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重组人高密度脂蛋白B族Ⅰ型清道夫受体基因腺相关病毒血清型2/1杂合载体在HepG2肝细胞的表达 被引量：1
1
作者 张玉玲 伍卫 +1 位作者 周淑娴 雷娟 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期696-701,共6页
【目的】构建含绿色荧光蛋白(EGFP)重组人高密度脂蛋白B族I型清道夫受体(SR-BI)基因腺相关病毒(rAAV)2/1杂合载体,观察其在HepG2肝细胞的表达。【方法】以pCMV.SPORT6-SR-BI质粒为模板PCR扩增目的基因cDNA,将其克隆至pSNAV2.0-IRES-EGFP... 【目的】构建含绿色荧光蛋白(EGFP)重组人高密度脂蛋白B族I型清道夫受体(SR-BI)基因腺相关病毒(rAAV)2/1杂合载体,观察其在HepG2肝细胞的表达。【方法】以pCMV.SPORT6-SR-BI质粒为模板PCR扩增目的基因cDNA,将其克隆至pSNAV2.0-IRES-EGFP-LacZa载体中,经酶切及测序鉴定后,脂质体介导转染BHK21细胞,经G418筛选得到含SR-BI基因的BHK/SR-BI-IRES-EGFP载体细胞株,用携带rep2-cap1基因的辅助病毒(rHsv/r2cl)感染该细胞株。通过细胞孵育、裂解和病毒纯化,得到杂合载体rAAV2/1-SR-BI-IRES-EGFP病毒。免疫荧光显微镜检测绿色荧光表达,计算转染效率,Western Blot检测转染后SR-BI蛋白的表达。【结果】酶切鉴定表明pSNAV2.0-SR-BI-IRES-EGFP重组成功,基因测序显示装入pSNAV2.0-IRES-EGFP-LacZa质粒中的SR-BI基因正确;成功构建了rAAV2/1-SR-BI-IRES-EGFP病毒载体。转染HepG2肝细胞后免疫荧光显微镜检测最佳MOI值为1×105时,以此值转染HepG2肝细胞荧光高效表达;Western Blot检测未转染组及rAAV2/1-IRES-EGFP组HepG2肝细胞均有SR-BI蛋白表达,rAAV2/1-SR-BI-IRES-EGFP组SR-BI蛋白表达水平较rAAV2/1-IRES-EGFP组及未转染组显著增加。【结论】成功构建了rAAV2/1-SR-BI-IRES-EGFP杂合载体系统,转染后SR-BI蛋白在HepG2肝细胞高效表达,为SR-BI生理学作用机制及临床应用的深入研究奠定基础。 展开更多
关键词 高密度脂蛋白 B族I型清道夫受体 腺相关病毒 HepG2肝细胞
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H9N2 AIV灭活疫苗免疫SPF鸡攻毒后肺组织免疫相关基因表达变化研究
2
作者 李丽 蒋作仪 +4 位作者 李茵婧 常丽凤 辛震东 平继辉 苏娟 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期18-27,共10页
[目的]本试验旨在探究H9N2亚型禽流感病毒攻击对H9灭活疫苗免疫SPF鸡呼吸系统的影响。[方法]选用36只3周龄SPF鸡,随机分为对照组(Con)、攻毒组(Flu)、免疫后攻毒组(Vac+Flu)。以每只0.4 mL剂量免疫接种H9灭活疫苗,3周后以10~6 EID_(50)... [目的]本试验旨在探究H9N2亚型禽流感病毒攻击对H9灭活疫苗免疫SPF鸡呼吸系统的影响。[方法]选用36只3周龄SPF鸡,随机分为对照组(Con)、攻毒组(Flu)、免疫后攻毒组(Vac+Flu)。以每只0.4 mL剂量免疫接种H9灭活疫苗,3周后以10~6 EID_(50)的病毒量进行攻毒,采集拭子、血清、气管、肺组织等样品,通过血凝抑制(HI)试验、RT-PCR、荧光定量PCR(qPCR)等方法检测血清中HI抗体滴度、肺脏流感病毒M基因拷贝数以及免疫相关基因CD4、CD8、GATA3、T-bet、IL-4、IL-13、TNF-α、IFN-γ、Perforin、Granzyme、FasL、Fas等的表达量;并利用HE染色、免疫组织化学的方法观察气管、肺脏的病理变化及病毒特异性抗原NP蛋白的分布特征。[结果]HI试验结果显示,SPF鸡疫苗免疫后可产生较高的H9N2 AIV抗体效价。免疫保护试验和RT-PCR结果显示,SPF鸡疫苗免疫后攻毒仍能检测到机体排毒和流感病毒M基因在肺脏组织中的表达。HE染色和免疫组化结果显示,接种H9N2 AIV灭活疫苗后能够明显减轻SPF鸡气管和肺脏的病理损伤,降低气管、肺脏中的病毒载量。荧光定量PCR结果显示,接种H9N2 AIV灭活疫苗后能够提高SPF鸡肺脏中Th1、Th2细胞因子分泌水平,促进穿孔素/颗粒酶途径相关基因表达进而增强肺脏中细胞毒性反应。[结论]H9N2疫苗免疫鸡感染H9病毒后虽然仍存在排毒现象,但其抗病毒免疫系统活跃、其主要器官病毒载量降低,建议按照流感疫苗免疫程序进行免疫接种,提高对流感的防控水平。 展开更多
关键词 SPF鸡 H9N2亚型禽流感病毒 灭活疫苗 肺 免疫相关基因
