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西农萨能羊脂肪酸合酶(FASN)基因启动子序列的克隆与序列分析
1
作者
王海滨
韩雪峰
+1 位作者
祁昱
罗军
《山地农业生物学报》
2013年第4期333-337,共5页
以陕西省千阳县种羊场的足月正常分娩、健康的西农萨能羊为试验材料,运用PCR方法对其FASN基因启动子部分序列进行了克隆和序列分析,获得了西农萨能羊FASN基因启动子序列片段719 bp(GenBank收录号EF556550.1)。序列分析显示,TATA盒位于-3...
以陕西省千阳县种羊场的足月正常分娩、健康的西农萨能羊为试验材料,运用PCR方法对其FASN基因启动子部分序列进行了克隆和序列分析,获得了西农萨能羊FASN基因启动子序列片段719 bp(GenBank收录号EF556550.1)。序列分析显示,TATA盒位于-35 bp处,1个类似于CAAT盒的序列位于-68 bp处,这些都是典型的真核生物启动子元件,TATA盒上游区域有76%以上的G/C含量和4个GC盒(GGGCGG和CCGCCC),潜在的核转录因子结合位点Sp1位于-99 bp、-174 bp、-255 bp和-320 bp。
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关键词
山羊
脂肪酸合酶基因
启动子
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职称材料
西农萨能羊FAS基因shRNA序列筛选及其腺病毒载体的构建
被引量：
8
2
作者
王伟
罗军
+3 位作者
赵旺生
李建华
张晓
王龙坛
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期6-12,共7页
山羊脂肪酸合酶（Fatty acid synthase,FAS）是脂肪酸合成的关键酶,对乳腺短、中链脂肪酸合成起重要调控作用。设计了shRNA-5544、shRNA-5936s、hRNA-6132 3条针对FAS基因不同区域的小发夹RNA（Short hairpin RNA,shRNA）及一条阴性对...
山羊脂肪酸合酶（Fatty acid synthase,FAS）是脂肪酸合成的关键酶,对乳腺短、中链脂肪酸合成起重要调控作用。设计了shRNA-5544、shRNA-5936s、hRNA-6132 3条针对FAS基因不同区域的小发夹RNA（Short hairpin RNA,shRNA）及一条阴性对照序列shRNA-NC,并构建表达这4条shRNA序列的入门载体及其靶基因与红色荧光蛋白基因的融合表达载体,二者共转染HEK 293细胞进行有效序列筛选,结果显示shRNA-5544和shRNA-5936序列具有明显的干扰效果。在LR Clonase-Ⅱ重组酶作用下,分别将pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA-5544、pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA-5936及pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA-NC入门载体与腺病毒骨架载体pAd/PL-DEST进行LR重组,经氨苄青霉素及氯霉素抗性筛选后成功获得3个重组腺病毒载体,ScaⅠ酶切鉴定及测序分析证实所构建的重组腺病毒载体中插入序列与设计序列一致。重组腺病毒载体经PacⅠ酶切线性化后,利用Lipofectamine 2000转染HEK 293细胞,10~12 d后收集病毒,在HEK 293细胞中反复扩增3次后,获得高滴度的重组腺病毒,利用TCID50法测定重组腺病毒滴度分别为6×108PFU/mL（表达shRNA-5544序列）、5×108PFU/mL（表达shRNA-5936序列）及6×108PFU/mL（表达shRNA-NC序列）,为进一步在原代培养的山羊乳腺上皮细胞中进行FAS基因的RNA干扰研究奠定基础。
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关键词
西农萨能羊
乳腺
脂肪酸合酶基因
SHRNA
腺病毒载体
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职称材料
题名
西农萨能羊脂肪酸合酶(FASN)基因启动子序列的克隆与序列分析
1
作者
王海滨
韩雪峰
祁昱
罗军
机构
贵阳市农业委员会
西北农林科技大学动物科技学院
出处
《山地农业生物学报》
2013年第4期333-337,共5页
基金
公益性行业(农业)科研专项项目(201103038)
文摘
以陕西省千阳县种羊场的足月正常分娩、健康的西农萨能羊为试验材料,运用PCR方法对其FASN基因启动子部分序列进行了克隆和序列分析,获得了西农萨能羊FASN基因启动子序列片段719 bp(GenBank收录号EF556550.1)。序列分析显示,TATA盒位于-35 bp处,1个类似于CAAT盒的序列位于-68 bp处,这些都是典型的真核生物启动子元件,TATA盒上游区域有76%以上的G/C含量和4个GC盒(GGGCGG和CCGCCC),潜在的核转录因子结合位点Sp1位于-99 bp、-174 bp、-255 bp和-320 bp。
关键词
山羊
脂肪酸合酶基因
启动子
Keywords
goat
fatty acid synthase gene
Promoter
分类号
Q751 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
西农萨能羊FAS基因shRNA序列筛选及其腺病毒载体的构建
被引量：
8
2
作者
王伟
罗军
赵旺生
李建华
张晓
王龙坛
机构
西北农林科技大学动物科技学院
出处
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期6-12,共7页
基金
国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2008AA10Z135)资助
文摘
山羊脂肪酸合酶（Fatty acid synthase,FAS）是脂肪酸合成的关键酶,对乳腺短、中链脂肪酸合成起重要调控作用。设计了shRNA-5544、shRNA-5936s、hRNA-6132 3条针对FAS基因不同区域的小发夹RNA（Short hairpin RNA,shRNA）及一条阴性对照序列shRNA-NC,并构建表达这4条shRNA序列的入门载体及其靶基因与红色荧光蛋白基因的融合表达载体,二者共转染HEK 293细胞进行有效序列筛选,结果显示shRNA-5544和shRNA-5936序列具有明显的干扰效果。在LR Clonase-Ⅱ重组酶作用下,分别将pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA-5544、pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA-5936及pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA-NC入门载体与腺病毒骨架载体pAd/PL-DEST进行LR重组,经氨苄青霉素及氯霉素抗性筛选后成功获得3个重组腺病毒载体,ScaⅠ酶切鉴定及测序分析证实所构建的重组腺病毒载体中插入序列与设计序列一致。重组腺病毒载体经PacⅠ酶切线性化后,利用Lipofectamine 2000转染HEK 293细胞,10~12 d后收集病毒,在HEK 293细胞中反复扩增3次后,获得高滴度的重组腺病毒,利用TCID50法测定重组腺病毒滴度分别为6×108PFU/mL（表达shRNA-5544序列）、5×108PFU/mL（表达shRNA-5936序列）及6×108PFU/mL（表达shRNA-NC序列）,为进一步在原代培养的山羊乳腺上皮细胞中进行FAS基因的RNA干扰研究奠定基础。
关键词
西农萨能羊
乳腺
脂肪酸合酶基因
SHRNA
腺病毒载体
Keywords
Xinong Saanen goat
Mammary gland
Fatty acid synthase gene
shRNA
Adenovirus vector
分类号
S827 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
西农萨能羊脂肪酸合酶(FASN)基因启动子序列的克隆与序列分析
王海滨
韩雪峰
祁昱
罗军
《山地农业生物学报》
2013
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
西农萨能羊FAS基因shRNA序列筛选及其腺病毒载体的构建
王伟
罗军
赵旺生
李建华
张晓
王龙坛
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
8
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