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猪胸膜肺炎放线杆菌OmpD、LppB蛋白的原核表达及免疫原性分析 被引量:1
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作者 曾焱 欧祥龙 +2 位作者 闫晓阳 刘灿 廖永洪 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第1期343-352,共10页
本研究旨在评价猪胸膜肺炎放线杆菌OmpD和LppB蛋白的免疫原性和保护效果。通过同源性分析,发现19个血清型的APP均含有ompD和lppB基因,氨基酸序列相似性分别为98.2%~100%和99.3%~100%。利用基因工程大肠杆菌表达纯化了1型菌株的rOmpD和rL... 本研究旨在评价猪胸膜肺炎放线杆菌OmpD和LppB蛋白的免疫原性和保护效果。通过同源性分析,发现19个血清型的APP均含有ompD和lppB基因,氨基酸序列相似性分别为98.2%~100%和99.3%~100%。利用基因工程大肠杆菌表达纯化了1型菌株的rOmpD和rLppB蛋白,并进行了免疫原性分析。结果显示,两种蛋白均能有效表达,与猪康复血清反应明显。小鼠免疫rOmpD、rLppB蛋白后,ELISA抗体水平显著提高,对国内流行的1型、7型菌株攻毒保护率为70%~80%。进一步制备含rOmpD和rLppB的油乳剂,免疫仔猪后,ELISA抗体水平显著提高,对1型、7型菌株攻毒具有部分保护作用和交叉保护能力,但未能完全阻止感染和死亡。因此OmpD、LppB有作为APP亚单位疫苗开发候选抗原的潜力,本研究为进一步开发具有良好交叉保护效果的疫苗提供了数据支持。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 OmpD LppB 免疫原性 免疫效果
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌1型菌株的分离鉴定、耐药性及致病性研究
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作者 王烜 杨德鸿 +1 位作者 王连想 宋厚辉 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第5期458-464,共7页
2023年云南省某规模化猪场猪发生明显的呼吸道疾病,损失较大。为确定引起这次疫情的病原,并探究有效的防治方案,本研究采集45只死亡猪的肺脏10份、咽拭子样品35份,均采用平板划线法分离病原;采用革兰氏染色法观察细菌的形态;采用生化鉴... 2023年云南省某规模化猪场猪发生明显的呼吸道疾病,损失较大。为确定引起这次疫情的病原,并探究有效的防治方案,本研究采集45只死亡猪的肺脏10份、咽拭子样品35份,均采用平板划线法分离病原;采用革兰氏染色法观察细菌的形态;采用生化鉴定管鉴定分离菌的生化特征;采用PCR鉴定分离菌的种属和血清型;采用K-B药敏纸片法检测分离菌的药物敏感性。经不同方法鉴定结果显示,从45份样品中分离到3株血清1型猪胸膜肺炎放线杆菌(APP 1);3株菌均对β-内酰胺类的大部分药物、喹诺酮类的诺氟沙星、恩诺沙星、氧氟沙星和环丙沙星、磺胺类的甲氧苄啶和复方新诺明敏感;对大环内酯类的红霉素、硝基呋喃类的呋喃唑酮药物中介;对氨基糖苷类的丁胺卡那和新霉素、四环素类的四环素和多西环素、多肽类的多粘菌素B和万古霉素、酰胺醇类的氟苯尼考和氯霉素药物耐药。将分离菌分别以2×10^(7)cfu感染小鼠,通过小鼠的临床症状与死亡率分析分离菌对小鼠的致病性;将其中一株致病性最强的分离菌分别以不同剂量感染小鼠,采用Reed-Muench法计算分离菌对小鼠的半数致死量(LD_(50));将该菌以2×10^(8)cfu经气管注射77日龄猪,记录猪的死亡率,剖检死亡猪观察其肺脏的剖检病变,取病变明显的肺组织制备病理切片观察其病变。采用药敏试验筛选的敏感药物治疗该猪场发病猪,观察治疗效果。小鼠的致病性试验结果显示,3株菌感染的小鼠全部出现症状,所致小鼠死亡率分别为100%、66.7%与66.7%,其中DT-F2-1A菌株所致小鼠的症状最严重,致病性最强。选用DT-F2-1A菌株测定其对KM小鼠的LD50为6.32×10^(7)cfu,对小鼠的致病性较强;猪的致病性试验结果显示,感染猪出现口鼻出血,四肢发绀的明显呼吸道症状,发病率、死亡率均达100%,死亡猪肺脏弥散性出血和坏死,质地发硬。病变观察可见肺组织出现较严重的病变。表明该株菌对猪的致病性也很强。采用筛选的敏感药物头孢噻呋钠+恩诺沙星对该猪场的猪经肌肉注射连续治疗7 d后,患病猪均痊愈。上述结果表明,本研究分离到3株APP 1,其耐药性不强。其中DT-F2-1A株的致病性较强。为后续APP 1新型多联多价疫苗提供候选菌株,为猪传染性胸膜肺炎(PCP)的综合防治及其他研究提供实验参考。 展开更多
关键词 猪传染性胸膜肺炎 胸膜肺炎放线杆菌 分离鉴定 药敏试验 致病性
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猪胸膜肺炎放线杆菌临床分离株特性分析及疫苗候选菌株筛选
