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两步化学转化法构建猪圆环病毒2型ORF2基因重组腺病毒质粒
被引量：
3
1
作者
郭全海
陈陆
+4 位作者
王川庆
吴德峰
李志娟
王永生
刘扬科
《江苏农业科学》
CSCD
北大核心
2010年第5期48-50,共3页
为了利用化学转化法快速构建携带猪圆环病毒2型ORF2基因的重组腺病毒质粒以便获得表达该基因的重组腺病毒,首先把骨架质粒pAdeasy-1通过化学法转化到氯化钙法制备的E.coliB J5183感受态菌中,通过含氨苄青霉素的LB平板筛选出含骨架质粒...
为了利用化学转化法快速构建携带猪圆环病毒2型ORF2基因的重组腺病毒质粒以便获得表达该基因的重组腺病毒,首先把骨架质粒pAdeasy-1通过化学法转化到氯化钙法制备的E.coliB J5183感受态菌中,通过含氨苄青霉素的LB平板筛选出含骨架质粒的阳性菌B J5183/p,再次用化学法把插入有猪圆环病毒2型ORF2基因的穿梭质粒rpShuttle-CMV-276经Pm eⅠ酶切线性化后转化到B J5183/p感受态细胞中进行同源重组,再在含卡那霉素的LB平板上培养,筛选出卡那霉素抗性菌进行质粒抽提纯化,酶切并电泳鉴定,获得重组阳性质粒rPAD-276。结果表明,运用2步化学转化法构建重组腺病毒质粒是一种简便、快捷且容易操作的方法。
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关键词
化学转化法
猪圆环
病毒
2型ORF2基因
重组
腺病毒质粒
构建
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职称材料
口蹄疫病毒L、2B基因siRNA重组腺病毒质粒的构建
2
作者
贾俊涛
郭凤英
+2 位作者
乌伦吉如嘎
张小宇
陈金顶
《湖北农业科学》
2017年第16期3152-3154,共3页
根据si RNA设计原则,分别选择O型FMDV的L和2B基因上保守序列作为可能的干扰位点,设计了2个si RNAs,并将si RNAs克隆到p SIREN-Shuttle中,获得2个si RNA重组表达载体p Shuttle-L和p Shuttle-2B。用限制性内切酶I-Ceu I和PI-Sce I双酶切si...
根据si RNA设计原则,分别选择O型FMDV的L和2B基因上保守序列作为可能的干扰位点,设计了2个si RNAs,并将si RNAs克隆到p SIREN-Shuttle中,获得2个si RNA重组表达载体p Shuttle-L和p Shuttle-2B。用限制性内切酶I-Ceu I和PI-Sce I双酶切si RNA重组表达载体和腺病毒质粒载体p Adeno-X,利用体外连接法获得了重组质粒。经PCR扩增、酶切鉴定及序列测定,成功构建了重组腺病毒质粒p Adeno-L和p Adeno-2B。
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关键词
口蹄疫
病毒
RNA干扰
重组
腺病毒质粒
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职称材料
猪附红细胞体ENO基因重组腺病毒穿梭质粒的构建及真核表达
被引量：
3
3
作者
王淼
倪婷婷
+4 位作者
伍生军
赵云
宋建臣
董亮
薛书江
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2018年第8期2113-2118,共6页
为构建猪附红细胞体ENO基因重组腺病毒穿梭质粒,试验根据GenBank中登录的猪附红细胞体ENO基因序列(登录号:CP002525.1)设计特异性引物,对ENO基因进行PCR扩增,并将纯化后的PCR产物克隆到pMD19-T载体中。用KpnⅠ和XhoⅠ对pMD19T-ENO进行...
