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提高树突状细胞腺病毒感染效率的融合蛋白的表达及活性鉴定
1
作者
田仁礼
殷小涛
+7 位作者
王伟
林晓亮
朱晓明
徐元基
阎瑾琦
张巍
高江平
于继云
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期476-479,484,共5页
目的构建表达靶向树突状细胞融合蛋白CT40L的原核表达载体,在大肠杆菌中表达,并对CT40L融合蛋白进行纯化鉴定及功能验证。方法从GenBank上查找柯萨奇病毒和腺病毒受体(CAR)、T4噬菌体fibritin和小鼠CD40L的基因序列,并将其主要功能区域...
目的构建表达靶向树突状细胞融合蛋白CT40L的原核表达载体,在大肠杆菌中表达,并对CT40L融合蛋白进行纯化鉴定及功能验证。方法从GenBank上查找柯萨奇病毒和腺病毒受体(CAR)、T4噬菌体fibritin和小鼠CD40L的基因序列,并将其主要功能区域连接形成拼接序列;序列进行原核表达密码子优化后将其克隆至原核表达载体pET42a(+),构建重组表达载体pET42a-CT40L,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达CT40L/GST融合蛋白,并采用GST琼脂糖凝胶纯化重组蛋白。纯化后的重组蛋白经Western blot法、间接ELISA鉴定其免疫活性。结果重组表达载体经NcoⅠ和EcoRⅠ酶切鉴定正确;IPTG诱导后经SDS-PAGE分析表明获得了相对分子质量(Mr)78 000大小的重组蛋白;纯化后的蛋白纯度达到90%。Western blot法和ELISA检测证实纯化的CT40L分子能够与特异性抗体及相应受体发生反应,表明该融合蛋白具有良好的免疫学活性。结论成功构建了原核表达载体pET42a-CT40L,利用大肠杆菌表达系统实现了融合分子的可溶性表达,纯化后CT40L融合蛋白经检测具备较高的免疫学活性。
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关键词
CD40L
靶向治疗
原核表达
腺病毒感染效率
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职称材料
题名
提高树突状细胞腺病毒感染效率的融合蛋白的表达及活性鉴定
1
作者
田仁礼
殷小涛
王伟
林晓亮
朱晓明
徐元基
阎瑾琦
张巍
高江平
于继云
机构
解放军总医院泌尿外科
军事医学科学院基础医学研究所
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期476-479,484,共5页
基金
国家自然科学基金(30840094)
国家高技术研究发展计划(863)(2007AA02Z451)
文摘
目的构建表达靶向树突状细胞融合蛋白CT40L的原核表达载体,在大肠杆菌中表达,并对CT40L融合蛋白进行纯化鉴定及功能验证。方法从GenBank上查找柯萨奇病毒和腺病毒受体(CAR)、T4噬菌体fibritin和小鼠CD40L的基因序列,并将其主要功能区域连接形成拼接序列;序列进行原核表达密码子优化后将其克隆至原核表达载体pET42a(+),构建重组表达载体pET42a-CT40L,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达CT40L/GST融合蛋白,并采用GST琼脂糖凝胶纯化重组蛋白。纯化后的重组蛋白经Western blot法、间接ELISA鉴定其免疫活性。结果重组表达载体经NcoⅠ和EcoRⅠ酶切鉴定正确;IPTG诱导后经SDS-PAGE分析表明获得了相对分子质量(Mr)78 000大小的重组蛋白;纯化后的蛋白纯度达到90%。Western blot法和ELISA检测证实纯化的CT40L分子能够与特异性抗体及相应受体发生反应,表明该融合蛋白具有良好的免疫学活性。结论成功构建了原核表达载体pET42a-CT40L,利用大肠杆菌表达系统实现了融合分子的可溶性表达,纯化后CT40L融合蛋白经检测具备较高的免疫学活性。
关键词
CD40L
靶向治疗
原核表达
腺病毒感染效率
Keywords
CD40L
target therapy
prokaryotic expression
efficiency of adenovirus infection
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
R392.33 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
提高树突状细胞腺病毒感染效率的融合蛋白的表达及活性鉴定
田仁礼
殷小涛
王伟
林晓亮
朱晓明
徐元基
阎瑾琦
张巍
高江平
于继云
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
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