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偏头痛模型大鼠降钙素基因相关肽、腺苷A1、A2α受体的表达及天舒胶囊对其影响 被引量：12
3
作者 鲁文先 陈金波 +3 位作者 董晓梦 苏毅鹏 苏鑫阳 李斌 《中国疼痛医学杂志》 CAS CSCD 2016年第4期265-271,共7页
目的:研究降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)、腺苷A1、A2α受体(A1R、A2αR)在偏头痛模型大鼠三叉神经节(trigeminal ganglion,TG)和三叉神经脊束尾核(spinal trigeminal nucleus caudalis,TNC)中的表达及天舒... 目的:研究降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)、腺苷A1、A2α受体(A1R、A2αR)在偏头痛模型大鼠三叉神经节(trigeminal ganglion,TG)和三叉神经脊束尾核(spinal trigeminal nucleus caudalis,TNC)中的表达及天舒胶囊对其表达的影响。方法:将40只大鼠随机分为空白对照组(BC组)、假手术组(SO组)、电刺激三叉神经节(electrical stimulation of the trigeminal ganglion,ESTG)组、天舒胶囊干预组(TC组)。采用REAL-TIME PCR、Western Blot技术检测TG、TNC中CGRP、A1R、A2αR的表达量的变化。结果:(1)电刺激三叉神经节对CGRP、A2αR、A1R表达的影响:ESTG组大鼠CGRP、A2αR的表达均高于空白对照组和假手术组,差异具有统计学意义(P<0.05),空白对照组和假手术组之间的差异没有统计学意义(P>0.05)。ESTG组大鼠腺苷A1R的表达低于空白对照组和假手术组,差异具有统计学意义(P<0.05),空白对照组和假手术组之间的差异没有统计学意义(P>0.05)。(2)天舒胶囊对CGRP、A2αR、A1R表达量的影响:天舒胶囊干预组大鼠TG、TNC中CGRP、A2αR蛋白表达量低于ESTG组,A1R蛋白表达量高于ESTG组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:CGRP、A2αR、A1R三种物质相互作用参与偏头痛痛觉信息的产生和传递过程,预防应用天舒胶囊可调节大鼠偏头痛发作时的相关活性物质,可能对偏头痛的发作起到一定保护作用。 展开更多
关键词 偏头痛 降钙素基因相关肽 腺苷A1受体 腺苷A2α受体 电刺激三叉神经节模型 天舒胶囊
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M型磷脂酶A2受体及其抗体在乙肝病毒相关性膜性肾病中的临床意义 被引量：6
4
作者 许向青 朱雪婧 +7 位作者 袁曙光 姜文玲 夏运成 刘虹 李军 孙林 彭佑铭 刘伏友 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1064-1068,共5页
目的:研究M型磷脂酶A2受体(phospholipase A2 receptor,PLA2R)在乙肝病毒相关性膜性肾病(hepatitis B virus-associated membranous nephropathy,HBV-MN)患者血液及肾组织中的表达情况,并探讨肾组织PLA2R阳性表达在乙型肝炎相关性肾小... 目的:研究M型磷脂酶A2受体(phospholipase A2 receptor,PLA2R)在乙肝病毒相关性膜性肾病(hepatitis B virus-associated membranous nephropathy,HBV-MN)患者血液及肾组织中的表达情况,并探讨肾组织PLA2R阳性表达在乙型肝炎相关性肾小球肾炎(hepatitis B virus associated glomerulone nephritis,HBV-GN)患者中的临床和病理特点。方法:选取经肾活检确诊的49例HBV-MN患者。检测血清抗PLA2R抗体以及肾组织PLA2R的表达,将患者分为肾组织PLA2R表达阳性组和阴性组,比较两组间临床指标、病理改变、血抗PLA2R抗体表达水平的差异。结果:17例患者存在肾组织PLA2R阳性表达,其中10例患者血清抗PLA2R抗体阳性。肾组织阳性组较阴性组24 h尿蛋白水平升高,血白蛋白水平下降,血清Hbs Ag阳性比例更高(70.5%),肾组织Hbs Ag表达比例更高(71%)。结论:肾组织PLA2R以及血清抗PLA2R抗体在HBV-MN患者中有一定表达,其表达可能与HBV-MN患者血清以及肾组织中Hbs Ag沉积有关。肾组织PLA2R阳性患者肾小球慢性损伤可能相对更重。 展开更多
关键词 乙肝病毒相关性膜性肾病 磷脂酶A2受体 M型磷脂酶A2受体抗体
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精神分裂症患者5-HT2A受体基因相关因素的研究 被引量：9
5
