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结核分枝杆菌PPE15蛋白的原核表达、鉴定及其兔多克隆抗体的制备
被引量：
2
1
作者
许涛
李敏英
+4 位作者
王楚彤
常先友
钱中清
李柏青
汪洪涛
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第1期78-83,共6页
目的 克隆、表达和纯化结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)蛋白,制备并鉴定PPE15蛋白兔多克隆抗体。方法 通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv株基因组扩增PPE15基因,利用同源重组克隆技术构建原核表达组氨酸标签PPE15蛋白的pET28a-PPE1...
目的 克隆、表达和纯化结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)蛋白,制备并鉴定PPE15蛋白兔多克隆抗体。方法 通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv株基因组扩增PPE15基因,利用同源重组克隆技术构建原核表达组氨酸标签PPE15蛋白的pET28a-PPE15载体。将pET28a-PPE15转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导PPE15蛋白表达,通过SDS-PAGE鉴定PPE15蛋白表达。用亲和层析法Ni-NTA柱纯化PPE15蛋白,用复性纯化后的PPE15蛋白免疫新西兰大白兔,制备和纯化多克隆抗体。Western blot法鉴定PPE15蛋白与人血清和多克隆抗体结合特异性,间接ELISA检测多克隆抗体效价。结果 成功构建pET28a-PPE15重组表达载体,PPE15蛋白主要以包涵体形式存在,纯化后在相对分子质量(M;)38 000位置处有单一条带。纯化后PPE15蛋白与结核病患者和多克隆抗体发生特异性反应,多克隆抗体效价达1∶1 300 480以上。结论 成功表达和纯化重组PPE15蛋白,并制备出高效价兔源性多克隆抗体,为进一步研究PPE15蛋白的功能提供了实验基础。
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关键词
结核分枝杆菌
脯氨酸
-
脯氨酸
-
谷氨酸
15
(
ppe
15
)
Rv1040c
多克隆抗体
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职称材料
结核分枝杆菌PPE59蛋白通过调控耻垢分枝杆菌感染巨噬细胞的细胞因子分泌促进其在宿主细胞的存活
2
作者
王楚彤
郭方正
+4 位作者
宋亚敏
魏婧
李敏英
汪洪涛
许涛
《细胞与分子免疫学杂志》
2025年第10期875-881,共7页
目的研究结核分枝杆菌(Mtb)脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸-59(PPE59)对耻垢分枝杆菌(Ms)生物学功能及调控宿主细胞免疫应答的影响。方法通过PCR扩增获得PPE59基因片段,将其克隆至pALACE,构建重组pALACE-PPE59载体,电转化至Ms;采用Western blot法...
目的研究结核分枝杆菌(Mtb)脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸-59(PPE59)对耻垢分枝杆菌(Ms)生物学功能及调控宿主细胞免疫应答的影响。方法通过PCR扩增获得PPE59基因片段,将其克隆至pALACE,构建重组pALACE-PPE59载体,电转化至Ms;采用Western blot法对PPE59表达进行鉴定和亚细胞定位分析。分析Ms_Vec和Ms_PPE59在低酸(pH=3和pH=5)条件和表面活性压力十二烷基硫酸钠(SDS)条件的存活能力,以及其在巨噬细胞内存活率。ELISA检测Ms_Vec和Ms_PPE59感染巨噬细胞后,白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-12和肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-10分泌水平。结果PPE59蛋白定位于Ms细胞壁,可增强Ms的耐酸作用和抗SDS作用,有利于Ms在巨噬细胞内的存活;PPE59显著降低促炎细胞因子IL-1β、IL-6、IL-12和TNF-α的分泌,促进抑炎因子IL-10的分泌。结论PPE59能增强Ms对低酸和SDS压力条件下的存活能力,通过调控细胞因子分泌水平促进其在细胞内的存活。
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关键词
免疫应答
结核分枝杆菌(Mtb)
耻垢分枝杆菌(Ms)
脯氨酸
-
脯氨酸
-
谷氨酸
-
59(
ppe
59)
Rv3429
生物学功能
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职称材料
题名
结核分枝杆菌PPE15蛋白的原核表达、鉴定及其兔多克隆抗体的制备
被引量：
2
1
作者
许涛
李敏英
王楚彤
常先友
钱中清
李柏青
汪洪涛
机构
蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室
蚌埠医学院免疫学教研室
蚌埠医学院检验医学实验中心
蚌埠市第五人民医院感染科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第1期78-83,共6页
基金
安徽省自然科学基金(1908085MH252,2008085QH405)