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作者 陈虹宇 朋璐 +7 位作者 张娇 韩未尧 汤细彪 宋文博 黄超 金卉 周锐 黎璐 《四川农业大学学报》 北大核心 2025年第2期458-468,共11页
【目的】分析胸膜肺炎放线杆菌(APP)临床分离株的优势血清型,获得疫苗候选菌株。【方法】从国内疑似分离株中鉴定获得53株APP菌株,鉴定各菌株血清型及评价其生物学特性后,利用大蜡螟和小鼠模型筛选评估有价值的疫苗候选菌株。【结果】53... 【目的】分析胸膜肺炎放线杆菌(APP)临床分离株的优势血清型,获得疫苗候选菌株。【方法】从国内疑似分离株中鉴定获得53株APP菌株,鉴定各菌株血清型及评价其生物学特性后,利用大蜡螟和小鼠模型筛选评估有价值的疫苗候选菌株。【结果】53株APP中血清型占比由高到低依次为1、7、15、5型,各菌株在体外生长存活能力强,具有不同程度的溶血活性。MIC结果显示,分离菌株对氟苯尼考敏感度较低,而对头孢类药物高度敏感。用大蜡螟和小鼠模型从每个血清型菌株中各筛选到一株高毒力候选菌株。其中,1型菌株制备的灭活疫苗能够以小于商品化疫苗中1型菌株1/5的剂量,保护100%同血清型攻毒小鼠存活。同时,商品化疫苗中缺乏的15型菌株制备的灭活疫苗对同血清型攻毒小鼠保护率为66.7%,高于商品化疫苗的保护率。【结论】本研究筛选获得高毒力的优势血清型1、5、7、15型菌株各一株,根据免疫剂量和免疫保护率分析,其中的1型菌株和15型菌株有开发为新疫苗候选菌株的潜力。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 临床分离株 血清型 灭活疫苗 猪传染性胸膜肺炎
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副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、猪链球菌与多杀性巴氏杆菌的研究进展
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作者 余松松 汤德元 +7 位作者 何松 廖正波 毛茵茗 周飘 秦海峰 向雪艳 梁建买 王飞鸿 《猪业科学》 2025年第3期94-96,共3页
副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)属于革兰氏阴性菌,是影响育肥猪群的第三大关键细菌病原体,对外界抵抗能力较差。HPS病是保育猪的主要传染病,也影响育肥猪和母猪健康,传染性较强,在春秋季发病率会相对较高,介于10%~50%之间,致... 副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)属于革兰氏阴性菌,是影响育肥猪群的第三大关键细菌病原体,对外界抵抗能力较差。HPS病是保育猪的主要传染病,也影响育肥猪和母猪健康,传染性较强,在春秋季发病率会相对较高,介于10%~50%之间,致死率高达50%。猪传染性胸膜肺炎(Porcine Contagious Pleuropneumonia,PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的猪的一种急性呼吸系统疾病,是养猪业发病率和死亡率极高的动物疫病之一。 展开更多
关键词 猪链球菌 胸膜肺炎放线杆菌 副猪嗜血杆菌
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胸膜肺炎放线杆菌 tadF 基因缺失株构建及生物学特性研究
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作者 熊威振 冀笑明 +4 位作者 任豆豆 梁萱 魏雨婷 崔国林 许金朋 《动物医学进展》 北大核心 2025年第2期10-16,共7页
为探究tadF基因对胸膜肺炎放线杆菌(App)生物学特性及毒力的影响,研究基于App血清1型4074株,通过两步单交换同源重组及正负向筛选,构建tadF基因缺失株,并测定亲本株和缺失株生长曲线、侧翼基因表达水平、生物被膜形成能力、细胞黏附入... 为探究tadF基因对胸膜肺炎放线杆菌(App)生物学特性及毒力的影响,研究基于App血清1型4074株,通过两步单交换同源重组及正负向筛选,构建tadF基因缺失株,并测定亲本株和缺失株生长曲线、侧翼基因表达水平、生物被膜形成能力、细胞黏附入侵能力和对小鼠的致病力。结果显示,成功构建tadF基因缺失株4074ΔtadF,该基因缺失对App生物被膜形成能力和侧翼基因表达水平无显著影响,但缺失株增殖速度慢于亲本株,tadF基因缺失显著降低App对PAM细胞的黏附入侵能力(P<0.05),亲本株黏附入侵能力为缺失株的1.75倍;对小鼠致病力检测结果显示,缺失株对小鼠的LD 50是亲本株的2.5倍,表明tadF基因缺失株对小鼠致病力下降。说明胸膜肺炎放线杆菌tadF基因缺失导致App增殖变慢,并降低其对细胞黏附入侵能力和对小鼠的毒力,为App黏附素作用机制研究提供参考。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 tadF基因 黏附素 缺失株 生物学特性