作者 罗星光 江开达 顾牛范 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期156-158,共3页
目的　分析汉族人 5 HT2A受体基因与精神分裂症易感性之间的关系以及影响患者 5 HT2A受体基因的相关因素。方法　 2 6 9例精神分裂症病人 ,310例正常对照 ,用聚合酶链式反应 (PCR)扩增及限制性片段长度多态性 (RFLPs)技术测定其 5 H... 目的　分析汉族人 5 HT2A受体基因与精神分裂症易感性之间的关系以及影响患者 5 HT2A受体基因的相关因素。方法　 2 6 9例精神分裂症病人 ,310例正常对照 ,用聚合酶链式反应 (PCR)扩增及限制性片段长度多态性 (RFLPs)技术测定其 5 HT2A受体基因型和等位基因。结果　发现含 5 HT2A受体基因的等位基因A2的精神分裂症患者平均发病年龄明显大于含等位基因A1的患者 ,但 5 HT2A受体基因与精神分裂症的易感性、患者的性别、家族史、症状严重度均无显著相关。结论　 5 HT2A受体基因的等位基因A2可明显推迟精神分裂症患者的发病年龄 ,但 5 HT2A受体基因不影响汉族人精神分裂症的易感性、患者的症状严重度 ,患者 5 HT2A受体基因的频率分布也不受患者的性别。 展开更多
关键词 精神分裂症 5-HT2A受体基因 相关因素
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肿瘤坏死因子受体2基因多态性与SLE易感性的相关性 被引量：3
6
作者 王小飞 钱绩虎 +2 位作者 鞠少卿 王惠民 陈晓栋 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期746-748,共3页
为探讨肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)第六外显子基因多态性与系统性红斑狼疮(SLE)易感的相关性,采用病例对照研究的方法,用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术(PCR-RFLP)检测50例SLE患者和117例健康对照人群的TNFR2第六外显子的基... 为探讨肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)第六外显子基因多态性与系统性红斑狼疮(SLE)易感的相关性,采用病例对照研究的方法,用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术(PCR-RFLP)检测50例SLE患者和117例健康对照人群的TNFR2第六外显子的基因型和等位基因,SLE患者组TNFR2第六外显子基因型196R/R、196M/R和等位基因196R的频率明显比对照组高,经χ2检验,其差异具有统计学意义。(两组基因型之间:χ2=6.23P=0.044;两组等位基因之间:χ2=6.39P=0.011)。结果表明TNFR2第六外显子基因多态性与SLE的易感性相关。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子受体2 基因多态性 易感性 相关性 系统性红斑狼疮
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猪伪狂犬病病毒受体nectin-2基因的克隆与分子特征 被引量：3
7
作者 杜伟国 耿玉静 +3 位作者 苏惠龙 胡京京 刘宇 张桂红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第9期52-56,共5页
为了进一步了解猪nectin-2基因的结构与功能,本研究采用生物信息学结合RT-PCR的方法从猪脑组织中克隆到了猪nectin-2基因,并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了比较分析。猪nectin-2基因的编码区含有1440个核苷酸,编码479个氨基酸... 为了进一步了解猪nectin-2基因的结构与功能,本研究采用生物信息学结合RT-PCR的方法从猪脑组织中克隆到了猪nectin-2基因,并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了比较分析。猪nectin-2基因的编码区含有1440个核苷酸,编码479个氨基酸,其中信号肽由32个氨基酸组成,胞外域由330个氨基酸组成,含有2个潜在的N-糖基化位点和6个半胱氨酸残基,跨膜区由23个氨基酸组成,胞浆区由94个氨基酸组成,猪nectin-2基因与犬、马、家鼠、人、恒河猴、牛、黑猩猩的nectin-2基因核苷酸序列同源性分别为85.4%、85.7%、78.6%、82.1%、82.1%、81.9%和82.1%;推导氨基酸序列的同源性分别为84.5%、83.0%、74.7%、75.7%、76.4%、78.4%和75.5%。本试验为进一步深入研究猪伪狂犬病病毒与宿主之间的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 受体 猪nectin-2基因 分子特征
