大黄素增强SD大鼠脑基底动脉平滑肌细胞BK_(Ca)电流 被引量：9

1

作者 张传林 王蕊 +2 位作者 马克涛 司军强 李丽 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1244-1247,共4页

目的研究大黄素对SD大鼠脑基底动脉的影响。方法应用压力型小动脉测量仪观察给予大黄素前后脑基底动脉直径的变化;应用全细胞膜片钳技术观察大黄素对离体的SD大鼠脑基底动脉平滑肌细胞电流的调节作用。结果(1)大黄素舒张脑基底动脉(P<... 目的研究大黄素对SD大鼠脑基底动脉的影响。方法应用压力型小动脉测量仪观察给予大黄素前后脑基底动脉直径的变化;应用全细胞膜片钳技术观察大黄素对离体的SD大鼠脑基底动脉平滑肌细胞电流的调节作用。结果(1)大黄素舒张脑基底动脉(P<0.05);(2)大黄素呈电压依赖性增强脑基底动脉平滑肌细胞外向电流(P<0.05);(3)大黄素呈浓度依赖性增强脑基底动脉平滑肌细胞外向电流,10-7、10-6和10-5mol·L-1的大黄素分别增加脑基底动脉平滑肌细胞外向电流(+60mV)从(173±43)pA到(226±36)pA、(266±54)pA和(303±71)pA(P<0.05);(4)给予10-3mol·L-1的BK Ca通道阻断剂四乙胺(tetraethyl ammonium;TEA)不仅取消了大黄素对脑基底动脉平滑肌细胞外向电流的增强作用,而且使外向电流减小到(61.2±6.5)pA,比对照组电流减小了(0.65±0.06)倍(P<0.01)。结论大黄素通过增强BK Ca通道的开放促进钾离子外流从而舒张脑基底动脉血管。 展开更多

关键词 脑基底动脉 平滑肌细胞 大黄素 大电导钙激活钾 通道 膜片钳 钙离子

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大鼠脑基底动脉平滑肌细胞培养及功能鉴定 被引量：8

2

作者 丘钦英 周家国 +1 位作者 刘玉洁 关永源 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1531-1533,共3页

目的探讨大鼠脑基底动脉平滑肌细胞的培养方法,了解生长特性。方法用组织贴块法培养大鼠脑基底动脉平滑肌,用免疫细胞化学法鉴定细胞,用RF-5000荧光分光光度计观察细胞内Ca2+浓度的动态变化来检测其活性。结果培养5d后可见组织块周围有... 目的探讨大鼠脑基底动脉平滑肌细胞的培养方法,了解生长特性。方法用组织贴块法培养大鼠脑基底动脉平滑肌,用免疫细胞化学法鉴定细胞,用RF-5000荧光分光光度计观察细胞内Ca2+浓度的动态变化来检测其活性。结果培养5d后可见组织块周围有平滑肌细胞长出,2wk后可融合传代,经平滑肌特异性肌动蛋白α-actin鉴定,确定为平滑肌细胞。钙离子通道激动剂可诱导细胞Fura-2荧光比值(F340/F380)上升,细胞活性良好。结论组织贴块法是大鼠脑基底动脉平滑肌细胞培养简单、高效、经济的实验方法,为脑血管疾病发病机制的研究提供了理想的细胞模型。 展开更多

关键词 大鼠 脑基底动脉 平滑肌细胞 细胞培养

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miR-130a对大鼠脑基底动脉平滑肌细胞活力和凋亡的影响 被引量：5

3

作者 任应国 张保朝 +1 位作者 贾东佩 胡科 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期989-995,共7页

