胡萝卜软腐欧文氏菌分子检测技术的研究 被引量：6

1

作者 马改转 修建华 +2 位作者 魏兰芳 姬广海 李凡 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期22-26,共5页

胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜亚种Erwinia carotovorasub sp.carotovora(Ecc)是引起魔芋和马蹄莲软腐病的主要病原细菌.本研究根据细菌L-氨基酸渗透酶同源基因设计URP核苷酸序列特异性引物进行普通PCR、巢式PCR,同时采用细菌16S-23S rDNA间... 胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜亚种Erwinia carotovorasub sp.carotovora(Ecc)是引起魔芋和马蹄莲软腐病的主要病原细菌.本研究根据细菌L-氨基酸渗透酶同源基因设计URP核苷酸序列特异性引物进行普通PCR、巢式PCR,同时采用细菌16S-23S rDNA间的ITS序列设计引物及TaqMan探针进行实时荧光PCR,对样品中存在的胡萝卜软腐欧文氏菌进行检测,并比较了3种检测方法的特异性和灵敏度.结果表明,应用实时荧光PCR方法检测样品,其中存在的胡萝卜软腐欧文氏菌的最低菌悬液浓度可达10 cfu/mL;巢式PCR灵敏度也可检测到10 cfu/mL;而用普通PCR最低可检测到103cfu/mL.用实时荧光PCR和巢式PCR方法检测病菌,其灵敏度都比常规PCR提高了100倍,且实时荧光PCR方法更快速、简便、安全、准确,不需PCR的后续处理.实时荧光PCR方法适用于种苗、种球等检测领域. 展开更多

关键词 胡萝卜软腐欧文氏菌 特异性引物 分子检测技术 PCR

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胡萝卜软腐欧文氏菌中信号分子合成酶expI基因的克隆、表达及其分析 被引量：3

2

作者 黄媛媛 边子睿 宋水山 《生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第4期60-64,共5页

用PCR方法从胡萝卜软腐欧文氏菌的基因组DNA中扩增出信号分子合成酶expI基因,将其克隆到大肠杆菌表达载体pET-28α(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得高效表达expI基因的重组大肠杆菌BL21(pET28α-expI)。重组菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE... 用PCR方法从胡萝卜软腐欧文氏菌的基因组DNA中扩增出信号分子合成酶expI基因,将其克隆到大肠杆菌表达载体pET-28α(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得高效表达expI基因的重组大肠杆菌BL21(pET28α-expI)。重组菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测表达蛋白相对分子质量约为24.8 kD,与预期分子量相符。经薄层层析和高效液相色谱分析发现该重组菌产生的信号分子种类为N-3-羰基己酰高丝氨酸内酯和N-己酰高丝氨酸内酯与胡萝卜软腐欧文氏菌产生的一致。 展开更多

关键词 胡萝卜软腐欧文氏菌 expI基因 克隆 薄层层析 高效液相色谱

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四株胡萝卜软腐欧文氏杆菌胡萝卜亚种新菌株的分离鉴定 被引量：7

3

作者 赵玲 柴兆祥 +1 位作者 李金花 王蒂 《草业学报》 CSCD 北大核心 2011年第4期244-251,共8页

采用棋盘式取样法,从正茬、重茬、连作2年和连作3年的马铃薯播前、现蕾期、成熟期和收获期4个不同阶段采集马铃薯根围土样。以稀释平板法,用选择性培养基CVP分离软腐欧文氏杆菌,共得到42个菌株。在形态学观察和生理生化特性测定的过程... 采用棋盘式取样法,从正茬、重茬、连作2年和连作3年的马铃薯播前、现蕾期、成熟期和收获期4个不同阶段采集马铃薯根围土样。以稀释平板法,用选择性培养基CVP分离软腐欧文氏杆菌,共得到42个菌株。在形态学观察和生理生化特性测定的过程中发现编号为GAUP-b410、GAUP-b492、GAUP-b416和GAUP-d34等4个菌株的主要性状一致,且与其他菌株的性状不同。致病性测定结果显示,这4个菌株均能引起马铃薯薯片腐烂。对其中的2个菌株进行了16S rDNA序列分析,其PCR产物的序列与GenBank上登记的18个分离自中国大白菜上的Erwinia carotovorasubsp.carotovora菌株的亲缘关系最近,同源性均达99%。利用DNAStar软件绘制系统发育树状图,菌株GAUP-b410亦与这18个E.carotovorasubsp.carotovora菌株位于系统发育树的同一分支,聚为一类;菌株GAUP-b492与其中的16个E.carotovorasubsp.carotovora菌株位于系统发育树的同一分支,聚为一类;结合生理生化特性和16S rDNA序列分析,确定这4个菌株为胡萝卜软腐欧文氏杆菌胡萝卜亚种(E.carotovorasubsp.carotovora)新菌株。 展开更多