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腺相关病毒介导心肌肌浆网钙离子ATP酶2a基因转导对慢性心力衰竭大鼠的短期治疗作用 被引量：3
8
作者 惠海鹏 李小鹰 +3 位作者 刘秀华 鲁晓春 孙胜 刘涛 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期485-488,共4页
目的研究腺相关病毒为载体的心肌肌浆网钙离子ATP酶2a(SERCA2a)基因转导对慢性心力衰竭(CHF)大鼠的短期治疗作用。方法将大鼠分为4个组:对照组,CHF组,CHF+eGFP组和CHF+SERCA2a组。采用腹主动脉缩窄术建立慢性心力衰竭大鼠模型,应用经腹... 目的研究腺相关病毒为载体的心肌肌浆网钙离子ATP酶2a(SERCA2a)基因转导对慢性心力衰竭(CHF)大鼠的短期治疗作用。方法将大鼠分为4个组:对照组,CHF组,CHF+eGFP组和CHF+SERCA2a组。采用腹主动脉缩窄术建立慢性心力衰竭大鼠模型,应用经腹心包腔内注射术分别将生理盐水、携带eGFP基因的重组腺相关病毒和携带SERCA2a基因的重组腺相关病毒导入CHF组、CHF+eGFP组和CHF+SERCA2a组大鼠心脏。于导入后10天检测各组大鼠的心脏收缩和舒张功能、SERCA2a蛋白表达水平和活性。结果慢性心力衰竭大鼠心脏内转导入SERCA2a基因10天后,CHF+eGFP组SERCA2a蛋白表达水平和活性较CHF组大鼠明显增加(SERCA2a蛋白表达增加80.7%,活性增加89.9%),但低于对照组大鼠蛋白表达水平(约为对照组的67.6%)和活性水平(约为对照组的77.7%);大鼠的心脏功能随着SERCA2a功能的增强而改善,左室收缩压峰值和左室内压最大下降速率已达到对照组水平,左室舒张末压力和左室内压最大上升速率虽未达到对照组水平,但较CHF组明显改善。结论CHF大鼠心脏SERCA2a蛋白表达水平及活性较对照大鼠明显下降;SERCA2a基因转导对慢性心力衰竭具有良好的短期治疗作用。 展开更多
关键词 慢性心力衰竭 肌浆网钙离子ATP酶2a 腺相关病毒 基因治疗
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世界卫生组织宣称对消除2型脊髓灰质炎取得重大胜利
9
作者 沈震 王明贵 《中国感染与化疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期493-493,共1页
2015年10月23日，卫生领域专家向世界卫生组织提议，应停止给儿童接种2型脊髓灰质炎疫苗。目前口服疫苗是预防脊髓灰质炎的主要措施，该类病毒株主要有l型、2型和3型。但自1999年以来，世界范围内未再检出2型脊髓灰质炎病毒株。另外，... 2015年10月23日，卫生领域专家向世界卫生组织提议，应停止给儿童接种2型脊髓灰质炎疫苗。目前口服疫苗是预防脊髓灰质炎的主要措施，该类病毒株主要有l型、2型和3型。但自1999年以来，世界范围内未再检出2型脊髓灰质炎病毒株。另外，口服疫苗接种者排出的病毒也可能感染未接受疫苗的人群。近期在疫苗低覆盖地区如老挝、乌克兰、马达加斯加及几内亚等地已出现多起与使用疫苗相关感染。 展开更多
关键词 脊髓灰质炎疫苗 世界卫生组织 2型 对消 口服疫苗 相关感染 马达加斯加 病毒株
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血管紧张素Ⅱ2型受体基因重组腺病毒简便快速的构建方法 被引量：3
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作者 唐兵 黎军 +1 位作者 何国祥 李德 《医学研究生学报》 CAS 2005年第5期402-403,407,F003,共4页
目的:利用细菌内同源重组法构建含血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)基因的重组腺病毒。方法:应用PCR技术从质粒PUHD AT2R中克隆出AT2R基因片段,定向克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrackCMV中,PmeⅠ酶切线性化后转化Adeasier1细胞,抽提经鉴定含有目... 目的:利用细菌内同源重组法构建含血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)基因的重组腺病毒。方法:应用PCR技术从质粒PUHD AT2R中克隆出AT2R基因片段,定向克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrackCMV中,PmeⅠ酶切线性化后转化Adeasier1细胞,抽提经鉴定含有目的基因的重组腺病毒质粒,PacⅠ酶切后用脂质体转染293细胞,包装成重组腺病毒Ad AT2R。用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中带有GFP报告基因,对病毒滴度进行监测。结果:PCR检测表明重组腺病毒已含有目的基因AT2R,滴度为1.5×1012pfu/ml。结论:细菌内同源重组法构建腺病毒比传统的细胞内同源重组法具有成功率高、方法简便、快捷和实验周期短的优点。AT2R基因重组腺病毒的成功构建为进一步实验研究奠定了基础。 展开更多
