功能性胰岛素分泌细胞化学诱导方案的研究

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作者 李易文 陈继冰 +2 位作者 梁维萍 高宏君 徐之然 《器官移植》 北大核心 2025年第3期435-442,共8页

目的探讨脂肪间充质干细胞(ADMSC)向胰岛素分泌细胞(IPC)分化的有效诱导方案。方法使用不同方案的小分子化合物诱导分化ADMSC,通过流式细胞术分析细胞纯度,镜下观察细胞形态学变化,苏木素-伊红和免疫组织化学染色检测细胞质量、性能及... 目的探讨脂肪间充质干细胞(ADMSC)向胰岛素分泌细胞(IPC)分化的有效诱导方案。方法使用不同方案的小分子化合物诱导分化ADMSC,通过流式细胞术分析细胞纯度,镜下观察细胞形态学变化,苏木素-伊红和免疫组织化学染色检测细胞质量、性能及胰岛素相关指标,双硫腙(DTZ)与二乙酰荧光素/碘化丙啶染色检测细胞成熟度及活性,分析ADMSC向IPC分化诱导效果。结果ADMSC纯度可达99%以上,方案Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的成球性良好;细胞诱导质量及胰腺十二脂肠同源盒1(PDX1)、肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A(MAFA)、胰岛素和C肽表达效果均为方案Ⅰ优于其它方案;DTZ染色深浅可能与IPC成熟度有关,其中方案Ⅰ的凋亡细胞数量明显较方案Ⅱ、Ⅲ少。结论诱导方案Ⅰ能提高ADMSC向IPC的分化效率,为未来临床IPC移植应用奠定一定基础。 展开更多

关键词 胰岛素分泌细胞 脂肪间充质干细胞 胰岛移植 小分子化合物 糖尿病 化学诱导 基质胶 胰岛素

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重编程诱导犬脂肪间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化 被引量：1

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作者 朱明德 陈奕静 +2 位作者 戴鹏秀 张翊华 张欣珂 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3205-3212,共8页

本研究旨在利用转基因技术诱导脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,AMSCs)分化为胰岛素分泌细胞(insulin producing cells,IPCs),通过干细胞疗法达到临床治疗糖尿病的目的。本试验首先验证了Hnf1b基因在体外诱导... 本研究旨在利用转基因技术诱导脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,AMSCs)分化为胰岛素分泌细胞(insulin producing cells,IPCs),通过干细胞疗法达到临床治疗糖尿病的目的。本试验首先验证了Hnf1b基因在体外诱导犬AMSCs向IPCs分化中的作用,在此基础上联合胰岛细胞发育过程中起关键作用的级联调控因子Pdx1、Ngn3、Pax4、Nkx6.1,组成三种不同的多基因共表达腺病毒感染犬AMSCs,重编程其向IPCs分化,通过检测筛选出最佳诱导组合。结果表明,Hnf1b基因对体外诱导犬AMSCs向IPCs分化具有促进作用。pAdEasy-Hnf1b-Pdx1-Ngn3(A)、pAdEasy-Hnf1b-Pdx1-Ngn3-Pax4(B)、pAdEasy-Hnf1b-Pdx1-Ngn3-Nkx6.1(C)三种组合的多基因共表达腺病毒载体,在感染犬AMSCs 25 d后,A、B、C三组均形成胰岛样细胞团,且B组数量最多,双硫腙染色着色最深;高糖刺激下B组的胰岛素分泌量极显著高于A组和C组。A、B、C三组的胰岛细胞发育相关基因表达量显著升高;B组Pdx1基因的表达量显著高于A组和C组,Pcsk1基因表达量极显著高于C组;Ins基因的表达量显著高于A组。综上所述,Hnf1b基因对体外诱导犬AMSCs向IPCs分化具有促进作用,Hnf1b、Pdx1、Ngn3和Pax4基因联合诱导效率最佳。该研究结果为探究干细胞向IPCs分化的更高效方法提供新参考,也为糖尿病的临床治疗提供新思路。 展开更多

关键词 糖尿病 犬脂肪间充质干细胞 胰岛素分泌细胞 Hnf1b基因 多基因共表达

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小鼠骨髓多能成体祖细胞的分离、培养及体外诱导分化为胰岛素分泌细胞的研究 被引量：5

3

作者 陈黎红 程桦 +3 位作者 闵军 吴木潮 严励 傅祖植 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1797-1801,共5页