目的:探讨微小RNA(miR)-130a对大鼠脑基底动脉平滑肌细胞(basilar arterial smooth muscle cells,BASMCs)生物学行为的影响及可能的作用机制。方法:采用real-time PCR法检测大鼠BASMCs在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下miR-130a的表达水平。... 目的:探讨微小RNA(miR)-130a对大鼠脑基底动脉平滑肌细胞(basilar arterial smooth muscle cells,BASMCs)生物学行为的影响及可能的作用机制。方法:采用real-time PCR法检测大鼠BASMCs在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下miR-130a的表达水平。转染miR-130a inhibitor下调BASMCs中miR-130a的表达,采用CCK-8法和流式细胞术检测BASMCs活力、细胞周期及凋亡情况;Western blot检测细胞周期及凋亡相关调控因子细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、p21、p-Rb、Bcl-2和cleaved caspase-3/caspase-3的蛋白水平。Real-time PCR及Western blot检测检测生长阻滞特异性同源盒蛋白(Gax)的表达情况。结果:AngⅡ可促进BASMCs中miR-130a的表达,而抑制Gax的表达。miR-130a inhibitor可部分抑制AngⅡ增加BASMCs细胞活力的效应,并上调Gax的表达。此外,下调miR-130a后细胞早期凋亡率显著增加(P<0.05);同时细胞中cyclin D1、CDK2、Bcl-2和p-Rb的蛋白水平均显著降低,p21及cleaved caspase-3的蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论:沉默miR-130a可上调BASMCs中Gax的表达,进而影响细胞周期及凋亡相关因子的表达,从而抑制细胞活力,并促进其凋亡,提示miR-130a可作为高血压脑血管重构的一个潜在诊疗靶点。 展开更多

关键词 微小RNA-130a 基底动脉平滑肌细胞 细胞活力 细胞凋亡 生长阻滞特异性同源盒蛋白

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同型半胱氨酸通过Rho激酶信号通路促进大鼠脑基底动脉平滑肌细胞活力与迁移 被引量：5

4

作者 肖猛 任传忠 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1372-1378,共7页

目的:探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对大鼠脑基底动脉平滑肌细胞(basilar arterial smooth muscle cells,BASMCs)活力和迁移的作用及可能的分子机制。方法:分离培养大鼠BASMCs,给予不同浓度的Hcy刺激后,用CCK-8法初步测定细胞活... 目的:探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对大鼠脑基底动脉平滑肌细胞(basilar arterial smooth muscle cells,BASMCs)活力和迁移的作用及可能的分子机制。方法:分离培养大鼠BASMCs,给予不同浓度的Hcy刺激后,用CCK-8法初步测定细胞活力的变化,Western blot检测Rho激酶信号通路的活性。然后固定Hcy的浓度(1 mmol/L),并采用ROCK抑制剂Y-27632作为工具药对细胞进行处理,流式细胞术检测细胞的周期分布,划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移情况;检测细胞抗氧化酶超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的活性以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平反映细胞的氧化应激状态。结果:Hcy可浓度依赖性地提高BASMCs的活力,并上调细胞中GTP-RhoA和ROCK2的蛋白表达(P<0.05);同浓度的Hcy处理细胞后,48 h处理组的细胞活力显著高于24 h处理组(P<0.05)。Hcy处理组BASMCs中S期细胞的比例明显升高,G0/G1期细胞的比例显著降低(P<0.05);加入Y-27632预处理可显著抑制Hcy处理组BASMCs的G1/S期转换。划痕实验和Transwell的实验结果显示,Hcy处理组BASMCs的迁移率显著高于对照组;加入Y-27632预处理可抑制Hcy处理组BASMCs的迁移(P<0.05)。此外,Hcy可降低BASMCs中SOD和GSH-Px的活性,同时升高MDA的含量;相较Hcy处理组,加入Y-27632预处理后,细胞内SOD和GSH-Px的活性升高,MDA的含量降低(P<0.05)。结论:同型半胱氨酸可促进大鼠脑基底动脉平滑肌细胞的活力及迁移,其作用机制可能与激活Rho激酶信号通路并提高细胞内氧化应激的水平有关。 展开更多

关键词 同型半胱氨酸 脑基底动脉平滑肌细胞 细胞活力 细胞迁移 Rho激酶信号通路

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Cl^-通道阻断剂对5-HT和CPA引起的兔脑椎基底动脉平滑肌细胞Ca^(2+)内流的影响 被引量：1

5

作者 丁岩 关永源 +2 位作者 熊大志 贺华 丘钦英 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期83-89,共7页

