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胰酶酶解/高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法检测虾制品中过敏原蛋白
1
作者
史洪飞
周修齐
+7 位作者
徐伯芃
周用武
徐成鑫
周亦飞
冶金
张吕悦
刘柯宇
郭明鑫
《分析测试学报》
北大核心
2025年第10期2162-2168,共7页
建立了基于特征肽段检测虾制品中过敏原蛋白的胰酶酶解/高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱方法。采用6 mol/L盐酸胍和50 mmol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)缓冲液各700μL分别作为蛋白质的变性提取试剂,通过优化酶解时间和特征肽段...
建立了基于特征肽段检测虾制品中过敏原蛋白的胰酶酶解/高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱方法。采用6 mol/L盐酸胍和50 mmol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)缓冲液各700μL分别作为蛋白质的变性提取试剂,通过优化酶解时间和特征肽段,确定采用50 mmol/L二硫苏糖醇、100 mmol/L碘乙酰胺破坏并抑制二硫键的形成,而后在100μL 500 mmol/L碳酸氢铵弱碱性环境中经10 mg/mL胰蛋白酶酶解,以乙腈和0.1%甲酸水溶液为流动相,采用Caprisil C_(18)-X(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱进行分离,电喷雾双喷离子源(Dual AJS ESI)正离子模式下电离,利用四极杆-飞行时间质谱通过Auto MS/MS采集离子迭代排除的方法循环采样。根据肽段出峰情况,选择IQLLEEDLER作为原肌球蛋白的特征肽段,利用外标法定量。结果证明,实验选取的特征肽段在线性范围内线性关系良好,相关系数(r^(2))为0.9920,检出限为0.68μg/L,定量下限为2.28μg/L,在2、10 mg/kg加标水平下样品的回收率为84.5%~101%。该方法前处理简单、灵敏度高、重现性好、定性定量准确,可为虾过敏原的检验鉴定提供技术支持,并为基于蛋白质特征肽段的动物源成分识别提供方法参考。
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关键词
胰酶酶解
高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法
虾制品
过敏原蛋白
特征肽段
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职称材料
蝇蛆组织匀浆液及其酶解物中抑菌组分的研究
被引量：
3
2
作者
吴杰
邹思湘
+1 位作者
陈伟华
张源淑
《江苏农业科学》
CSCD
北大核心
2007年第4期153-155,共3页
以人工培养的新鲜蝇蛆为原料,采用磷酸盐缓冲液匀浆,经胰蛋白酶酶解、Sephadex G-15层析分离,筛选到了一组具有抑菌活性的肽类物质。试验结果显示,蝇蛆组织匀浆液对大肠杆菌和沙门氏菌的增殖有显著的抑制作用,对金黄色葡萄球菌的增殖有...
以人工培养的新鲜蝇蛆为原料,采用磷酸盐缓冲液匀浆,经胰蛋白酶酶解、Sephadex G-15层析分离,筛选到了一组具有抑菌活性的肽类物质。试验结果显示,蝇蛆组织匀浆液对大肠杆菌和沙门氏菌的增殖有显著的抑制作用,对金黄色葡萄球菌的增殖有显著的促进作用,但加热灭活后其抑菌生物活性丧失;匀浆液经胰酶消化后对上述3种细菌增殖的影响没有变化,煮沸灭活后其生物活性也未见显著变化,表现出较高的热稳定性;胰酶消化产物经Sephadex G-15层析柱分离后得到一种组分保持了对沙门氏菌、大肠杆菌增殖的抑制作用和对金黄色葡萄球菌增殖的促进作用。表明蝇蛆组织中存在着有抑菌活性的肽类物质,具有潜在的开发利用价值。
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关键词
蝇蛆
组织匀浆液
胰酶酶解
液
抑菌
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职称材料
题名
胰酶酶解/高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法检测虾制品中过敏原蛋白
1
作者
史洪飞
周修齐
徐伯芃
周用武
徐成鑫
周亦飞
冶金
