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西门塔尔牛胰腺间充质干细胞分离培养及生物学特性研究
1
作者
王仲发
刘晏辰
+4 位作者
闫炎
李旻娟
何玉楠
关伟军
刘文忠
《中国畜牧兽医》
北大核心
2025年第6期2519-2530,共12页
【目的】分离培养西门塔尔牛胰腺间充质干细胞,建立西门塔尔牛胰腺间充质干细胞系,研究其生物学特性,为西门塔尔牛种质资源的保存提供参考。【方法】采集西门塔尔牛胰腺组织,利用酶消法和组织块贴壁法分离培养胰腺间充质干细胞,并对胰...
【目的】分离培养西门塔尔牛胰腺间充质干细胞,建立西门塔尔牛胰腺间充质干细胞系,研究其生物学特性,为西门塔尔牛种质资源的保存提供参考。【方法】采集西门塔尔牛胰腺组织,利用酶消法和组织块贴壁法分离培养胰腺间充质干细胞,并对胰腺间充质干细胞的生物学特性进行鉴定;利用免疫荧光试验和半定量PCR测定细胞表面标记物(CD34、CD73、CD90、CD166)的表达情况;通过绘制P4、P10、P16代细胞生长曲线及计算群体倍增时间测定细胞增殖能力;通过细胞克隆试验测定细胞克隆形成率,通过划痕试验计算细胞迁移率;对纯化后的细胞分别进行成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞诱导分化,检测胰腺间充质干细胞多向分化能力,并通过染色体核型分析试验检测细胞的遗传稳定性。【结果】采用组织块贴壁法培养可得到胰腺间充质干细胞,且传代到第3代基本纯化。半定量PCR结果显示,表面标记物(CD73、CD90、CD166)呈阳性表达,而与造血细胞相关的表面抗原CD34呈阴性表达。西门塔尔牛胰腺间充质干细胞呈现典型的S型生长曲线,P4、P10、P16代细胞群体倍增时间分别为40.22、43.09和44.50 h,细胞克隆形成率分别为26.25%、19.00%和13.50%。划痕试验测定第3代细胞迁移率为44.44%。在体外诱导分化胰腺间充质干细胞后,结果呈现出清晰的脂滴、软骨团和钙结节。核型分析结果判定,西门塔尔牛胰腺间充质干细胞为正常二倍体核型(2n=60,XY),染色体组未发生变异。【结论】从西门塔尔牛胰腺组织分离培养的胰腺间充质干细胞能够稳定遗传,增殖能力强,且具有向成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞分化的潜能。研究结果可为西门塔尔牛组织修复提供新方法,为西门塔尔牛种质资源的保护和保存提供种子细胞。
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关键词
西门塔尔牛
胰腺间充质干细胞
分离培养
诱导分化
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职称材料
西门塔尔牛胰腺间充质干细胞原代培养及其多向分化潜能研究
被引量：
2
2
作者
王育南
吴月
+2 位作者
宋哈楠
张涛
关伟军
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第11期3786-3796,共11页
旨在对西门塔尔牛胰腺间充质干细胞(pancreatic mesenchymal stem cells,PMSCs)进行原代培养并研究其体外分化潜能,为细胞疗法和组织工程学方面提供新的种子细胞。本研究从3月龄的西门塔尔牛胚胎中无菌分离胰腺组织,分别采用胶原酶消化...
旨在对西门塔尔牛胰腺间充质干细胞(pancreatic mesenchymal stem cells,PMSCs)进行原代培养并研究其体外分化潜能,为细胞疗法和组织工程学方面提供新的种子细胞。本研究从3月龄的西门塔尔牛胚胎中无菌分离胰腺组织,分别采用胶原酶消化法和组织块贴壁法分离PMSCs,进行原代培养;绘制第3代、第9代、第15代细胞生长曲线并测定群体倍增时间及克隆形成能力,采用免疫荧光检测干细胞表面标志物(CD29、CD44、CD73、CD90、CD34和CD45),RT-PCR检测干细胞细胞表面标志物(CD29、CD44、CD73、CD90、CD106、CD166、CD34和CD45);染色体核型分析检测其基因稳定性,通过向成脂、成骨、成软骨和成肝样细胞诱导分化,检测其多向分化潜能。结果表明,两种方法都可成功分离出PMSCs,细胞贴壁后形态均为长梭形,漩涡状生长,生长趋势呈典型的S形;第9代细胞群体倍增时间显著低于第15代而高于第3代(P<0.01);第9代PMSCs克隆形成率显著低于第3代而显著高于第15代(P<0.05);免疫荧光结果表明,PMSCs特异性表达CD29、CD44、CD73和CD90,RT-PCR结果显示PMSCs特异性表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD106和CD166,未表达造血细胞表面标志物CD34和CD45,与国际细胞治疗学会组织干细胞委员会指定的MSCs表面标记物相对应;核型分析表明,PMSCs为正常二倍体(2n=60,XY),染色体基因组未发生变异;特异性染色和RT-PCR结果表明,从西门塔尔牛体内获得的PMSCs可分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞和肝样细胞。本试验证实两种方法均可成功建立西门塔尔牛PMSCs体外分离培养体系,PMSCs具有活性好、增殖速度快的特点,与MSCs有相似的生物学特性和多项分化的潜能。可为组织工程学提供新的种子细胞。
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关键词
胰腺间充质干细胞
西门塔尔牛
原代培养
生物学特征
分化潜能
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职称材料
永生化胎猪胰腺源间充质干细胞移植糖尿病小鼠的研究
被引量：
1
3
作者
张慧茹
李丹
+3 位作者
刘雨潇
王雪琴
李强
冯九星
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2013年第12期131-135,共5页
为研究长春花生物碱(conophylline)诱导永生化猪胰腺源间充质干细胞(iPMSCs)对糖尿病小鼠的治疗效果,将长春花生物碱诱导的iPMSCs细胞移植到裸鼠体内2周后进行致瘤性安全检测;以双硫腙染色(DTZ)检测诱导iPMSCs的胰岛素功能性分化;将诱导...
