基于显色体系和破壁条件的优化,构建了酶解破壁与显色反应相结合的氨基酸脱氢酶突变体高通量筛选方法。以颜色和吸光度表征内消旋-2,6-二氨基庚二酸脱氢酶(StDAPDH)酶活,以碘硝基四唑紫(INT)-吩嗪硫酸甲酯(PMS)为显色剂,通过其与StDAPD...基于显色体系和破壁条件的优化,构建了酶解破壁与显色反应相结合的氨基酸脱氢酶突变体高通量筛选方法。以颜色和吸光度表征内消旋-2,6-二氨基庚二酸脱氢酶(StDAPDH)酶活,以碘硝基四唑紫(INT)-吩嗪硫酸甲酯(PMS)为显色剂,通过其与StDAPDH的偶联反应优化了显色体系;以StDAPDH酶活为评价指标,在单因素实验的基础上,采用响应面法探究了菌体量、破壁时间、溶菌酶加量对菌体破壁效果的影响。确定最优显色体系为:INT浓度0.1 mg·mL^(-1)、PMS浓度0.5μg·mL^(-1)、检测波长510 nm;确定最优菌体破壁条件为:30 mL OD 600值为1.5的菌悬液,离心后用10 mL PBS缓冲液重悬菌体沉淀,加入0.2 mg·mL^(-1)的溶菌酶,在37℃下破壁50 min。该方法简单高效,为氨基酸脱氢酶突变体的高通量筛选提供了一定参考。展开更多
文摘基于显色体系和破壁条件的优化,构建了酶解破壁与显色反应相结合的氨基酸脱氢酶突变体高通量筛选方法。以颜色和吸光度表征内消旋-2,6-二氨基庚二酸脱氢酶(StDAPDH)酶活,以碘硝基四唑紫(INT)-吩嗪硫酸甲酯(PMS)为显色剂,通过其与StDAPDH的偶联反应优化了显色体系;以StDAPDH酶活为评价指标,在单因素实验的基础上,采用响应面法探究了菌体量、破壁时间、溶菌酶加量对菌体破壁效果的影响。确定最优显色体系为:INT浓度0.1 mg·mL^(-1)、PMS浓度0.5μg·mL^(-1)、检测波长510 nm;确定最优菌体破壁条件为:30 mL OD 600值为1.5的菌悬液,离心后用10 mL PBS缓冲液重悬菌体沉淀,加入0.2 mg·mL^(-1)的溶菌酶,在37℃下破壁50 min。该方法简单高效,为氨基酸脱氢酶突变体的高通量筛选提供了一定参考。