目的:探讨培养骨髓多能成体祖细胞的条件和生物学特性及其向胰岛素分泌细胞分化的可能性。方法:采用文献报道的条件培养液培养小鼠骨髓多能成体祖细胞,观察其细胞形态、生长情况、细胞表面标志及mR-NA水平,检测其oct-4基因表达,并以含... 目的:探讨培养骨髓多能成体祖细胞的条件和生物学特性及其向胰岛素分泌细胞分化的可能性。方法:采用文献报道的条件培养液培养小鼠骨髓多能成体祖细胞,观察其细胞形态、生长情况、细胞表面标志及mR-NA水平,检测其oct-4基因表达,并以含胰高糖素多肽-1的无血清培养液诱导分化细胞,基因水平检测与胰岛素分泌细胞有关的基因表达。结果:小鼠骨髓多能成体祖细胞类圆形,细胞核大,胞质少;细胞增殖能力尚可;细胞表面CD13+、CD44-、CD45-、MHCⅡ-;有oct-4基因表达;诱导分化后,可见与胰岛素分泌细胞有关的基因表达。结论:成功培养小鼠骨髓多能成体祖细胞,具有与文献报道类似的生物学特征;有被诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性。 展开更多

关键词 骨髓 干细胞 细胞培养 细胞分化 胰岛素分泌细胞

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GLP-1、Betacellulin、Activin A、bFGF和Nicotinamide联合诱导小鼠胚胎干细胞分化为胰岛素分泌细胞 被引量：5

4

作者 吴木潮 陈黎红 +1 位作者 徐明彤 程桦 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期426-430,共5页

【目的】探讨体外联合应用GLP-1、betacellulin、activinA、bFGF和nicotinamide5种生长因子能否将小鼠胚胎干细胞(ES细胞)诱导分化为胰岛素分泌细胞。【方法】以GLP-1、betacellulin、activinA、bFGF和nicoti-namide5种生长因子诱导E14.... 【目的】探讨体外联合应用GLP-1、betacellulin、activinA、bFGF和nicotinamide5种生长因子能否将小鼠胚胎干细胞(ES细胞)诱导分化为胰岛素分泌细胞。【方法】以GLP-1、betacellulin、activinA、bFGF和nicoti-namide5种生长因子诱导E14.1小鼠ES细胞30d后,应用RT-PCR、DTZ染色和免疫组化检测分化细胞胰岛素表达,以流式细胞仪检测胰岛素分泌细胞的分化率,用RIA法测定培养液中胰岛素水平。【结果】分化细胞可检测到胰岛素mRNA表达,DTZ染色和胰岛素免疫组化染色阳性,胰岛素分泌细胞的分化率平均为13.6%±3.7%,在5.6mmol/L和25mmol/L葡萄糖浓度作用下培养液中胰岛素水平分别为(0.04±0.01)ng/mL和(0.09±0.02)ng/mL。【结论】体外联合应用GLP-1、betacellulin、activinA、bFGF和nicotinamide5种生长因子能将小鼠ES细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞,但胰岛素分泌功能较差。 展开更多

关键词 胰岛素分泌细胞 GLP-1 FGF 生长因子 胰岛素水平 干细胞分化 联合诱导 分化细胞 小鼠胚胎 ES细胞

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三种不同细胞培养方式对体外小鼠胚胎干细胞分化为胰岛素分泌细胞诱导效果的比较 被引量：6

5

作者 吴木潮 程桦 +3 位作者 陈黎红 徐明彤 黎锋 薛声能 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1591-1596,共6页

目的:比较胚胎体、胚胎体-细胞单层和细胞单层3种细胞培养方式对小鼠胚胎干细胞(ES细胞)分化为胰岛素分泌细胞的诱导效果。方法:应用胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、β细胞素(betacellu lin)、激活素A(activin A)、碱性成纤维细胞生长因子(bF... 目的:比较胚胎体、胚胎体-细胞单层和细胞单层3种细胞培养方式对小鼠胚胎干细胞(ES细胞)分化为胰岛素分泌细胞的诱导效果。方法:应用胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、β细胞素(betacellu lin)、激活素A(activin A)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和尼克酰胺(n icotinam ide),分别以胚胎体、胚胎体-细胞单层和细胞单层3种细胞培养方式诱导小鼠ES细胞30 d后,应用RT-PCR、双硫腙(DTZ)染色和免疫组化检测分化细胞胰岛素表达,以流式细胞仪检测胰岛素阳性细胞百分比。结果:3种细胞培养方式诱导的分化细胞均可见DTZ染色和胰岛素免疫组化染色阳性细胞,RT-PCR检测到胰岛素和其它一些胰岛相关基因mRNA表达,胚胎体-细胞单层方式胰岛素mRNA表达最强,胚胎体方式次之,细胞单层方式最弱。胚胎体-细胞单层方式的胰岛素阳性细胞百分比高于胚胎体方式(P<0.01),后者又高于细胞单层方式(P<0.01)。结论:采用胚胎体-细胞单层方式诱导可更好促进小鼠ES细胞分化为胰岛素分泌细胞。 展开更多