目的　在培养的兔脑椎基底动脉平滑肌细胞上观察5 HT和CPA诱导的Ca2 + 内流的特性 ,电压依赖性Ca2 + 通道 (VDC)抑制药尼莫地平 ,非电压依赖性Ca2 + 通道抑制药SK&F963 65及Cl-通道阻断剂DIDS、NPPB对两种激动剂引起 [Ca2 + ]i 反... 目的　在培养的兔脑椎基底动脉平滑肌细胞上观察5 HT和CPA诱导的Ca2 + 内流的特性 ,电压依赖性Ca2 + 通道 (VDC)抑制药尼莫地平 ,非电压依赖性Ca2 + 通道抑制药SK&F963 65及Cl-通道阻断剂DIDS、NPPB对两种激动剂引起 [Ca2 + ]i 反应的影响 ,以探讨脑血管平滑肌细胞中 5 HT引起Ca2 + 内流的特性、Cl-通道与Ca2 + 内流的关系。方法　采用生物荧光双波长影像分析系统瞬即测定单细胞胞质[Ca2 + ]i 技术。结果　① 5 HT和CPA均能诱导平滑肌细胞[Ca2 + ]i 呈双相升高 ,并且 5 HT诱导的Ca2 + 释放是环匹阿尼酸 (CPA)敏感Ca2 + 池的一部分 ;②尼莫地平对 5 HT和CPA触发的Ca2 + 内流无明显影响 ,而SK&F963 65可阻止二者触发的Ca2 + 内流 ;③Cl-通道阻断剂DIDS、NPPB呈浓度依赖性抑制Ca2 + 内流 ,在SK&F963 65最大限度抑制Ca2 + 内流后 ,DIDS、NPPB可进一步抑制Ca2 + 内流 ;而Ca2 +内流被DIDS、NPPB分别最大抑制后 ,SK&F963 65也可进一步抑制Ca2 + 内流。结论　 5 HT引起的Ca2 + 内流是经SK&F963 65敏感的非VDC ,其中包含Ca2 + 释放引起的Ca2 + 内流 (CRAC)成分与非CRAC成分 ,并且这两部分Ca2 +内流均与DIDS。 展开更多

关键词 Cl^-通道阻断剂 脑椎基底动脉 平滑肌细胞 CA^2+通道 CL^-通道 5-HT CPA

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辣椒素抑制自发性高血压大鼠脑基底动脉平滑肌细胞的增殖和迁移

6

作者 唐雪纯 刘旭东 +6 位作者 高瑞娟 曹囡 张景荣 孔良靖元 马克涛 李丽 司军强 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期807-812,共6页

目的研究辣椒素(CAP)是否可以改善自发性高血压大鼠(SHR)脑基底动脉平滑肌细胞(BASMC)的增殖迁移。方法体外培养SHR及Wistar京都(WKY)大鼠原代BASMC,随机均分为对照组(WKY组)、SHR组、CAP处理的SHR组。通过CCK-8法选取CAP处理浓度;Trans... 目的研究辣椒素(CAP)是否可以改善自发性高血压大鼠(SHR)脑基底动脉平滑肌细胞(BASMC)的增殖迁移。方法体外培养SHR及Wistar京都(WKY)大鼠原代BASMC,随机均分为对照组(WKY组)、SHR组、CAP处理的SHR组。通过CCK-8法选取CAP处理浓度;Transwell^(TM)小室实验和划痕实验检测各组BASMC的迁移能力;免疫荧光细胞化学染色检测BASMC中的骨桥蛋白(OPN)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达和分布;Western blot法检测BASMC的OPN、PCNA蛋白水平。结果与WKY组相比,SHR组BASMC增殖和迁移能力增强,经CAP处理后,细胞增殖和迁移能力降低;OPN表达在BASMC胞质和胞核,PCNA主要表达在胞核,与WKY组相比,SHR组OPN、PCNA表达及蛋白水平增强,经CAP处理后,其OPN、PCNA表达及蛋白水平明显降低。结论CAP可降低SHR来源的BASMC的增殖和迁移。 展开更多

关键词 辣椒素(CAP) 细胞增殖 细胞迁移 脑基底动脉平滑肌细胞(basmc)

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ET-1对大鼠脑基底动脉平滑肌细胞骨架以及细胞内钙离子浓度的影响