为构建猪附红细胞体ENO基因重组腺病毒穿梭质粒,试验根据GenBank中登录的猪附红细胞体ENO基因序列(登录号:CP002525.1)设计特异性引物,对ENO基因进行PCR扩增,并将纯化后的PCR产物克隆到pMD19-T载体中。用KpnⅠ和XhoⅠ对pMD19T-ENO进行双酶切后,将其亚克隆至腺病毒穿梭载体PCR^259中,构建PCR^259-ENO重组质粒,提取重组质粒进行鉴定。应用脂质体介导转染法将鉴定正确的PCR^259-ENO重组穿梭质粒转染293细胞,应用间接免疫荧光法(IFTA)检测ENO基因在293细胞中的表达。结果显示,试验克隆的ENO基因长为1 182bp,编码393个氨基酸,与GenBank中ENO基因序列(登录号:CP002525.1)同源性为99%。构建的重组腺病毒穿梭质粒PCR^259-ENO经PCR和酶切鉴定正确,并且能在293细胞中表达,表明ENO基因成功插入腺病毒穿梭质粒PCR^259中,重组腺病毒穿梭质粒PCR^259-ENO构建成功。
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关键词
猪附红细胞体
ENO基因
重组
腺病毒
穿梭
质粒
表达
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职称材料
题名
两步化学转化法构建猪圆环病毒2型ORF2基因重组腺病毒质粒
被引量：
3
1
作者
郭全海
陈陆
王川庆
吴德峰
李志娟
王永生
刘扬科
机构
河南农业大学牧医工程学院
商丘职业技术学院
福建农林大学
出处
《江苏农业科学》
CSCD
北大核心
2010年第5期48-50,共3页
基金
国家高技术研究与发展计划"863"项目(编号:2007AA100606)
文摘
为了利用化学转化法快速构建携带猪圆环病毒2型ORF2基因的重组腺病毒质粒以便获得表达该基因的重组腺病毒,首先把骨架质粒pAdeasy-1通过化学法转化到氯化钙法制备的E.coliB J5183感受态菌中,通过含氨苄青霉素的LB平板筛选出含骨架质粒的阳性菌B J5183/p,再次用化学法把插入有猪圆环病毒2型ORF2基因的穿梭质粒rpShuttle-CMV-276经Pm eⅠ酶切线性化后转化到B J5183/p感受态细胞中进行同源重组,再在含卡那霉素的LB平板上培养,筛选出卡那霉素抗性菌进行质粒抽提纯化,酶切并电泳鉴定,获得重组阳性质粒rPAD-276。结果表明,运用2步化学转化法构建重组腺病毒质粒是一种简便、快捷且容易操作的方法。
关键词
化学转化法
猪圆环
病毒
2型ORF2基因
重组
腺病毒质粒
构建
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
口蹄疫病毒L、2B基因siRNA重组腺病毒质粒的构建
2
作者
贾俊涛
郭凤英
乌伦吉如嘎
张小宇
陈金顶
机构
内蒙古农业大学职业技术学院
华南农业大学
出处
《湖北农业科学》
2017年第16期3152-3154,共3页
基金
教育部"长江学者和创新团队发展计划"创新团队项目(TRT0723)
广东省自然科学基金创新团队项目(5200638)
+2 种基金
广东省自然科学基金项目(020995
06025827)
广州市科技计划项目(2008Z1-E011)
文摘
根据si RNA设计原则,分别选择O型FMDV的L和2B基因上保守序列作为可能的干扰位点,设计了2个si RNAs,并将si RNAs克隆到p SIREN-Shuttle中,获得2个si RNA重组表达载体p Shuttle-L和p Shuttle-2B。用限制性内切酶I-Ceu I和PI-Sce I双酶切si RNA重组表达载体和腺病毒质粒载体p Adeno-X,利用体外连接法获得了重组质粒。经PCR扩增、酶切鉴定及序列测定,成功构建了重组腺病毒质粒p Adeno-L和p Adeno-2B。
关键词
口蹄疫
病毒
RNA干扰
重组
腺病毒质粒
Keywords
Foot-and-mouth disease virus（FMDV）
RNA interference（RNAi）
recombinant adenovirus plasmid
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
猪附红细胞体ENO基因重组腺病毒穿梭质粒的构建及真核表达
被引量：
3
3
作者
王淼
倪婷婷
伍生军
赵云
宋建臣
董亮
薛书江
机构
延边大学农学院
吉林省和龙市动物卫生监督所
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2018年第8期2113-2118,共6页
基金
国家自然科学基金(31460657)
吉林省科技厅青年科研基金(20150520129JH)
文摘
为构建猪附红细胞体ENO基因重组腺病毒穿梭质粒,试验根据GenBank中登录的猪附红细胞体ENO基因序列(登录号:CP002525.1)设计特异性引物,对ENO基因进行PCR扩增,并将纯化后的PCR产物克隆到pMD19-T载体中。用KpnⅠ和XhoⅠ对pMD19T-ENO进行双酶切后,将其亚克隆至腺病毒穿梭载体PCR^259中,构建PCR^259-ENO重组质粒,提取重组质粒进行鉴定。应用脂质体介导转染法将鉴定正确的PCR^259-ENO重组穿梭质粒转染293细胞,应用间接免疫荧光法(IFTA)检测ENO基因在293细胞中的表达。结果显示,试验克隆的ENO基因长为1 182bp,编码393个氨基酸,与GenBank中ENO基因序列(登录号:CP002525.1)同源性为99%。构建的重组腺病毒穿梭质粒PCR^259-ENO经PCR和酶切鉴定正确,并且能在293细胞中表达,表明ENO基因成功插入腺病毒穿梭质粒PCR^259中,重组腺病毒穿梭质粒PCR^259-ENO构建成功。
关键词
猪附红细胞体
ENO基因
重组
腺病毒
穿梭
质粒
表达
Keywords
Mycoplasma suis
ENO gene
recombinant adenovirus shuttle plasmid
expression
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
两步化学转化法构建猪圆环病毒2型ORF2基因重组腺病毒质粒
郭全海
陈陆
王川庆
吴德峰
李志娟
王永生
刘扬科
《江苏农业科学》
CSCD
北大核心
2010
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
口蹄疫病毒L、2B基因siRNA重组腺病毒质粒的构建
贾俊涛
郭凤英
乌伦吉如嘎
张小宇
陈金顶
《湖北农业科学》
2017
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
猪附红细胞体ENO基因重组腺病毒穿梭质粒的构建及真核表达
王淼
倪婷婷
伍生军
赵云
宋建臣
董亮
薛书江
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2018
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
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