关键词 胚胎干细胞 细胞培养 胰岛素分泌细胞

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小鼠骨髓干细胞有诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性 被引量：3

6

作者 陈黎红 程桦 +3 位作者 严励 吴木潮 杨川 傅祖植 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期538-541,共4页

【目的】探讨小鼠骨髓干细胞有无被诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性。【方法】培养小鼠骨髓干细胞,采用含GLP-1和nicotinamide的无血清培养液诱导分化,在培养过程中,检测有关基因的表达。【结果】培养的小鼠骨髓干细胞具有与文献报道... 【目的】探讨小鼠骨髓干细胞有无被诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性。【方法】培养小鼠骨髓干细胞,采用含GLP-1和nicotinamide的无血清培养液诱导分化,在培养过程中,检测有关基因的表达。【结果】培养的小鼠骨髓干细胞具有与文献报道相似的生物学特性;在诱导分化第7天,有ngn3和pdx-1基因表达;在诱导分化第14天,有nkx2.2、pdx-1和ins2基因表达。【结论】小鼠骨髓干细胞有诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性,值得进一步研究。 展开更多

关键词 诱导分化 骨髓干细胞 小鼠 胰岛素分泌细胞 基因表达 GLP-1 无血清培养 PDX-1 基因

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胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化的体外诱导 被引量：3

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作者 周光纪 屈纪富 +5 位作者 徐海伟 阮怀珍 杨丽 唐军 赵明亮 李达兵 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期903-906,共4页

目的探讨胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化诱导的途径和方法,为阐明胰岛β-细胞的发育机制和糖尿病的细胞移植治疗奠定基础。方法将传统的多步诱导法改良为两步诱导法,将胚胎干细胞诱导为胰岛素分泌细胞,并与传统的多步法进行比较。结果... 目的探讨胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化诱导的途径和方法,为阐明胰岛β-细胞的发育机制和糖尿病的细胞移植治疗奠定基础。方法将传统的多步诱导法改良为两步诱导法,将胚胎干细胞诱导为胰岛素分泌细胞,并与传统的多步法进行比较。结果经过两步诱导,胚胎干细胞被诱导成了胰岛素分泌细胞,越过了先将胚胎干细胞诱导为神经前体细胞,再进一步诱导为胰岛素分泌细胞的传统模式,使诱导时间缩短,诱导方法简化,所得胰岛素分泌细胞数量与传统方法所得相当。结论多阶段和两阶段诱导均可将胚胎干细胞诱导为胰岛素分泌细胞。 展开更多

关键词 胚胎干细胞 分化 胰岛素分泌细胞 糖尿病

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重构腺相关病毒转导PDX-1对C2C12分化为胰岛素分泌细胞的作用 被引量：3

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作者 杨川 李莉 +4 位作者 王川 陈黎红 黎峰 严励 程桦 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期486-490,共5页

【目的】重构含有PDX-1的腺相关病毒载体,将PDX-1转导入C2C12细胞,观察胰岛素分泌量的改变。【方法】应用PCR方法将PDX-1从pZL1质粒中克隆出来,安装到Stratagene公司的腺相关病毒(AAVHelper-FreeSystem)表达系统中,转染HEK293细胞,培养7... 【目的】重构含有PDX-1的腺相关病毒载体,将PDX-1转导入C2C12细胞,观察胰岛素分泌量的改变。【方法】应用PCR方法将PDX-1从pZL1质粒中克隆出来,安装到Stratagene公司的腺相关病毒(AAVHelper-FreeSystem)表达系统中,转染HEK293细胞,培养72h,提取病毒悬液,转导PDX-1进入C2C12细胞中,检测细胞培养液中的胰岛素含量。【结果】①用X-gal染色系统检测,可见有蓝色的阳性细胞。②病毒的粗略的浓度经计算后大约为1012/mL,转导的病毒数约为1011。③PCR结果:用重构的腺相关病毒转导后C2C12有胰岛素及PDX-1的mRNA的表达。④用重构的腺相关病毒转导PDX-1进入C2C12后的培养液的胰岛素浓度为(5.5±1.1)μIU/mL,较其他方法也有较明显的增加(P<0.05)。【结论】通过应用含有PDX-1基因的重构腺相关病毒载体可以转导PDX-1在C2C12细胞中表达,且可以提高C2C12分化为胰岛素分泌细胞的分泌量。 展开更多