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作者 牛子冉 方莲花 杜冠华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第B11期170-170,共1页

目的建立胶原酶消化法培养大鼠脑基底动脉平滑肌细胞的新方法,并探讨内皮素-1（endothelin-1,ET-1）对细胞骨架以及细胞内钙离子浓度的影响.方法采用胶原酶消化法培养大鼠脑基底动脉平滑肌,用免疫细胞化学法鉴定细胞.加入ET-1（10^-8mol... 目的建立胶原酶消化法培养大鼠脑基底动脉平滑肌细胞的新方法,并探讨内皮素-1（endothelin-1,ET-1）对细胞骨架以及细胞内钙离子浓度的影响.方法采用胶原酶消化法培养大鼠脑基底动脉平滑肌,用免疫细胞化学法鉴定细胞.加入ET-1（10^-8mol·L^-1）刺激后,通过细胞骨架的观察和细胞内钙离子浓度的动态变化探讨ET-1对细胞的影响.结果培养6d后可见脑基底动脉组织块周围有平滑肌细胞爬出,经平滑肌特异性肌动蛋白α-actin鉴定,鉴定为平滑肌细胞.ET-1刺激后细胞骨架致密,细胞内Ca2＋浓度增加.结论成功建立胶原酶法培养大鼠平滑肌细胞的新方法为脑血管疾病的发病机制和防治药物研究提供了理想的细胞模型.ET-1可能通过脑基底动脉平滑肌细胞骨架及细胞内钙离子浓度的变化,影响脑血管重构. 展开更多

关键词 脑基底动脉 平滑肌细胞 ET-1 细胞骨架 细胞内钙 脑血管疾病

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TMB-8对牛基底动脉平滑肌细胞增殖的作用 被引量：2

8

作者 王斌 张民英 肖继皋 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1998年第4期286-288,共3页

采用培养乳牛基底动脉平滑肌细胞（ＢＡＳＭＣ），观察了去甲肾上腺素（ＮＥ）和血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对细胞增殖的影响，以及８－（Ｎ，Ｎ－二乙胺）－ｎ－辛基－３，４，５－三甲氧基苯甲酸酯（ＴＭＢ－８）的作用，发现ＮＥ和Ａ... 采用培养乳牛基底动脉平滑肌细胞（ＢＡＳＭＣ），观察了去甲肾上腺素（ＮＥ）和血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对细胞增殖的影响，以及８－（Ｎ，Ｎ－二乙胺）－ｎ－辛基－３，４，５－三甲氧基苯甲酸酯（ＴＭＢ－８）的作用，发现ＮＥ和ＡｎｇⅡ能明显引起ＢＡＳＭＣ增殖。１０μｍｏｌ／ＬＮＥ和１μｍｏｌ／ＬＡｎｇⅡ可诱导最大增殖，增殖率分别为７７．８％和９７．９％，ＴＭＢ－８能浓度依赖性地抑制其作用，３０μｍｏｌ／ＬＴＭＢ－８的抑制率分别为４０．０％和５２．２％。 展开更多

关键词 钙拮抗剂 TMB-8 基底动脉 血管平滑肌 脑缺血

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Rock信号通路参与TNF-α刺激兔基底动脉平滑肌增殖 被引量：2

9

作者 安家印 周政 +3 位作者 刘俊 杨辉 雷雪 李正杨 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第18期1952-1956,共5页

目的探索Rock信号通路在肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)引起兔基底动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖中的作用。方法组织块法原代培养兔基底动脉VSMCs,TNF-α刺激VSMCs,Rho激酶(Rho kinase... 目的探索Rock信号通路在肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)引起兔基底动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖中的作用。方法组织块法原代培养兔基底动脉VSMCs,TNF-α刺激VSMCs,Rho激酶(Rho kinase,Rock)抑制剂Y-27632预处理,CCK-8法检测细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞周期,免疫细胞化学观察增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在VSMCs的定位及表达变化,Western blot法检测细胞PCNA表达量的变化。结果细胞培养24 h后,与阴性对照组比较,20 ng/mL TNF-α处理可以显著增加VSMCs的增殖率(P<0.01),PCNA蛋白表达显著增高(P<0.01),S期+G2/M期细胞比例明显增加(P<0.05);加入Y-27632预处理后,与20 ng/mL TNF-α处理组相比,VSMCs的增殖率受到显著抑制(P<0.01),PCNA蛋白表达明显减少(P<0.05),S期+G2/M期细胞比例明显减少(P<0.05)。结论 TNF-α可促进VSMCs增殖和细胞周期进程,Rock抑制剂可阻滞TNF-α对VSMCs的这一作用,Rock信号通路参与TNF-α诱导的VSMCs增殖和细胞周期进程加速。 展开更多

