含patatin样磷脂酶结构域蛋白7通过过氧化物酶体增殖物激活受体γ促进巨噬细胞M2型极化

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作者 王宇 黄飞飞 +2 位作者 何晓红 孙全 常平安 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1193-1201,共9页

溶血磷脂酰胆碱(LPC)在免疫反应、组织炎症和重塑中调控巨噬细胞极化的动态和整体过程。含patatin样磷脂酶结构域蛋白7(PNPLA7)是近年发现的优先水解LPC的溶血磷脂酶。然而,直到现在仍不清楚PNPLA7在巨噬细胞极化中的表达和作用。本研... 溶血磷脂酰胆碱(LPC)在免疫反应、组织炎症和重塑中调控巨噬细胞极化的动态和整体过程。含patatin样磷脂酶结构域蛋白7(PNPLA7)是近年发现的优先水解LPC的溶血磷脂酶。然而,直到现在仍不清楚PNPLA7在巨噬细胞极化中的表达和作用。本研究发现,PNPLA7在白细胞介素4(IL-4)刺激的巨噬细胞向替代激活(M2)表型的极化过程中上调(P<0.05)。本文发现,PNPLA7的敲低和过表达分别降低和增加了M2标记基因,包括精氨酸酶1(Arg1)和类几丁质酶3(Ym1)的表达(P<0.05)。进一步的研究表明,PNPLA7在M2极化过程中调节过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在mRNA和蛋白质水平上的表达(P<0.05)。然而,信号转导和转录激活因子6(STAT6)的磷酸化不受PNPLA7的影响。这些发现表明,PNPLA7通过PPARγ相关机制促进巨噬细胞抗炎M2型极化。 展开更多

关键词 M2巨噬细胞 溶血卵磷脂 含patatin样磷脂酶结构域蛋白7 过氧化物酶体增殖物激活受体Γ

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Toll样受体4接头分子对乳酸诱导巨噬细胞M2极化的促进作用及其机制 被引量：3

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作者 陈为 沈楠 +4 位作者 韩宛娜 郗艳丽 任旷 金连海 许娜 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1190-1199,共10页

目的:探讨Toll样受体4 (TLR4)接头分子髓样分化因子88 (MyD88)和诱导β干扰素的Toll/白细胞介素1 (IL)受体(TIR)结构域衔接蛋白(TRIF)基因敲除后对乳酸诱导巨噬细胞极化的促进作用,初步阐明乳酸免疫调控的可能机制。方法:体外培养小鼠... 目的:探讨Toll样受体4 (TLR4)接头分子髓样分化因子88 (MyD88)和诱导β干扰素的Toll/白细胞介素1 (IL)受体(TIR)结构域衔接蛋白(TRIF)基因敲除后对乳酸诱导巨噬细胞极化的促进作用,初步阐明乳酸免疫调控的可能机制。方法:体外培养小鼠巨噬细胞Raw264.7,采用慢病毒法构建CRISPR/Cas9基因编辑载体,定向敲除MyD88和TRIF基因(MyD88-KO组和TRIF-KO组),设未感染的Raw264.7细胞为对照组,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法检测基因敲除效果。实验分为未处理Raw264.7细胞组、Raw264.7+乳酸组、MyD88-KO组、MyD88-KO+乳酸组、TRIF-KO组和TRIF-KO+乳酸组。15 mmol·L^(-1)乳酸诱导24 h后进行各指标检测。RT-qPCR法检测各组细胞中M2极化表型分子巨噬细胞甘露糖受体CD206和精氨酸酶1(Arg1) mRNA表达水平,光学显微镜下观察各组细胞形态表现,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞上清中肿瘤坏死因子α (TNF-α)、γ干扰素(INF-γ)和白细胞介素10 (IL0)水平,Western blotting法检测各组细胞中核因子κB (NF-κB)信号通路相关蛋白表达水平。采用Autodock软件将乳酸分别与TLR4、MyD88和TRIF分子对接并观察其结合情况。结果:采用CRISPR/Cas9技术进行基因定向敲除后,与对照组比较,MyD88-KO组和TRIF-KO组细胞中MyD88和TRIF mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。乳酸作用24 h后,与未处理Raw264.7细胞组比较,Raw264.7+乳酸组细胞中M2极化标志物CD206和Arg1 mRNA表达水平明显升高(P<0.05);与MyD88-KO组比较,MyD88-KO+乳酸组细胞中CD206和Arg1 mRNA表达水平均升高(P<0.05);与TRIF-KO组比较,TRIF-KO+乳酸组细胞中CD206和Arg1 mRNA表达水平均降低(P<0.05)。细胞形态表现,Raw264.7+乳酸组细胞表现出M2极化形态,即体积增大、明显突起伪足和偏锥形细胞比例增加;MyD88-KO+乳酸组细胞同样表现出M2极化形态变化;TRIF-KO+乳酸组细胞形态变化不明显。ELISA法检测,与未处理Raw264.7细胞组比较,Raw264.7+乳酸组细胞中TNF-α水平明显降低(P<0.05),INF-γ和IL0水平差异无统计学意义(P>0.05);与MyD88-KO组比较,MyD88-KO+乳酸组细胞中TNF-α水平明显降低(P<0.05),INF-γ水平差异无统计学意义(P>0.05),IL0水平明显升高(P<0.05);与TRIF-KO组比较,TRIF-KO+乳酸组细胞中TNF-α水平明显升高(P<0.05),INF-γ和IL0水平差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting法检测,与未处理Raw264.7组比较,Raw264.7+乳酸组、MyD88-KO组、MyD88-KO+乳酸组、TRIF-KO组和TRIF-KO+乳酸组细胞中TLR4蛋白表达水平差异均无统计学意义(P>0.05),Raw264.7+乳酸组细胞中核因子κB抑制蛋白α (IκB-α)和p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与MyD88-KO组比较,MyD88-KO+乳酸组细胞中IκB-α和p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与TRIF-KO组比较,TRIF-KO+乳酸组细胞中IκB-α和p65蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。分子对接,乳酸分别与TLR4、MyD88和TRIF形成氢键数为2、4和4,结合能分别为-2.72、-3.24和-3.66。结结论论:乳酸作用巨噬细胞后,可通过调控TRIF抑制IκB-α活性进而抑制NF-κB,促进M2极化。 展开更多