关键词 PDX-1 成肌细胞 胰岛素分泌细胞 腺相关病毒

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人羊膜上皮细胞干细胞特性及向胰岛素分泌细胞分化的研究 被引量：6

9

作者 王建 彭琳 卢光琇 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1484-1487,共4页

目的建立人羊膜上皮细胞(hAECs)的分离及培养方法,探讨其向胰岛素分泌细胞分化的能力。方法观察不同培养方法对hAECs生长倍增时间的影响以优化其培养体系;通过细胞免疫荧光法检测不同培养代数细胞多能干细胞的表面标记;通过体外添加诱... 目的建立人羊膜上皮细胞(hAECs)的分离及培养方法,探讨其向胰岛素分泌细胞分化的能力。方法观察不同培养方法对hAECs生长倍增时间的影响以优化其培养体系;通过细胞免疫荧光法检测不同培养代数细胞多能干细胞的表面标记;通过体外添加诱导因子的方法,探讨诱导hAECs向胰岛素分泌细胞分化的潜能。结果在10 ng表皮生长因子培养下,hAECs可长期传代。hAECs表达胚胎干细胞表面标记如阶段特异性胚胎抗原4等;采用悬浮培养法诱导分化,可检测到胰岛发育、胰岛功能基因如胰腺十二指肠同源盒、神经源素3、同源异形盒转录因子6、胰岛素、胰高糖素的表达,免疫组化检测细胞可以表达胰岛素,并且随着外界葡萄糖浓度升高,胰岛素分泌显著增加。结论建立了人羊膜上皮细胞的分离和培养方法(不添加动物血清);在体外可诱导分化为胰岛素分泌细胞。 展开更多

关键词 人羊膜上皮细胞 胰岛素分泌细胞 横向分化

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胰高血糖素样肽1类似物调节胰岛素分泌细胞增殖和功能的细胞信号通路研究进展 被引量：3

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作者 郭莉霞 刘建辉 +1 位作者 陈刚 邓小红 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期308-311,共4页

胰岛素分泌细胞的功能紊乱是糖尿病早期的病理学特征。胰高血糖素样肽1(GLP1)是由肠黏膜L细胞分泌和葡萄糖浓度依赖的多肽类激素,它能够刺激胰岛素的基因表达、蛋白质合成和分泌;最重要的是,GLP1作为一种生长因子,可促进胰岛素分泌细胞... 胰岛素分泌细胞的功能紊乱是糖尿病早期的病理学特征。胰高血糖素样肽1(GLP1)是由肠黏膜L细胞分泌和葡萄糖浓度依赖的多肽类激素,它能够刺激胰岛素的基因表达、蛋白质合成和分泌;最重要的是,GLP1作为一种生长因子,可促进胰岛素分泌细胞增殖,并抑制其凋亡,增加其数量,增强其功能。其机制包括多条胞内信号通路,如通过激活GLP1受体激活蛋白激酶A和直接被cAMP活化的交换蛋白,或通过GLP1受体由表皮生长因子β细胞素(β-cellulin)或基质金属蛋白酶反式激活表皮生长因子受体并增加Wnt信号通路因子等。本文综述了近年来GLP1及其类似物调节胰岛素分泌细胞增殖和功能信号通路的研究进展。 展开更多

关键词 胰高血糖素样肽1 胰岛素分泌细胞 细胞增殖 信号传导

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PDX-1对成肌细胞株C2C12分化为胰岛素分泌细胞的作用 被引量：4

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作者 杨川 程桦 +3 位作者 王川 严励 黎锋 魏菁 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期409-412,共4页

