葛根素对脉络膜血管内皮细胞增殖的影响 被引量：4

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作者 吴宁玲 吴沂旎 +1 位作者 庄曾渊 夏彧 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期933-935,共3页

目的:观察不同浓度葛根素(Puerarin,Pur)对体外培养脉络膜血管内皮细胞(Choroidal vascular endothelial cells,CVECs)增殖的影响。方法:取第3代人CVECs用于实验。实验组中加入含不同浓度的Pur培养液,细胞对照组加入等量空白培养液。24 ... 目的:观察不同浓度葛根素(Puerarin,Pur)对体外培养脉络膜血管内皮细胞(Choroidal vascular endothelial cells,CVECs)增殖的影响。方法:取第3代人CVECs用于实验。实验组中加入含不同浓度的Pur培养液,细胞对照组加入等量空白培养液。24 h及48 h后采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测血管内皮细胞的增殖情况。结果:与细胞对照组比较,0.05、0.50、5.00μg/ml和50μg/ml Pur组作用24 h及48 h后CVECs A值均增加(P<0.01)。结论:Pur对体外培养的CVECs有明显的促进增殖作用,其作用与Pur的剂量有关。 展开更多

关键词 葛根素 脉络膜血管内皮细胞 增殖

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脉络膜微血管内皮细胞的培养及相关研究 被引量：2

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作者 赵炜 王雨生 惠延年 《眼科新进展》 CAS 2004年第3期227-230,共4页

脉络膜新生血管与眼部多种疾病有关 ,而脉络膜微血管内皮细胞是研究脉络膜新生血管的重要工具。目前已有数种脉络膜微血管内皮细胞体外培养体系 。

关键词 细胞培养 脉络膜微血管内皮细胞 脉络膜新生血管

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热休克蛋白B6中和性抗体对脉络膜血管内皮细胞管腔形成的影响及其机制

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作者 陈惠康 张济明 +4 位作者 李龙标 钱益勇 刘高勤 罗宝根 费梅 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1031-1036,共6页

背景血管内皮细胞的增生和迁移是血管发生的主要环节。新近的研究发现，热休克蛋白B6（HspB6）可促进多种与血管新生相关因子的分泌，导致病理状态下新生血管的发生，研究HspB6中和性抗体对人脉络膜血管内皮细胞增生、迁移和管腔形成能... 背景血管内皮细胞的增生和迁移是血管发生的主要环节。新近的研究发现，热休克蛋白B6（HspB6）可促进多种与血管新生相关因子的分泌，导致病理状态下新生血管的发生，研究HspB6中和性抗体对人脉络膜血管内皮细胞增生、迁移和管腔形成能力的影响对于脉络膜新生血管相关疾病的靶向治疗具有重要意义。目的探讨HspB6中和性抗体对人脉络膜血管内皮细胞管腔形成能力的影响及其机制。方法对人脉络膜血管内皮细胞株进行培养和传代，取对数生长期细胞用于实验。应用逆转录PCR（RT—PCR）和流式细胞术检测HspB6mRNA及其蛋白在人脉络膜血管内皮细胞中的表达。将基质胶铺于96孔板中，凝固后加入细胞悬液，细胞密度为2×10^4个／孔，将不同质量浓度（100μg／L、500μg／L）HspB6中和性抗体分别加入培养孔，未加入HspB6中和性抗体的细胞作为对照组（0μg／LHspB6中和性抗体组），每组设3个复孔。细胞孵育12h后，采用体外三维成型法检测各组完整管腔形成的数量，以评价HspB6中和性抗体对人脉络膜血管内皮细胞的管腔形成能力。96孔板培养人脉络膜血管内皮细胞，培养液中加入不同质量浓度（0、50、100、500μg/L）HspB6中和性抗体孵育24h，然后采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测细胞的增生值。采用Transwell小室法检测HspB6中和性抗体作用24h后各组穿过小室膜的“贴壁”细胞数目，以评估人脉络膜内皮细胞的增生和迁移情况。收集HspB6中和性抗体干预后的人脉络膜血管内皮细胞，流式细胞术检测HspB6中和性抗体作用后各组人脉络膜血管内皮细胞的凋亡率。结果人脉络膜血管内皮细胞在基因和蛋白水平均可表达HspB6分子。0、100、500μg／LHspB6中和性抗体组管腔形成数目分别为（67．25±5．75）、（60．39±6．41）和（39．76±10．73）个／视野，总体比较差异有统计学意义（F=10．210，P=0．012），其中500μg／LHspB6中和性抗体组管腔形成数目明显少于0μg／LHspB6中和性抗体组，差异有统计学意义（P=0．005）。随着HspB6中和性抗体质量浓度的增加和作用时间的延长，其对细胞增生和迁移的抑制率均明显增加，差异均有统计学意义（F质量浓度=7．485，P=0．002；F时间=16．684，P=0．001）。Transwell小室法检测显示，0、50、100、500μg／LHspB6中和性抗体组细胞迁移数目分别为（14．0±2．5）、（11．1±0．8）、（6．6±0．1）、（6．7±0．2）个，其中100μg／L、500μg／LHspB6中和性抗体干预24h后细胞迁移数目较0μg／LHspB6中和性抗体组明显减少，差异均有统计学意义（均P=0．000）。流式细胞术检测结果发现，HspB6中和性抗体组人脉络膜血管内皮细胞的凋亡率为（22．73±2．53）％，对照组为（13．33±2．08）％，差异有统计学意义（t=4．967，P=0．008）。结论HspB6中和性抗体对脉络膜血管内皮细胞的管腔形成有抑制作用，可能通过抑制血管内皮细胞的增生、迁移以及促进细胞的凋亡等途径发挥效应。 展开更多

