲液中,ASAL的最适pH值约为7.4,而在含15%(v/v)甘油和pH7.4~8.6的Tricine缓冲液中,ASAL的最适pH值约为8.2。 展开更多
关键词 豇豆 根瘤 腺苷酸琥珀酸 激活剂 抑制剂
在线阅读 下载PDF
鸡腺苷琥珀酸裂解酶基因适用性进化分析
7
作者 朱云芬 张学余 +2 位作者 韩威 李慧芳 李新 《家畜生态学报》 2011年第6期12-15,共4页
采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,以肝脏总RNA为模板,对泰和乌骨鸡、隐性白羽肉鸡腺苷琥珀酸裂解酶基因(ADSL)编码区序列进行克隆和测序;并结合Gen-Bank中已提交的家鸡、鱼类、哺乳动物和人类等ADSL基因序列,采用基于最大似然法... 采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,以肝脏总RNA为模板,对泰和乌骨鸡、隐性白羽肉鸡腺苷琥珀酸裂解酶基因(ADSL)编码区序列进行克隆和测序;并结合Gen-Bank中已提交的家鸡、鱼类、哺乳动物和人类等ADSL基因序列,采用基于最大似然法的密码子置换模型分析ADSL基因编码区序列在进化过程中承受的选择压力。结果RT-PCR方法准确获得了泰和乌骨鸡和隐性白羽肉鸡ADSL基因编码区序列,全长为1 380bp。"分支特异模型"检验结果表明,ADSL基因在不同物种进化过程中较为保守,未受到正选择作用。鸡ADSL基因序列的"位点特异模型"检验未发现正选择位点。研究结果有助于了解鸡ADSL基因的结构及进化历程。 展开更多
关键词 腺苷琥珀酸基因 进化分析
在线阅读 下载PDF
甘油对豇豆根瘤腺苷酸琥珀酸裂解酶活性的影响
8
作者 周跃钢 《西南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 1997年第3期252-254,共3页
】在缓冲液中添加15%(V/V)甘油可使腺苷酸琥珀酸裂解酶(ASAL)的活性提高24%,对防止ASAL变性失活的效果显著。在4℃静置8,23和52h后,ASAL活性分别为原活性的93%,74%和64%,而不加甘油的对... 】在缓冲液中添加15%(V/V)甘油可使腺苷酸琥珀酸裂解酶(ASAL)的活性提高24%,对防止ASAL变性失活的效果显著。在4℃静置8,23和52h后,ASAL活性分别为原活性的93%,74%和64%,而不加甘油的对照,ASAL活性仅分别为原活性的30%,3%和0。 展开更多
关键词 甘油 豇豆 腺苷酸琥珀酸 根瘤菌
在线阅读 下载PDF
产褐藻胶裂解酶菌株S10的鉴定、全基因组测序及分析 被引量:2
9
作者 刘芳 舒志强 +5 位作者 王共明 井月欣 赵云苹 徐英江 矫春娜 张健 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第22期73-84,共12页
为了详细解析从仿刺参肠道中分离出1株具有较高酶活力高产褐藻胶裂解酶菌株S10的基因组序列信息,进而深入挖掘与褐藻胶裂解酶相关的基因资源,本研究通过形态学观察和16S rRNA序列分析对菌株S10进行菌种鉴定,然后利用Illumina二代测序技... 为了详细解析从仿刺参肠道中分离出1株具有较高酶活力高产褐藻胶裂解酶菌株S10的基因组序列信息,进而深入挖掘与褐藻胶裂解酶相关的基因资源,本研究通过形态学观察和16S rRNA序列分析对菌株S10进行菌种鉴定,然后利用Illumina二代测序技术和第三代高通量PacBio测序平台对菌株S10进行全基因组测序,并使用相关软件对测序数据进行基因组组装、基因预测及基因功能注释等。此外,根据注释结果对菌株S10中所含的3组假定褐藻胶裂解酶基因序列进行生物信息学分析及结构预测。结果表明,菌株S10被鉴定为Vibrio alginolyticus,基因组总长度为5397046 bp,GC含量为44.59%,由2条染色体和1条质粒组成。