【目的】探讨PDX-1对成肌细胞株C2C12分化为胰岛素分泌细胞的作用。【方法】将C2C12细胞分别经过不同浓度的类胰高血糖素(GLP-1)诱导120h后,瞬间转染胰腺十二指肠同源框(PDX-1)基因,用RT-PCR检测PDX-1的表达,流式细胞仪、放射免疫法检... 【目的】探讨PDX-1对成肌细胞株C2C12分化为胰岛素分泌细胞的作用。【方法】将C2C12细胞分别经过不同浓度的类胰高血糖素(GLP-1)诱导120h后,瞬间转染胰腺十二指肠同源框(PDX-1)基因,用RT-PCR检测PDX-1的表达,流式细胞仪、放射免疫法检测细胞内和培养基中是否存在胰岛素。【结果】GLP-1可以直接诱导C2C12细胞表达PDX-1;PDX-1瞬时转染C2C12细胞后,胰岛素分泌细胞阳性率比值(1.19±0.10)、培养基中的胰岛素含量(2.45±1.48)×10-6U/mL均明显升高(P<0.05);单独的40nmol/LGLP-1诱导与瞬间转染PDX-1相比,阳性率比值及胰岛素浓度的差别均无统计学意义。【结论】GLP-1可以诱导C2C12表达PDX-1,而且PDX-1可以促进C2C12分泌胰岛素。提示GLP-1诱导C2C12分化为胰岛素分泌细胞可能与PDX-1有关。 展开更多

关键词 胰岛素分泌细胞 PDX-1 成肌细胞株 分化 C2C12细胞 GLP-1 RT-PCR检测 胰腺十二指肠 胰高血糖素 流式细胞仪 免疫法检测 胰岛素含量 mol/L 胰岛素浓度 分泌胰岛素 不同浓度 细胞表达 瞬时转染 培养基 阳性率 同源框 细胞内

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新生大鼠肌源性干细胞跨胚层分化为胰岛素分泌细胞的研究 被引量：2

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作者 王滢丽 刘畅 +2 位作者 梅晰凡 郭占鹏 李全双 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期415-419,共5页

目的探讨新生大鼠肌源性干细胞(MDSCs)在体外跨胚层转分化为胰岛素分泌细胞(IPCs)的可能性。方法提取新生大鼠MDSCs原代细胞,差速贴壁培养后行Desmin免疫细胞化学鉴定。然后将细胞分为3组:胰腺提取液诱导组、化学方法诱导组、空白对照组... 目的探讨新生大鼠肌源性干细胞(MDSCs)在体外跨胚层转分化为胰岛素分泌细胞(IPCs)的可能性。方法提取新生大鼠MDSCs原代细胞,差速贴壁培养后行Desmin免疫细胞化学鉴定。然后将细胞分为3组:胰腺提取液诱导组、化学方法诱导组、空白对照组,分别诱导并同期观察细胞的生长形态,采用双硫腙(DTZ)染色鉴定胰岛素分泌细胞,RT-PCR方法检测诱导后细胞的基因表达情况。结果获得高纯度的MDSCs,且Desmin免疫细胞化学鉴定呈阳性。胰腺提取液诱导组诱导后4d,相差显微镜下可见细胞团结构,诱导后6d呈半贴壁状态,诱导后12d形成典型的胰岛样细胞团,较化学方法诱导组诱导时间缩短3d。RT-PCR检测显示:胰腺提取液诱导组诱导6d后可检测到胰岛前体细胞相关基因Ngn3、nestin、PDX-1的表达;诱导12d后可检测到胰岛素基因的表达,但未检测到Ngn3、nestin、PDX-1的表达。结论胰腺提取液可模仿胰岛细胞发育的微环境,并诱导大鼠MDSCs跨胚层分化为胰岛素分泌细胞。 展开更多

关键词 成体干细胞 转分化 胰岛素分泌细胞

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miR-375对人类诱导多能干细胞向胰岛素分泌细胞分化的影响 被引量：3

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作者 邓春艳 王晗月 +4 位作者 李宁 蒋豆蔻 俞丽娜 欧阳志斌 李富荣 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期877-885,共9页

目的:探讨微小RNA-375(miR-375)在调控人类诱导多能干细胞(hiPSCs)分化为胰岛素分泌细胞(IPCs)过程中的作用及可能机制。方法:构建miR-375过表达的慢病毒载体,转染hiPSCs获得miR-375稳定表达的miR-375-hiPSCs,体外诱导其定向分化为IPCs... 目的:探讨微小RNA-375(miR-375)在调控人类诱导多能干细胞(hiPSCs)分化为胰岛素分泌细胞(IPCs)过程中的作用及可能机制。方法:构建miR-375过表达的慢病毒载体,转染hiPSCs获得miR-375稳定表达的miR-375-hiPSCs,体外诱导其定向分化为IPCs,采用real-time PCR、流式细胞术及ELISA等方法对其标志性基因、分化效率、胰岛素和C肽释放量等进行检测;生物信息学结合萤光素酶报告基因实验预测并验证miR-375的靶基因,real-time PCR及Western blot检测靶基因的表达。结果:过表达miR-375可上调胰岛β细胞标志性转录因子HNF4α、MafA、Pdx1、Pax6、Nkx6.1、glucokinase和insulin的表达,分化效率由对照组的22.3%提高至38.6%;高糖刺激后胰岛素释放量由成年胰岛细胞分泌量的1/8提高到1/5;过表达miR-375可影响靶基因REST和WNT5A的蛋白翻译水平。结论:miR-375可通过干扰靶基因REST和WNT5A的翻译水平,开启胰岛素分泌相关特异性基因的表达,从而促进hiPSCs向IPCs定向分化。 展开更多