关键词 TOLL样受体4 髓样分化因子88 诱导β干扰素的TIR结构域衔接蛋白 乳酸 巨噬细胞

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NLRC3通过抑制STING信号通路, 减轻类风湿关节炎患者巨噬细胞焦亡诱导的免疫炎症反应 被引量：3

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作者 张雪芬 孙玥 张皖东 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期818-825,共8页

目的探索含胱天蛋白酶激活和募集结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体3(NLRC3)在RA患者巨噬细胞焦亡诱导的免疫炎症反应中的作用及潜在的机制。方法按照入组标准选取50名类风湿关节炎(RA)患者和10名健康志愿者,提取外周血巨噬细胞,根据分... 目的探索含胱天蛋白酶激活和募集结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体3(NLRC3)在RA患者巨噬细胞焦亡诱导的免疫炎症反应中的作用及潜在的机制。方法按照入组标准选取50名类风湿关节炎(RA)患者和10名健康志愿者,提取外周血巨噬细胞,根据分组要求进行转染处理,分为正常健康对照(NC)组、RA巨噬细胞模型(RA-MC)组、RA巨噬细胞模型联合NLRC3过表达(RA-MC联合pcDNA3.1-NLRC3)组、RA巨噬细胞模型联合NLRC3敲低(RA-MC联合siRNA-NLRC3)组、RA巨噬细胞模型联合干扰素基因刺激因子(STING)过表达(RA-MC联合pcDNA3.1-STING)组、RA巨噬细胞模型联合STING敲低(RA-MC联合siRNA-STING)组,采用透射电镜观察各组巨噬细胞焦亡的情况,实时定量PCR检测各组巨噬细胞中NLRC3、STING、胱天蛋白酶1(caspase-1)、消皮素D(GSDMD)的mRNA表达,ELISA测定各组巨噬细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18的水平。结果与NC组相比,RA-MC组中巨噬细胞表现出细胞焦亡的特点;与RA-MC组相比,RA-MC联合pcDNA3.1-NLRC3组和RA-MC联合siRNA-STING组中细胞焦亡情况改善,RA-MC联合siRNA-NLRC3组和RA-MC联合pcDNA3.1-STING组中细胞焦亡情况加重;与NC组相比,RA-MC组中STING、caspase-1、GSDMD的mRNA相对表达水平升高,炎症因子IL-1β、IL-18的水平也升高,而NLRC3的mRNA相对表达水平降低;与RA-MC组相比,RA-MC联合pcDNA3.1-NLRC3组和RA-MC联合siRNA-STING组中caspase-1、GSDMD的mRNA相对表达水平降低,炎症因子IL-1β、IL-18的水平也降低,RA-MC联合siRNA-NLRC3组和RA-MC联合pcDNA3.1-STING组的情况则与之相反;同样与RA-MC组相比,RA-MC联合pcDNA3.1-NLRC3组中STING的mRNA相对表达水平会降低,RA-MC联合siRNA-NLRC3组中STING的mRNA相对表达水平升高。结论NLRC3可通过抑制STING信号通路,减少caspase-1、GSDMD焦亡蛋白的产生,进而拮抗巨噬细胞焦亡,降低炎症因子IL-1β、IL-18的水平,从而减轻RA患者的免疫炎症反应。 展开更多