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CD 163基因敲除猪对胸膜肺炎放线杆菌、猪链球菌和副猪嗜血杆菌的易感性研究 被引量:1
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作者 梁国濠 胡丹丹 +5 位作者 钟海文 张健 杨德鸿 吴珍芳 杨化强 张献伟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期5478-5488,共11页
旨在探究在CD 163基因的SRCR5区域插入1个碱基的CD 163基因敲除(CD 163 gene knockout,CD 163-KO)型猪对3种关键细菌的易感性相较于野生型(wild-type,WT)猪是否会有所变化,评估CD 163-KO型猪的生物安全性。本研究选用均为50日龄、体重... 旨在探究在CD 163基因的SRCR5区域插入1个碱基的CD 163基因敲除(CD 163 gene knockout,CD 163-KO)型猪对3种关键细菌的易感性相较于野生型(wild-type,WT)猪是否会有所变化,评估CD 163-KO型猪的生物安全性。本研究选用均为50日龄、体重与健康状况等相似的17头CD 163-KO型大白猪和17头WT型大白猪,其中2头CD 163-KO型大白猪和2头WT型大白猪作为空白对照,不做任何感染处理。试验猪只均无胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)、猪链球菌(Streptococcus suis,SS)及副猪嗜血杆菌(Haemophlius parasuis,HPS)感染史与接种史。试验猪只随机分为3组,每组均有5头CD 163-KO型猪和WT型猪,A组接种APP1型菌株、B组接种SS2型菌株、C组接种HPS13型菌株。连续观察8 d,记录猪只临床症状表现与死亡情况;试验猪只死亡后及时解剖,观察心脏、胸腔、肺部等重要部位病变情况;采集肺样并提取肺部中的细菌DNA,用于定量PCR检测并统计分析与对比CD 163-KO型与WT型死亡大白猪肺中3种细菌分别的相对DNA拷贝量。依据试验猪只临床症状表现可得,各组试验猪只均成功感染相应的细菌,且各组内的CD 163-KO型猪与WT型猪的存活率均无显著差异(P>0.05);依据死亡猪只肺部病变情况及细菌定量PCR检测结果可得,CD 163-KO型死亡猪肺与WT型死亡猪肺中APP1型、SS2型及HPS13型菌株的相对DNA拷贝量均无显著差异(P>0.05)。本研究的结果是CD 163-KO型大白猪生物安全性的有力证据,证明CD 163基因敲除后没有提高猪只对APP、SS和HPS的易感性,不会显著影响猪只抵抗细菌的能力,为CD 163-KO型猪的生物安全性评估提供强有力的支持。 展开更多
关键词 CD 163 基因敲除 大白猪 猪繁殖与呼吸综合征病毒 胸膜肺炎放线杆菌 猪链球菌 副猪嗜血杆菌 生物安全评估
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柚皮苷可通过多种途径修复猪胸膜肺炎放线杆菌诱导的小鼠肺上皮屏障损伤 被引量:1
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作者 黄麒霖 刘晨 +5 位作者 景晓涵 黄丽娜 潘香逸 石雄伟 仇正英 辛蕊华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期5299-5309,共11页
旨在研究柚皮苷(naringin,NAR)对猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)感染引起小鼠肺上皮屏障损伤的防治效果。将40只6~8周龄的雄性昆明小鼠随机分为5组,分别为对照组、模型组、NAR低剂量组、NAR中剂量组以及NAR... 旨在研究柚皮苷(naringin,NAR)对猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)感染引起小鼠肺上皮屏障损伤的防治效果。将40只6~8周龄的雄性昆明小鼠随机分为5组,分别为对照组、模型组、NAR低剂量组、NAR中剂量组以及NAR高剂量组。连续灌胃给药8 d,空白组和模型组给予生理盐水。在第7天,小鼠以气管插管灌注的方式感染APP(1×10^(8)CFU·mL^(-1),100μL·只^(-1)),空白组灌注等体积无菌生理盐水,各组小鼠于造模后48 h处死,采样并评估NAR的防治作用。通过X射线图像表明,NAR可降低小鼠肺泡灌洗液中APP载菌量,并且能够缓解肺部病理损伤;此外,NAR干预后,可逆转由于APP诱导的小鼠肺组织中ZO-1、Occludin-1和Claudin-1紧密连接蛋白的表达降低,从而促进肺上皮屏障修复。为进一步探讨NAR促进肺上皮屏障修复的机制,研究发现NAR不仅减少小鼠肺组织中促炎因子IL-6和TNF-α的分泌,还增加了抑炎因子IL^(-1)0表达,同时能够增加抗氧化酶SOD2和Hmox1表达,表明NAR能够增强机体抗炎及抗氧化能力;此外,NAR可抑制TGF-β1/Smad2/3通路,减少由APP诱导的肺纤维组织增生;通过分析凋亡相关关键蛋白和Tunel荧光标记发现,NAR可呈剂量依赖性的减少细胞凋亡。综上所述,NAR可通过抗炎、抗氧化、抗纤维化和抗凋亡等途径,修复小鼠肺上皮屏障损伤,从而有效逆转APP诱导的肺部炎症损伤、发挥防治APP的功效。 展开更多