为研究长春花生物碱(conophylline)诱导永生化猪胰腺源间充质干细胞(iPMSCs)对糖尿病小鼠的治疗效果,将长春花生物碱诱导的iPMSCs细胞移植到裸鼠体内2周后进行致瘤性安全检测;以双硫腙染色(DTZ)检测诱导iPMSCs的胰岛素功能性分化;将诱导的iPMSCs移植到糖尿病模型的小鼠体内,通过监测小鼠体重和血糖的变化,判断长春花生物碱诱导的iPMSCs对糖尿病小鼠的治疗效果。结果表明,诱导后的iPMSCs无致瘤性,呈DTZ阳性。诱导的iPMSCs移植到糖尿病小鼠体内后,与对照组小鼠相比,诱导的细胞会减缓糖尿病小鼠体重的降低趋势,且在短期内(1周)能恢复高血糖至正常水平。说明长春花生物碱具有诱导iPMSCs分泌胰岛素、短期治疗糖尿病的作用。
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关键词
诱导后的永生化胎猪
胰腺
源
间
充质
干细胞
细胞
移植
糖尿病
小鼠
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职称材料
题名
西门塔尔牛胰腺间充质干细胞分离培养及生物学特性研究
1
作者
王仲发
刘晏辰
闫炎
李旻娟
何玉楠
关伟军
刘文忠
机构
山西农业大学动物科学学院
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
出处
《中国畜牧兽医》
北大核心
2025年第6期2519-2530,共12页
基金
国家重点研发计划(2021YFP1200303)。
文摘
【目的】分离培养西门塔尔牛胰腺间充质干细胞,建立西门塔尔牛胰腺间充质干细胞系,研究其生物学特性,为西门塔尔牛种质资源的保存提供参考。【方法】采集西门塔尔牛胰腺组织,利用酶消法和组织块贴壁法分离培养胰腺间充质干细胞,并对胰腺间充质干细胞的生物学特性进行鉴定;利用免疫荧光试验和半定量PCR测定细胞表面标记物(CD34、CD73、CD90、CD166)的表达情况;通过绘制P4、P10、P16代细胞生长曲线及计算群体倍增时间测定细胞增殖能力;通过细胞克隆试验测定细胞克隆形成率,通过划痕试验计算细胞迁移率;对纯化后的细胞分别进行成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞诱导分化,检测胰腺间充质干细胞多向分化能力,并通过染色体核型分析试验检测细胞的遗传稳定性。【结果】采用组织块贴壁法培养可得到胰腺间充质干细胞,且传代到第3代基本纯化。半定量PCR结果显示,表面标记物(CD73、CD90、CD166)呈阳性表达,而与造血细胞相关的表面抗原CD34呈阴性表达。西门塔尔牛胰腺间充质干细胞呈现典型的S型生长曲线,P4、P10、P16代细胞群体倍增时间分别为40.22、43.09和44.50 h,细胞克隆形成率分别为26.25%、19.00%和13.50%。划痕试验测定第3代细胞迁移率为44.44%。在体外诱导分化胰腺间充质干细胞后,结果呈现出清晰的脂滴、软骨团和钙结节。核型分析结果判定,西门塔尔牛胰腺间充质干细胞为正常二倍体核型(2n=60,XY),染色体组未发生变异。【结论】从西门塔尔牛胰腺组织分离培养的胰腺间充质干细胞能够稳定遗传,增殖能力强,且具有向成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞分化的潜能。研究结果可为西门塔尔牛组织修复提供新方法,为西门塔尔牛种质资源的保护和保存提供种子细胞。
关键词
西门塔尔牛
胰腺间充质干细胞
分离培养
诱导分化
Keywords
Simmental cattle
pancreatic mesenchymal stem cells
isolation and culture
induced differentiation
分类号
S852.2 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
西门塔尔牛胰腺间充质干细胞原代培养及其多向分化潜能研究
被引量：
2
2
作者
王育南
吴月
宋哈楠
张涛
关伟军
机构
佳木斯大学基础医学院
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第11期3786-3796,共11页
基金
国家重点研发计划(2021YFD1200303)。
文摘