关键词 类风湿关节炎(RA) 含胱天蛋白酶激活和募集结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体3(NLRC3) 干扰素基因刺激因子(STING)信号通路 巨噬细胞焦亡 免疫炎症反应

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广叶绣球菌水溶性多糖结构表征及其对巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响 被引量：13

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作者 谢添 郝正祺 +3 位作者 常明昌 孟俊龙 刘靖宇 冯翠萍 《山西农业科学》 2021年第2期150-155,共6页

试验采用超声波辅助水提醇沉法结合DEAE-52和Sephadex G-100柱从广叶绣球菌子实体中提取纯化得到水溶性多糖组分SLP-a和SLP-b,之后运用高效凝胶渗透色谱法和离子色谱法分析SLP-a和SLP-b分子质量及单糖组成,以傅里叶红外色谱法、扫描电... 试验采用超声波辅助水提醇沉法结合DEAE-52和Sephadex G-100柱从广叶绣球菌子实体中提取纯化得到水溶性多糖组分SLP-a和SLP-b,之后运用高效凝胶渗透色谱法和离子色谱法分析SLP-a和SLP-b分子质量及单糖组成,以傅里叶红外色谱法、扫描电镜和原子力显微镜对SLP-a和SLP-b红外光谱特征和形貌特征进行结构表征,最后通过噻唑兰比色法(MTT)研究SLP-a和SLP-b对巨噬细胞RAW264.7增殖活力的影响。结果表明,SLP-a和SLP-b分子质量分别为6346 u~125 ku和217 u~196 ku;SLP-a由摩尔比为64∶1∶19的果糖、木糖、甘露糖组成,SLP-b由摩尔比为12∶1∶6∶3的葡萄糖、木糖、半乳糖、甘露糖组成;SLP-a分子呈现为少分支及单链状构象,SLP-b分子呈现为球形及大小不一短链构象;SLP-a和SLP-b表观均为簇状堆积,交织,结构规律性不强,具有一定粗糙、紧密、集中的网状结构;SLP-a与SLP-b均能促进巨噬细胞RAW264.7的增殖,具有潜在的免疫调节能力。 展开更多

关键词 广叶绣球菌 水溶性多糖 分离纯化 高效凝胶渗透色谱法 离子色谱法 结构表征 巨噬细胞RAW264.7

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广叶绣球菌中性多糖对巨噬细胞RAW 264.7细胞因子及TLR2受体的影响 被引量：2

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作者 魏欣 王萌皓 +4 位作者 云少君 程艳芬 曹谨玲 常明昌 冯翠萍 《山西农业科学》 2022年第4期447-454,共8页

真菌多糖主要通过TLRs受体介导吞噬细胞分泌细胞因子而进行免疫调节作用,为探究广叶绣球菌中性多糖(SNP)对巨噬细胞RAW 264.7细胞因子的分泌及TLR2受体是否介导此作用,首先采用传统水提法,经HZ-830大孔树脂、DEAE-52和Sepharose CL-6B... 真菌多糖主要通过TLRs受体介导吞噬细胞分泌细胞因子而进行免疫调节作用,为探究广叶绣球菌中性多糖(SNP)对巨噬细胞RAW 264.7细胞因子的分泌及TLR2受体是否介导此作用,首先采用传统水提法,经HZ-830大孔树脂、DEAE-52和Sepharose CL-6B柱分离纯化后得到SNP,利用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定SNP分子质量,利用离子色谱法(IC)和傅里叶红外色谱法(FT-IR)分析单糖组成和结构表征;然后通过MTT比色法分析SNP对巨噬细胞RAW 264.7增殖活力的影响,以SNP最佳浓度作用,通过酶联免疫吸附测定法检测巨噬细胞RAW 264.7分泌的细胞因子含量;最后通过SNP处理TLR2抗体作用的吞噬细胞,分析TLR2受体是否对SNP调节巨噬细胞RAW 264.7细胞因子的分泌具有介导作用。结果表明,SNP分子质量为3.2×10;u,由摩尔比为6∶12∶63∶10∶5的阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖组成,不含呋喃糖;一定浓度范围内的SNP能显著促进RAW 264.7的增殖,其最佳作用质量浓度为250μg/mL;此浓度下,RAW 264.7的NO、IL-6、TNF-α、IFN-β细胞因子的分泌量最高,与空白对照差异极显著,但均低于脂多糖(LPS)的作用;而加入TLR2抗体后,SNP组巨噬细胞RAW 264.7的上述各细胞因子的分泌量相较未加TLR2抗体组均降低,但除IL-6细胞因子外差异均不显著。由此可见,SNP可促进巨噬细胞RAW 264.7的增殖及细胞因子的分泌,但不是通过TLR2受体介导。 展开更多