关键词 热休克蛋白 B6 中和性抗体 脉络膜血管内皮细胞 新生血管 迁移 凋亡

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牛脉络膜微血管内皮细胞纯化和体外培养的改良方法

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作者 赵炜 王雨生 +1 位作者 朱洁 惠延年 《眼科新进展》 CAS 2008年第3期161-165,共5页

目的建立快速、简便地培养脉络膜微血管内皮细胞的方法,为脉络膜新生血管疾病的研究提供细胞模型。方法显微分离牛脉络膜微血管,采用1g·L-1胶原酶一步法消化,并采用免疫磁珠分选脉络膜微血管内皮细胞,使用内皮细胞培养基进行原代... 目的建立快速、简便地培养脉络膜微血管内皮细胞的方法,为脉络膜新生血管疾病的研究提供细胞模型。方法显微分离牛脉络膜微血管,采用1g·L-1胶原酶一步法消化,并采用免疫磁珠分选脉络膜微血管内皮细胞,使用内皮细胞培养基进行原代培养。利用光学和电子显微镜进行形态学观察,利用Von Willebrand因子免疫荧光染色及Dil-Ac-LDL吞噬实验进行细胞学鉴定,利用管腔形成实验观察内皮细胞形成管腔能力。结果采用本研究改良的方法可以获得纯度高达95%的脉络膜微血管内皮细胞,外观呈细长形,融合后呈典型铺路石样外观。电子显微镜观察可见胞浆内靠近核膜外的Weibel-Palade小体(棒状小体);免疫荧光显示Von Willebrand因子表达阳性,Dil-Ac-LDL吞噬实验阳性;在凝胶中可以形成明显管腔结构。结论本研究改良的方法成功地分离并纯化了牛脉络膜微血管内皮细胞,可在短期内快速简便地获得足够数量的内皮细胞。 展开更多

关键词 脉络膜微血管内皮细胞 牛 细胞培养

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Chemerin对恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞血管形成的影响及其机制研究

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作者 朱红军 赵萌 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2021年第10期939-942,共4页