关键词 天然药物 柚皮苷 胸膜肺炎放线杆菌 肺上皮屏障损伤
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福建省某规模化猪场胸膜肺炎放线杆菌血清1型的分离鉴定
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作者 杨圆 于慧 +4 位作者 何乐 黄文琳 戴爱玲 魏春华 刘建奎 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期5449-5458,共10页
【目的】对福建某猪场疑似患有猪接触传染性胸膜肺炎的病死猪肺脏进行胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的分离鉴定,并确定APP分离株的血清型及其生物学特性,以期为猪场临床合理用药和制定防疫策略提供科学依据。... 【目的】对福建某猪场疑似患有猪接触传染性胸膜肺炎的病死猪肺脏进行胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的分离鉴定,并确定APP分离株的血清型及其生物学特性,以期为猪场临床合理用药和制定防疫策略提供科学依据。【方法】对1例疑似APP感染致死的后备母猪的肺脏组织进行病原分离培养、染色镜检和生化鉴定,同时进行16S rRNA和ApxⅣ毒素基因PCR扩增及血清型分析,采用药敏试验和动物致病性试验探究其耐药情况及毒力。【结果】从病死猪肺脏中成功分离到1株细菌,菌体形态为表面光滑、边缘整齐、呈灰白色半透明的圆形菌落,革兰染色镜检可见多形性的革兰阴性短杆菌,具有APP的培养特征。生化鉴定结果显示,分离株能利用木糖、葡萄糖、甘露醇,尿素酶、硝酸盐还原和甲基红试验均为阳性,与APP的生化特性一致。16S rRNA与ApxⅣ基因测序比对结果显示,扩增序列与GenBank中APP序列的相似性均>98%,进一步证实分离株为APP,将其命名为APP FJ2022。血清型鉴定结果显示,分离株为生长依赖NAD的血清1型菌株。药敏试验结果显示,分离株对头孢噻肟、头孢呋辛、头孢美唑、阿莫西林等药物敏感,对四环素、氨苄西林、环丙沙星、氟苯尼考等药物耐药。动物致病性试验结果显示,分离株对小鼠具有致病性,其半数致死量(LD 50)为7.71×10^(8)CFU。【结论】本研究从福建省某规模化猪场疑似患猪传染性胸膜肺炎病死猪中分离获得1株血清1型APP,其对多种常见抗菌药物表现耐药,致病性较强。试验结果有助于了解福建省APP的血清型,并为猪场防控APP感染提供参考依据。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 分离 鉴定 药敏试验 致病性
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胸膜肺炎放线杆菌利用肠菌素摄取铁促生长的研究
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作者 焦晓丽 崔一芳 +6 位作者 申学阳 时晨欣 武金亮 郭芳芳 崔国林 刘娜 徐福洲 《动物医学进展》 北大核心 2024年第8期15-21,共7页
肠菌素(Ent)介导的铁摄取系统在病原细菌生长和定植过程中发挥关键作用。胸膜肺炎放线杆菌是引起猪传染性胸膜肺炎的病原,为鉴定该菌不同血清型菌株能否利用肠菌素摄取铁发挥促生长作用,试验选用胸膜肺炎放线杆菌血清1~12型参考菌株,首... 肠菌素(Ent)介导的铁摄取系统在病原细菌生长和定植过程中发挥关键作用。胸膜肺炎放线杆菌是引起猪传染性胸膜肺炎的病原,为鉴定该菌不同血清型菌株能否利用肠菌素摄取铁发挥促生长作用,试验选用胸膜肺炎放线杆菌血清1~12型参考菌株,首先在限铁条件下通过肠菌素促生长试验鉴定不同血清型菌株能否利用肠菌素;进而通过添加不同浓度的铁螯合剂DFO、细菌接种量、肠菌素等因子,筛选胸膜肺炎放线杆菌利用肠菌素促生长的最适培养条件;最后分别在限铁和富铁培养条件下通过生长曲线鉴定肠菌素对胸膜肺炎放线杆菌12个血清型菌株的促生长作用。结果显示,在测定的胸膜肺炎放线杆菌血清1~12型参考菌株中,除血清2型和10型外,其他型菌株在限铁条件下均可利用肠菌素促生长。不同因子筛选结果显示,最适细菌接种浓度为1×10^(4)CFU/mL,添加DFO浓度为20μmol/L,而添加0.4、2.0、10.0μg/mL等不同浓度的肠菌素对胸膜肺炎放线杆菌均有显著促生长作用,且随肠菌素浓度升高而促生长能力显著增强。试验证实胸膜肺炎放线杆菌可利用肠菌素促进其生长,同时证实不同血清型利用肠菌素方面存在显著差异,为解析肠菌素介导的铁摄取系统在胸膜肺炎放线杆菌中的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 血清型 肠菌素 促生长