关键词 广叶绣球菌中性多糖 巨噬细胞RAW 264.7 高效凝胶渗透色谱法 细胞因子 TLR2受体

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神经调节素受体降解蛋白1调控巨噬细胞极化对成纤维细胞功能的影响 被引量：2

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作者 贾康 张志 +5 位作者 刘昌玲 曹雯娟 刘志河 陈宾 汤文彬 李孝建 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1003-1009,共7页

目的探讨E3连接酶神经调节素受体降解蛋白1(neuregulin receptor degradation protein 1,Nrdp1)调控巨噬细胞极化对成纤维细胞功能的影响。方法分别以内毒素(lipopolysaccharide, LPS)和γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)混合剂、白细胞介... 目的探讨E3连接酶神经调节素受体降解蛋白1(neuregulin receptor degradation protein 1,Nrdp1)调控巨噬细胞极化对成纤维细胞功能的影响。方法分别以内毒素(lipopolysaccharide, LPS)和γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)混合剂、白细胞介素13(interleukin-13,IL-13)诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞为M1型巨噬细胞(简称M1)和M2型巨噬细胞(简称M2);流式细胞仪、Western blot分别检测M1表面标记蛋白CD11c、特异性分泌物——诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxide synthase, iNOS)及M2表面标记蛋白CD206、特异性分泌物——精氨酸酶1(arginine1,Arg1)的表达。转染siRNA-Nrdp1 24 h, Western blot检测Nrdp1表达;建立巨噬细胞与成纤维细胞的Transwell共培养体系,按添加的诱导剂不同,分为LPS组(LPS及IFN-γ共同诱导)、LPS-NC组(siRNA阴性Nrdp1无关序列对照组)、LPS-siRNA-Nrdp1组(转染siRNA-Nrdp1质粒)及对应的IL-13组、IL-13-NC组、IL-13-siRNA-Nrdp1组;培养8、12、24 h, CCK-8检测成纤维细胞增殖情况,ELISA检测转化生长因子β1(transforming growth factor-beta1, TGF-β1)、Ⅰ型前胶原含量。对数据行析因设计方差分析、Bonferroni法检验。结果 LPS诱导的巨噬细胞中,M1表面标记蛋白CD11c阳性细胞比例显著高于对照组(P<0.05);IL-13诱导的巨噬细胞中,M2表面标记蛋白CD206阳性细胞比例显著高于未诱导组(P<0.05);LPS组M1特异性分泌物iNOS表达量显著高于对照组(P<0.01)及IL-13组(P<0.01);IL-13组M2型特异性分泌物Arg1显著高于对照组及LPS组(P<0.01)。siRNA-Nrdp1干扰巨噬细胞24 h后,Western blot检测结果显示,干扰组(siRNA-Nrdp1组)Nrdp1的蛋白表达量明显低于空白对照组(P<0.01)及阴性对照组(P<0.01)。共培养24 h后,CCK-8检测结果显示,IL-13-siRNA-Nrdp1组成纤维细胞增殖数量明显低于IL-13组及IL-13-NC组(P<0.01);ELISA检测结果显示,IL-13-siRNA-Nrdp1组TGF-β1含量明显低于IL-13组及IL-13-NC组(P<0.01),IL-13-siRNA-Nrdp1组Ⅰ型前胶原含量明显低于IL-13组(P<0.01)。结论通过siRNA干扰Nrdp1合成,影响巨噬细胞向M2型极化,可抑制M2型巨噬细胞与成纤维细胞共培养体系中成纤维细胞的增殖,减少共培养体系中成纤维细胞TGF-β1及Ⅰ型前胶原的分泌。 展开更多

