期刊文献+
共找到8篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
胞外表达L-天冬酰胺酶发酵条件的研究 被引量:3
1
作者 王利群 黄达明 +2 位作者 赵希岳 王文兵 徐苑 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第33期16280-16281,共2页
[目的]优化胞外表达L-天冬酰胺酶工程菌的发酵条件。[方法]用正交试验研究培养基的组成,用单因素试验研究诱导条件以及通气量对酶产量的影响。[结果]发酵培养基采用8.0%玉米浆和1.0%甘油组成;诱导剂采用终浓度为0.5g/L的乳糖,扩大培养后... [目的]优化胞外表达L-天冬酰胺酶工程菌的发酵条件。[方法]用正交试验研究培养基的组成,用单因素试验研究诱导条件以及通气量对酶产量的影响。[结果]发酵培养基采用8.0%玉米浆和1.0%甘油组成;诱导剂采用终浓度为0.5g/L的乳糖,扩大培养后10h加入,诱导时间为12h,通气量为0.83VVM。[结论]该研究为胞外表达L-天冬酰胺酶的工业化生产提供了参考。 展开更多
关键词 L-天冬酰胺酶 胞外表达 发酵
在线阅读 下载PDF
黑曲霉木聚糖酶在大肠杆菌中的胞外表达和酶学性质研究 被引量:8
2
作者 李阳阳 刘松 +1 位作者 尹小强 堵国成 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1-7,共7页
木聚糖酶能催化木聚糖分解为低聚木糖和木单糖,对于木聚糖高效利用具有重要意义。该研究将黑曲霉(Aspergillus niger)AG11来源的β-D-1,4内切木聚糖酶(β-D-1,4 endoxylanase,xynA)分泌表达于大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),并进... 木聚糖酶能催化木聚糖分解为低聚木糖和木单糖,对于木聚糖高效利用具有重要意义。该研究将黑曲霉(Aspergillus niger)AG11来源的β-D-1,4内切木聚糖酶(β-D-1,4 endoxylanase,xynA)分泌表达于大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),并进行了表达条件优化和酶学性质研究。最终确定xynA最佳表达条件为:诱导剂(异丙基硫代半乳糖苷)浓度0.1 mmol/L、诱导温度20℃、诱导起始OD_(600)值0.5。在该条件下,胞外xynA活力达到15.8 U/mL,较初始条件提高85.9%。重组xynA经镍柱纯化至单一条带后进行酶学性质分析。酶学性质分析表明,重组xynA比酶活力、最适反应温度及最适反应pH分别为175.1 U/mg、50℃和4.0。重组xynA在40℃半衰期为182 min,且在pH为2.0~9.0内孵育1 h保持在70%以上活性。以桦木木聚糖为底物,重组xynA的K_(m)和k_(cat)分别为3.45 g/L和58.51 s^(-1)。研究结果为xynA优良突变体的筛选和在工业生产中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 黑曲霉 木聚糖酶 胞外表达 优化 酶学性质
在线阅读 下载PDF
共表达磷脂酶C促进葡萄糖异构酶在大肠杆菌中的胞外表达 被引量:2
3
作者 姜琪 宿玲恰 +1 位作者 吴敬 陈晟 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期236-242,共7页