目的探究Chemerin对恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞RF/6A血管形成的影响及其可能作用机制。方法RF/6A细胞随机分为3组,其中CO组正常培养RF/6A细胞24 h;CH组RF/6A细胞与10μg·L^(-1) Chemerin混合培养24 h;CN组在CH组基础上+200μmol&... 目的探究Chemerin对恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞RF/6A血管形成的影响及其可能作用机制。方法RF/6A细胞随机分为3组,其中CO组正常培养RF/6A细胞24 h;CH组RF/6A细胞与10μg·L^(-1) Chemerin混合培养24 h;CN组在CH组基础上+200μmol·L^(-1)N-乙酰半胱氨酸混合培养24 h。通过荧光探针-二氢乙啶(DHE)法、MTT法、细胞划痕实验、基质胶(Matrigel)法、Western blot等检测CO组、CH组、CN组RF/6A细胞活性氧(ROS)表达水平、增殖情况、迁移能力、管腔形成、p38MAPK蛋白表达的差异。结果CH组RF/6A细胞中ROS表达水平、细胞增殖数量均显著高于CO组、CH组(均为P<0.05)。CO组、CH组、CN组RF/6A细胞迁移面积(像素)分别为31268±1397、56489±2653、39684±1864,细胞管腔形成数量分别为(1.06±1.12)个、(6.04±2.24)个、(3.08±3.67)个,3组间细胞迁移面积、管腔形成数量比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Western blot检测结果显示,CH组RF/6A细胞中p38MAPK蛋白相对表达量显著高于CO组、CN组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论Chemerin对RF/6A细胞血管形成有促进作用,其机制与ROS介导的MAPK通路激活有关。 展开更多

关键词 CHEMERIN 活性氧 恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞 血管形成

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加减驻景方含药血清对缺氧状态下大鼠脉络膜血管内皮细胞增生的抑制作用 被引量：3

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作者 刘彦江 亢泽峰 +1 位作者 邢凯 刘健 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1065-1071,共7页

背景黄斑区脉络膜新生血管（CNV）是致盲率较高的眼病之一，以往的主要治疗方法是光动力学疗法和玻璃体腔抗血管内皮生长因子（VEGF）药物注射，但均存在一定的不良反应。研究认为，加减驻景方的应用对相关病变有治疗效果。目的探讨加... 背景黄斑区脉络膜新生血管（CNV）是致盲率较高的眼病之一，以往的主要治疗方法是光动力学疗法和玻璃体腔抗血管内皮生长因子（VEGF）药物注射，但均存在一定的不良反应。研究认为，加减驻景方的应用对相关病变有治疗效果。目的探讨加减驻景方含药血清对缺氧状态下大鼠脉络膜血管内皮细胞（RCVECs）增生的影响。方法10只SD大鼠给予0．525g／ml加减驻景方药液20ml／kg灌胃3d，于末次给药后2h无菌条件下采集腹主动脉血，制备加减驻景方含药血清。将培养的RCVECs分为4个组，空白对照组细胞用常规培养液进行培养，氯化钴组在培养液中添加100μmol／L氯化钴100μl以制备细胞缺氧模型，空白血清＋氯化钴组在缺氧细胞培养液中添加体积分数20％空白血清，含药血清＋氯化钻组在缺氧细胞培养液中添加体积分数20％含药血清。细胞培养后24h采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组细胞的增生情况；采用逆转录PCR和Western blot技术检测各组细胞中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因和蛋白的相对表达量。结果培养的RCVECs生长良好，呈梭形。100μmol／L氯化钴作用后成功建立了缺氧细胞模型。MTT法检测显示，空白对照组、氯化钴组、含药血清＋氯化钴组和空白血清＋氯化钴组吸光度（A）值分别为0．659±0．051、0．757±0．553、0．683±0．037和0．731±0．038，其中氯化钴组A值明显高于空白对照组和含药血清＋氯化钴组，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。空白对照组、氯化钴组、含药血清＋氯化钴组和空白血清＋氯化钻组细胞中HIF-1α mRNA和VEGF mRNA及其蛋白的相对表达量总体比较，差异均有统计学意义（HIF-1α mRNA：F=3．100，P〈0．05；VEGF mRNA：F=3．420，P〈0．05；HIF-1α蛋白：F=470．600，P=0．000；VEGF蛋白：F=146．700，P=0．000），其中氯化钴组细胞中HIF-1α mRNA、VEGFmRNA及其蛋白的相对表达量均明显高于空白对照组和含药血清＋氯化钴组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论加减驻景方含药血清可能通过抑制RCVECs分泌HIF-1α和VEGF的机制而抑制缺氧状态下RCVECs的增生。 展开更多

关键词 缺氧/化学诱导 脉络膜血管内皮细胞 中草药 SD大鼠 含药血清 加减驻景方 细胞培养

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miR-338-3p/TCF4对脉络膜微血管内皮细胞增生及凋亡的影响 被引量：3