关键词 腺病毒 血管紧张素Ⅱ2型受体基因 同源重组 细菌
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磺脲类药物受体基因多态性和2型糖尿病相关性研究 被引量：3
11
作者 赵明 杜宏 +1 位作者 王燕燕 王坚 《医学研究生学报》 CAS 2004年第1期41-42,共2页
目的 :调查糖尿病 (DM)患者磺脲类药物受体基因 16外显子 - 3T→C多态性与 2型DM相关性。　方法 :应用限制性内切酶片段长度多态性技术 ,对相互间无一级亲属关系的 15 5例 2型DM患者及 132名正常人中磺脲类药物受体基因第 16外显子 3T... 目的 :调查糖尿病 (DM)患者磺脲类药物受体基因 16外显子 - 3T→C多态性与 2型DM相关性。　方法 :应用限制性内切酶片段长度多态性技术 ,对相互间无一级亲属关系的 15 5例 2型DM患者及 132名正常人中磺脲类药物受体基因第 16外显子 3T→C多态性进行遗传学相关性研究。　结果 :2型DM患者 16外显子 3T→C为“C”的等位基因及“CC”纯合子基因型频率比正常人显著增高 (P <0 .0 1)。　结论 :等位基因“C”所代表的单倍体在2型DM发病中遗传易感性上起重要作用。 展开更多
关键词 磺脲类药物受体 基因多态性 2型糖尿病 相关性 遗传易感性
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腺病毒介导血管紧张素Ⅱ2型受体基因转染对血管平滑肌细胞生物学行为的影响 被引量：2
12
作者 刘建平 何国祥 +2 位作者 景涛 王旭 史光鉴 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期441-444,共4页
为探讨血管紧张素Ⅱ (AngⅡ ) 2型受体 (AT2R)基因表达对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖、迁移和凋亡等生物学行为的影响 ,用同源重组方法构建带AT2R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体 (AdCMV AT2R) ,体外转染VSMC ,用流式细胞仪检测AT2R转染... 为探讨血管紧张素Ⅱ (AngⅡ ) 2型受体 (AT2R)基因表达对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖、迁移和凋亡等生物学行为的影响 ,用同源重组方法构建带AT2R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体 (AdCMV AT2R) ,体外转染VSMC ,用流式细胞仪检测AT2R转染表达率 ,RT PCR方法检测AT2RmRNA表达 ,VSMC增殖用MTT比色法和 5 溴脲苷 (BrdU)掺入法检测 ,迁移用改良Boyden趋化小室法检测 ,细胞凋亡用流式细胞仪、原位末端标记法检测。结果表明 ,AdCMV AT2R转染后 ,VSMC表达率为 89.5 1% ;AT2R峰值表达时 ,MTT吸光度和BrdU掺入量分别降低 6 1.4%和 5 1.6 % (P <0 .0 1) ,VSMC的跨膜迁移数减少 6 2 .2 % (P <0 .0 5 ) ,细胞凋亡增加约 3.2倍 ,bax表达增加 76 .3% (P <0 .0 5 )。提示AT2R表达可介导抑制VSMC的增殖和迁移 。 展开更多
关键词 血管紧张素Ⅱ2型受体 血管平滑肌细胞 细胞增殖 细胞迁移 细胞凋亡 基因转染 腺病毒
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β3肾上腺素受体基因Trp64Arg多态性与中国男性2型糖尿病患者合并高尿酸血症的相关性研究(英文) 被引量：2
13
作者 黄琼 张留福 +2 位作者 程雁 司力 魏伟 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2013年第3期307-312,共6页
目的:探讨中国人群男性2型糖尿病患者中β3肾上腺素受体基因Trp64Arg多态性与高尿酸血症的相关性。方法:196名高尿酸血症的2型糖尿病患者和196名正常尿酸水平的2型糖尿病患者进行基因分型。检测体重指数、腰臀比、收缩压、舒张压、血尿... 目的:探讨中国人群男性2型糖尿病患者中β3肾上腺素受体基因Trp64Arg多态性与高尿酸血症的相关性。方法:196名高尿酸血症的2型糖尿病患者和196名正常尿酸水平的2型糖尿病患者进行基因分型。检测体重指数、腰臀比、收缩压、舒张压、血尿酸、肌酐、尿素氮、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇脂、高密度脂蛋白胆固醇脂、空腹血糖和餐后血糖的水平。结果:高尿酸血症组中,携带不同β3肾上腺素受体Trp64Arg基因型的2型糖尿病患者其尿酸水平有统计学差异,且呈基因剂量效应[CC组(599.53±113.70)vsCT组(529.78±81.10)vs TT组(507.33±74.27),P<0.01]。在该研究中,Trp64Arg TC+CC基因型患者的血尿酸水平亦显著高于TT基因型组[(557.95±99.91)vs(503.47±69.40)μmol/L,P<0.01]。结论:β3肾上腺素受体基因Trp64Arg多态性与2型糖尿病合并高尿酸血症的具有相关性。 展开更多