关键词 马铃薯 连作 根围土壤 胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜亚种 16SrDNA

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芋头软腐病拮抗菌的筛选及生防效果研究 被引量：9

4

作者 赵江涛 赵延存 +3 位作者 黄开红 李鹏霞 王毓宁 胡花丽 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第7期155-159,共5页

分别从蔬菜田土壤和采后芋头表面黏附土壤中分离纯化到267和244株菌株,通过平板拮抗实验,发现其中6个菌株对胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora subsp.carotovora,Ecc)产生了清晰且明显的拮抗圈(直径>10 mm)。利用芋头对它们的... 分别从蔬菜田土壤和采后芋头表面黏附土壤中分离纯化到267和244株菌株,通过平板拮抗实验,发现其中6个菌株对胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora subsp.carotovora,Ecc)产生了清晰且明显的拮抗圈(直径>10 mm)。利用芋头对它们的生物防控效果进行复筛,结果发现BGP14菌株发酵液处理芋头的发病率仅为6.7%,显著低于其他5个菌株(P<0.05)。根据BGP14的形态学特征、芽孢产生及16S rRNA和gyrB基因的部分核酸序列,该菌株被鉴定为解淀粉芽孢杆菌BGP14(Bacillus amyloliquefaciens)。BGP14在芋头伤口上具有较强的定殖能力,并将病原菌Ecc的群体数量压制在一个较低水平。BGP14与病原菌Ecc联合处理芋头的苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)活性显著高于其他处理。以上结果表明,解淀粉芽孢杆菌BGP14对病原菌E.carotovora具有强大的拮抗活性,能够有效防治贮藏期芋头软腐病,具有潜在的应用开发前景。 展开更多

关键词 胡萝卜软腐欧文氏菌 解淀粉芽孢杆菌 进化树 群体动态 系统诱导抗病性

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拮抗软腐病菌的魔芋内生细菌多样性研究 被引量：3

5

作者 林天兴 龚明福 管芩澜 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第8期197-198,206,共3页

生活在魔芋组织中的内生细菌具有拮抗魔芋软腐病病菌的潜力。通过组织分离法从魔芋块茎中分离得到内生细菌,用牛津杯法皿内测试内生细菌对魔芋软腐病菌的拮抗作用,使用肠杆菌重复居间序列聚合酶链式反应(enterobacterial repetitive int... 生活在魔芋组织中的内生细菌具有拮抗魔芋软腐病病菌的潜力。通过组织分离法从魔芋块茎中分离得到内生细菌,用牛津杯法皿内测试内生细菌对魔芋软腐病菌的拮抗作用,使用肠杆菌重复居间序列聚合酶链式反应(enterobacterial repetitive intergenic consensus polymerase chain reaction,ERIC-PCR)方法研究其遗传多样性。结果表明,从魔芋块茎中分离得到35株内生细菌,35株内生细菌对魔芋软腐病菌均有不同程度的拮抗活性,ERIC-PCR指纹图谱显示35株内生细菌在Watson距离为0.60时可分为4个ERIC群和4株独立成群菌株,表明35株拮抗性内生细菌的遗传多样性明显。 展开更多

关键词 魔芋 内生细菌 胡萝卜软腐欧文氏菌 多样性

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两种天南星内生细菌抗魔芋软腐病菌株筛选 被引量：2

6

作者 曾波 林天兴 龚明福 《农技服务》 2015年第10期7-7,5,共2页

魔芋软腐病严重影响着魔芋的生产,利用内生细菌来抑制魔芋软腐病菌有很多优点。选择23株从药用植物一把伞南星、异叶天南星中分离得到的内生细菌,用牛津杯法皿内测试内生细菌对魔芋软腐病菌的拮抗作用,以筛选拮抗软腐病菌能力强的菌株... 魔芋软腐病严重影响着魔芋的生产,利用内生细菌来抑制魔芋软腐病菌有很多优点。选择23株从药用植物一把伞南星、异叶天南星中分离得到的内生细菌,用牛津杯法皿内测试内生细菌对魔芋软腐病菌的拮抗作用,以筛选拮抗软腐病菌能力强的菌株。研究结果表明,23株供试内生细菌对魔芋软腐病菌均有不同程度的拮抗活性,8株抑菌效果非常显著,YC06和YC09两株内生细菌抑菌能力极强,其发酵产物对魔芋软腐菌也有极强的抑菌能力。 展开更多