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育肥猪伪狂犬病病毒、蓝耳病病毒和胸膜肺炎放线杆菌混合感染案例分析 被引量:2
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作者 张敏 张坤 《今日养猪业》 2024年第2期49-51,共3页
【目的】为猪场防治猪伪狂犬病提供经验借鉴,提升猪场疫病防控水平,提高养殖经济效益。【方法】介绍一起猪伪狂犬病病毒(PRV)变异毒株引起17~18周龄生长育肥猪陆续出现严重呼吸道疾病(死亡率高达10%)的案例,通过病猪解剖、胸膜肺炎放线... 【目的】为猪场防治猪伪狂犬病提供经验借鉴,提升猪场疫病防控水平,提高养殖经济效益。【方法】介绍一起猪伪狂犬病病毒(PRV)变异毒株引起17~18周龄生长育肥猪陆续出现严重呼吸道疾病(死亡率高达10%)的案例,通过病猪解剖、胸膜肺炎放线杆菌(APP)分离和常规抗生素药敏试验,以及蓝耳病病毒(PRRSV)和猪伪狂犬病病毒的病原荧光定量PCR(qPCR)检测,对疫情进行综合诊断。【结果】病料中分离到猪胸膜肺炎放线杆菌,荧光定量PCR检测PRRSV和PRV病原均为阳性,确诊为感染猪伪狂犬病病毒后,继发蓝耳病病毒、胸膜肺炎放线杆菌感染。采取伪狂犬病疫苗免疫+药物保健等措施后,疫情得到控制。【结论】猪场一定要对猪伪狂犬病引起足够的重视,日常生产中需要做好猪伪狂犬病的防控,尤其要执行科学的免疫程序。面对伪狂犬病病毒和其他病原的混合感染,要分清楚哪个是原发病原,哪些是继发感染,从而采取针对性的治疗措施,从根源上控制疫情。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒变异株 猪蓝耳病病毒 胸膜肺炎放线杆菌 细菌分离 荧光定量PCR
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仔猪附红细胞体与传染性胸膜肺炎放线杆菌混合感染的诊治
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作者 张博 《浙江畜牧兽医》 2024年第4期45-45,47,共2页
猪附红细胞体病是由猪附红细胞体附着在猪红细胞上或游离在猪血浆中,从而导致病猪发生贫血、黄疸、电解质失衡等临床症状,属于人畜共患病。猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起的肺部炎症,属于革兰氏阴性杆菌,主要以体温升高,口... 猪附红细胞体病是由猪附红细胞体附着在猪红细胞上或游离在猪血浆中,从而导致病猪发生贫血、黄疸、电解质失衡等临床症状,属于人畜共患病。猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起的肺部炎症,属于革兰氏阴性杆菌,主要以体温升高,口鼻流带血泡沫,胸痛,咳嗽为典型症状。 展开更多
关键词 猪附红细胞体 胸膜肺炎放线杆菌 革兰氏阴性杆菌 猪传染性胸膜肺炎 人畜共患病 猪红细胞 混合感染 典型症状
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藏猪多杀性巴氏杆菌、肺炎支原体、支气管败血波氏杆菌和传染性胸膜肺炎放线杆菌四重PCR方法的建立与初步应用
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作者 肖晨冬 潘瑶 +4 位作者 陈亭宇 王艳琼 赵红燕 陈和强 赵晓刚 《甘肃畜牧兽医》 2024年第6期83-88,共6页
为了迅速、高效检测引起藏猪呼吸道疾病的4种主要病原菌,本研究选择猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)的kmt 1基因、猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mh)的P36ldh基因、猪支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptic... 为了迅速、高效检测引起藏猪呼吸道疾病的4种主要病原菌,本研究选择猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)的kmt 1基因、猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mh)的P36ldh基因、猪支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)的DNT基因和猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,App)的apxIV基因为靶标,设计4组特异性引物,建立灵敏、特异、可同时检测Pm、Mh、Bb和App的四重PCR检测方法,并初步用于调查甘孜州乡城县这4种细菌的流行情况。