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猪轮状病毒胶体金检测试纸条的研制及应用 被引量：3
1
作者 李妍花 周兵强 +11 位作者 康笃利 郝丽影 汪志艳 赵少若 黄甜 庞杏豪 刘俊阳 楚园园 张云静 高晓静 邓均华 田克恭 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1223-1231,共9页
【目的】利用2株猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)单克隆抗体,研制胶体金检测试纸条,用于PoRV的临床快速检测。【方法】制备40 nm粒径的胶体金溶液标记单克隆抗体4G5,将单克隆抗体5G4和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测... 【目的】利用2株猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)单克隆抗体,研制胶体金检测试纸条,用于PoRV的临床快速检测。【方法】制备40 nm粒径的胶体金溶液标记单克隆抗体4G5,将单克隆抗体5G4和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测线和质控线。通过优化胶体金溶液最适pH、标记抗体和检测抗体的最佳使用量,制备PoRV胶体金检测试纸条;对试纸条的灵敏度、敏感性、特异性、重复性和稳定性进行评价。通过检测50份猪粪便样品,计算试纸条与RT-PCR方法的符合率,最后采用试纸条进行1249份临床样品的测定。【结果】经优化后试纸条的最佳参数如下:胶体金溶液最佳pH为8.0,标记抗体4G5和检测抗体5G4最佳使用量分别为14.4μg/mL和1 mg/mL。试纸条能检测出1∶2000稀释的PoRV OSU株(G5型)病毒液,灵敏度为104.5TCID50/mL,且检测PoRV G9、G3和G4型毒株均为阳性。检测猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)、猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)均为阴性。批内和批间重复性、稳定性良好。检测50份猪粪便样品,与RT-PCR方法的阳性符合率为97.5%(39/40),阴性符合率为100%(10/10),总体符合率为98%(49/50)。检测2022年在河南、山西省猪场收集的临床样品1249份,阳性检出率为5.2%。【结论】本研究制备的PoRV胶体金检测试纸条具有良好的敏感性、特异性和重复性等优点,与RT-PCR方法的符合率较高,可用于规模化猪场PoRV的快速检测。 展开更多
关键词 猪轮状病毒(PoRV) 胶体金检测试纸条 快速检测
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牛传染性鼻气管炎病毒胶体金检测试纸条的研制和评价
2
作者 刘文晓 张坤 +1 位作者 程晶 李永清 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第11期70-76,共7页
为建立快速检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的病原学检测方法,本试验采用杂交瘤细胞融合技术制备IBRV单克隆抗体,以其作为检测原,优化反应条件并组装IBRV胶体金检测试纸条,验证该试纸条的特异性、灵敏性、敏感性和稳定性,并与实时荧光定... 为建立快速检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的病原学检测方法,本试验采用杂交瘤细胞融合技术制备IBRV单克隆抗体,以其作为检测原,优化反应条件并组装IBRV胶体金检测试纸条,验证该试纸条的特异性、灵敏性、敏感性和稳定性,并与实时荧光定量PCR(qPCR)进行比较分析。结果显示,共制备7株针对IBRV的单克隆抗体,其中以胶体金标记的单克隆抗体2B7作为捕获抗体、1B9作为检测抗体,建立的胶体金检测试纸条能够检测样品中的IBRV;该试纸条与病毒性腹泻/黏膜病毒、牛冠状病毒和大肠杆菌无交叉反应,检测限为4.04×10~4TCID50/0.1 mL,敏感性为86.7%;在室温条件下保存12个月仍能够有效检测IBRV,说明该试纸条稳定性良好。与qPCR比较结果显示,2种方法检测结果的符合率为92.85%,说明该胶体金检测试纸条能够用于IBRV的临床诊断。结果表明,本试验利用IBRV的单克隆抗体建立的胶体金检测试纸条灵敏度高且特异性好,为IBRV抗原检测和流行病学调查提供技术支持。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV) 胶体金检测试纸条 单克隆抗体