关键词 Β3肾上腺素受体 基因多态性 高尿酸血症 尿酸 2型糖尿病 相关性分析
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Her2/neu基因重组腺相关病毒转染人外周血来源树突状细胞的免疫功能 被引量：2
14
作者 徐蕾 罗荣城 +2 位作者 尤长宣 李荣 郑航 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第9期1181-1184,共4页
目的Her2/neu基因重组腺相关病毒(rAAV-Her2/neu)转染人外周血树突状细胞(DC),并检测其免疫功能。方法采用Ficoll分离健康人外周血中的单个核细胞。将其分成两组,给其中一组加入病毒。应用含10%人AB血清的RPMI-1640培养基及粒细胞-巨噬... 目的Her2/neu基因重组腺相关病毒(rAAV-Her2/neu)转染人外周血树突状细胞(DC),并检测其免疫功能。方法采用Ficoll分离健康人外周血中的单个核细胞。将其分成两组,给其中一组加入病毒。应用含10%人AB血清的RPMI-1640培养基及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子,白细胞介-4、肿瘤坏死因子-α培养。第7天收获成熟DC。流式细胞仪检测DC表型。3H-TdR检测同种混合淋巴细胞反应。MTT法检测DC诱导T细胞的杀伤活性。结果加病毒组CD1a、CD86和CD83分别为:98.10%、99.42%、84.59%;无病毒组为:92.69%、98.07%、82.72%,组差别不明显。加病毒组CD40、CD80分别为:61.02%、97.61%;无病毒组为:36.19%、55.5%,加病毒组高于无病毒组。两组均能刺激T淋巴细胞增殖。加病毒组DC可诱导特异性杀伤,最高杀伤率(39.7±7.2)%。结论rAAV-Her2/neu转染的DC有更强的免疫功能。 展开更多
关键词 树突状细胞 腺相关病毒 免疫功能 HER2/NEU基因
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NT4-Apoptin-HA2-TAT融合基因重组腺相关病毒的构建及鉴定 被引量：1
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作者 王健生 张明鑫 +5 位作者 刘德纯 段小艺 周苏娜 张广健 杨广笑 王全颖 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期754-756,共3页
目的:构建编码融合基因NT4-Apoptin-HA2-TAT的重组腺相关病毒表达载体。方法:利用限制性内切酶切相应载体后将Apoptin和HA2-TAT连入pUC19/NT4质粒,再将融合基因NT4-Apoptin-HA2-TAT亚克隆至腺相关病毒的穿梭质粒内,与辅助质粒pAAV/Ad、... 目的:构建编码融合基因NT4-Apoptin-HA2-TAT的重组腺相关病毒表达载体。方法:利用限制性内切酶切相应载体后将Apoptin和HA2-TAT连入pUC19/NT4质粒,再将融合基因NT4-Apoptin-HA2-TAT亚克隆至腺相关病毒的穿梭质粒内,与辅助质粒pAAV/Ad、腺病毒质粒pFG140共同转染HEK-293细胞,通过同源重组获得NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体,收集病毒上清,Dot blot法测定其滴度。MTT比色法观察NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒表达载体,对HepG2细胞存活率的影响。结果:经酶切及测序证实克隆出NT4-Apoptin-HA2-TAT融合基因;得到高滴度的(3.14×1015pfu/L)重组腺相关病毒表达载体。NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒表达载体,对HepG2细胞有强烈的诱导凋亡作用,与对照组比较,处理组细胞的存活率明显降低。结论:通过分子克隆体外重组技术成功制备了NT4-Ap-optin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体,为下一步的Apoptin应用于基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 NT4-Apoptin-HA2-TAT 重组腺相关病毒 肿瘤 融合基因