结果显示:该方法特异性强,不与猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪伪狂犬病毒等9种病原的DNA/RNA反应;敏感性高,Pm、Mh、Bb和App的最低检测量分别为3.13×10^(3)、1.95×10^(3)、4.32×10^(4)和2.45×10^(4);重复性好,批内的试验、批间的试验结果都一致;临床检测显示,Pm、Mh、Bb和App阳性率分别为25.86%(45/174)、29.89%(52/174)、19.54%(34/174)、25.29%(44/174),与已报道的检测方法一致,符合率达100%。因此,本研究建立的四重PCR方法具有迅速、高效、敏感性高、特异性强的优点,对临床防控藏猪细菌性呼吸道疾病及进行流行病学调查具有重要意义。 展开更多
关键词 猪多杀性巴氏杆菌 肺炎支原体 猪支气管败血波氏杆菌 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 四重PCR
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌PCR检测方法的建立
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作者 蔡一鸣 任荣清 +1 位作者 黄碧兴 杨莉 《上海畜牧兽医通讯》 2008年第2期20-21,共2页
关键词 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 PCR检测方法 胸膜肺炎放线杆菌 呼吸道疾病 坏死性肠炎 病理特征 纤维素性 上升趋势
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乌梅等20种中药对胸膜肺炎放线杆菌的体外抗菌活性研究 被引量:16
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作者 康帅 殷中琼 +5 位作者 贾仁勇 代如意 李莉 彭练慈 曲径 梁陈 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期13-17,共5页
【目的】观察乌梅Fructus mume等20种中药的体外抗胸膜肺炎放线杆菌Actinobacillus pleuropneumoniae活性.【方法】通过乙醇回流、水煎煮和超声波等方法对20种中药进行提取,采用二倍稀释法测定其对胸膜肺炎放线杆菌的体外抗菌活性;... 【目的】观察乌梅Fructus mume等20种中药的体外抗胸膜肺炎放线杆菌Actinobacillus pleuropneumoniae活性.【方法】通过乙醇回流、水煎煮和超声波等方法对20种中药进行提取,采用二倍稀释法测定其对胸膜肺炎放线杆菌的体外抗菌活性;并研究抗菌活性较强的几味中药的体外联合抑菌活性.【结果和结论】乌梅、黄连Rhizoma cop-tidis、诃子Terminalia chebula、秦皮Cortex fraxini、地榆Sanguisorbae officinalis、虎杖Polygonum cuspidatum 6种中药提取物对胸膜肺炎放线杆菌的最小抑菌浓度( Minimal inhibitory concentration ,MIC)范围是6.25~50.00 mg/mL;大青叶Isatis indigotica、茵陈Artemisia capillaris、甘草Glycyrrhiza uralensis和白鲜皮Dictamnus dasycarpus 4种中药提取物的MIC范围是50.00~100.00 mg/mL;黄柏Phellodendron amurense、杜仲Eucommia ulmoides、金银花Lonicera japoni-ca、柴胡Bupleurum chinense、蒲公英Taraxacum mongolicum、板蓝根Baphicacanthus cusia、栀子Gardenia jasminoides和黄芪Astragalus membranaceus等10种中药提取物的MIC>100.00 mg/mL.联合抑菌试验结果表明,乌梅、黄连、诃子和虎杖两两联合抑菌指数(FICI)≤1,乌梅、虎杖分别与秦皮的FICI>2.乌梅、黄连、诃子、虎杖、秦皮、地榆对胸膜肺炎放线杆菌均具有较好的体外抗菌活性;乌梅、黄连、诃子和虎杖两两联合为相加、协同作用;秦皮分别与乌梅、虎杖为拮抗作用. 展开更多
关键词 乌梅 黄连 诃子 虎杖 胸膜肺炎放线杆菌 抗菌活性
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猪胸膜肺炎放线杆菌的分离及PCR诊断方法的建立 被引量:19
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作者 梁金华 刘镇明 +3 位作者 顾万军 王淑敏 冼琼珍 黄良宗 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期36-38,共3页