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作者 李建成 卜战云 潘俊辉 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期639-645,共7页

目的探讨微小RNA-338-3p(miR-338-3p)对脉络膜微血管内皮细胞增生和凋亡的影响及其调控机制。方法体外培养人脉络膜微血管内皮细胞,将培养的细胞分为血管内皮生长因子(VEGF)组和正常对照组,正常对照组细胞常规培养,VEGF组细胞应用VEGF处... 目的探讨微小RNA-338-3p(miR-338-3p)对脉络膜微血管内皮细胞增生和凋亡的影响及其调控机制。方法体外培养人脉络膜微血管内皮细胞,将培养的细胞分为血管内皮生长因子(VEGF)组和正常对照组,正常对照组细胞常规培养,VEGF组细胞应用VEGF处理24 h;将VEGF组培养的细胞分为4个亚组,分别将阴性对照(miR-NC)、miR-338-3p拟似物、miR-338-3p拟似物+pcDNA、miR-338-3p拟似物+pcDNA-TCF4转染至脉络膜微血管内皮细胞后用VEGF处理24 h。采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测细胞中miR-338-3p和TCF4相对表达量;采用MTT法检测细胞增生率以评估细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;行双荧光素酶报告实验验证miR-338-3p与TCF4的靶向关系;采用Western blot法检测细胞中增生标记蛋白细胞增生核抗原-67(Ki-67)、增生细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(bax)、B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)蛋白相对表达量。结果与正常对照组比较,VEGF组细胞中miR-338-3p mRNA表达水平显著降低,TCF4 mRNA表达水平显著升高,细胞增生率显著升高,细胞凋亡率显著降低,细胞中Ki-67、PCNA、bcl-2蛋白表达水平显著升高,bax蛋白水平显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);与VEGF+miR-NC组比较,VEGF+miR-338-3p组细胞增生率显著降低,细胞凋亡率显著升高,细胞中Ki-67、PCNA、bcl-2蛋白表达水平显著降低,bax蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-338-3p可靶向结合TCF4;与VEGF+miR-338-3p+pcDNA组比较,VEGF+miR-338-3p+pcDNA-TCF4组细胞增生率显著升高[(56.48±13.20)%vs.(96.24±16.24)%],细胞凋亡率显著降低[(30.59±3.57)%vs.(12.36±1.29)%],细胞中Ki-67、PCNA、bcl-2蛋白表达水平显著升高(0.41±0.11 vs.0.96±0.19;0.44±0.10 vs.0.97±0.20;0.55±0.12 vs.0.98±0.15),bax蛋白表达水平显著降低(0.87±0.13 vs.0.42±0.11),差异均有统计学意义(t=5.700、14.408、7.516、7.111、6.715、7.927,均P<0.01)。结论miR-338-3p过表达可负向调控TCF4在细胞中的表达量,从而抑制脉络膜微血管内皮细胞的增生及诱导细胞凋亡。 展开更多

关键词 miR-338-3p T细胞生长因子4 脉络膜微血管内皮细胞 增生 凋亡

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腺病毒介导的Slit2及Slit2 ShRNA转染缺氧诱导的人RPE细胞对人脉络膜微血管内皮细胞增殖的影响

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作者 汤艳玲 周希瑗 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1590-1593,共4页

