-
题名兔脊髓微血管内皮细胞的体外培养及鉴定
- 1
-
-
作者
李柏霖
池茗
张帆
唐元瑜
-
机构
福建中医药大学中医学院
福建中医药大学中西医结合学院
福建中医药大学针灸推拿学院
-
出处
《中国脊柱脊髓杂志》
北大核心
2025年第5期516-521,共6页
-
基金
国家自然科学基金资助项目(编号:81072714)
福建省自然科学基金资助项目(编号:2017J01545)。
-
文摘
目的:建立一种高效的兔原代脊髓微血管内皮细胞(spinal cord microvascular endothelial cells,SCMECs)的体外分离培养方法。方法:选取2周龄日本大耳白兔15只,雌雄不限。在无菌条件下剪开背部皮肤肌肉层,充分暴露脊柱,沿其纵轴方向剪开椎管,获得脊髓组织。剪碎脊髓,用牛血清白蛋白密度梯度离心去髓鞘杂质、筛网过滤获得脊髓微血管段。采用酶促消化法,予0.1%Ⅱ型胶原酶消化微血管段20min后,将其接种于培养皿中,并置于CO_(2)培养箱内静止培养72h。上述操作每次取5只,重复3次,以第3次培养的目的细胞为观察、鉴定对象。通过倒置相差显微镜观察目的细胞生长情况及其形态特征、免疫细胞化学染色法检测细胞第Ⅷ因子相关抗原表达情况,鉴定所培养的目的细胞。结果:接种后的脊髓微血管段镜下呈短棍样或分支状;微血管段培养24h后有短梭形细胞从其周围迁移爬出,呈“出芽式”生长;48h后“岛屿状”的细胞集落形成,增殖迅速;72h后细胞铺满皿底,呈典型的单层、“铺路石样”、镶嵌式排列生长。免疫细胞化学染色显示,99%以上的细胞胞质呈现棕红色,Ⅷ因子相关抗原表达为阳性,苏木素衬染胞核显示为蓝色。结论:酶促消化法可以成功分离培养出活性好、纯度高的日本大耳白兔脊髓微血管内皮细胞。
-
关键词
脊髓微血管内皮细胞
酶促消化法
Ⅷ因子相关抗原
免疫细胞化学染色法
日本大耳白兔
-
Keywords
Microvesselsendelial cells of spinal cord
Enzymatic digestion method
FactorⅧrelated antigen
Immunocytochemistry
Japanese large ear white rabbit
-
分类号
R-332
[医药卫生]
-
-
题名原代家兔脊髓微血管内皮细胞培养方法的建立
- 2
-
-
作者
马华根
池茗
林芷伊
唐元瑜
丛伟红
-
机构
中国中医科学院西苑医院心血管病实验室
福建中医药大学中西医结合学院
福建中医药大学中医学院中医基础理论教研室
-
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
北大核心
2025年第7期1062-1067,共6页
-
基金
中国中医科学院西苑医院能力提升项目(No.XYZX0303-02)
中医药传承与创新“百千万”人才项目(第四批全国西医学习中医优秀人才研修项目)(No.国中医药人教发[2019]13号)和国家自然科学基金(No.81072714)资助。
-
文摘
本研究旨在体外分离培养出原代家兔脊髓微血管内皮细胞,为脊髓损伤研究提供实用的受试细胞源。无菌提取1月龄家兔脊髓组织,依次经剪碎、牛血清白蛋白密度梯度离心、筛网过滤、Ⅱ型胶原酶消化获得纯净的脊髓微血管段,将其与适量M199完全培养基混匀后接种于培养皿中进行原代培养;期间持续观察记录细胞的生长状况,并采用免疫组化检测其Ⅷ因子相关抗原表达情况。结果显示:脊髓微血管段接种24 h后,有少量内皮样细胞爬出;36~60 h细胞集落逐渐扩大并相互融合;72 h后细胞铺满皿底,呈“鹅卵石样”单层贴壁生长。免疫组化检测Ⅷ因子相关抗原,99%以上的细胞胞质染成棕红色,为阳性表达。上述结果表明,本研究成功建立了一种便捷、稳定的原代家兔脊髓微血管内皮细胞培养方法。
-
关键词
脊髓微血管内皮细胞
原代培养
Ⅷ因子相关抗原
家兔
脊髓损伤
-
Keywords
spinal cord microvascular endothelial cells(SCMECs)
primary culture
factorⅧ-related antigen
rabbit
spinal cord injury
-
分类号
Q4-33
[生物学—生理学]
-
-
题名大鼠原代脊髓微血管内皮细胞的体外分离培养及鉴定
- 3
-
-
作者
张帆
李柏霖
刘海琴
唐元瑜
-
机构
福建中医药大学针灸学院
福建中医药大学中医学院
海军军医大学第二附属医院上海长征医院
-
出处
《神经解剖学杂志》
CAS
CSCD
2023年第5期563-567,共5页
-
基金
国家自然科学基金(81072714)
福建省自然科学基金(2017J01545)。
-
文摘
目的:建立一种简单高效的大鼠原代脊髓微血管内皮细胞培养方法。方法:分离大鼠脊髓组织,经剪碎、细胞筛网过滤、Ⅱ型胶原酶消化后接种培养。通过细胞形态学观察、FⅧRag免疫细胞化学染色鉴定所培养的目的细胞。结果:接种的脊髓微血管段呈“短棍样”,培养24 h后有少量短梭形细胞从血管段周围迁移爬出,48 h后逐渐形成“岛屿状”的细胞集落,72 h后细胞铺满皿底,呈典型的单层、“鹅卵石样”、镶嵌式排列生长;细胞FⅧRag免疫细胞化学染色显示细胞质呈棕红色,表达为阳性。结论:该方法可成功分离培养出活性好、纯度高的大鼠原代脊髓微血管内皮细胞。
-
关键词
脊髓微血管内皮细胞
原代培养
第Ⅷ因子相关抗原
免疫细胞化学染色
大鼠
-
Keywords
spinal cord microvascular endothelial cells(SCMECs)
primary culture
factor VIII related antigen(FⅧRag)
immunocytochemistry staining
rat
-
分类号
R-33
[医药卫生]
-