预测共有4936个编码基因,127个tRNA基因和37个rRNA基因。在直系同源集、基因本体论、京都基因与基因组百科全书和碳水化合物活性酶数据库中分别注释到4039、3163、3104个和96个功能基因。此外,在菌株S10中发现了3组潜在的褐藻胶裂解酶基因alg4755、alg4756和alg4760。生物信息学分析结果表明,褐藻胶裂解酶Alg4755、Alg4756和Alg4760均属于多糖裂解酶家族7(polysaccharide lyases,PL7)蛋白,具有3个PL7家族高度保守的基序(R*E*R、Q(I/V)H、Y*KAG*Y*Q)。综上,S10菌株全基因组测序及分析对该菌的高效产酶机制研究和新型褐藻胶裂解酶的挖掘具有重要意义,可为后期酶的表达及工业化应用提供理论基础。 展开更多
关键词 褐藻胶 溶藻弧菌 基因组测序 基因功能注释 生物信息学
在线阅读 下载PDF
细脚拟青霉腺苷酸琥珀酸合酶基因的克隆与表达分析 被引量:1
10
作者 杜林娜 李秀兰 +3 位作者 魏东旭 陈鸿兵 姚宇 杨晶 《黑龙江农业科学》 2018年第6期11-16,共6页
腺苷酸琥珀酸合酶(ADSS)为细脚拟青霉(Paecilomyces tenuipes)有效成分腺苷合成代谢途径的关键酶,而细脚拟青霉中腺苷酸琥珀酸合酶基因Ptadss的克隆与序列分析鲜见相关报道。本文在细脚拟青霉转录组测序结果的基础上,利用PCR技术克隆得... 腺苷酸琥珀酸合酶(ADSS)为细脚拟青霉(Paecilomyces tenuipes)有效成分腺苷合成代谢途径的关键酶,而细脚拟青霉中腺苷酸琥珀酸合酶基因Ptadss的克隆与序列分析鲜见相关报道。本文在细脚拟青霉转录组测序结果的基础上,利用PCR技术克隆得到该菌Ptadss基因的cDNA序列,对Ptadss基因及其编码的蛋白进行生物信息学分析(相关理化性质、结构域、亲水性-疏水性、亚细胞定位、信号肽和高级结构等),并构建PtADSS与相关微生物ADSS的系统进化树。同时,采用实时荧光定量PCR技术,分析Ptadss基因在不同发酵阶段的细脚拟青霉菌丝体中的表达量,以初步明确该基因的表达量对于细脚拟青霉腺苷含量的影响。结果表明:克隆得到的Ptadss基因的ORF序列为1 670bp。该基因编码的蛋白的基本性质为:423个氨基酸残基、相对分子量为46.7 663kDa、等电点(pI)为5.59,含58个磷酸化位点,且该蛋白为定位于细胞质中的非分泌性和非跨膜的疏水性蛋白。结构预测结果表明该蛋白是由α-螺旋、β-转角、延伸链和无规则卷曲组成的复杂结构。序列分析结果提示,细脚拟青霉Ptadss基因与Cordyceps confragosa腺苷酸琥珀酸合酶基因同源性最高,可达91%。结合其他微生物的ADSS氨基酸序列构建系统树,结果表明细脚拟青霉与Cordyceps confragosa亲缘关系较近。另经对不同发酵阶段的细脚拟青霉中Ptadss的表达量及腺苷含量分析结果表明:Ptadss基因的表达水平与菌丝体中腺苷含量存在正相关性。 展开更多
关键词 细脚拟青霉 腺苷酸琥珀酸 基因克隆 序列分析 表达分析
在线阅读 下载PDF
辣椒果胶裂解酶基因家族的生物信息学分析
11
作者 赵铮 史帅朋 +1 位作者 石明军 魏兵强 《寒旱农业科学》 2024年第5期415-421,共7页
为了解辣椒果胶裂解酶(Pectin lyase like,PLL)基因家族成员数量、理化结构及可能参与的生物学过程,以期为全面鉴定和认识辣椒CaPLLs基因家族的生物学功能提供研究基础。利用全基因组扫描方法和在线生物信息学工具对辣椒CaPLLs基因家族... 为了解辣椒果胶裂解酶(Pectin lyase like,PLL)基因家族成员数量、理化结构及可能参与的生物学过程,以期为全面鉴定和认识辣椒CaPLLs基因家族的生物学功能提供研究基础。利用全基因组扫描方法和在线生物信息学工具对辣椒CaPLLs基因家族进行了鉴定和分析。结果在辣椒参考基因组的9条染色体上共鉴定出28个CaPLLs基因家族成员,且分别隶属于5个亚族;CaPLLs家族成员的氨基酸序列长度介于183~762 aa,分子量范围为19.65~84.31 kDa,等电点范围为5.39~9.44。保守基序及结构域分析表明,CaPLLs家族成员共有10个保守基序,所有成员均含有Pec_lyase_C结构域。有多种与激素、胁迫应答和生长发育相关的顺式作用元件存在于CaPLLs基因的启动子区域中。由此可见,这28个CaPLLs基因家族成员同一亚家族基因之间高度保守。 展开更多