关键词 魔芋 内生细菌 魔芋软腐病 胡萝卜软腐欧文氏菌 筛选

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巨大芽孢杆菌L2发酵产物对魔芋软腐病菌的抑菌机制 被引量：17

7

作者 赵妗颐 肖洋 +3 位作者 杨龙 张素 吉玉玉 李祝 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第21期14-20,共7页

目的:探究巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)L2发酵产物对贮藏期魔芋软腐病菌--胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora subsp. carotovora)EC-1的抑菌机制。方法:以巨大芽孢杆菌菌粉为原料提取发酵产物,用常压硅胶柱层析分离得到发酵... 目的:探究巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)L2发酵产物对贮藏期魔芋软腐病菌--胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora subsp. carotovora)EC-1的抑菌机制。方法:以巨大芽孢杆菌菌粉为原料提取发酵产物,用常压硅胶柱层析分离得到发酵产物流分LE4-1~LE4-7,经抑菌实验筛选得到对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1有良好抑菌作用的流分,再使用气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)法对其进行成分分析;并通过测定其半数抑制质量浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)、菌液电导率、核酸蛋白泄漏、可溶性总糖质量浓度、菌体总蛋白、菌体磷代谢及胞内活性氧水平对其抑菌机制进行研究。结果:巨大芽孢杆菌L2流分LE4-3对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1有良好抑菌作用,经GC-MS检测其主要成分为苯乙酸乙酯(32.190%(相对含量,后同))、亚油酸乙酯(15.819%)、苯乙酸甲酯(13.793%)等;LE4-3对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1的IC50为(1.06±0.01)mg/m L,并初步推测其作用机制是通过影响细胞膜完整性、损伤细胞结构、抑制细胞蛋白质合成及能量代谢等对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1发挥抑菌作用,因此巨大芽孢杆菌L2流分LE4-3在魔芋抗软腐病贮藏中具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 巨大芽孢杆菌 胡萝卜软腐欧文氏菌 抑菌机制

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解淀粉芽孢杆菌BGP20-γ的诱变选育及生防效果 被引量：4

8

作者 赵延存 李鹏霞 +3 位作者 黄开红 王毓宁 孙娅 胡花丽 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1791-1796,共6页

胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora subsp.carotovora,Ecc)引起的细菌性软腐病是导致采后蔬菜腐败的主要原因之一,前期研究发现解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BGP20对该病害具有较好的生防效果。为了进一步提高BGP20... 胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora subsp.carotovora,Ecc)引起的细菌性软腐病是导致采后蔬菜腐败的主要原因之一,前期研究发现解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BGP20对该病害具有较好的生防效果。为了进一步提高BGP20对采后蔬菜细菌性软腐病的生防效果,本研究利用60Co辐照诱变技术,对该菌株进行诱变选育。结果表明,在200-800 Gy剂量范围内,60Co对BGP20的致死率随着辐照剂量的增加而迅速上升。600 Gy剂量的60Co辐照致死率为78.3%,选用该剂量进行诱变选育。利用辣椒对409株突变菌株的生防效果进行活体评价,获得1株生防效果显著提高的突变菌株BGP20-γ(P<0.05)。与野生型菌株BGP20相比,利用突变株BGP20-γ处理的辣椒伤口腐烂面积下降64.4%,其在辣椒伤口上的定殖能力显著提高,将病原菌Ecc的群体数量限制在一个更低的水平。 展开更多

关键词 解淀粉芽孢杆菌 胡萝卜软腐欧文氏菌 60Co 诱变育种 群体动态

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N-己酰高丝氨酸内酯对马铃薯生长及抗软腐病能力的影响 被引量：3

9

作者 黄媛媛 邱健 +3 位作者 马宏 苏浴源 宋聪 宋水山 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第2期559-561,共3页

[目的]研究细菌个体间通讯信号N己-酰高丝氨酸内酯(C6-HSL)是否可以影响植物的生长和抗病能力。[方法]以马铃薯脱毒苗为试验材料,C6-HSL为诱导剂研究了经不同浓度C6-HSL处理后,马铃薯生长、抵抗胡萝卜软腐欧文氏菌浸染的情况,特别研究了... [目的]研究细菌个体间通讯信号N己-酰高丝氨酸内酯(C6-HSL)是否可以影响植物的生长和抗病能力。[方法]以马铃薯脱毒苗为试验材料,C6-HSL为诱导剂研究了经不同浓度C6-HSL处理后,马铃薯生长、抵抗胡萝卜软腐欧文氏菌浸染的情况,特别研究了C6-HSL对植株标志性防御酶活性和H2O2含量的影响。[结果]不同浓度的C6-HSL能明显抑制马铃薯的出根率和生根数,而对株高、茎节数及叶片大小没有影响;植物标志性防御酶类中POD和SOD的活性以及H2O2的产生量经C6-HSL诱导后显著提高,而PAL和PPO的活性则没有明显变化;抗病试验中,经C6-HSL诱导的马铃薯植株能有效抑制胡萝卜软腐欧文氏菌的侵染,发病率明显低于对照组。[结论]细菌AHL有可能成为一种新的植物抗病激活剂。 展开更多