关键词 人类诱导多能干细胞 微小RNA-375 胰岛素分泌细胞

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人骨髓源干细胞向胰岛素分泌细胞分化(英文) 被引量：2

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作者 陆琰 张洹 迟作华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期774-780,共7页

目的:探讨人骨髓源干细胞向具有功能的胰岛素分泌细胞分化的可能性。方法:从人骨髓分离间充质干细胞。采用表皮生长因子、β-巯基乙醇和高糖培养基诱导其向胰岛素分泌细胞分化。经诱导后,用RT-PCR检测胰岛β细胞相关基因的表达,并采用... 目的:探讨人骨髓源干细胞向具有功能的胰岛素分泌细胞分化的可能性。方法:从人骨髓分离间充质干细胞。采用表皮生长因子、β-巯基乙醇和高糖培养基诱导其向胰岛素分泌细胞分化。经诱导后,用RT-PCR检测胰岛β细胞相关基因的表达,并采用免疫细胞化学染色检测胞浆胰岛素的表达。此外,诱导后细胞分泌的胰岛素定量及胰岛素释放实验将采用化学发光法进行检测。将经诱导后的细胞移植到糖尿病小鼠的右侧肾被膜下。在移植后16 d持续检测小鼠的血糖水平,最后对右侧肾脏进行免疫组化检测。结果:经诱导后,细胞能表达胰岛β细胞相关基因;免疫细胞化学染色也能检测到胞浆有胰岛素的表达;而且这些细胞能对糖刺激有所反应。细胞被移植到糖尿病小鼠的肾被膜下,能起降血糖作用。其肾脏的免疫组化显示:肾被膜下有胰岛素阳性细胞。结论:人骨髓源干细胞具有向胰岛素分泌细胞分化的潜能,这将为糖尿病细胞治疗提供丰富的细胞来源。 展开更多

关键词 人类 骨髓 干细胞 细胞分化 胰岛素分泌细胞

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多基因修饰小鼠诱导多潜能干细胞分化为胰岛素分泌细胞 被引量：1

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作者 范向军 王雷 +3 位作者 陆玉华 朱铭岩 钱海鑫 王志伟 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期700-707,共8页

目的观测胰岛素转录关键调控因子胰腺十二指肠同源框蛋白1(PDX-1)、神经分化因子1(NeuroD1)及肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A(MafA)对小鼠诱导多潜能干细胞(iPS细胞)分化为胰岛素分泌细胞的作用。方法筛选鉴定小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)重... 目的观测胰岛素转录关键调控因子胰腺十二指肠同源框蛋白1(PDX-1)、神经分化因子1(NeuroD1)及肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A(MafA)对小鼠诱导多潜能干细胞(iPS细胞)分化为胰岛素分泌细胞的作用。方法筛选鉴定小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)重编程的iPS细胞。以重组腺病毒Ad-mPDX-1-IRES-GFP、Ad-mNeuroD1-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP联合感染小鼠iPS细胞,体外培养后以RT-PCR检测胰岛B细胞功能基因表达;免疫荧光检测胰岛素蛋白表达及定位;ELISA检测不同糖浓度(0、5、10、20、30、40mmol/L)下胰岛素的分泌量。结果起源于MEFs的iPS细胞能形成边缘光整的致密克隆,表达干性基因Nanog、Rex-1、SSEA-1,并能在体内外分化为三胚层组织,显示MEFs被成功地重编程为iPS细胞。Ad-PDX-1-IRES-GFP、Ad-mNeuroD-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP感染的小鼠iPS细胞能分化为胰岛类B细胞,RT-PCR结果显示其胰岛B细胞功能基因的表达与小鼠胰岛B细胞株MIN6相似。免疫荧光检测可见胰岛类B细胞内有胰岛素表达。ELISA检测结果显示胰岛类B细胞对不同浓度葡萄糖有较好的反应性。结论胰岛素转录关键调控因子PDX-1、NeuroD1和MafA三者能协同作用,使小鼠iPS细胞分化为具有显著胰岛素合成和分泌能力的胰岛素分泌细胞。 展开更多

