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脂肪组织特异性表达载体的构建
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作者 华晓敏 许登高 潘庆杰 《青岛农业大学学报(自然科学版)》 2012年第2期84-88,共5页
采用PCR技术克隆了小鼠脂肪组织特异表达的脂肪酸结合蛋白ap2基因增强子和启动子,通过DNA重组技术将该基因增强子和启动子重组于pEGFP-N1真核表达载体上,构建pEGFP-N1-ap2重组质粒,通过PCR扩增、酶切电泳分析和测序的方法对重组质粒进... 采用PCR技术克隆了小鼠脂肪组织特异表达的脂肪酸结合蛋白ap2基因增强子和启动子,通过DNA重组技术将该基因增强子和启动子重组于pEGFP-N1真核表达载体上,构建pEGFP-N1-ap2重组质粒,通过PCR扩增、酶切电泳分析和测序的方法对重组质粒进行鉴定,并转染小鼠前脂肪细胞,通过荧光素酶活性检测特异性表达强度。结果表明,本实验克隆的ap2基因增强子和启动子的碱基组成与GenBank中的ap2基因序列完全一致,通过DNA重组技术将该基因增强子和启动子重组于pEGFP-N1真核表达载体上,成功构建了脂肪组织特异表达的重组质粒。为以后的转基因动物的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 脂肪组织特异表达载体 增强子 启动子 ap2
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不同启动子调控的PNP基因载体的构建和表达差异性分析 被引量:1
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作者 蔡晓坤 林菊生 +2 位作者 刘址忠 薛秀兰 梁扩寰 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期33-36,共4页
 目的 分别构建巨细胞病毒 (cytomegalovirus, CMV) 通用启动子和甲胎蛋白 (α fetoprotein, AFP) 组织特异性启动子调控的PNP基因表达载体并分析二者表达的差异性。方法 将 AF0. 3 启动子插入载体 pcDNA3. 0,构建肝癌细胞特异表...  目的 分别构建巨细胞病毒 (cytomegalovirus, CMV) 通用启动子和甲胎蛋白 (α fetoprotein, AFP) 组织特异性启动子调控的PNP基因表达载体并分析二者表达的差异性。方法 将 AF0. 3 启动子插入载体 pcDNA3. 0,构建肝癌细胞特异表达载体 pAF0 .3; 将 PNP基因分别插入到 pcDNA3 .0 和 pAF0. 3 中, 构建不同启动子调控下的PNP基因表达载体 pcDNA3 .0/PNP和 pAF0. 3/PNP; 通过酶切、PCR及测序鉴定各重组体。采用脂质体介导法将两种PNP基因表达载体转染不同的细胞株, RT-PCR检测PNP基因在各细胞株中的表达, 分析二者表达的不同。结果各目的片段均成功插入相应的载体中, CMV启动子调控下的 PNP基因在各株细胞中均实现了表达, 而 AF0 3 启动子调控下的PNP基因则在AFP阳性肝癌细胞中实现了组织特异性表达。结论 两 PNP基因表达载体是肝癌基因治疗中新型、高效的治疗载体, 且 pAF0. 3/PNP还实现了在AFP阳性肝癌细胞中的靶向性表达。 展开更多
关键词 PNP 启动子 肝癌细胞 基因表达载体 调控 基因 PCDNA3 特异表达 组织特异 重组体
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骨骼肌细胞葡萄糖运载体4的研究进展 被引量:9
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作者 林强 吴毅 胡永善 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期471-475,共5页
骨骼肌是体内最主要摄取葡萄糖和代谢葡萄糖的组织之一。葡萄糖跨膜转运是骨骼肌利用葡萄糖的首要步骤。葡萄糖跨膜进入骨骼肌细胞需要细胞膜上的葡萄糖运载体(glucose transporter,GLUT)协助扩散。GLUT有多种亚型,其中葡萄糖运载体4... 骨骼肌是体内最主要摄取葡萄糖和代谢葡萄糖的组织之一。葡萄糖跨膜转运是骨骼肌利用葡萄糖的首要步骤。葡萄糖跨膜进入骨骼肌细胞需要细胞膜上的葡萄糖运载体(glucose transporter,GLUT)协助扩散。GLUT有多种亚型,其中葡萄糖运载体4(GLUT4)是存在于骨骼肌、脂肪组织中帮助葡萄糖转运的蛋白。胰岛素和肌肉收缩可通过不同的机制调节GLUT4的基因表达和转位,从而促进葡萄糖的跨膜转运。因此,GLUT4是糖尿病基础研究中的一个热点。 展开更多
关键词 葡萄糖运载体4 骨骼肌细胞 GLUT4 跨膜转运 脂肪组织 葡萄糖转运 基因表达 肌肉收缩
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小鼠adiponectin的甲基化敏感性检测及其启动子克隆 被引量:1
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作者 许登高 张敏 +1 位作者 曲贞晓 潘庆杰 《青岛农业大学学报(自然科学版)》 2013年第1期6-10,共5页
本试验通过对脂肪组织特异表达的脂肪因子adiponectin调控区域4个CpG位点在心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌、腹脂、内脏脂肪中的甲基化程度以及adiponectin mRNA表达水平的检测,表明adiponectin在mRNA水平的表达与其调控位点的甲基化程度... 本试验通过对脂肪组织特异表达的脂肪因子adiponectin调控区域4个CpG位点在心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌、腹脂、内脏脂肪中的甲基化程度以及adiponectin mRNA表达水平的检测,表明adiponectin在mRNA水平的表达与其调控位点的甲基化程度显著相关;同时采用PCR技术克隆了小鼠脂肪组织特异表达的脂联素的启动子,通过DNA重组技术将该基因的启动子重组于pEGFP-N1真核表达载体上,构建pEGFP-N1-P(adi)重组质粒,通过分子克隆测序方法对重组质粒进行鉴定,并转染小鼠前脂肪细胞,通过荧光素酶活性检测表明P(adi)具备驱动报告基因表达的活性,为今后制备转基因动物的研究奠定基础。 展开更多
关键词 脂肪组织特异表达载体 转基因动物 甲基化敏感型
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