关键词 细菌群体感应信号分子 N-己酰高丝氨酸内酯 马铃薯 防御酶 胡萝卜软腐欧文氏菌

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Ecc36菌株hrpN基因的克隆、表达及HrpN_(EccPR)蛋白的生物学活性 被引量：1

10

作者 贾振华 刘方 +3 位作者 宋聪 黄亚丽 马宏 宋水山 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期36-41,共6页

为了揭示hrp基因表达的Harpins蛋白能够广泛地诱导植物对植物病虫害防卫反应的分子机制,通过琼脂固体平板法,发现胡萝卜软腐欧文氏菌Ecc36菌株具有很高的胞外酶分泌活性,该菌接种非寄主植物烟草,能够引起过敏反应(HR),结果表明,Ecc36携... 为了揭示hrp基因表达的Harpins蛋白能够广泛地诱导植物对植物病虫害防卫反应的分子机制,通过琼脂固体平板法,发现胡萝卜软腐欧文氏菌Ecc36菌株具有很高的胞外酶分泌活性,该菌接种非寄主植物烟草,能够引起过敏反应(HR),结果表明,Ecc36携带hrp基因。用地高辛标记的hrp N基因作探针,通过Southern杂交证明了Ecc36菌株中含有hrp N基因,命名为hrp NEcc PR基因;核苷酸序列分析表明,hrp NEcc PR基因的开放阅读框ORF为1 254 bp,编码的Harpin蛋白(命名为HrpN_(EccPR)蛋白)由417个氨基酸残基组成,其分子量为45.27 ku,等电点为5.73,与其他几种软腐欧文氏菌Harpin蛋白有较高的同源性。此外,将hrp NEcc PR基因克隆到表达载体p ET28a(+)上,将构建的hrp NEcc PR基因表达载体(p ET30a-Ecc PR)转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG(异丙基硫代-β-D半乳糖苷)诱导HrpN_(EccPR)蛋白表达,纯化后的HrpN_(EccPR)能诱导烟草发生过敏反应,表明HrpN_(EccPR)蛋白具有激发植物免疫反应的生物活性,可为进一步研究HrpN_(EccPR)蛋白诱导植物防卫反应的机制奠定基础。 展开更多

关键词 HrpNEccPR蛋白 基因克隆 hrpN基因 胡萝卜软腐欧文氏菌 过敏反应

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不同覆盖物对魔芋软腐病影响的试验研究 被引量：11

11

作者 李仕东 盛德贤 粟廷书 《湖北植保》 2006年第3期15-16,共2页

关键词 魔芋软腐病 试验研究 覆盖物 胡萝卜软腐欧文氏菌 综合防治 田间发病率 特色资源 经济作物 农业防治 经济效益

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兰花茎腐病防治对策

12

作者 周涤 《农家科技》 2015年第4期20-20,共1页

茎府病又称枯萎病或凋萎病，目前认为病原为半知菌亚门尖胞镰刀菌与胡萝卜软腐欧文氏菌，是近几年来发病率高．对生产造成严重损失的一种兰花病害，一般长时间的高温、高湿环境可诱发。生产中应以预防为主。应保持养兰环境清洁，通风良... 茎府病又称枯萎病或凋萎病，目前认为病原为半知菌亚门尖胞镰刀菌与胡萝卜软腐欧文氏菌，是近几年来发病率高．对生产造成严重损失的一种兰花病害，一般长时间的高温、高湿环境可诱发。生产中应以预防为主。应保持养兰环境清洁，通风良好；上盆前兰花、兰盆和植料一定要消毒，植料要排水良好；避免兰株有伤1：1，特别应预防土壤中的虫口咬伤假球茎造成感染．可在土壤中施杀虫剂；生产中病苗及所用的植材、盆具应丢弃并集中销毁。 展开更多

关键词 茎腐病 兰花 胡萝卜软腐欧文氏菌 防治 高湿环境 环境清洁 凋萎病 枯萎病

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