关键词 辣椒 果胶 基因家庭 生物信息学
在线阅读 下载PDF
高肺血流量对肺血管结构及胱硫醚-γ-裂解酶基因表达的影响 被引量:42
12
作者 石琳 杜军保 +4 位作者 卜定方 齐建光 魏冰 唐朝枢 汤秀英 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期566-570,共5页
目的 :探讨高肺血流量所致肺动脉高压大鼠肺血管结构和内源性硫化氢体系的变化。方法 :SD大鼠共1 6只 ,随机分为分流组及对照组。对分流组大鼠行腹主动脉 -下腔静脉分流术。 1 1周后以右心导管法测定肺动脉平均压 (pulmonaryarterymeanp... 目的 :探讨高肺血流量所致肺动脉高压大鼠肺血管结构和内源性硫化氢体系的变化。方法 :SD大鼠共1 6只 ,随机分为分流组及对照组。对分流组大鼠行腹主动脉 -下腔静脉分流术。 1 1周后以右心导管法测定肺动脉平均压 (pulmonaryarterymeanpressure ,mPAP)。检测右心室 /体重 (rightventricle/bodyweight,RV/BW )和右心室 /左心室 +室间隔 (rightventricle /leftventricleplusseptum ,RV/LV +S)比值。并且以光学显微镜和电子显微镜观测肺血管结构的变化。以分光光度法测定血浆硫化氢 (hydrogensulfide,H2 S)含量。化学法测定肺组织硫化氢产出率 ,以原位杂交的方法检测肺动脉胱硫醚 γ 裂解酶 (cystuthionine γ lyase ,CSE)mRNA表达。 结果 :分流组大鼠mPAP、RV/BW及RV/ (LV +S)比值明显高于对照组 ,光镜下肺小血管肌化程度明显增强 ,肺中、小肌型动脉相对中膜厚度明显增加。电镜下 ,肺中、小肌型动脉内皮细胞增生、肥厚、肿胀 ,平滑肌细胞增生、肥厚 ,并由收缩表型向合成表型转化。分流组大鼠的血浆H2 S含量及肺组织CSE活性 (肺组织H2 S产出率 )明显低于对照组 ,肺动脉mRNA表达明显降低。结论 :肺血管结构重建是高肺血流量所致肺动脉高压的重要病理基础 ,内源性H2 S体系———mRNA表达、CSE活性及血浆H2 展开更多
关键词 高肺血流量 肺血管结构 胱硫醚—γ 基因表达 肺性高血压
在线阅读 下载PDF
苹果树腐烂病菌果胶裂解酶基因Vmpl4的致病功能研究 被引量:11
13
作者 许春景 孙迎超 +3 位作者 吴玉星 冯浩 高小宁 黄丽丽 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期19-25,共7页
【目的】通过研究苹果树腐烂病菌果胶裂解酶(pectate lyase,PL)基因Vmpl4敲除突变体的致病力、对果胶的利用和基因敲除后家族内其他基因的表达水平变化,探明Vmpl4在致病过程中的作用。【方法】采用q RT-PCR技术检测Vmpl4在野生菌株03-8... 【目的】通过研究苹果树腐烂病菌果胶裂解酶(pectate lyase,PL)基因Vmpl4敲除突变体的致病力、对果胶的利用和基因敲除后家族内其他基因的表达水平变化,探明Vmpl4在致病过程中的作用。【方法】采用q RT-PCR技术检测Vmpl4在野生菌株03-8与寄主互作过程中的表达水平及Vmpl4敲除后PL家族内其他基因的表达水平,通过Doublejoint PCR构建基因敲除载体,并通过PEG介导原生质体遗传转化获取转化子、PCR及Southern blot验证基因敲除突变体。