APXⅣA基因是新发现的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的RTX毒素基因,本文通过PCR方法从APP标准血清1型及临床分离到的3株野毒株中扩增出长为442bp的部分APXⅣA基因,而从其它引起猪呼吸道疾病的细菌中无法扩增出此片段。通过玻板凝集试... APXⅣA基因是新发现的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)的RTX毒素基因,本文通过PCR方法从APP标准血清1型及临床分离到的3株野毒株中扩增出长为442bp的部分APXⅣA基因,而从其它引起猪呼吸道疾病的细菌中无法扩增出此片段。通过玻板凝集试验鉴定这三株野毒株为血清1型APP。所建立的PCR方法能检测的DNA量最高敏感度为28pg.表明本文所建立的对猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的PCR诊断方法具有较高的特异性和敏感性。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 分离 聚合酶链式反应 PCR诊断 血清学方法 病原学方法
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及药敏试验 被引量:26
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作者 张东超 杨宁宁 +4 位作者 林静 弓建芳 高珂珂 李小慧 金天明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第6期1604-1609,共6页
为了给天津某规模猪场提供猪传染性胸膜肺炎(PCP)的科学防控和合理的用药方案,本试验对该猪场疑似患PCP的病猪进行临床综合诊断和病理组织学观察,无菌采集病料,通过细菌的分离与培养、镜检、生化试验、卫星试验、PCR检测、动物致病性试... 为了给天津某规模猪场提供猪传染性胸膜肺炎(PCP)的科学防控和合理的用药方案,本试验对该猪场疑似患PCP的病猪进行临床综合诊断和病理组织学观察,无菌采集病料,通过细菌的分离与培养、镜检、生化试验、卫星试验、PCR检测、动物致病性试验及药敏试验等实验室方法对分离菌进行系统分析。结果发现,病猪呼吸困难,病理剖检和病理组织学观察可见有典型的纤维素性肺炎变化;显微镜下分离菌呈多形性的革兰氏阴性杆菌,且其生化试验、卫星试验结果与传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)特性一致;用APP APXⅣA毒素基因特异性引物扩增结果为阳性;该APP分离菌对小鼠具有致病性,且对头孢噻肟、氟苯尼考等药物高度敏感。根据实验室检测结果并结合临床综合诊断,最终判定该细菌分离株为猪传染性APP。 展开更多
关键词 猪传染性胸膜肺炎 胸膜肺炎放线杆菌 分离 PCR检测 药敏试验
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猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及药敏试验 被引量:12
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作者 何启盖 王贵平 +5 位作者 刘军发 陈焕春 周汉华 刘正飞 刘梦元 吴斌 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期360-363,共4页
对从全国 30多个猪场送检的疑似猪传染性胸膜肺炎的病猪中 ,用PPLO培养基进行了胸膜肺炎放线杆菌的分离 ,对分离菌进行了PCR鉴定和生化鉴定 ,并测定了该菌的培养特性、致病性和对药物的敏感性。结果成功分离到了15株胸膜肺炎放线杆菌 ,... 对从全国 30多个猪场送检的疑似猪传染性胸膜肺炎的病猪中 ,用PPLO培养基进行了胸膜肺炎放线杆菌的分离 ,对分离菌进行了PCR鉴定和生化鉴定 ,并测定了该菌的培养特性、致病性和对药物的敏感性。结果成功分离到了15株胸膜肺炎放线杆菌 ,该菌对先锋霉素类和氯霉素较敏感。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 分离鉴定 药敏试验
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猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIVA基因特异片段的克隆和表达 被引量:7
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作者 彭永刚 刘思国 +3 位作者 王牟平 宫强 王春来 沈国顺 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期103-106,共4页