关键词 巨噬细胞 极化 神经调节素受体降解蛋白1 转化生长因子Β1 Ⅰ型前胶原

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巨噬细胞的Toll样受体信号串联自噬与吞噬作用

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作者 占贞贞 刘秋燕 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第2期172-172,共1页

关键词 巨噬细胞 吞噬作用 自噬体 受体信号 TOLL 串联 膜性结构 细胞器

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BLP耐受通过上调MARCO增强巨噬细胞的吞噬能力 被引量：1

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作者 习大林 项静 +6 位作者 蔡军伟 赵舒祺 吉晶晶 李月 苏婷 姜勇 刘靖华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期914-919,共6页

目的:探讨胶原样结构巨噬细胞受体(MARCO)在细菌脂蛋白(BLP)耐受巨噬细胞吞噬能力增强过程中的作用。方法:分离、分化和培养骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs),并制备BLP耐受细胞;利用流式细胞术和荧光显微镜检测并比较BLP耐受与非耐受细胞吞... 目的:探讨胶原样结构巨噬细胞受体(MARCO)在细菌脂蛋白(BLP)耐受巨噬细胞吞噬能力增强过程中的作用。方法:分离、分化和培养骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs),并制备BLP耐受细胞;利用流式细胞术和荧光显微镜检测并比较BLP耐受与非耐受细胞吞噬细菌的能力,同时用流式细胞术和qPCR检测BLP耐受对MARCO蛋白及mRNA表达的影响;进一步利用小干扰RNA下调MARCO表达,通过流式细胞术及荧光技术探讨MARCO对BLP耐受巨噬细胞吞噬能力的影响。结果:BLP耐受巨噬细胞吞噬细菌的量较非耐受巨噬细胞明显增加(P<0.05);同时BLP耐受巨噬细胞膜表面MARCO蛋白表达水平较非耐受细胞明显升高,并且在细菌刺激后进一步增加,MARCO的mRNA水平变化与蛋白水平变化一致;下调MARCO表达后,BLP耐受巨噬细胞对细菌的吞噬能力明显下降,提示BLP耐受巨噬细胞吞噬能力增强与巨噬细胞膜表面MARCO蛋白的表达上调有关。结论:BLP耐受通过上调巨噬细胞膜表面MARCO蛋白的表达,增强其对细菌的吞噬能力。 展开更多

关键词 胶原样结构巨噬细胞受体 巨噬细胞 吞噬 细菌脂蛋白 耐受

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绵羊清道夫受体MARCO原核表达及组织表达分析

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作者 鲁子岳 王钢 +6 位作者 范文雨 薛嘉熹 张秦川 盛金良 贺笋 孙延鸣 张彦兵 《石河子大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第5期648-654,共7页

目的本研究旨在制备绵羊胶原样结构巨噬细胞受体(Macrophage receptor with collagenous structure,MARCO)多克隆抗体,分析MARCO蛋白在不同组织中的表达水平。方法本研究通过实时荧光定量PCR的方法来对绵羊各组织中MARCO的mRNA表达水平... 目的本研究旨在制备绵羊胶原样结构巨噬细胞受体(Macrophage receptor with collagenous structure,MARCO)多克隆抗体,分析MARCO蛋白在不同组织中的表达水平。方法本研究通过实时荧光定量PCR的方法来对绵羊各组织中MARCO的mRNA表达水平进行相对定量分析,并在BL21大肠杆菌中诱导表达,离心获得MARCO重组蛋白包涵体沉淀,利用MARCO包涵体蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,通过ELISA和Western blot测定抗体的效价和特异性,利用Western blot检测绵羊各组织中的MARCO蛋白表达水量。结果MARCO mRNA在各组织中都有表达,在肺脏、淋巴结和扁桃体中MARCO转录水平相对较高;成功诱导表达MARCO重组蛋白,免疫获得的抗体效价较高,特异性强;MARCO蛋白在肺脏、肝脏、脾脏和淋巴结均有表达,但在肺泡巨噬细胞、肾脏与小肠中表达量较低,几乎不表达。结论本研究首次证实绵羊MARCO蛋白在肺泡巨噬细胞不表达,在肺脏、淋巴结中高水平表达,也为进一步研究MARCO蛋白功能提供检测手段。 展开更多

