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海洋放线菌S.areniocola CNS-205腺苷化结构域基因的克隆、表达和纯化 被引量:3
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作者 陆胜利 祁超 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2014年第6期876-884,共9页
海洋放线菌S.arenicola CNS-205是首次报道的专属海洋性放线菌属Salinispora的代表菌株之一.选取海洋放线菌S.arenicola CNS-205非核糖体多肽合成酶氨基酸腺苷化结构域基因sare 0357,对其进行生物信息学分析后进行原核重组质粒的构建和... 海洋放线菌S.arenicola CNS-205是首次报道的专属海洋性放线菌属Salinispora的代表菌株之一.选取海洋放线菌S.arenicola CNS-205非核糖体多肽合成酶氨基酸腺苷化结构域基因sare 0357,对其进行生物信息学分析后进行原核重组质粒的构建和表达及蛋白纯化.分别构建了pET-28a-sare 0357和pGEX-KG-sare 0357重组质粒,并转化E.coli BL21(DE3)进行不同诱导条件的诱导表达,sare 0357基因均以包涵体的形式表达.收集Sare0357重组蛋白包涵体,选取6mol/L的盐酸胍对其进行变性并将变性后的重组蛋白进行镍柱纯化.得到了可溶性的Sare0357融合蛋白. 展开更多
关键词 海洋放线菌 非核糖体多肽合成酶 腺苷化结构域
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海洋放线菌代谢产物、非核糖体多肽、腺苷化结构域研究进展 被引量:2
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作者 陆胜利 祁超 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2015年第1期114-124,共11页
概述了海洋放线菌代谢产物、非核糖体多肽、腺苷化结构域的研究进展.
关键词 海洋放线菌 代谢产物 腺苷化结构域
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海洋放线菌Salinispora areniocola CNS-205腺苷化结构域基因sare0357的酶活测定 被引量:2
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作者 陆胜利 祁超 《安徽农业科学》 CAS 2014年第33期11632-11635,11668,共5页
[目的]测定海洋放线菌S.areniocola CNS-205腺苷化结构域基因sare0357的酶活。[方法]选取海洋放线菌Salinispora arenicola CNS-205 NRPS A domain基因sare0357,对其进行克隆表达和功能鉴定。[结果]在以Trp为底物时测定Sare0357蛋白的... [目的]测定海洋放线菌S.areniocola CNS-205腺苷化结构域基因sare0357的酶活。[方法]选取海洋放线菌Salinispora arenicola CNS-205 NRPS A domain基因sare0357,对其进行克隆表达和功能鉴定。[结果]在以Trp为底物时测定Sare0357蛋白的酶动力学参数为:Km=(0.040 33±0.003 67)mmol/L,Vmax=(2.135 05±0.029 43)μmol/(min·L),kcat=(14.233 6±0.196 2)min;Phe为底物时:Km=(0.027 65±0.001 51)mmol/L,Vmax=(1.558 06±0.009 7)μmol/(min·L),kcat=(10.387 1±0.064 6)min。[结论]丰富洋放线菌Salinispora arenicola CNS-205 NRPS腺苷化结构域的底物特异性和密码子领域的研究,为组合生物学和体外酶系合成NRPs提供依据。 展开更多
关键词 海洋放线菌 非核糖体多肽合成酶 腺苷化结构域 底物特异性 sare0357
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非核糖体肽合成酶腺苷化结构域在E.coli中的表达及底物特异性分析
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作者 刘欣 魏小雅 +1 位作者 于宏伟 郭润芳 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期110-115,132,共7页
侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)S62-9产生的抗菌肽(Brevibacillin,BBL)是一种非核糖体多肽,由非核糖体肽合成酶催化合成。本研究所用基因是从侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)S62-9质粒基因组中克隆的一个非核糖体肽合成酶... 侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)S62-9产生的抗菌肽(Brevibacillin,BBL)是一种非核糖体多肽,由非核糖体肽合成酶催化合成。本研究所用基因是从侧孢短芽孢杆菌(B.laterosporus)S62-9质粒基因组中克隆的一个非核糖体肽合成酶的腺苷化结构域(Nonribosomal peptide synthetase adenylation,NRPS-A)基因,根据此NRPS-A基因构建了pET21b-N1、pET21b-B2、pET22b-N1、pET22b-N3四个重组表达载体。将以上重组表达载体分别转化E.coli BL21、E.coli Rosetta(DE3)和E.coli Origami B(DE3)受体细胞,并用1 mmol/L异丙基β-d-硫代吡喃半乳糖吡喃糖苷(IPTG)在16°C 200 r/min下进行诱导,将诱导产物用SDS-PAGE检测分析。结果显示,4种重组载体在E.coliBL21中均无表达,在E.coliRosetta(DE3)大量表达但均以包涵体形式存在,在E.coli Origami B(DE3)均表达,但只有pET22b-N3这一重组表达载体出现了可溶性融合蛋白。可溶性融合蛋白对赖氨酸有较高的腺苷化活性,表明该A结构域负责抗菌肽BBL中的赖氨酸的识别和上载。该研究结果不仅为其它NRPS-A域的可溶性表达提供了方法,同时为研究抗菌肽BBL的生物合成机制提供依据。 展开更多
关键词 侧孢短芽孢杆菌 抗菌肽 非核糖体肽合成酶 腺苷化结构域 底物特异性
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非核糖体肽合成酶体系设计和改造研究进展
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作者 黄婷 温赛 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期315-324,I0013,I0014,共12页
自然界中,微生物合成肽类化合物一般通过核糖体途径合成核糖体肽,而非核糖体肽(nonribosomal peptide,NP)是一类不通过核糖体途径、由非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthetase,NRPS)催化合成的肽类化合物。非核糖体肽合成酶... 自然界中,微生物合成肽类化合物一般通过核糖体途径合成核糖体肽,而非核糖体肽(nonribosomal peptide,NP)是一类不通过核糖体途径、由非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthetase,NRPS)催化合成的肽类化合物。非核糖体肽合成酶是一种模块化、线性化组装的酶,以类似流水装配线的方式发挥作用。它们产生的次生代谢物多肽通常具有非常复杂的结构,其中有许多是具有重要药理意义的天然产物。NRPS的模块化性质导致其可以通过模块重组实现产物多样化,基于这个发现,科学家们对其进行了深入研究,以期通过人为改造和重构等方式产生更多更有价值的产物。该文集中介绍近年来通过NRPS人工改造和重组等方式生产多肽的研究,为未来发现和生产新的生物活性化合物提供思路。 展开更多
关键词 非核糖体肽合成酶 腺苷化结构域 非核糖体肽合成酶改造 缩合结构域 模块结构
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