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2011年中国北方H9N2亚型禽流感病毒分离株HA基因进化分析及受体结合性检测 被引量：1
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作者 屈亚锦 屈秋锦 +5 位作者 李超 刘月月 石迎 刘立涛 任庆海 刘思当 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期787-790,816,共5页
为了解近期中国北方禽源H9N2亚型禽流感病毒(AIV)流行规律及分子遗传进化特征,本实验对2011年在中国北方家禽中分离到的11株H9N2亚型AIV通过RT-PCR扩增病毒的HA基因片段,进行测序及遗传进化分析,并对这些病毒的受体结合性进行了检测。... 为了解近期中国北方禽源H9N2亚型禽流感病毒(AIV)流行规律及分子遗传进化特征,本实验对2011年在中国北方家禽中分离到的11株H9N2亚型AIV通过RT-PCR扩增病毒的HA基因片段,进行测序及遗传进化分析,并对这些病毒的受体结合性进行了检测。结果表明:11株H9N2亚型AIV分离株的HA基因在HA1和HA2的氨基酸裂解位点均为PSRSSR/GLF基序,符合低致病性病毒株氨基酸序列特征。多数病毒HA潜在糖基化位点为8个,所有分离株病毒的受体结合位点226位均为L,经红细胞受体结合性试验验证表明这些病毒均同时具有α-2,3和α-2,6受体结合特性,表明目前北方地区流行的H9N2亚型AIV具有感染哺乳动物的潜在威胁。本研究结果对加强H9N2病毒的分子流行病学监测具有重要意义。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 HA基因 进化分析 受体结合性
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携带全长人极低密度脂蛋白受体基因的重组腺相关病毒的构建 被引量：2
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作者 徐咏平 张木勋 袁刚 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期791-794,共4页
目的构建携带全长人极低密度脂蛋白受体(very low-density lipoprotein receptor,VLDLR)基因的重组腺相关病毒。方法通过设计含有特定酶切位点的引物,从人的骨骼肌中提取RNA,合成cDNA,扩增人VLDLR全长基因5′端约1 000 bp的DNA,并以含人... 目的构建携带全长人极低密度脂蛋白受体(very low-density lipoprotein receptor,VLDLR)基因的重组腺相关病毒。方法通过设计含有特定酶切位点的引物,从人的骨骼肌中提取RNA,合成cDNA,扩增人VLDLR全长基因5′端约1 000 bp的DNA,并以含人VLDLR基因片段的质粒为模板,合成人VLDLR全长基因近3′端约1 600 bp的DNA,通过粘端连接将2片段连接成全长VLDLR后,再将其连接到重组腺相关病毒包装系统的特定载体raav-UF1上,用293细胞作为包装细胞,配合重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)相关质粒:辅助质粒(phelp-er)和包装质粒(Pxx2),包装大量携带人VLDLR基因的重组腺相关病毒(raav-VLDLR-UF1),以含绿色荧光蛋白(greenfluorescence protein,GFP)基因的重组腺相关病毒(raav-GFP-UF1)为对照,测定raav-VLDLR-UF1及raav-GFP-UF1的滴度。结果raav-GFP-UF1和raav-VLDLR-UF1的滴度均为4×1011pfu/ml,达到实验要求。结论成功构建携带全长人VLDLR基因的重组腺相关病毒,有望为2型糖尿病高脂血症的基因治疗提供一种新的方法。 展开更多
关键词 人极低密度脂蛋白受体基因 人骨骼肌 重组腺相关病毒
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脂质体介导含IL-2及IFN-γ cDNA腺相关病毒质粒的转基因及抗肿瘤作用 被引量：1
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作者 张景迎 陈诗书 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 2000年第2期244-248,共5页