利用苹果叶片和枝条离体接种方法检测突变体致病力;接种至PDA及果胶培养基,观察突变体的营养生长和对果胶的利用情况。【结果】Vmpl4在病菌侵染过程中上调表达高达10.20倍;通过验证得到1个基因敲除突变体,其在叶片和枝条上的致病力均显著降低,在果胶培养基上生长速率也明显降低,Vmpl4敲除后家族内4个基因在病菌侵染过程中表达水平显著上调。【结论】果胶裂解酶基因Vmpl4通过降解果胶参与致病过程,PL家族内其他基因与Vmpl4在病菌致病性方面共同发挥作用。 展开更多
关键词 苹果树腐烂病菌 果胶 基因敲除 致病力
在线阅读 下载PDF
茶树脂氢过氧化物裂解酶基因CsiHPL1的克隆及表达 被引量:7
14
作者 辛肇军 孙晓玲 +1 位作者 张正群 陈宗懋 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期66-72,共7页
根据茶树基因CsiHPL1的cDNA序列设计引物,采用RT-PCR方法从茶树品种龙井43'中克隆了CsiHPL1序列,并分析了CsiHPL1在生物和非生物胁迫下的诱导表达情况及亚细胞定位。结果表明,CsiHPL1包含一个1 476 bp的最大开放阅读框,编码491个氨... 根据茶树基因CsiHPL1的cDNA序列设计引物,采用RT-PCR方法从茶树品种龙井43'中克隆了CsiHPL1序列,并分析了CsiHPL1在生物和非生物胁迫下的诱导表达情况及亚细胞定位。结果表明,CsiHPL1包含一个1 476 bp的最大开放阅读框,编码491个氨基酸,预测为13-HPL基因。Real-Time PCR分析结果表明,CsiHPL1的表达受到茶尺蠖取食、机械损伤和茉莉酸的诱导;构建了CsiHPL1与绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组表达载体,经农杆菌瞬时转化烟草叶片,利用激光共聚焦显微镜在叶绿体中观察到GFP荧光,表明CsiHPL1编码的蛋白质为叶绿体蛋白质。 展开更多
关键词 茶树 脂氢过氧化物基因 克隆 表达
在线阅读 下载PDF
褐藻胶裂解酶基因的克隆、表达载体构建以及表达条件的研究 被引量:4
15
作者 刘航 曹海龙 +3 位作者 岳敏 张建平 李曙光 杜昱光 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期456-460,467,共6页
以产褐藻胶裂解酶的紫色链霉菌(Streptomyces violaceoruber)为出发菌株,应用基因工程技术,将褐藻胶裂解酶aly基因进行克隆,并构建了该基因的重组表达载体pET23b(+)-aly.通过表达条件的初步优化,实现了aly基因在大肠杆菌Escherichia col... 以产褐藻胶裂解酶的紫色链霉菌(Streptomyces violaceoruber)为出发菌株,应用基因工程技术,将褐藻胶裂解酶aly基因进行克隆,并构建了该基因的重组表达载体pET23b(+)-aly.通过表达条件的初步优化,实现了aly基因在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中的成功表达.在IPTG诱导浓度为0.1mmol/L,诱导时间为8h,诱导温度为16℃的条件下,细胞破壁后上清中ALY粗酶液活力为6U/mg.根据褐藻胶裂解酶ALY的蛋白质结构预测结果推断该酶属于Algi-nate lyase-2家族,理论pI为8.85,理论分子量大小为28 500,化学式为C1252N1920H356O394S9.SDS-PAGE蛋白电泳检测发现,ALY蛋白的分子量约为28 000,与预测的蛋白分子量较为接近. 展开更多
关键词 褐藻胶 aly基因 pET23b(+)克隆 ESCHERICHIA coli表达
在线阅读 下载PDF
剑麻苯丙氨酸裂解酶基因的鉴定及表达分析 被引量:3