关键词 诱导多潜能干细胞 胰岛素分泌细胞 转录因子 细胞分化

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诱导后大鼠胰岛素分泌细胞超顺磁化氧化铁颗粒-多聚左旋赖氨酸体外标记后生物活性研究 被引量：1

16

作者 王维英 邓钢 +1 位作者 李爱梅 孙军辉 《介入放射学杂志》 CSCD 2007年第2期104-108,共5页

目的比较超顺磁化氧化铁颗粒-多聚左旋赖氨酸(SPIO-PLL)标记与未标记诱导后大鼠胰岛素分泌细胞的生物活性,探讨两者MRI成像表现。方法分离培养大鼠骨髓间质干细胞(BMSC),经二期方案诱导成胰岛素分泌细胞,SPIO-PLL标记细胞,普鲁士蓝染色... 目的比较超顺磁化氧化铁颗粒-多聚左旋赖氨酸(SPIO-PLL)标记与未标记诱导后大鼠胰岛素分泌细胞的生物活性,探讨两者MRI成像表现。方法分离培养大鼠骨髓间质干细胞(BMSC),经二期方案诱导成胰岛素分泌细胞,SPIO-PLL标记细胞,普鲁士蓝染色显示细胞内铁;放射免疫分析法测定标记及未标记细胞的胰岛素分泌情况;同时采用临床应用型1．5 T MR仪对两组细胞群进行T_1WI、T_2WI、T_2*WI 3个序列成像。结果普鲁士蓝染色显示标记细胞蓝色铁颗粒位于细胞内。标记后的细胞能分泌胰岛素,经统计学分析分泌量与未标记细胞无显著性差异。标记后的细胞在以T_2*WI序列信号降低最明显,信号强度变化率最大。结论SPIO-PLL可以有效标记诱导后大鼠胰岛素分泌细胞,且对其生物学活性无明显影响,临床应用型1．5 T MR仪可对标记细胞群进行体外成像。 展开更多

关键词 间质干细胞 胰岛素分泌细胞 磁共振成像 标记

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人脂肪基质细胞向胰岛素分泌细胞的分化诱导

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作者 韦安慧 李会敏 +4 位作者 付常皓 王浩天 王文加 苏曼曼 颜炜群 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期266-269,I0003,共5页

目的:体外分离培养人脂肪来源基质细胞(hADSCs),并定向诱导hADSCs向胰岛样细胞分化,探讨hADSCs分化为胰岛素分泌细胞的潜能。方法:从脂肪抽吸物中分离hADSCs,利用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、上皮细胞生长因子(EGF)、尼克酰胺和exend... 目的:体外分离培养人脂肪来源基质细胞(hADSCs),并定向诱导hADSCs向胰岛样细胞分化,探讨hADSCs分化为胰岛素分泌细胞的潜能。方法:从脂肪抽吸物中分离hADSCs,利用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、上皮细胞生长因子(EGF)、尼克酰胺和exendin-4等因子诱导hADSCs向胰岛样细胞分化。采用RT-PCR检测诱导前后胰岛素、胰十二指肠同源性盒因子(Pdx-1)、葡萄糖转运因子2(Glu-t 2)和胰高血糖素(glucagon)基因的表达;双硫腙染色鉴定胰岛样细胞团;免疫荧光染色检测诱导后细胞胰岛素和Pdx-1的表达;ELISA检测诱导后细胞在低糖和高糖环境中胰岛素的分泌量。结果:诱导7 d左右细胞由长梭形逐渐变成多边形,并且细胞开始呈岛状聚集,21 d左右形成胰岛样细胞团。双硫腙染色阳性;RT-PCR显示,诱导后细胞表达胰岛素、Pdx-1、Glu-t2和glucagon基因;免疫细胞化学显示,诱导后细胞表达胰岛素和Pdx-1;葡萄糖刺激实验显示胰岛素的释放,并且随着葡萄糖浓度增加胰岛素的释放量也增加。结论:体外hADSCs具有分化为胰岛素分泌细胞的潜能,为将来应用于临床移植治疗糖尿病奠定了基础。 展开更多

关键词 脂肪基质细胞 胰岛素分泌细胞 分化

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曲古抑菌素A促进小鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞

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作者 李佳萦 冯烈 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1088-1092,共5页

目的:观察曲古抑菌素A(TSA)诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的适宜浓度。方法:C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞系体外培养。实验分为5组:对照组(DMSO,A组)和TSA干预组(25 nmol/L,B组;50 nmol/L,C组;100 nmol/L,D组;200 nmol/... 目的:观察曲古抑菌素A(TSA)诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的适宜浓度。方法:C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞系体外培养。实验分为5组:对照组(DMSO,A组)和TSA干预组(25 nmol/L,B组;50 nmol/L,C组;100 nmol/L,D组;200 nmol/L,E组)。各组分两阶段用相应的培养基培养10 d后进行检测。双硫腙染色鉴定各组的胰岛素分泌细胞,结果进行半定量分析。免疫荧光染色鉴定各组的胰岛素分泌,比较各组胰岛素平均荧光强度。酶联免疫吸附试验检测各组胰岛素分泌细胞胰岛素的分泌量。结果:TSA作用10 d能够诱导C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞分化成为胰岛素分泌细胞并分泌胰岛素。B组胰岛素染色阳性面积、阳性率、胰岛素染色积分吸光度以及胰岛素平均荧光强度显著高于其它干预组,差异有统计学意义(均P<0.05)。随着各干预组TSA浓度的升高,胰岛素的分泌量减少。B组胰岛素含量显著高于其它干预组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:TSA处理10 d能诱导C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞分化成为胰岛素分泌细胞,并且25 nmol/L为TSA的适宜浓度。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 曲古抑菌素A 胰岛素分泌细胞 胰岛素

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胰岛新生相关蛋白肽在促进脐带间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞中的作用 被引量：3

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作者 陈桃 王云帅 +5 位作者 谷乐辉 周淑艳 叶剑 简优强 李富荣 齐晖 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期141-145,共5页

目的探索人脐带间充质干细胞(hUCMSC)向胰岛素分泌细胞(IPCs)分化的高效、定向诱导方案。方法在传统诱导方案基础上,加入胰岛新生相关蛋白肽,诱导hUCMSCs分化为IPCs,并通过形态学观察、流式细胞术、荧光定量PCR、免疫荧光、ELISA鉴定IPC... 目的探索人脐带间充质干细胞(hUCMSC)向胰岛素分泌细胞(IPCs)分化的高效、定向诱导方案。方法在传统诱导方案基础上,加入胰岛新生相关蛋白肽,诱导hUCMSCs分化为IPCs,并通过形态学观察、流式细胞术、荧光定量PCR、免疫荧光、ELISA鉴定IPCs。结果改良组IPCs的C肽阳性细胞率较传统组有明显提高(P<0.05),胰腺发育相关转录因子PDX-1、Ngn3、NeuroD1、MafA、insulin、Glut-2 mRNA表达明显提高(P<0.05)。同时,改良组蛋白C肽、PDX-1、Nkx6.1表达阳性,葡萄糖刺激试验证实胰岛素及C肽分泌能力也明显增强(P<0.05)。结论胰岛新生相关蛋白肽可促进hUCMSCs分化为IPCs,但仍未达到正常人胰岛β细胞功能。 展开更多

关键词 脐带间充质干细胞 胰岛素分泌细胞 胰岛新生相关蛋白肽 分化

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胰岛素分泌细胞再生医学研究的最新进展 被引量：1

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作者 王会霞 朱永强 +2 位作者 王新宇 郑义 黄来强 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期613-615,共3页

糖尿病是由于胰岛素绝对或相对不足引起的以高血糖和多并发症为特征的内分泌代谢性疾病,其本质是胰岛素分泌细胞受损或者胰岛素工作效率低下。通过再生医学手段将体外再生的胰岛素分泌细胞植入患者体内,重建有功能的胰岛素分泌系统不失... 糖尿病是由于胰岛素绝对或相对不足引起的以高血糖和多并发症为特征的内分泌代谢性疾病,其本质是胰岛素分泌细胞受损或者胰岛素工作效率低下。通过再生医学手段将体外再生的胰岛素分泌细胞植入患者体内,重建有功能的胰岛素分泌系统不失为治疗Ⅰ型和部分Ⅱ型糖尿病的一种新途径。再生医学的研究和应用中,最有价值的细胞是干细胞。文中就干细胞诱导分化以及成体细胞重编程再生为胰岛素分泌细胞方面最新进展作一综述。 展开更多

关键词 再生医学 细胞重编程 胰岛素分泌细胞

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