以猪胸膜肺炎放线杆菌的血清7型国内分离株25_4株基因组DNA为模板,PCR方法扩增apxIVA特异片段,PCR产物经纯化后与载体PMD18_T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆到原核表达载体pGEX_6P_1中,构建成重组表达质粒pGEX_apxI... 以猪胸膜肺炎放线杆菌的血清7型国内分离株25_4株基因组DNA为模板,PCR方法扩增apxIVA特异片段,PCR产物经纯化后与载体PMD18_T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆到原核表达载体pGEX_6P_1中,构建成重组表达质粒pGEX_apxIVA,转入到大肠杆菌BL21中,以IPTG进行诱导,进行SDS_PAGE电泳。结果表明,25_4株apxIVAgene与基因库中标准7型apxIVAgene同源性达97%,所表达的融合蛋白相对分子量为44kD,与实际预测相符。apxIVA毒素特异片段的成功表达为猪胸膜肺炎放线杆菌病的诊断打下基础。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 分泌蛋白 载体 克隆 表达 apxⅣA
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌“菌影”的制备 被引量:11
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作者 常月红 刘思国 +6 位作者 王春来 刘慧芳 司薇 彭玮 王聃 赫明雷 杜艳芬 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期674-677,693,共5页
本试验通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将该基因连接到含有λPL/PR-cI857启动阻遏系统的pBV220载体中,从而使裂解基因E和启动阻遏系统λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建重组质粒pBV-E。再将含有E基因的裂解盒插入到App-... 本试验通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将该基因连接到含有λPL/PR-cI857启动阻遏系统的pBV220载体中,从而使裂解基因E和启动阻遏系统λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建重组质粒pBV-E。再将含有E基因的裂解盒插入到App-E.coli穿梭载体pGZRS-18中,构建胸膜肺炎放线杆菌打孔质粒。采用电击穿孔法将其转入胸膜肺炎放线杆菌中,含有打孔质粒的胸膜肺炎放线杆菌在28℃条件下生长到对数生长期,升温42℃诱导E基因的表达,制备了胸膜肺炎放线杆菌菌影。电镜观察菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。本试验为进一步研究菌影这一新型菌苗及佐剂奠定了基础。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 菌影 裂解基因
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猪的胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立 被引量:18
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作者 米丰泉 陈小玲 +2 位作者 王翠敏 赵玉军 王凤强 《动物医学进展》 CSCD 2005年第5期85-88,共4页
在已经建立猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)、猪多杀性巴氏杆菌(PM)、副猪嗜血杆菌(HPS)的单项PCR诊断方法的基础上,通过对扩增条件的优化,成功地建立了APP、PM、HPS的复合PCR实验室诊断方法,利用一次PCR反应,即可同时扩增出APP的342bp、PM的45... 在已经建立猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)、猪多杀性巴氏杆菌(PM)、副猪嗜血杆菌(HPS)的单项PCR诊断方法的基础上,通过对扩增条件的优化,成功地建立了APP、PM、HPS的复合PCR实验室诊断方法,利用一次PCR反应,即可同时扩增出APP的342bp、PM的457 bp 和HPS 的821 bp 的特异性片段。该复合PCR 能同时检测到100 个每种细菌或50 pg 的APP 或HPS 的DNA和500 pg的PM的DNA。该三重复合PCR的敏感性同已报道的单PCR 一致。该方法的建立对临床上进行这3 种疾病的鉴别诊断和混合感染的检测都具有重要意义。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 猪多杀性巴氏杆菌 副猪嗜血杆菌 复合PCR
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