16
作者 黄兴 习金根 +4 位作者 陈涛 覃旭 谭施北 陈河龙 易克贤 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1082-1089,共8页
剑麻是热带地区重要的纤维作物,但其分子生物学研究基础薄弱,纤维发育机制尚未明确。苯丙氨酸裂解酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)是纤维重要组分木质素生物合成的起始酶,近年来转录组测序技术快速发展,使开展剑麻PAL基因相关研究... 剑麻是热带地区重要的纤维作物,但其分子生物学研究基础薄弱,纤维发育机制尚未明确。苯丙氨酸裂解酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)是纤维重要组分木质素生物合成的起始酶,近年来转录组测序技术快速发展,使开展剑麻PAL基因相关研究更为便利。本文根据已报道转录组数据成功鉴定出2个含完整编码序列的剑麻PAL基因,其在剑麻叶片发育过程中的表达模式与前人报道的PAL在纤维发育过程中的活性变化规律一致,表明其与木质素生物合成密切相关。遗传进化分析结果显示,剑麻和番麻PAL基因进化关系更近,选择压力分析结果显示,剑麻和番麻PAL基因序列选择压力一致且高于太匮龙舌兰PAL基因,这一现象可能由剑麻和番麻纤维性状的趋同进化引起。此外,剑麻PAL基因在铜铅胁迫后差异表达不显著,其可能在重金属胁迫后受到转录后调控。值得一提的是,在烟草疫霉侵染后,剑麻PAL基因表达水平上调倍数较高,其可能同时参与苯丙烷类代谢途径中抗病相关次生代谢产物的合成和细胞壁介导的免疫机制。因此开展剑麻PAL基因功能解析可加深对剑麻纤维发育机制和抗病机制的理解,对培育高产、优质、多抗剑麻新品种具有重要意义。 展开更多
关键词 剑麻 苯丙氨酸基因 遗传进化 选择压力 表达模式 逆境胁迫
在线阅读 下载PDF
蛋氨酸裂解酶的基因克隆及序列分析 被引量:10
17
作者 马百坤 唐晓莹 +1 位作者 黄惠臣 时永辉 《医学研究生学报》 CAS 2006年第12期1063-1066,共4页
目的:克隆蛋氨酸裂解酶(METase)中阴道毛滴虫蛋氨酸裂解酶(TVMGL1)基因,探讨重组METase(rMETase)对肿瘤细胞生长的抑制作用。方法:从培养的阴道毛滴虫提取总RNA,以此为模板,利用RT-PCR获取TVMGL1基因,琼脂糖电泳分离纯化所得目的基因并... 目的:克隆蛋氨酸裂解酶(METase)中阴道毛滴虫蛋氨酸裂解酶(TVMGL1)基因,探讨重组METase(rMETase)对肿瘤细胞生长的抑制作用。方法:从培养的阴道毛滴虫提取总RNA,以此为模板,利用RT-PCR获取TVMGL1基因,琼脂糖电泳分离纯化所得目的基因并克隆至T-Vector,AB I 3730自动序列分析仪分析所得基因序列。结果:PCR产物经琼脂糖电泳,目的基因片段大小与预期大小相符;序列分析所得基因序列为1 191 bp,与国外报导的序列相符。结论:从培养的阴道毛滴虫中成功克隆出TVMGLV1基因,为METase抗肿瘤作用的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 蛋氨酸 基因克隆 反转录PCR
在线阅读 下载PDF
脂氢过氧化物裂解酶基因对生菜遗传转化的研究 被引量:4
18
作者 谢鑫鑫 吴卫东 +3 位作者 林碧英 林忠平 高山 钱昆 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2016年第5期856-861,共6页
