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脂肪组织特异性表达载体的构建
1
作者
华晓敏
许登高
潘庆杰
《青岛农业大学学报(自然科学版)》
2012年第2期84-88,共5页
采用PCR技术克隆了小鼠脂肪组织特异表达的脂肪酸结合蛋白ap2基因增强子和启动子,通过DNA重组技术将该基因增强子和启动子重组于pEGFP-N1真核表达载体上,构建pEGFP-N1-ap2重组质粒,通过PCR扩增、酶切电泳分析和测序的方法对重组质粒进...
采用PCR技术克隆了小鼠脂肪组织特异表达的脂肪酸结合蛋白ap2基因增强子和启动子,通过DNA重组技术将该基因增强子和启动子重组于pEGFP-N1真核表达载体上,构建pEGFP-N1-ap2重组质粒,通过PCR扩增、酶切电泳分析和测序的方法对重组质粒进行鉴定,并转染小鼠前脂肪细胞,通过荧光素酶活性检测特异性表达强度。结果表明,本实验克隆的ap2基因增强子和启动子的碱基组成与GenBank中的ap2基因序列完全一致,通过DNA重组技术将该基因增强子和启动子重组于pEGFP-N1真核表达载体上,成功构建了脂肪组织特异表达的重组质粒。为以后的转基因动物的研究奠定了基础。
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关键词
脂肪组织特异表达载体
增强子
启动子
ap2
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职称材料
不同启动子调控的PNP基因载体的构建和表达差异性分析
被引量:
1
2
作者
蔡晓坤
林菊生
+2 位作者
刘址忠
薛秀兰
梁扩寰
《华中科技大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第1期33-36,共4页
目的 分别构建巨细胞病毒 (cytomegalovirus, CMV) 通用启动子和甲胎蛋白 (α fetoprotein, AFP) 组织特异性启动子调控的PNP基因表达载体并分析二者表达的差异性。方法 将 AF0. 3 启动子插入载体 pcDNA3. 0,构建肝癌细胞特异表...
目的 分别构建巨细胞病毒 (cytomegalovirus, CMV) 通用启动子和甲胎蛋白 (α fetoprotein, AFP) 组织特异性启动子调控的PNP基因表达载体并分析二者表达的差异性。方法 将 AF0. 3 启动子插入载体 pcDNA3. 0,构建肝癌细胞特异表达载体 pAF0 .3; 将 PNP基因分别插入到 pcDNA3 .0 和 pAF0. 3 中, 构建不同启动子调控下的PNP基因表达载体 pcDNA3 .0/PNP和 pAF0. 3/PNP; 通过酶切、PCR及测序鉴定各重组体。采用脂质体介导法将两种PNP基因表达载体转染不同的细胞株, RT-PCR检测PNP基因在各细胞株中的表达, 分析二者表达的不同。结果各目的片段均成功插入相应的载体中, CMV启动子调控下的 PNP基因在各株细胞中均实现了表达, 而 AF0 3 启动子调控下的PNP基因则在AFP阳性肝癌细胞中实现了组织特异性表达。结论 两 PNP基因表达载体是肝癌基因治疗中新型、高效的治疗载体, 且 pAF0. 3/PNP还实现了在AFP阳性肝癌细胞中的靶向性表达。
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关键词
PNP
启动子
肝癌细胞
基因
表达
载体
调控
基因
PCDNA3
特异
表达
组织
特异
性
重组体
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职称材料
骨骼肌细胞葡萄糖运载体4的研究进展
被引量:
9
3
作者
林强
吴毅
胡永善
《中国康复医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期471-475,共5页
骨骼肌是体内最主要摄取葡萄糖和代谢葡萄糖的组织之一。葡萄糖跨膜转运是骨骼肌利用葡萄糖的首要步骤。葡萄糖跨膜进入骨骼肌细胞需要细胞膜上的葡萄糖运载体(glucose transporter,GLUT)协助扩散。GLUT有多种亚型,其中葡萄糖运载体4...