目的:观察腺病毒介导的Slit2及Slit2 ShRNA转染缺氧诱导的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial cells,RPE)细胞对人脉络膜微血管内皮细胞(human choroidal microvascular endothelial cell,HCMEC)增殖的影响,探讨Slit2在脉络... 目的:观察腺病毒介导的Slit2及Slit2 ShRNA转染缺氧诱导的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial cells,RPE)细胞对人脉络膜微血管内皮细胞(human choroidal microvascular endothelial cell,HCMEC)增殖的影响,探讨Slit2在脉络膜新生血管中的可能作用,为脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)提供新的治疗思路。方法:体外培养并鉴定人RPE细胞、HCMEC;200μmol/L氯化钴建立化学缺氧模型,Transwell小室建立细胞共培养模型;将缺氧的RPE细胞随机分为Slit2组(加入Slit2)、Slit2 ShRNA组(加入Slit2 ShRNA)、空腺病毒组(加入空腺病毒)、缺氧组,12、24、48 h后采用CCK 8(Cell Counting Kit-8,CCK 8)法检测HCMEC的增殖。结果:不同组别存在组间差别,差异均有统计学意义(F=98.122,P=0.000),不同时间点存在差别(F=3388.913,P=0.000),组别与时间点的交互作用(F=82.863,P=0.000)。Slit2组吸光度(absorbance,A)值在24 h、48 h均高于其他组(与缺氧组P=0.001,其余P=0.000),Slit2 ShRNA组A值在24 h、48 h均低于其他组(48 h与缺氧组P=0.003,与空腺病毒组P=0.008,其余P=0.000)。结论:Slit2的高表达可明显促进HCMEC的增殖,沉默RPE细胞中的Slit2的表达后,会明显抑制HCMEC的增殖。 展开更多

关键词 SLIT2 人视网膜色素上皮细胞 人脉络膜微血管内皮细胞 Transwell共培养

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CCN1siRNA对视网膜血管内皮细胞活性的抑制及其机制 被引量：2

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作者 底煜 张轶欧 +1 位作者 王爱媛 陈晓隆 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期24-29,共6页

背景富含半胱氨酸蛋白61（Cyr61）/CCN1在早产儿视网膜病变（ROP）的视网膜新生血管（RNV）形成中发挥重要作用，但目前国内外关于CCN1小干扰RNA（CCN1 siRNA）对ROP有无延缓和治疗作用的研究较少。 目的探讨特异性抑制CCN1的表达对视... 背景富含半胱氨酸蛋白61（Cyr61）/CCN1在早产儿视网膜病变（ROP）的视网膜新生血管（RNV）形成中发挥重要作用，但目前国内外关于CCN1小干扰RNA（CCN1 siRNA）对ROP有无延缓和治疗作用的研究较少。 目的探讨特异性抑制CCN1的表达对视网膜血管内皮细胞的调控作用。 方法恒河猴脉络膜－视网膜内皮细胞株（RF/6A）分别于常氧（正常对照组）和低氧环境（体积分数1%O2、5%CO2和94%N2的混合气体）中培养，低氧环境培养的细胞分别采用脂质体Lipofectamine？2000介导转染空载体质粒（低氧对照组）和CCN1 siRNA表达质粒（CCN1 siRNA转染组），于细胞转染后24 h采用逆转录PCR法检测细胞中CCN1 siRNA重组质粒的表达情况；分别于培养后0、24、48、72和96 h采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法测定各组细胞活性并绘制细胞生长曲线；于培养后24 h采用流式细胞术检测各组培养细胞的增生和凋亡情况；于培养后24 h采用免疫荧光技术和Western blot法检测各组RF/6A细胞中CCN1和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达。 结果细胞转染后24 h用逆转录法检测到细胞中CCN1 siRNA的表达条带。CCK-8检测显示随着培养时间的延长，RF/6A细胞增生值（吸光度，A值）均明显增加，但CCN1 siRNA转染组各时间点细胞增生值均明显低于正常对照组和低氧对照组，总体比较差异均有统计学意义（F组别＝198.45，P〈0.05；F时间＝39.26，P〈0.05）；CCN1 siRNA转染组、正常对照组和低氧对照组细胞的凋亡率分别为（68.9±1.1）%、（18.9±1.3）%和（39.6±1.8）%，其中CCN1 siRNA转染组细胞的凋亡率明显高于正常对照组和低氧对照组，差异均有统计学意义（t＝2.93、2.56，均P〈0.05）；CCN1和VEGF蛋白在正常对照组细胞中呈弱表达，在低氧对照组细胞中表达均明显增强，CCN1 siRNA转染组细胞中CCN1和VEGF的相对表达量较低氧对照组均明显下降（均P〈0.05）。 结论CCN1 siRNA转染后能抑制RF/6A细胞的增生并促进其凋亡，CCN1 siRNA可下调缺氧环境下RF/6A细胞中CCN1和VEGF蛋白的表达水平，可能是抑制RNV形成的主要机制。 展开更多