张吕悦
刘柯宇
郭明鑫
机构
南京警察学院刑事科学技术学院
青岛海关缉私局大港海关缉私分局
出处
《分析测试学报》
北大核心
2025年第10期2162-2168,共7页
基金
国家重点研发计划项目(2023YFC3304000)
2025年省级大学生创新重点项目(X202512263052)。
文摘
建立了基于特征肽段检测虾制品中过敏原蛋白的胰酶酶解/高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱方法。采用6 mol/L盐酸胍和50 mmol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)缓冲液各700μL分别作为蛋白质的变性提取试剂,通过优化酶解时间和特征肽段,确定采用50 mmol/L二硫苏糖醇、100 mmol/L碘乙酰胺破坏并抑制二硫键的形成,而后在100μL 500 mmol/L碳酸氢铵弱碱性环境中经10 mg/mL胰蛋白酶酶解,以乙腈和0.1%甲酸水溶液为流动相,采用Caprisil C_(18)-X(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱进行分离,电喷雾双喷离子源(Dual AJS ESI)正离子模式下电离,利用四极杆-飞行时间质谱通过Auto MS/MS采集离子迭代排除的方法循环采样。根据肽段出峰情况,选择IQLLEEDLER作为原肌球蛋白的特征肽段,利用外标法定量。结果证明,实验选取的特征肽段在线性范围内线性关系良好,相关系数(r^(2))为0.9920,检出限为0.68μg/L,定量下限为2.28μg/L,在2、10 mg/kg加标水平下样品的回收率为84.5%~101%。该方法前处理简单、灵敏度高、重现性好、定性定量准确,可为虾过敏原的检验鉴定提供技术支持,并为基于蛋白质特征肽段的动物源成分识别提供方法参考。
关键词
胰酶酶解
高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法
虾制品
过敏原蛋白
特征肽段
Keywords
pancreatic enzymolysis
high performance liquid chromatography-quadrupole-time of flight mass spectrometry
shrimp products
allergenic protein
characteristic peptide segments
分类号
O657.63 [理学—分析化学]
O657.7 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
蝇蛆组织匀浆液及其酶解物中抑菌组分的研究
被引量：
3
2
作者
吴杰
邹思湘
陈伟华
张源淑
机构
南京农业大学动物医学院
出处
《江苏农业科学》
CSCD
北大核心
2007年第4期153-155,共3页
基金
国家自然科学基金(编号:39770540)
文摘
以人工培养的新鲜蝇蛆为原料,采用磷酸盐缓冲液匀浆,经胰蛋白酶酶解、Sephadex G-15层析分离,筛选到了一组具有抑菌活性的肽类物质。试验结果显示,蝇蛆组织匀浆液对大肠杆菌和沙门氏菌的增殖有显著的抑制作用,对金黄色葡萄球菌的增殖有显著的促进作用,但加热灭活后其抑菌生物活性丧失;匀浆液经胰酶消化后对上述3种细菌增殖的影响没有变化,煮沸灭活后其生物活性也未见显著变化,表现出较高的热稳定性;胰酶消化产物经Sephadex G-15层析柱分离后得到一种组分保持了对沙门氏菌、大肠杆菌增殖的抑制作用和对金黄色葡萄球菌增殖的促进作用。表明蝇蛆组织中存在着有抑菌活性的肽类物质,具有潜在的开发利用价值。
关键词
蝇蛆
组织匀浆液
胰酶酶解
液
抑菌
分类号
S476 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
胰酶酶解/高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法检测虾制品中过敏原蛋白
史洪飞
周修齐
徐伯芃
周用武
徐成鑫
周亦飞
冶金
张吕悦
刘柯宇
郭明鑫
《分析测试学报》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
蝇蛆组织匀浆液及其酶解物中抑菌组分的研究
吴杰
邹思湘
陈伟华
张源淑
《江苏农业科学》
CSCD
北大核心
2007
3
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职称材料
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