骨骼肌是体内最主要摄取葡萄糖和代谢葡萄糖的组织之一。葡萄糖跨膜转运是骨骼肌利用葡萄糖的首要步骤。葡萄糖跨膜进入骨骼肌细胞需要细胞膜上的葡萄糖运载体(glucose transporter,GLUT)协助扩散。GLUT有多种亚型,其中葡萄糖运载体4(GLUT4)是存在于骨骼肌、脂肪组织中帮助葡萄糖转运的蛋白。胰岛素和肌肉收缩可通过不同的机制调节GLUT4的基因表达和转位,从而促进葡萄糖的跨膜转运。因此,GLUT4是糖尿病基础研究中的一个热点。
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关键词
葡萄糖运
载体
4
骨骼肌细胞
GLUT4
跨膜转运
脂肪
组织
葡萄糖转运
基因
表达
肌肉收缩
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职称材料
小鼠adiponectin的甲基化敏感性检测及其启动子克隆
被引量:
1
4
作者
许登高
张敏
+1 位作者
曲贞晓
潘庆杰
《青岛农业大学学报(自然科学版)》
2013年第1期6-10,共5页
本试验通过对脂肪组织特异表达的脂肪因子adiponectin调控区域4个CpG位点在心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌、腹脂、内脏脂肪中的甲基化程度以及adiponectin mRNA表达水平的检测,表明adiponectin在mRNA水平的表达与其调控位点的甲基化程度...
本试验通过对脂肪组织特异表达的脂肪因子adiponectin调控区域4个CpG位点在心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌、腹脂、内脏脂肪中的甲基化程度以及adiponectin mRNA表达水平的检测,表明adiponectin在mRNA水平的表达与其调控位点的甲基化程度显著相关;同时采用PCR技术克隆了小鼠脂肪组织特异表达的脂联素的启动子,通过DNA重组技术将该基因的启动子重组于pEGFP-N1真核表达载体上,构建pEGFP-N1-P(adi)重组质粒,通过分子克隆测序方法对重组质粒进行鉴定,并转染小鼠前脂肪细胞,通过荧光素酶活性检测表明P(adi)具备驱动报告基因表达的活性,为今后制备转基因动物的研究奠定基础。
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关键词
脂肪组织特异表达载体
转基因动物
甲基化敏感型
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职称材料
题名
脂肪组织特异性表达载体的构建
1
作者
华晓敏
许登高
潘庆杰
机构
青岛农业大学动物生殖发育与基因工程研究所
出处
《青岛农业大学学报(自然科学版)》
2012年第2期84-88,共5页
基金
国家自然科学基金(31072032)
国家转基因生物新品种培育重大专项(2011zx08008-003)
"泰山学者"建设工程专项经费资助
文摘
采用PCR技术克隆了小鼠脂肪组织特异表达的脂肪酸结合蛋白ap2基因增强子和启动子,通过DNA重组技术将该基因增强子和启动子重组于pEGFP-N1真核表达载体上,构建pEGFP-N1-ap2重组质粒,通过PCR扩增、酶切电泳分析和测序的方法对重组质粒进行鉴定,并转染小鼠前脂肪细胞,通过荧光素酶活性检测特异性表达强度。结果表明,本实验克隆的ap2基因增强子和启动子的碱基组成与GenBank中的ap2基因序列完全一致,通过DNA重组技术将该基因增强子和启动子重组于pEGFP-N1真核表达载体上,成功构建了脂肪组织特异表达的重组质粒。为以后的转基因动物的研究奠定了基础。
关键词
脂肪组织特异表达载体
增强子
启动子
ap2
Keywords
adipose tissue - specific expression vector
enhancer
promoter
ap2
分类号
Q75 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
不同启动子调控的PNP基因载体的构建和表达差异性分析
被引量:
1
2
作者
蔡晓坤
林菊生
刘址忠
薛秀兰
梁扩寰
机构
华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所
出处
《华中科技大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第1期33-36,共4页
基金
国家自然科学基金重点资助项目 (No. 30330680)
文摘
目的 分别构建巨细胞病毒 (cytomegalovirus, CMV) 通用启动子和甲胎蛋白 (α fetoprotein, AFP) 组织特异性启动子调控的PNP基因表达载体并分析二者表达的差异性。方法 将 AF0. 3 启动子插入载体 pcDNA3. 0,构建肝癌细胞特异表达载体 pAF0 .3; 将 PNP基因分别插入到 pcDNA3 .0 和 pAF0. 3 中, 构建不同启动子调控下的PNP基因表达载体 pcDNA3 .0/PNP和 pAF0. 3/PNP; 通过酶切、PCR及测序鉴定各重组体。采用脂质体介导法将两种PNP基因表达载体转染不同的细胞株, RT-PCR检测PNP基因在各细胞株中的表达, 分析二者表达的不同。结果各目的片段均成功插入相应的载体中, CMV启动子调控下的 PNP基因在各株细胞中均实现了表达, 而 AF0 3 启动子调控下的PNP基因则在AFP阳性肝癌细胞中实现了组织特异性表达。结论 两 PNP基因表达载体是肝癌基因治疗中新型、高效的治疗载体, 且 pAF0. 3/PNP还实现了在AFP阳性肝癌细胞中的靶向性表达。