关键词 富含半胱氨酸蛋白61/生理 视网膜新生血管/预防及控制 早产儿视网膜病变/治疗 缺 氧 RNA干扰 血管内皮生长因子 恒河猴脉络膜一视网膜内皮细胞

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细胞衰老在干性年龄相关性黄斑变性中的作用研究进展

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作者 蔡梦霞 魏婷婷 +1 位作者 朱凌鹏 姚勇 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2024年第4期324-328,共5页

干性年龄相关性黄斑变性(AMD)是一种视网膜黄斑区域的退行性疾病,各种视网膜和脉络膜组织的衰老变化是AMD致病的重要因素之一。细胞衰老是细胞在某些生理过程中或受到应激性损伤时引发的不可逆的细胞周期停滞状态,影响多种生理和病理过... 干性年龄相关性黄斑变性(AMD)是一种视网膜黄斑区域的退行性疾病,各种视网膜和脉络膜组织的衰老变化是AMD致病的重要因素之一。细胞衰老是细胞在某些生理过程中或受到应激性损伤时引发的不可逆的细胞周期停滞状态,影响多种生理和病理过程。越来越多的研究表明,细胞衰老在AMD的发生发展中起重要作用。本文就细胞衰老的机制及其与干性AMD的关系进行综述,旨在为干性AMD治疗提供新思路。 展开更多

关键词 年龄相关性黄斑变性 细胞衰老 视网膜色素上皮细胞 小胶质细胞 脉络膜血管内皮细胞 线粒体 溶酶体 炎症

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缺氧诱导ANGPTL4表达对实验性脉络膜新生血管生成的促进作用

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作者 陈佳 杨滢 +3 位作者 苏舒 张晟来 杨晓伟 桑爱民 《中华实验眼科杂志(中英文)》 2025年第10期906-914,共9页

目的探讨缺氧诱导血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)表达在实验性脉络膜新生血管(CNV)中的作用。方法选取6~8周龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠27只, 其中18只构建激光诱导CNV模型, 激光光凝后第7天分别采用光学相干断层扫描血流成像(OCTA)和荧光素... 目的探讨缺氧诱导血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)表达在实验性脉络膜新生血管(CNV)中的作用。方法选取6~8周龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠27只, 其中18只构建激光诱导CNV模型, 激光光凝后第7天分别采用光学相干断层扫描血流成像(OCTA)和荧光素眼底血管造影(FFA)验证造模是否成功, 分别于造模前和造模后第3、7天取视网膜色素上皮(RPE)-脉络膜-巩膜复合体提取蛋白。采用Western blot法检测各时间点ANGPTL4及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白相对表达量。同时取第7天小鼠眼球制备冰冻切片, 免疫荧光染色法观察ANGPTL4的表达及细胞定位。用200 μmol/L氯化钴(CoCl2)分别处理猕猴脉络膜视网膜内皮细胞RF/6A 0、3、6、12 h;另将RF/6A细胞分为正常对照组、缺氧组和缺氧+si-ANGPTL4组, 缺氧+si-ANGPTL4组采用含si-ANGPTL4序列的质粒转染细胞。采用Western blot法检测各组细胞中ANGPTL4和VEGF蛋白相对表达量;成管实验观察各组之间成管数量的差异。另选取27只雄性C57BL/6J小鼠, 采用随机数字表法分为CNV组、CNV+si-NC组和CNV+si-ANGPTL4组, 每组9只, 其中CNV+si-NC组和CNV+si-ANGPTL4组建立CNV模型后分别在玻璃体腔注射胆固醇修饰的si-NC和si-ANGPTL4。采用FFA观察各组荧光素渗漏情况, 采用OCTA及脉络膜铺片免疫荧光法观察各组CNV的长度、厚度及面积;采用Western blot法检测各组ANGPTL4和VEGF蛋白相对表达量。结果造模前及造模后第3、7天, ANGPTL4蛋白相对表达量分别为1.00±0.00、1.58±0.05和1.90±0.04, VEGF蛋白相对表达量分别为1.00±0.00、1.31±0.05和1.84±0.04, 总体比较差异均有统计学意义(F=528.934、390.424, 均P<0.05), 其中造模后第3、7天, ANGPTL4和VEGF蛋白相对表达量均明显高于对照组, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组视网膜各层组织清晰, CNV组视网膜神经上皮层下可见新生血管长入。相比于对照组, CNV组ANGPTL4表达明显增多, 并与血管内皮细胞共定位。CoCl2作用于RF/6A细胞后3、6、12 h, ANGPTL4和VEGF蛋白相对表达量均高于0 h, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。与对照组比较, 低氧组ANGPTL4蛋白相对表达量升高, 低氧+si-ANGPTL4组ANGPTL4蛋白相对表达量明显降低, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组、低氧组、低氧+si-ANGPTL4组成管数量分别为(12.67±1.53)、(19.64±1.56)和(17.01±1.04)个, 总体比较差异有统计学意义(F=33.091, P<0.01), 其中低氧组、低氧+si-ANGPTL4组成管数量均较对照组增多, 低氧+si-ANGPTL4组成管数量较低氧组减少, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。CNV+si-ANGPTL4组ANGPTL4和VEGF蛋白相对表达量均明显低于CNV组, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。CNV+si-ANGPTL4组CNV面积明显小于CNV组和CNV+si-NC组, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论缺氧诱导ANGPTL4表达促进体内及体外实验性CNV生成, 抑制ANGPTL4可以减少CNV的形成及渗漏。 展开更多