关键词 基底动脉 血管平滑肌细胞 RHO相关激酶类 细胞增殖 肿瘤坏死因子Α 兔

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尼莫地平对过氧化氢诱导猪脑基底动脉氧化应激损伤的保护作用 被引量：9

10

作者 蔡志春 黎敏 +4 位作者 李健哲 陈颇静 王晨静 吴建华 方云祥 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2007年第8期906-910,共5页

目的:探讨尼莫地平对过氧化氢(H2O2)诱导猪脑基底动脉损伤的保护作用。方法:采用去内皮离体血管环灌流的方法,建立H2O2损伤模型。比较正常对照组,H2O2(2×10-4mol/L)损伤组,维生素C(10-4mol/L)组,尼莫地平高、中、低剂量(5×10-... 目的:探讨尼莫地平对过氧化氢(H2O2)诱导猪脑基底动脉损伤的保护作用。方法:采用去内皮离体血管环灌流的方法,建立H2O2损伤模型。比较正常对照组,H2O2(2×10-4mol/L)损伤组,维生素C(10-4mol/L)组,尼莫地平高、中、低剂量(5×10-6、5×10-7、5×10-8mol/L)组血管环对KCl、苯肾上腺素的张力;检测各组血管组织匀浆中的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性及丙二醛(MDA)含量。结果:(1)H2O2损伤组与正常对照组比较,血管环对KCl、苯肾上腺素的收缩反应明显增加;尼莫地平高、中、低剂量组呈剂量依赖性抑制KCl、苯肾上腺素对血管环的收缩反应。(2)H2O2损伤组MDA含量升高,SOD、CAT、GSH-PX活性降低,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。尼莫地平高、中、低剂量均能降低组织中MDA含量,增强SOD、CAT、GSH-PX的活性,与H2O2损伤组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:钙通道阻断剂尼莫地平具有抗氧化应激作用,能预防H2O2对脑基底动脉血管的氧化损伤。 展开更多

关键词 尼莫地平 过氧化氢 基底动脉 氧自由基 血管平滑肌细胞

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消化法培养大鼠脑血管平滑肌细胞 被引量：7

11

作者 吕平 申海涛 +1 位作者 张浩 王永利 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期272-274,共3页

目的建立大鼠基底动脉平滑肌细胞培养的方法。方法取大鼠基底动脉,剪成约0.2mm的小段,用含胶原酶Ⅱ型(0.5g.L-1)、弹性酶(0.15g.L-1)、透明质酸酶Ⅳ-S型(0.5g.L-1)及脱氧核糖核酸酶Ⅰ型(0.1g.L-1)的消化液在37℃消化1h。而后用含20%FCS... 目的建立大鼠基底动脉平滑肌细胞培养的方法。方法取大鼠基底动脉,剪成约0.2mm的小段,用含胶原酶Ⅱ型(0.5g.L-1)、弹性酶(0.15g.L-1)、透明质酸酶Ⅳ-S型(0.5g.L-1)及脱氧核糖核酸酶Ⅰ型(0.1g.L-1)的消化液在37℃消化1h。而后用含20%FCS的DMEM/F12进行培养。结果原代培养3d后细胞可少量贴壁,1wk左右可传代,细胞传代成活率达97%。光镜和免疫细胞化学染色检测第4代细胞纯度为98%。结论与目前国内培养脑血管平滑肌细胞的方法相比,本方法操作简单,培养周期短,细胞纯度高。 展开更多

关键词 细胞培养 平滑肌细胞 基底动脉 大鼠

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