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玉米赤霉醇特异性单克隆抗体及其胶体金检测试纸的研制 被引量：5
3
作者 刘媛 文孟棠 +9 位作者 张霄 徐重新 杨晶祎 张留娟 王恒 何鑫 梁颖 郑勤 夏兴霞 刘贤金 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1101-1107,共7页
为了研究国内制备的玉米赤霉醇单克隆抗体,与其同系物玉米赤霉烯酮交叉反应严重,实际检测存在假阳性的问题,本试验开展了玉米赤霉醇特异性识别单克隆抗体及其胶体金检测试纸的研制工作。试验采用玉米赤霉醇-16-羧丙基醚与牛血清白蛋白偶... 为了研究国内制备的玉米赤霉醇单克隆抗体,与其同系物玉米赤霉烯酮交叉反应严重,实际检测存在假阳性的问题,本试验开展了玉米赤霉醇特异性识别单克隆抗体及其胶体金检测试纸的研制工作。试验采用玉米赤霉醇-16-羧丙基醚与牛血清白蛋白偶联,免疫雌性Balb/c系小鼠;利用单克隆抗体技术完成杂交瘤融合,并用非竞争及竞争ELISA法,对阳性克隆进行鉴定。杂交瘤诱生腹水后,经亲和纯化,用于15 nm胶体金标记,制作玉米赤霉醇胶体金检测试纸。融合细胞经筛选,最终对3株杂交瘤细胞建株,结果均为Ig G1型。其中Mab-1A8诱生腹水效价高达1∶1.28×10^7,对玉米赤霉醇抑制中浓度（I50）为10.25 ng·m L^-1,检测灵敏度（I10）为1.96 ng·m L^-1,线性检测范围在2.96-35.46 ng·m L^-1,对同系物玉米赤霉烯酮的交叉反应率小于0.1%。试验研制的玉米赤霉醇胶体金试纸,检测阈值为2.5μg·m L-1,检测时间为10 min。本研究制备了一种新型玉米赤霉醇特异性单克隆抗体,并研制了以单抗为基础的玉米赤霉醇胶体金快速检测试纸,为玉米赤霉醇残留快速检测提供了灵敏、便捷的新方法。 展开更多
关键词 玉米赤霉醇 单克隆抗体 玉米赤霉醇-16-羧丙基醚 玉米赤霉烯酮 胶体金检测试纸
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猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体的制备及其制备胶体金检测试纸条的应用 被引量：5
4
作者 王莹 白晶晶 +6 位作者 李玉芳 钱鹏 曹玉姣 陈凌燕 郝丽影 邓均华 田克恭 《安徽农业科学》 CAS 2021年第15期99-103,共5页
制备猫泛白细胞减少症病毒(FPV)单克隆抗体,研制胶体金检测试纸条。用FPV临床分离株免疫Balb/c小鼠,取血凝抑制(HI)效价最高的小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,采用HI方法筛选获得2株可稳定分泌FPV单克隆抗体的杂交瘤细胞,并对其用于胶体金... 制备猫泛白细胞减少症病毒(FPV)单克隆抗体,研制胶体金检测试纸条。用FPV临床分离株免疫Balb/c小鼠,取血凝抑制(HI)效价最高的小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,采用HI方法筛选获得2株可稳定分泌FPV单克隆抗体的杂交瘤细胞,并对其用于胶体金检测试纸条进行评价。2株杂交瘤细胞3C3和4A1株,分泌的单克隆抗体重链亚型分别为IgG2b、IgG2a,轻链亚型均为kappa;腹水纯化后单克隆抗体3C3、4A1的HI效价分别为1∶5120、1∶10240。用胶体金标记单克隆抗体4A1,单克隆抗体3C3作为检测线,羊抗鼠二抗作为对照线制备的胶体金检测试纸条,检测FPV病毒液的灵敏度为10^(3.7)TCID_(50)/mL;检测猫源其他病毒如FHV-1、FCV均为阴性;批内和批间重复性检测不同含量的FPV结果一致;检测513份临床样品,与PCR的阳性符合率为76%(71/93),阴性符合率为100%(420/420),总符合率为96%(491/513)。该研究制备的FPV单克隆抗体可用于FPV胶体金检测试纸条的生产,用于FPV的现场快速检测。 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症病毒 单克隆抗体 胶体金检测试纸条