关键词 胶原样结构巨噬细胞受体 清道夫受体 原核表达 组织表达分析 绵羊

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土拉弗朗西斯菌与巨噬细胞膜的早期相互作用 被引量：2

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作者 潘欣 祁建城 +1 位作者 李广波 贾文凯 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第2期1-5,共5页

评估土拉弗朗西斯菌LVS在感染鼠巨噬细胞早期与细胞膜的相互作用。用表达GFP的土拉弗朗西斯菌LVS感染鼠巨噬细胞J774A.1。结合单抗的小窝蛋白-1或转铁蛋白受体-1分别用键合了Alexa594的羊抗鼠二抗显色。土拉弗朗西斯菌疫苗株LVS可以诱... 评估土拉弗朗西斯菌LVS在感染鼠巨噬细胞早期与细胞膜的相互作用。用表达GFP的土拉弗朗西斯菌LVS感染鼠巨噬细胞J774A.1。结合单抗的小窝蛋白-1或转铁蛋白受体-1分别用键合了Alexa594的羊抗鼠二抗显色。土拉弗朗西斯菌疫苗株LVS可以诱导宿主细胞膜伸出伪足,将细菌吸收进入巨噬细胞。分布在细胞膜上的小窝蛋白-1和转铁蛋白受体-1参与巨噬细胞对弗朗西斯菌的摄入。这些发现说明,弗朗西斯菌进入巨噬细胞需要细胞膜微结构域和小窝蛋白;在感染早期转铁蛋白受体-1参与了细菌的摄入,这可能与弗朗西斯菌获取铁以利在胞内生存有关。 展开更多

关键词 巨噬细胞 土拉弗朗西斯菌 微膜结构域 小窝蛋白-1 转铁蛋白受体-1

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曲美他嗪激活自噬增加巨噬细胞胞外诱捕网抑制炎性体减少泡沫细胞胆固醇含量 被引量：4

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作者 李艳红 侯雯莉 +1 位作者 李覃 赵季红 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期969-976,共8页

目的探讨曲美他嗪(TMZ)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导泡沫细胞形成的影响及可能的作用机制。方法应用ox-LDL刺激RAW264. 7细胞建立泡沫细胞模型,分为对照组(培养基)、模型组(60μg/m L ox-LDL刺激)、氯喹(CQ)组(60μg/m L ox-LDL联合1... 目的探讨曲美他嗪(TMZ)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导泡沫细胞形成的影响及可能的作用机制。方法应用ox-LDL刺激RAW264. 7细胞建立泡沫细胞模型,分为对照组(培养基)、模型组(60μg/m L ox-LDL刺激)、氯喹(CQ)组(60μg/m L ox-LDL联合10 mmol/L CQ处理)、TMZ联合CQ组(60μg/m L ox-LDL联合80μmol/L TMZ和10 mmol/L CQ处理)。油红O染色评估泡沫细胞形成情况,ELISA试剂盒检测细胞内总胆固醇(TC)及游离胆固醇(FC)含量;单丹磺酰尸胺(MDC)染色观察自噬; Picogreen荧光染色及荧光定量PCR检测巨噬细胞胞外诱捕网(MET)形成及其含量;实时定量PCR检测自噬相关指标微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)、泛素结合蛋白P62、含pyrin结构域NOD样受体家族3 (NLRP3)、含胱天蛋白酶结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶1(caspase-1)及胆固醇流出相关基因ATP结合盒亚家族A成员1(ABCA1)、ATP结合盒亚家族G成员1(ABCG1)的mRNA水平。结果与模型组相比,TMZ联合CQ组LC3B表达增加、P62表达减少,同时TC、FC、胆固醇酯(CE)/TC含量降低,此外NLRP3、ASC及caspase-1的mRNA表达水平均显著下调,MET形成增加。CQ组结果相反。结论曲美他嗪可以通过激活自噬、增强巨噬细胞胞外诱捕网(MET)形成并抑制炎性体形成,从而促进泡沫细胞的胆固醇流出。 展开更多

关键词 曲美他嗪 自噬 巨噬细胞胞外诱捕网(MET) 含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3) 胆固醇流出 泡沫细胞

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单宁酸通过增强小鼠巨噬细胞自噬抑制NLRP3炎性体活化 被引量：2

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作者 宋丹 宋东霁 +2 位作者 王珊 裴令敏 姜钊 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期702-709,共8页