h IL- 2基因和 m IFN- γ基因经 IRES连接后克隆入腺相关病毒质粒表达载体 p AC中 ,构建得双基因质粒表达载体 p AC- FRI.体外经阳离子脂质体 Dosper介导转染小鼠肝癌细胞 MM45T.Li,Northern印迹及生物活性检测分别从 RNA水平和蛋白质... h IL- 2基因和 m IFN- γ基因经 IRES连接后克隆入腺相关病毒质粒表达载体 p AC中 ,构建得双基因质粒表达载体 p AC- FRI.体外经阳离子脂质体 Dosper介导转染小鼠肝癌细胞 MM45T.Li,Northern印迹及生物活性检测分别从 RNA水平和蛋白质水平证明了 2个基因的表达 .直接瘤内注射 Dosper- DNA复合物后 ,与对照组 ( Lac Z)相比 ,双基因组及 IL- 2或 IFN-γ单基因组均产生了较明显的抗瘤作用 ,并诱发了较高的特异 CTL活性 . 展开更多
关键词 IL-2 IFN-Γ 腺相关病毒 脂质体 肿瘤 基因治疗
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Her2/neu基因重组腺相关病毒转染人外周血树突状细胞的免疫功能
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作者 徐蕾 罗荣城 +2 位作者 白中红 许软成 王方聚 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1893-1895,1901,共4页
目的Her2/neu基因重组腺相关病毒(rAAV-Her2/neu)转染人外周血树突状细胞(dendriticcell,DC),并检测其免疫功能。方法检测乳腺癌细胞MCF7的HLA基因分型。采用与乳腺癌细胞株SK-BR-3、MCF7的HLA基因分型一致的健康人外周血,Ficoll分离取... 目的Her2/neu基因重组腺相关病毒(rAAV-Her2/neu)转染人外周血树突状细胞(dendriticcell,DC),并检测其免疫功能。方法检测乳腺癌细胞MCF7的HLA基因分型。采用与乳腺癌细胞株SK-BR-3、MCF7的HLA基因分型一致的健康人外周血,Ficoll分离取得单个核细胞,各分两组,分别加入病毒和不加病毒。应用含10%人AB血清的RPMI-1640培养基及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF),白细胞介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)培养。第7天收获成熟DC。流式细胞仪检测DC表型。MTT法检测DC诱导T细胞的杀伤活性,此步骤重复4次取平均值。结果加病毒组CD1a、CD86和CD83分别为:98.10%、99.42%、84.59%;无病毒组为:92.69%、98.07%、82.72%,组间差别不明显。加病毒组CD40、CD80分别为:61.02%、97.61%;无病毒组为:36.19%、55.5%,加病毒组高于无病毒组。两组均能刺激T淋巴细胞增殖。加病毒组DC可诱导特异性杀伤,最高杀伤率(39.7±7.2)%。结论rAAV-Her2/neu转染的DC有更强的免疫功能。 展开更多
关键词 树突状细胞 腺相关病毒 免疫功能 HER2/NEU基因
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2型腺相关病毒转导人胎肝造血细胞及其介导的β珠蛋白基因的表达(英文)
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作者 孙小娟 田晶 谭孟群 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第5期525-532,共8页
β地中海贫血是一种因β珠蛋白基因缺陷导致的遗传性贫血性疾病,基因治疗是唯一有望治愈该病的方法.2型腺相关病毒(adeno-associated virustype2,AAV2)是一种非致病性病毒,作为一种基因治疗载体,其应用潜力日益受到关注.目前还未见AAV2... β地中海贫血是一种因β珠蛋白基因缺陷导致的遗传性贫血性疾病,基因治疗是唯一有望治愈该病的方法.2型腺相关病毒(adeno-associated virustype2,AAV2)是一种非致病性病毒,作为一种基因治疗载体,其应用潜力日益受到关注.目前还未见AAV2转导人早期胎肝造血细胞及其介导β珠蛋白基因在动物体内表达的实验报道.有研究表明,AAV2转导人造血干细胞的效率,因各实验室包装和纯化rAAV2的方法不同而存在差异,其中辅助病毒的污染被认为是一重要原因.制备了无辅助病毒污染的rAAV2,经体外检测其滴度,纯度及功能后,再转导人早期胎肝造血细胞,将被转导的胎肝造血细胞移植入受亚致死量剂量照射的8只BALB/C裸鼠体内,检测rAAV2介导的β珠蛋白基因在裸鼠体内的表达.结果显示:制备的无辅助病毒污染的rAAV2具有较高的滴度、纯度,并能够在体外介导β基因的表达;在8只受试BALB/C裸鼠中,RT-PCR在2只BALB/C裸鼠骨髓中检测到β珠蛋白基因的表达.提示,rAAV2能够转导人早期胎肝细胞并介导β珠蛋白基因的表达,但同时也存在表达量较低的缺点,应用于β地中海贫血的基因治疗还需要对AAV2生物学特性做深入的研究. 展开更多
关键词 2型腺相关病毒 β珠蛋白基因 胎肝造血细胞 表达
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