旨在对西门塔尔牛胰腺间充质干细胞(pancreatic mesenchymal stem cells,PMSCs)进行原代培养并研究其体外分化潜能,为细胞疗法和组织工程学方面提供新的种子细胞。本研究从3月龄的西门塔尔牛胚胎中无菌分离胰腺组织,分别采用胶原酶消化法和组织块贴壁法分离PMSCs,进行原代培养;绘制第3代、第9代、第15代细胞生长曲线并测定群体倍增时间及克隆形成能力,采用免疫荧光检测干细胞表面标志物(CD29、CD44、CD73、CD90、CD34和CD45),RT-PCR检测干细胞细胞表面标志物(CD29、CD44、CD73、CD90、CD106、CD166、CD34和CD45);染色体核型分析检测其基因稳定性,通过向成脂、成骨、成软骨和成肝样细胞诱导分化,检测其多向分化潜能。结果表明,两种方法都可成功分离出PMSCs,细胞贴壁后形态均为长梭形,漩涡状生长,生长趋势呈典型的S形;第9代细胞群体倍增时间显著低于第15代而高于第3代(P<0.01);第9代PMSCs克隆形成率显著低于第3代而显著高于第15代(P<0.05);免疫荧光结果表明,PMSCs特异性表达CD29、CD44、CD73和CD90,RT-PCR结果显示PMSCs特异性表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD106和CD166,未表达造血细胞表面标志物CD34和CD45,与国际细胞治疗学会组织干细胞委员会指定的MSCs表面标记物相对应;核型分析表明,PMSCs为正常二倍体(2n=60,XY),染色体基因组未发生变异;特异性染色和RT-PCR结果表明,从西门塔尔牛体内获得的PMSCs可分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞和肝样细胞。本试验证实两种方法均可成功建立西门塔尔牛PMSCs体外分离培养体系,PMSCs具有活性好、增殖速度快的特点,与MSCs有相似的生物学特性和多项分化的潜能。可为组织工程学提供新的种子细胞。
关键词
胰腺间充质干细胞
西门塔尔牛
原代培养
生物学特征
分化潜能
Keywords
pancreatic mesenchymal stem cells
Simmental cattle
primary culture
biological characteristics
differentiation potential
分类号
S823.1 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
永生化胎猪胰腺源间充质干细胞移植糖尿病小鼠的研究
被引量：
1
3
作者
张慧茹
李丹
刘雨潇
王雪琴
李强
冯九星
机构
河南工业大学生物工程学院
中国人民解放军总医院第一附属医院
出处
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2013年第12期131-135,共5页
基金
河南工业大学研究生创新基金项目(11YJCX45)
河南工业大学人才引进项目(150214)
文摘
为研究长春花生物碱(conophylline)诱导永生化猪胰腺源间充质干细胞(iPMSCs)对糖尿病小鼠的治疗效果,将长春花生物碱诱导的iPMSCs细胞移植到裸鼠体内2周后进行致瘤性安全检测;以双硫腙染色(DTZ)检测诱导iPMSCs的胰岛素功能性分化;将诱导的iPMSCs移植到糖尿病模型的小鼠体内,通过监测小鼠体重和血糖的变化,判断长春花生物碱诱导的iPMSCs对糖尿病小鼠的治疗效果。结果表明,诱导后的iPMSCs无致瘤性,呈DTZ阳性。诱导的iPMSCs移植到糖尿病小鼠体内后,与对照组小鼠相比,诱导的细胞会减缓糖尿病小鼠体重的降低趋势,且在短期内(1周)能恢复高血糖至正常水平。说明长春花生物碱具有诱导iPMSCs分泌胰岛素、短期治疗糖尿病的作用。
关键词
诱导后的永生化胎猪
胰腺
源
间
充质
干细胞
细胞
移植
糖尿病
小鼠
Keywords
immortalized pancreatic mesenchymal stem cell
cell transplantation
diabetes
mouse
分类号
Q256 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
西门塔尔牛胰腺间充质干细胞分离培养及生物学特性研究
王仲发
刘晏辰
闫炎
李旻娟
何玉楠
关伟军
刘文忠
《中国畜牧兽医》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
西门塔尔牛胰腺间充质干细胞原代培养及其多向分化潜能研究
王育南
吴月
宋哈楠
张涛
关伟军
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
2
在线阅读
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职称材料
3
永生化胎猪胰腺源间充质干细胞移植糖尿病小鼠的研究
张慧茹
李丹
刘雨潇
王雪琴
李强
冯九星
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2013
1
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