目的探讨单宁酸调节巨噬细胞自噬对炎性体活化的影响。方法提取小鼠原代骨髓巨噬细胞(BMDM),1μg/mL的脂多糖(LPS)预处理后加入(1、10、50、100)μg/mL单宁酸,联合10μmol/L尼日利亚菌素、5 mmol/L三磷酸腺苷(ATP)、50μmol/L氯喹处理。... 目的探讨单宁酸调节巨噬细胞自噬对炎性体活化的影响。方法提取小鼠原代骨髓巨噬细胞(BMDM),1μg/mL的脂多糖(LPS)预处理后加入(1、10、50、100)μg/mL单宁酸,联合10μmol/L尼日利亚菌素、5 mmol/L三磷酸腺苷(ATP)、50μmol/L氯喹处理。Western blot法检测含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、胱天蛋白酶1(caspase-1)和微管相关蛋白1轻链3(LC3)的蛋白表达;透射电镜观察溶酶体或自噬溶酶体的形成;ELISA检测培养细胞上清液白细胞介素1β(IL-1β)的分泌。结果单宁酸下调BMDM的NLRP3蛋白水平并促进自噬体或自噬溶酶体的形成,增强JNK磷酸化、促进BMDM自噬并抑制IL-1β的分泌和caspase-1的切割。结论单宁酸通过增强BMDM自噬抑制NLRP3炎性体活化。 展开更多

关键词 单宁酸 巨噬细胞 自噬 含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3) 炎性体

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柯萨奇病毒B3(CVB3)通过激活NADK2促进小鼠巨噬细胞NLRP3的活化

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作者 桑瑞 魏金环 +3 位作者 潘静莹 杨日云 毛立明 包璟崟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期34-40,共7页

目的研究在柯萨奇病毒B3(CVB3)刺激下,小鼠巨噬细胞中含pyrin结构域NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)表达的变化及机制。方法CVB3刺激RAW264.7细胞、小鼠原代(骨髓来源或腹腔)巨噬细胞以及感染NLRP3短发夹RNA(shRNA-NLRP3)慢病毒的RAW264.7细... 目的研究在柯萨奇病毒B3(CVB3)刺激下,小鼠巨噬细胞中含pyrin结构域NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)表达的变化及机制。方法CVB3刺激RAW264.7细胞、小鼠原代(骨髓来源或腹腔)巨噬细胞以及感染NLRP3短发夹RNA(shRNA-NLRP3)慢病毒的RAW264.7细胞,实时荧光定量PCR检测NLRP3和白细胞介素1β(IL-1β)表达水平;ELISA检测细胞上清中IL-1β的含量;Western blot法检测NLRP3蛋白的变化,免疫共沉淀(Co-IP)法检测NLRP3相互作用蛋白的表达。结果CVB3刺激RAW264.7细胞、骨髓来源或腹腔巨噬细胞后,NLRP3和IL-1β表达明显升高;下调NLRP3后,IL-1β分泌明显减少;NLRP3抗体Co-IP所得复合物银染,组间差异蛋白经质谱分析鉴定为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶2(NADK2),证明CVB3诱导NADK2与NLRP3相互作用。结论CVB3通过激活NADK2促进巨噬细胞NLRP3活化,增加炎症因子IL-1β表达和释放。 展开更多

关键词 含pyrin结构域NOD样受体家族蛋白3(NLRP3) 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶2(NADK2) 柯萨奇病毒B3(CVB3) 巨噬细胞

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绵羊清道夫受体MARCO基因启动子克隆及生物信息学分析

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作者 陈佳阔 曹鑫艳 +3 位作者 魏立翔 高之煜 孙延鸣 张彦兵 《动物医学进展》 北大核心 2022年第12期56-60,共5页

为了分析绵羊清道夫受体MARCO基因的启动子序列特点,初步研究其功能及转录调控机理,以绵羊肺组织DNA为模板,通过PCR扩增绵羊MARCO基因启动子序列,对其序列进行生物信息学分析,并构建双荧光素酶报告基因载体。结果显示,成功克隆绵羊MARC... 为了分析绵羊清道夫受体MARCO基因的启动子序列特点,初步研究其功能及转录调控机理,以绵羊肺组织DNA为模板,通过PCR扩增绵羊MARCO基因启动子序列,对其序列进行生物信息学分析,并构建双荧光素酶报告基因载体。结果显示,成功克隆绵羊MARCO基因启动子,大小为1002 bp;预测了其核心活性区域,发现有1个潜在的活性区域位于5′端-790~-741,同时发现了1个TATA-box元件和多个转录因子结合位点,未发现CpG岛。结果表明,位于绵羊MARCO基因启动子区域的TATA-box元件和Sp1、NF-1、NF-κB、C/EBPalp、c-Jun等转录因子,可能影响绵羊MARCO基因启动子的激活,为后续研究MARCO基因的转录调控机理提供了参考依据。 展开更多