关键词 脉络膜新生血管 缺氧 血管生成素样蛋白4 脉络膜内皮细胞 小干扰RNA

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腺病毒介导slit2基因转染人视网膜色素上皮细胞对RF/6A细胞迁移及管腔形成的影响 被引量：4

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作者 张明慧 周希瑗 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第16期1619-1623,共5页

目的观察共培养模型下,腺病毒介导的slit2基因转染人视网膜色素上皮细胞(RPE)对猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)迁移及管腔形成的影响。方法用腺病毒介导的slit2基因(Ad-slit2)转染RPE细胞,同时设空载体腺病毒转染组(Ad-null)及空白... 目的观察共培养模型下,腺病毒介导的slit2基因转染人视网膜色素上皮细胞(RPE)对猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)迁移及管腔形成的影响。方法用腺病毒介导的slit2基因(Ad-slit2)转染RPE细胞,同时设空载体腺病毒转染组(Ad-null)及空白对照组。转染24 h及48 h后,采用RT-PCR及Western blot法分别检测RPE细胞中slit2、VEGF的mRNA及蛋白表达情况;ELISA法检测RPE细胞培养基上清液中VEGF的分泌水平;建立RPE&RF/6A共培养模型,采用Transwell小室法及Matrigel胶体外三维成型法分别检测过表达slit2基因的RPE细胞对RF/6A细胞迁移能力及管腔形成能力的影响,并计算迁移数目及管腔形成长度、管腔数。结果 Ad-slit2转染24、48 h后,RPE细胞在基因及蛋白水平表达slit2、VEGF均有明显增高;ELISA结果显示过表达slit2基因的RPE细胞其培养基上清液中分泌型VEGF水平增高;在RPE&RF/6A共培养下,空白对照组、Ad-null转染24 h组、Ad-slit2转染24 h组、Ad-null转染48 h组、Ad-slit2转染48 h组中,RF/6A细胞迁移数目分别是(40.6±4.5)、(36.7±3.5)、(67.7±4.2)、(36.0±3.6)、(79.7±3.5);管腔形成长度分别是(3.95±0.31)、(4.53±0.26)、(6.04±0.34)、(4.09±0.18)、(7.27±0.45)mm,管腔数分别是(8.7±3.2)、(8.9±3.6)、(15.9±4.2)、(8.3±2.4)、(23.3±4.5)。Ad-slit2转染24 h及48 h组与空白对照组比较,差异具有统学意义(P<0.05)。结论腺病毒介导的slit2基因转染RPE细胞可促进RF/6A细胞的迁移及管腔形成。RPE细胞中的slit2可能参与脉络膜新生血管形成过程。 展开更多

关键词 slit2基因 脉络膜新生血管 脉络膜视网膜血管内皮细胞 迁移 管腔形成

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枸杞多糖对高糖所致RF/6As通透性和Rho激酶的影响 被引量：3

