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EGCG对Ⅰ型胶原酶结构及水解活性的影响
1
作者 周雪伟 伍思进 程海明 《皮革科学与工程》 北大核心 2025年第2期23-29,共7页
制革生产过程中酶脱毛方法容易造成胶原蛋白过度水解,粒面损伤,为保证最终成革质量,对脱毛过程中胶原酶活性的调控至关重要。对混合孵育的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)与Ⅰ型胶原酶进行了胶原蛋白水解活力的测定,同时通过紫外光谱、... 制革生产过程中酶脱毛方法容易造成胶原蛋白过度水解,粒面损伤,为保证最终成革质量,对脱毛过程中胶原酶活性的调控至关重要。对混合孵育的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)与Ⅰ型胶原酶进行了胶原蛋白水解活力的测定,同时通过紫外光谱、荧光光谱和分子对接技术探究EGCG对Ⅰ型胶原酶的结构影响。实验结果表明,EGCG的添加可以有效抑制Ⅰ型胶原酶的活性,当浓度为100μmol/L时,对Ⅰ型胶原酶的胶原水解活性的抑制率达到86.06%。EGCG与Ⅰ型胶原酶活性中心的催化Zn(Ⅱ)离子配位,并与蛋白酶分子中的氨基酸残基存在氢键和疏水相互作用,导致蛋白酶的荧光发生猝灭,胶原酶活力降低。研究结果为胶原酶活性调控剂的筛选和设计提供了思路。 展开更多
关键词 ⅰ型胶原酶 EGCG 分子对接 荧光光谱 酶活力调控
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CaMKⅡ抑制剂抑制AngⅡ或电场刺激诱导的心肌成纤维细胞TNF-α、TGF-β_1及collagenⅠ、Ⅲ的表达 被引量：5
2
作者 钟拥军 陈东芹 姚小燕 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1549-1554,共6页
目的:观察钙-钙调素依赖性蛋白激酶(CaMK)Ⅱ在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)或电场刺激(EFS)诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖、分泌细胞因子及胶原酶表达中的作用及其机制。方法:培养新生1-3 d乳鼠心肌成纤维细胞(3代),分为正常对照组(control)、0.... 目的:观察钙-钙调素依赖性蛋白激酶(CaMK)Ⅱ在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)或电场刺激(EFS)诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖、分泌细胞因子及胶原酶表达中的作用及其机制。方法:培养新生1-3 d乳鼠心肌成纤维细胞(3代),分为正常对照组(control)、0.1μmol/L AngⅡ组、0.1μmol/L AngⅡ+0.5μmol/L CaMKⅡ抑制剂KN92组、0.1μmol/L AngⅡ+0.5μmol/L CaMKⅡ抑制剂KN93组、0.1μmol/L AngⅡ+0.5μmol/L CaMKⅡ抑制剂AIP组;10 V1.0 Hz EFS组、10 V 1.0 Hz EFS+0.5μmol/L KN92组、10 V 1.0 Hz EFS+0.5μmol/L KN93组、10 V1.0 Hz EFS+0.5μmol/L AIP组、10 V1.0 Hz EFS+0.1μmol/L AngⅡ组。MTT法测定心肌成纤维细胞增殖;ELISA法测定细胞因子(TGF-β1,TNF-α)分泌;RT-PCR检测TGF-β1、TNF-α、collagenⅠ、ⅢmRNA水平。结果:CaMKⅡ抑制剂(0.5μmol/L KN93,0.5μmol/L AIP)能预防AngⅡ或EFS诱导的心肌成纤维细胞增殖;CaMKⅡ抑制剂(0.5μmol/L KN93,0.5μmol/L AIP)可预防AngⅡ或EFS引起的细胞培养上清液TGF-β1、TNF-α含量及相应mRNA表达增加。CaMKⅡ抑制剂(0.5μmol/L AIP,1.0μmol/L AIP)预防0.1μmol/L AngⅡ引起的collagenⅠ、Ⅲ表达增加。结论:抑制CaMKⅡ对AngⅡ或EFS诱导的心肌成纤维细胞增殖具有预防作用,其机制可能与CaMKⅡ抑制剂抑制TGF-β1、TNF-α以及胶原的表达有关。 展开更多