关键词 清道夫受体 胶原样结构巨噬细胞受体 启动子 克隆 生物信息学分析

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骨质疏松分子生物学研究专家共识 被引量：14

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作者 《中国骨质疏松杂志》社 《中国骨质疏松杂志》骨代谢专家组 +2 位作者 张萌萌 毛未贤 马倩倩 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期157-162,共6页

骨质疏松分子生物学研究在骨代谢分子信号通路、骨质疏松易感基因、骨质疏松相关蛋白、骨质疏松靶向治疗等方向取得了很大进展。核因子κB受体活化因子/核因子κB受体活化因子配体/骨保护素(RANK/RANKL/OPG)信号通路、核因子κB受体活... 骨质疏松分子生物学研究在骨代谢分子信号通路、骨质疏松易感基因、骨质疏松相关蛋白、骨质疏松靶向治疗等方向取得了很大进展。核因子κB受体活化因子/核因子κB受体活化因子配体/骨保护素(RANK/RANKL/OPG)信号通路、核因子κB受体活化因子(NF-κB)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)信号通路、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)信号通路、钙离子(Ca^(2+))信号通路、酪氨酸激酶、蛋白激酶B(Src、Akt)信号通路、蛋白激酶C(PKC)信号通路等骨代谢重要通路,维生素D受体(VDR)基因、低密度脂蛋白相关蛋白5(LRP5)基因、亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因、雌激素受体(ER)基因等易感基因,载脂蛋白E(Apo E)、Klotho蛋白(Klotho)、骨形态发生蛋白(BMP)、骨涎蛋白(BSP)等相关蛋白,以直接或间接的方式参与调控骨代谢,作用重叠相互联系,互为结果,已在本专业领域达成共识。 展开更多

关键词 核因子κB受体活化因子/核因子κB受体活化因子配体/骨保护素信号通路 核因子κB受体活化因子信号通路 丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶信号通路 巨噬细胞集落刺激因子信号通路 钙离子信号通路 酪氨酸激酶、蛋白激酶B信号通路 蛋白激酶C信号通路 免疫球蛋白样受体信号通路 Wnt/β-连环蛋白信号通路 Hedghog信号通路 骨形态发生蛋白2/Smad信号通路 胞内磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B信号通路 维生素D受体基因 低密度脂蛋白相关蛋白5基因 亚甲基四氢叶酸还原酶基因 雌激素受体基因 Ⅰ型胶原α1和Ⅰ型胶原α2基因 甲状旁腺素基因 降钙素受体基因 甲状旁腺素相关蛋白受体基因 载脂蛋白E Klotho蛋白 骨形态发生蛋白 骨涎蛋白 低密度脂蛋白受体相关蛋白5 激活蛋白-1 硬化蛋白 靶向治疗 骨质疏松 分子生物学

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激素和活性多肽

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《生物技术通报》 CAS CSCD 1996年第3期68-72,共5页

961017 用胶束高效液相层析法分析大肠杆菌发酵液中的重组人生长激素[英]/Strege,M.A.…//J.Chromatogr.-1995,705(1).-155～161[译自DBA,1995,14(17),95-10070] 描述了用反相HPLC法(利用含有n-丙醇和SDS的流动相、胶束条件(pH6.4)检测... 961017 用胶束高效液相层析法分析大肠杆菌发酵液中的重组人生长激素[英]/Strege,M.A.…//J.Chromatogr.-1995,705(1).-155～161[译自DBA,1995,14(17),95-10070] 描述了用反相HPLC法(利用含有n-丙醇和SDS的流动相、胶束条件(pH6.4)检测大肠杆菌发酵液中重组甲二磺酰天冬氨酰生长激素的方法。采用一具有可变波长UV检测器的两泵系统进行层析。 展开更多

关键词 融合蛋白 肠杆菌 集落刺激因子 组织蛋白酶 凝胶过滤 人促甲状腺素受体 巨噬细胞 表达载体 CHO细胞 发酵液

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