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农药残留胶体金检测方法在蔬菜生产中的应用研究 被引量：6
5
作者 刘雅宁 袁宝凤 《陕西农业科学》 2014年第3期67-68,共2页
介绍了农药残留胶体金检测试纸具有简单快速,操作方便,准确度高等特点,对农药残留胶体金检测试纸在蔬菜生产中应用存在的问题进行了阐述,提出了加大宣传力度、推行标准化生产、推行市场准入制度和推广源头自检新模式等建议。
关键词 胶体金检测试纸 自检 蔬菜
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免疫快速同步检测玉米中5种真菌毒素胶体金试纸条的构建和应用 被引量：5
6
作者 邢常瑞 郑欣 +5 位作者 董雪 李光磊 刘崇靖 张勋 袁建 鞠兴荣 《中国粮油学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期205-210,共6页
玉米作为重要的粮食和饲料来源,容易受到多种真菌毒素的污染,给居民健康和养殖业造成严重的危害。本文优化了适合5种真菌毒素(黄曲霉毒素B1、伏马毒素、T-2毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮)同时提取的样品前处理方法,并构建了5... 玉米作为重要的粮食和饲料来源,容易受到多种真菌毒素的污染,给居民健康和养殖业造成严重的危害。本文优化了适合5种真菌毒素(黄曲霉毒素B1、伏马毒素、T-2毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮)同时提取的样品前处理方法,并构建了5检测线胶体金试纸条,检测结果可以通过肉眼定性,结合Image J软件可以进行定量分析,并应用于实际玉米样品检测。结果表明,最佳提取条件为90%乙腈/水,涡旋20 min,样品的添加回收率为71.9%~113.3%,相对标准偏差为0.9%~7.5%;测定基质添加样品建立标准曲线,通过肉眼判定得到5种真菌毒素的消线值分别为80.0、1 000.0、100.0、400.0、200.0μg/kg;结合Image J软件提取多重检测试纸条的检测线灰度值,结果表明当AFB1、FB1、T-2、DON和ZEN的质量分数为8.0、20.0、10.0、40.0、20.0μg/kg时,各真菌毒素浓度对应的检测线显色值比空白对照显色值低。最后,通过检测11个实际玉米样品,结果表明部分玉米样品受到了不同程度的AFB1、DON和ZEN的污染。因此,本研究开发的免疫快速同步检测玉米中5种真菌毒素胶体金试纸条可以用于玉米中真菌毒素的现场快速筛查。 展开更多
关键词 真菌毒素 玉米 多重检测胶体金试纸条
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不同方法用于检测A亚群和B亚群禽白血病病毒的比较研究
7
作者 赵方钰 崔慧珍 +4 位作者 王一新 常爽 任志浩 崔文平 赵鹏 《山东畜牧兽医》 2025年第11期16-23,共8页
禽白血病病毒(ALV)是种鸡场需要净化根除的重要病原之一,其中A亚群ALV(ALVA)和B亚群ALV(ALV-B)是蛋用型鸡常感染和携带的亚群。出壳雏鸡的检测是实施净化和评估鸡苗洁净度的重要手段。为此,本研究系统比较了6种不同检测试剂盒应用于ALV-... 禽白血病病毒(ALV)是种鸡场需要净化根除的重要病原之一,其中A亚群ALV(ALVA)和B亚群ALV(ALV-B)是蛋用型鸡常感染和携带的亚群。出壳雏鸡的检测是实施净化和评估鸡苗洁净度的重要手段。为此,本研究系统比较了6种不同检测试剂盒应用于ALV-A/B的检测结果。首先,通过卵黄囊接种ALV-A/B于SPF鸡胚,构建雏鸡ALV-A/B携带模型。出壳雏鸡逐一采集胎粪和抗凝血,胎粪滤液和血浆接种DF-1细胞进行病毒分离,维持7 d后收取细胞上清,采用3家公司的p27抗原ELISA试剂盒、磁微粒化学发光检测试剂盒、胶体金检测试纸条、荧光定量PCR检测试剂盒,分别对胎粪样本以及胎粪和血浆的病毒分离细胞上清进行检测,并对各方法的检测结果进行比较分析。