关键词 血管紧张素Ⅱ 电场刺激 钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ 转化生长因子β 肿瘤坏死因子 胶原酶ⅰ 胶原酶Ⅲ
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马脐静脉内皮细胞分离培养及其功能验证
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作者 赵比力格 温鑫 +7 位作者 伊敏娜 才文道力玛 神英超 斯琴 照伦其其格 任宏 芒来 格日乐其木格 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期2953-2962,共10页
【目的】建立一种简便且高效的体外马脐静脉内皮细胞(equine umbilical vein endothelial cells,eUVECs)分离和培养方法,并提供一个可靠的细胞模型,用于研究马的血管生成功能。【方法】在无菌条件下,从马脐带中分离静脉,并用PBS液彻底... 【目的】建立一种简便且高效的体外马脐静脉内皮细胞(equine umbilical vein endothelial cells,eUVECs)分离和培养方法,并提供一个可靠的细胞模型,用于研究马的血管生成功能。【方法】在无菌条件下,从马脐带中分离静脉,并用PBS液彻底冲洗。使用0.2%Ⅰ型胶原酶对脐静脉进行消化25~30 min后,收集分离的eUVECs进行培养。每12 h使用倒置显微镜观察eUVECs的生长状况。使用CCK-8法测定第1代(P1)和P3代eUVECs在7 d内的D450 nm值,并绘制生长曲线。通过免疫荧光染色方法鉴定内皮细胞标记物CD31和CD34的表达情况。使用间充质干细胞成脂和成骨分化诱导试剂诱导eUVECs,以验证其是否具有分化特性。确定内皮细胞后,添加梯度上升浓度(5、10、15、20、25 ng/mL)的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激eUVECs,使用CCK-8法检测细胞活性,观察细胞形态变化。使用Matrigel法培养eUVECs,用ImageJ软件分析数据,并统计新生血管的4个指标:成管交叉点、成管长度、成管数和成管面积。寻找体外血管生成能力的最佳TNF-α刺激浓度。【结果】使用0.2%Ⅰ型胶原酶消化法分离的eUVECs 4~5 d内的汇合度达到90%。在倒置显微镜下观察,这些细胞生长良好并呈铺路石状排列。通过免疫荧光染色确认了CD31和CD34在eUVECs中的阳性表达;并且eUVECs表现出薄弱的成脂和成骨分化能力。在Matrigel法培养条件下,20 ng/mL TNF-α处理组的成管交叉点数、成管长度、成管数和成管面积等血管形成能力指标最高,且极显著高于对照组(P<0.01)。然而,在常规培养条件下,随着TNF-α浓度增加到15 ng/mL,eUVECs的增殖受到显著抑制甚至开始导致细胞的凋亡。【结论】Ⅰ型胶原酶脐带注满消化法能够成功分离培养出原代eUVECs,20 ng/mL TNF-α显著增强eUVECs体外血管生成能力,eUVECs可以作为体外研究血管生成的细胞模型。 展开更多
关键词 马 脐静脉内皮细胞 ⅰ型胶原酶消化法 培养鉴定 TNF-α 血管新生
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奶牛乳腺上皮细胞的培养及NOD2定位 被引量：2
4
作者 徐丹丹 王刚 《养殖与饲料》 2019年第6期6-7,共2页
为获得纯净的奶牛乳腺上皮细胞并对细胞中的NOD2受体进行定位,本试验采用胶原酶Ⅰ消化法培养奶牛乳腺上皮细胞,通过免疫荧光技术对细胞进行鉴定并对细胞中NOD2进行定位。结果显示:本试验获得了纯净的奶牛乳腺上皮细胞;NOD2受体多表达于... 为获得纯净的奶牛乳腺上皮细胞并对细胞中的NOD2受体进行定位,本试验采用胶原酶Ⅰ消化法培养奶牛乳腺上皮细胞,通过免疫荧光技术对细胞进行鉴定并对细胞中NOD2进行定位。结果显示:本试验获得了纯净的奶牛乳腺上皮细胞;NOD2受体多表达于奶牛乳腺上皮细胞的细胞核中,且以核仁的表达量最高。 展开更多
关键词 奶牛 乳腺上皮细胞 胶原酶ⅰ NOD2
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