关键词
PNP
启动子
肝癌细胞
基因
表达
载体
调控
基因
PCDNA3
特异
表达
组织
特异
性
重组体
Keywords
PNP/Mep-dR system
CMV promoter
AF0.3 promoter
gene expression
hepatocellular carcinoma
分类号
R735.7 [医药卫生—肿瘤]
R758.66 [医药卫生—皮肤病学与性病学]
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职称材料
题名
骨骼肌细胞葡萄糖运载体4的研究进展
被引量:
9
3
作者
林强
吴毅
胡永善
机构
复旦大学附属华山医院康复医学科
出处
《中国康复医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第5期471-475,共5页
基金
国家自然科学基金项目(30370685)
美国中华医学会基金(CMB)资助项目(No.98-676)
文摘
骨骼肌是体内最主要摄取葡萄糖和代谢葡萄糖的组织之一。葡萄糖跨膜转运是骨骼肌利用葡萄糖的首要步骤。葡萄糖跨膜进入骨骼肌细胞需要细胞膜上的葡萄糖运载体(glucose transporter,GLUT)协助扩散。GLUT有多种亚型,其中葡萄糖运载体4(GLUT4)是存在于骨骼肌、脂肪组织中帮助葡萄糖转运的蛋白。胰岛素和肌肉收缩可通过不同的机制调节GLUT4的基因表达和转位,从而促进葡萄糖的跨膜转运。因此,GLUT4是糖尿病基础研究中的一个热点。
关键词
葡萄糖运
载体
4
骨骼肌细胞
GLUT4
跨膜转运
脂肪
组织
葡萄糖转运
基因
表达
肌肉收缩
分类号
R587.1 [医药卫生—内分泌]
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职称材料
题名
小鼠adiponectin的甲基化敏感性检测及其启动子克隆
被引量:
1
4
作者
许登高
张敏
曲贞晓
潘庆杰
机构
青岛农业大学动物生殖发育与基因工程研究所
出处
《青岛农业大学学报(自然科学版)》
2013年第1期6-10,共5页
基金
国家自然科学基金(31072032)
国家转基因新品种培育重大专项(2011zx08008-003)
"泰山学者"建设工程专项经费资助
文摘
本试验通过对脂肪组织特异表达的脂肪因子adiponectin调控区域4个CpG位点在心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌、腹脂、内脏脂肪中的甲基化程度以及adiponectin mRNA表达水平的检测,表明adiponectin在mRNA水平的表达与其调控位点的甲基化程度显著相关;同时采用PCR技术克隆了小鼠脂肪组织特异表达的脂联素的启动子,通过DNA重组技术将该基因的启动子重组于pEGFP-N1真核表达载体上,构建pEGFP-N1-P(adi)重组质粒,通过分子克隆测序方法对重组质粒进行鉴定,并转染小鼠前脂肪细胞,通过荧光素酶活性检测表明P(adi)具备驱动报告基因表达的活性,为今后制备转基因动物的研究奠定基础。
关键词
脂肪组织特异表达载体
转基因动物
甲基化敏感型
Keywords
adipose tissue-specific expressing vector
transgenic animal
methylation sensitive
分类号
Q75 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
脂肪组织特异性表达载体的构建
华晓敏
许登高
潘庆杰
《青岛农业大学学报(自然科学版)》
2012
0
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职称材料
2
不同启动子调控的PNP基因载体的构建和表达差异性分析
蔡晓坤
林菊生
刘址忠
薛秀兰
梁扩寰
《华中科技大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2005
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
骨骼肌细胞葡萄糖运载体4的研究进展
林强
吴毅
胡永善
《中国康复医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
9
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
小鼠adiponectin的甲基化敏感性检测及其启动子克隆
许登高
张敏
曲贞晓
潘庆杰
《青岛农业大学学报(自然科学版)》
2013
1
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