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题名小鼠CTSK敲降重组腺相关病毒的构建及其功能研究
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作者
何静
禚鑫喆
邹欣雨
王梦凡
王秀云
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机构
安徽医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室
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出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2024年第6期1001-1005,共5页
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基金
国家自然科学基金青年项目(编号:82300659)
安徽省自然科学基金青年项目(编号:2308085QH247)
+1 种基金
安徽医科大学校科研基金青年项目(编号:2021xkj006)
安徽高校自然科学研究项目重点项目(编号:KJ2021A0220)。
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文摘
目的构建小鼠组织蛋白酶K(CTSK)基因的敲降重组腺相关病毒(AAV-shCTSK),检测AAV-shCTSK在小鼠体内的敲降效率,及其对脂肪组织脂质储存的影响。方法设计阴性对照组(NC)及CTSK的shRNA引物,退火后插入到骨架载体中,挑选克隆并测序鉴定,重组质粒经纯化后,利用转染试剂PEI将构建好的腺相关病毒载体、包装质粒和辅助质粒共转染到293T细胞中,进行腺相关病毒包装与扩增,得到AAV-shNC以及AAV-shCTSK。利用脂肪组织原位注射将AAV病毒注射入小鼠附睾脂肪组织,2周后免疫印迹实验检测小鼠脂肪组织中CTSK蛋白的表达量及HE染色检测脂肪组织中脂滴大小。结果成功获得AAV-shNC以及AAV-shCTSK腺相关病毒。原位注射AAV-shCTSK的小鼠脂肪组织中CTSK成功敲降,脂肪组织中白色脂肪细胞显著变小。结论小鼠CTSK的敲降腺相关病毒构建成功,脂肪组织CTSK敲降引起脂肪组织中脂质含量减少。
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关键词
CTSK
腺相关病毒
脂肪组织原位注射
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Keywords
CTSK
adeno-associated virus
adipose tissue in situ injection
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分类号
Q782
[生物学—分子生物学]
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