安徽省高校自然科学研究重点项目(KJ2018A0233)
蚌埠医学院“512人才培育计划”项目(by51201309)。
文摘
目的 克隆、表达和纯化结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)蛋白,制备并鉴定PPE15蛋白兔多克隆抗体。方法 通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv株基因组扩增PPE15基因,利用同源重组克隆技术构建原核表达组氨酸标签PPE15蛋白的pET28a-PPE15载体。将pET28a-PPE15转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导PPE15蛋白表达,通过SDS-PAGE鉴定PPE15蛋白表达。用亲和层析法Ni-NTA柱纯化PPE15蛋白,用复性纯化后的PPE15蛋白免疫新西兰大白兔,制备和纯化多克隆抗体。Western blot法鉴定PPE15蛋白与人血清和多克隆抗体结合特异性,间接ELISA检测多克隆抗体效价。结果 成功构建pET28a-PPE15重组表达载体,PPE15蛋白主要以包涵体形式存在,纯化后在相对分子质量(M;)38 000位置处有单一条带。纯化后PPE15蛋白与结核病患者和多克隆抗体发生特异性反应,多克隆抗体效价达1∶1 300 480以上。结论 成功表达和纯化重组PPE15蛋白,并制备出高效价兔源性多克隆抗体,为进一步研究PPE15蛋白的功能提供了实验基础。
关键词
结核分枝杆菌
脯氨酸
-
脯氨酸
-
谷氨酸
15
(
ppe
15
)
Rv1040c
多克隆抗体
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
Rv1039c
ppe
15
protein
polyclonal antibody
分类号
R378.911 [医药卫生—病原生物学]
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
结核分枝杆菌PPE59蛋白通过调控耻垢分枝杆菌感染巨噬细胞的细胞因子分泌促进其在宿主细胞的存活
2
作者
王楚彤
郭方正
宋亚敏
魏婧
李敏英
汪洪涛
许涛
机构
蚌埠医科大学检验医学院
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
2025年第10期875-881,共7页
基金
安徽省自然科学基金(1908085MH252,2008085QH405)
蚌埠医学院“512人才培育计划”项目(by5120139)
+2 种基金
慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室开放研究基金(KLICD-2022-Z3)
呼吸系病临床基础安徽省重点实验室开放研究基金(HX2022Z02)
蚌埠医学院研究生科研创新计划项目(Byycx21008)。
文摘
目的研究结核分枝杆菌(Mtb)脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸-59(PPE59)对耻垢分枝杆菌(Ms)生物学功能及调控宿主细胞免疫应答的影响。方法通过PCR扩增获得PPE59基因片段,将其克隆至pALACE,构建重组pALACE-PPE59载体,电转化至Ms;采用Western blot法对PPE59表达进行鉴定和亚细胞定位分析。分析Ms_Vec和Ms_PPE59在低酸(pH=3和pH=5)条件和表面活性压力十二烷基硫酸钠(SDS)条件的存活能力,以及其在巨噬细胞内存活率。ELISA检测Ms_Vec和Ms_PPE59感染巨噬细胞后,白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-12和肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-10分泌水平。结果PPE59蛋白定位于Ms细胞壁,可增强Ms的耐酸作用和抗SDS作用,有利于Ms在巨噬细胞内的存活;PPE59显著降低促炎细胞因子IL-1β、IL-6、IL-12和TNF-α的分泌,促进抑炎因子IL-10的分泌。结论PPE59能增强Ms对低酸和SDS压力条件下的存活能力,通过调控细胞因子分泌水平促进其在细胞内的存活。
关键词
免疫应答
结核分枝杆菌(Mtb)
耻垢分枝杆菌(Ms)
脯氨酸
-
脯氨酸
-
谷氨酸
-
59(
ppe
59)
Rv3429
生物学功能
Keywords
immune response
Mycobacterium tuberculosis(Mtb)
Mycobacterium smegmatis(Ms)
Pro
-
Pro
-
Glu
-
59(
ppe
59)
Rv3429
biological function
分类号
R392 [医药卫生]
R378.911 [医药卫生—免疫学]
R516 [医药卫生—基础医学]
R392.11
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
结核分枝杆菌PPE15蛋白的原核表达、鉴定及其兔多克隆抗体的制备
许涛
李敏英
王楚彤
常先友
钱中清
李柏青
汪洪涛
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022
2
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下载PDF
职称材料
2
结核分枝杆菌PPE59蛋白通过调控耻垢分枝杆菌感染巨噬细胞的细胞因子分泌促进其在宿主细胞的存活
王楚彤
郭方正
宋亚敏
魏婧
李敏英
汪洪涛
许涛
《细胞与分子免疫学杂志》
2025
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