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作者 王继红 刘学政 杨雪佳 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期507-512,共6页

目的探讨高糖条件下猴脉络膜-视网膜内皮细胞(RF/6As)损伤时的单层通透性、Rho激酶1(ROCK1)的变化及它们之间的关系,和枸杞多糖(LBP)对上述变化的影响。方法体外培养RF/6As,分为等渗葡萄糖处理组(对照组)、40mmol/L葡萄糖处理组(高糖组)... 目的探讨高糖条件下猴脉络膜-视网膜内皮细胞(RF/6As)损伤时的单层通透性、Rho激酶1(ROCK1)的变化及它们之间的关系,和枸杞多糖(LBP)对上述变化的影响。方法体外培养RF/6As,分为等渗葡萄糖处理组(对照组)、40mmol/L葡萄糖处理组(高糖组)及LBP+40mmol/L葡萄糖处理组(LBP+高糖组)。各组分别培养1、3、5、7d,应用倒置显微镜观察培养的RF/6As形态,以辣根过氧化物酶(HRP)作为示踪剂用二室弥散系统检测RF/6As单层通透性的变化,应用免疫荧光法观察各组不同时间点细胞骨架的变化,采用Westernblot法检测ROCK1在5d、7d各组细胞中的表达量。结果第3、5、7天,高糖组RF/6As随时间延长逐渐变形,正常细胞数量明显减少,单层通透性逐渐增加;3个时间点HRP的A值分别为0.074±0.011、0.135±0.022、0.253±0.047,明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。LBP+高糖组仅于7d时细胞形态略有改变,5d及7d时HRP的A值分别为0.069±0.004和0.114±0.009,较对照组明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01);但明显低于高糖组,差异均有统计学意义(P<0.01)。Westernblot检测显示,7d时LBP+高糖组ROCK1灰度值为35849.47±1032.36,高糖组为21356.10±1566.66,差异有统计学意义(P<0.01)。结论高糖可引起RF/6As单层通透性增加和细胞骨架的重排以及ROCK1的高表达,而LBP可通过下调ROCK1的表达减轻高糖对RF/6As的损伤。 展开更多

关键词 脉络膜-视网膜内皮细胞 枸杞多糖 葡萄糖 通透性 Rho激酶1

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Ang-1对高糖环境中RF/6A单层的保护作用 被引量：2

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作者 刘学政 左中夫 +1 位作者 冯闯 王轶晶 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2009年第5期380-384,共5页

目的探讨高浓度葡萄糖及血管生成素-1(Ang-1)对内皮细胞(EC)单层通透性的影响。方法将猴脉络膜-视网膜内皮细胞(RF/6A)接种于0.8μm聚碳酸酯微孔滤膜,形成致密单层后分3个组培养。正常对照组:含葡萄糖25mmol/L;高糖组:含葡萄糖40mmol/L;... 目的探讨高浓度葡萄糖及血管生成素-1(Ang-1)对内皮细胞(EC)单层通透性的影响。方法将猴脉络膜-视网膜内皮细胞(RF/6A)接种于0.8μm聚碳酸酯微孔滤膜,形成致密单层后分3个组培养。正常对照组:含葡萄糖25mmol/L;高糖组:含葡萄糖40mmol/L;Ang-高糖组:含葡萄糖40mmol/L+Ang-1(250ng/mL)。于1、3、5、7d,4个时间点建立EC单层通透性模型,检测蛋白质渗透压反射系数(δ)及滤过系数(Kf),以监测EC单层通透性的变化;利用Westernblot(NBT/BCIP显色法)检测5d时survivin的表达。结果3、5、7d时,高糖组EC单层通透性增高(P<0.01),Ang-高糖组在5d及7d时,EC单层通透性升高(P<0.01),但仍低于高糖组;Westernblot结果显示,Ang-高糖组survivin表达明显高于其他各组(P<0.01)。结论高糖能够增加EC单层通透性,Ang-1能对抗高糖的这种生物学作用。可能是通过上调凋亡抑制基因survivin的表达,抑制RF/6A的凋亡而发挥生物学作用的。 展开更多

关键词 猴脉络膜-视网膜内皮细胞 血管生成素-1 高糖 内皮细胞单层 通透性 SURVIVIN

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