结果显示,6种试剂盒对胎粪、胎粪病毒分离上清以及血浆病毒分离上清检测结果的判定总体一致,其中磁微粒化学发光检测阳性样品与阴性样品读值差距大,读数直观易判定。对不同稀释度胎粪的检测结果显示,A公司p27抗原ELISA试剂盒、磁微粒化学发光检测试剂盒和荧光定量PCR更为灵敏,可检出低滴度病原。上述结果显示,不同方法对净化检测的整体判定影响不显著,但针对低滴度样品检测时,不同方法的检出率存在差异,应根据具体情况综合选择。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 A亚群 B亚群 ELISA 磁微粒化学发光技术 胶体金检测试纸条 荧光定量PCR
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番茄细菌性溃疡病病原菌检测鉴定及在植株体内分布规律研究
8
作者 高香 于泽洋 +1 位作者 陈康 史娟 《农业科学研究》 2025年第1期47-52,共6页
对密执安棒形杆菌密执安亚种(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis,简称Cmm)侵染番茄引起的细菌性溃疡病进行田间调查,采用胶体金试纸条和PCR方法,对田间疑似番茄细菌性溃疡病的植株及其根、茎、叶等不同组织进行Cmm检测和... 对密执安棒形杆菌密执安亚种(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis,简称Cmm)侵染番茄引起的细菌性溃疡病进行田间调查,采用胶体金试纸条和PCR方法,对田间疑似番茄细菌性溃疡病的植株及其根、茎、叶等不同组织进行Cmm检测和鉴定。结果表明:番茄苗期至成株期均可发生溃疡病;病情随生育期推移而加重,露地生产的发病程度重于设施栽培的发病程度。分离菌株均为Cmm,随病情加重,病菌随维管束扩散至全株,主要分布在番茄根部、茎秆、叶片、叶柄和果实等组织中,试纸条检测和PCR检测结果一致。 展开更多
关键词 番茄细菌性溃疡病 病原菌鉴定 胶体金试纸条检测 PCR 植株体内分布
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一种孔雀石绿快速检测金标试纸条的优化和评价
9
作者 张亮 谢海平 +4 位作者 马伟成 林颂雄 魏丹燕 郑水和 陈日富 《中国渔业质量与标准》 2013年第1期77-81,共5页
利用竞争抑制免疫层析的原理对某种市售金标试纸条进行优化。结果表明,当用0.007g/mL的硼氢化钾溶液对试纸条优化后,使得该快速检测金标试纸条对结果的判断更准确、清晰,避免了误判。研究说明优化后的试纸条可以用于现场操作,方法简单快... 利用竞争抑制免疫层析的原理对某种市售金标试纸条进行优化。结果表明,当用0.007g/mL的硼氢化钾溶液对试纸条优化后,使得该快速检测金标试纸条对结果的判断更准确、清晰,避免了误判。研究说明优化后的试纸条可以用于现场操作,方法简单快捷,灵敏度高(检测限2.0μg/L),在水产品质量安全执法中和推行水产品市场准入制度方面具有很高的应用和推广价值。 展开更多
关键词 孔雀石绿 胶体金快速检测试纸条 水产品 药物残留
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应用免疫金标检测试纸与其它方法检测猪瘟抗体的比较 被引量：3
10
作者 郑则乐 洪英 魏良宇 《中国畜牧兽医》 CAS 2005年第7期51-52,共2页
作者应用免疫金标检测试纸与其它检测猪瘟抗体的方法进行比较,试验结果表明免疫金标检测试纸法检出率与西班牙海博莱公司生产的ELISA试剂盒十分接近,与dot-ELISA也较为接近,与正向间接血凝试验有差异,且与猪圆环病毒等无交叉反应,4℃下... 作者应用免疫金标检测试纸与其它检测猪瘟抗体的方法进行比较,试验结果表明免疫金标检测试纸法检出率与西班牙海博莱公司生产的ELISA试剂盒十分接近,与dot-ELISA也较为接近,与正向间接血凝试验有差异,且与猪圆环病毒等无交叉反应,4℃下保存期大于15个月。 展开更多
关键词 猪瘟抗体 胶体金标检测试纸 检测
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