枸橘(Ponarus trifoliata)是一类含植物气味成分较高的植物。从枸橘中分离气味物质合成的关键基因—脂氢过氧化物裂解酶(hydroperoxide lyase,HPL)基因,并构建35S启动子驱动下的表达载体,通过农杆菌介导的方法将其导入生菜中,经PCR和Sou... 枸橘(Ponarus trifoliata)是一类含植物气味成分较高的植物。从枸橘中分离气味物质合成的关键基因—脂氢过氧化物裂解酶(hydroperoxide lyase,HPL)基因,并构建35S启动子驱动下的表达载体,通过农杆菌介导的方法将其导入生菜中,经PCR和Southern杂交检测。结果显示:有数十个阳性植株,且经RT-PCR和Northern杂交鉴定HPL基因可在生菜中正常转录。 展开更多
关键词 脂氢过氧化物基因 生菜 遗传转化
在线阅读 下载PDF
褐藻胶裂解酶的基因克隆及表达条件优化 被引量:2
19
作者 许超 黄桂媛 +5 位作者 王巧贞 卢明倩 张荣灿 廖威 张云开 黄庶识 《中国酿造》 CAS 北大核心 2017年第12期120-125,共6页
采用大肠杆菌(Escherichia coli)表达海洋弧菌(Vibrio sp.)X511的褐藻胶裂解酶基因,以实现对该酶的大量制备及酶学性质研究。通过序列分析,预测该酶的前20个氨基酸为信号肽,去除信号肽后的蛋白质分子质量约为30 254.28 Da,等电点8.75,... 采用大肠杆菌(Escherichia coli)表达海洋弧菌(Vibrio sp.)X511的褐藻胶裂解酶基因,以实现对该酶的大量制备及酶学性质研究。通过序列分析,预测该酶的前20个氨基酸为信号肽,去除信号肽后的蛋白质分子质量约为30 254.28 Da,等电点8.75,分子式为C1368H2100N364O401S6,对应的基因序列命名为alg1987。按如下方案构建重组菌:设计特异性核酸引物,PCR扩增得到alg1987;将重组质粒p ET-30(a)-alg1987导入大肠杆菌Trans5α进行测序;提取阳性p ET-30(a)-alg1987质粒导入大肠杆菌BL21,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测诱导后的重组菌胞液上清,发现异源表达的褐藻胶裂解酶分子质量大小与预测值相近。对重组菌中的褐藻胶裂解酶进行表达条件优化,结果显示,最适参数为诱导温度16℃,诱导时间16 h,诱导剂IPTG浓度0.8 mmol/L。 展开更多
关键词 褐藻胶 基因 克隆 条件优化 表达
在线阅读 下载PDF
象耳豆根结线虫果胶酸裂解酶新基因Me-pel2的鉴定及发育表达分析 被引量:3
20
作者 龙海波 孙燕芳 +2 位作者 曾凡云 彭军 白成 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期92-98,共7页
利用EST结合RACE方法从象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii)中克隆一个新的果胶酸裂解酶基因Me-pel2(Gen Bank登录号KP987180)。Me-pel2 c DNA开放阅读框全长834 bp,推导编码277个氨基酸残基的蛋白,属于多糖裂解酶第III家族新成员... 利用EST结合RACE方法从象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii)中克隆一个新的果胶酸裂解酶基因Me-pel2(Gen Bank登录号KP987180)。Me-pel2 c DNA开放阅读框全长834 bp,推导编码277个氨基酸残基的蛋白,属于多糖裂解酶第III家族新成员。Me-PEL2与南方根结线虫果胶酸裂解酶Mi-PEL3氨基酸具有较高的一致性,为54%。发育表达结果显示,Me-pel2在2龄幼虫和雄虫期高丰度表达,而在固着期寄生阶段转录水平急剧下降,推测Me-pel2主要在象耳豆根结线虫迁移性阶段起重要作用,通过降解寄主细胞壁果胶质成分,协助幼虫侵入寄主以及在寄主体内迁移。 展开更多
关键词 象耳豆根结线虫 果胶酸 基因克隆 发育表达类型
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 5 下一页 到第
使用帮助 返回顶部