磷脂酶C(PLC)能够水解细胞膜主要成分磷脂,使细胞膜通透性增强,从而能够释放出胞内物质。作者构建了PLC与天然胞内定位蛋白葡萄糖异构酶(GI)共表达的重组大肠杆菌,摇瓶发酵胞外上清液中GIC酶活达到3.4 U/m L,占胞外和胞内总酶活的93%,表... 磷脂酶C(PLC)能够水解细胞膜主要成分磷脂,使细胞膜通透性增强,从而能够释放出胞内物质。作者构建了PLC与天然胞内定位蛋白葡萄糖异构酶(GI)共表达的重组大肠杆菌,摇瓶发酵胞外上清液中GIC酶活达到3.4 U/m L,占胞外和胞内总酶活的93%,表明GIC成功实现了胞外表达。将胞外上清液中的GIC进行分离纯化和酶学定性,发现其比活为12.1 U/mg,最适反应温度为80℃,最适pH为10,均与对照菌单独表达的GIO性质基本一致。在此基础上,对上述重组菌进行3 L发酵罐培养,发酵周期为24 h,酶活达到17.7 U/m L,表明其良好的工业化放大生产前景。 展开更多
关键词 磷脂酶C 葡萄糖异构酶 共表 胞外表达
在线阅读 下载PDF
两阶段温度控制策略以及助剂促进淀粉分支酶的胞外表达 被引量:1
4
作者 王驰 李柱 +4 位作者 李才明 顾正彪 洪雁 程力 李兆丰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期19-24,共6页
为了促进重组淀粉分支酶在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis WB600)中的胞外表达,对重组淀粉分支酶在摇瓶水平上进行了发酵优化。首先,以胞外酶活力为指标,先后考察了初始培养基、pH、培养温度和培养时间4种因素对胞外表达的影响;... 为了促进重组淀粉分支酶在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis WB600)中的胞外表达,对重组淀粉分支酶在摇瓶水平上进行了发酵优化。首先,以胞外酶活力为指标,先后考察了初始培养基、pH、培养温度和培养时间4种因素对胞外表达的影响;然后,通过两阶段温度策略和助剂的添加进一步提高胞外表达水平。结果表明,当发酵培养基为TB、pH为7.5时,25℃培养24h后胞外酶活力达到19.9U/mL;同时,菌体生长最适温度和酶分泌的最适温度是不一致的,通过两阶段温度控制策略(即0—12h控制温度30℃,12h后温度调至25℃),胞外酶活力与单一温度条件下的最高水平(25℃)相比提高了1.4倍,达到了47.1U/mL;在此基础上,进一步添加0.05%的吐温-80,将胞外酶活进一步提高40%,达到65.8U/mL。 展开更多
关键词 淀粉分支酶 胞外表达 两阶段温度控制策略 发酵优化
在线阅读 下载PDF
天冬酰胺酶胞外表达的初步研究 被引量:1
5
作者 张志红 王利群 +1 位作者 陈驷 朱劼 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第16期6653-6654,6659,共3页
[目的]为降低L-天冬酰胺酶Ⅱ的生产成本提供依据。[方法]通过PCR反应扩增大肠杆菌JM109成熟区的L-天冬酰胺酶II基因(ansB),将扩增片段与pMD18-T载体连接,构建重组质粒pMD18-T-asp。对pMD18-T-asp与质粒pET-22b进行双酶切后,将它们连接起... [目的]为降低L-天冬酰胺酶Ⅱ的生产成本提供依据。[方法]通过PCR反应扩增大肠杆菌JM109成熟区的L-天冬酰胺酶II基因(ansB),将扩增片段与pMD18-T载体连接,构建重组质粒pMD18-T-asp。对pMD18-T-asp与质粒pET-22b进行双酶切后,将它们连接起来,转化感受态细胞,筛选重组表达载体pET-22b-asp。利用重组表达载体pET-22b-asp转化BL21(DE3),并对其发酵条件以及分离、纯化工艺进行了初步研究。[结果]成功克隆长度为960 bp的L-天冬酰胺酶II基因。重组表达载体pET-22b-asp也构建成功,并在BL21中得到表达。在重组菌接入TB培养基后2 h加入IPTG、培养基的初始pH值为7.2、装液量为12%,L-天冬酰胺酶Ⅱ酶活最高。重组天冬酰胺酶的纯化收率为82%,比活力达196 U/mg。[结论]重组天冬酰胺酶的胞外表达大大简化了其分离步骤。 展开更多
关键词 L-天冬酰胺酶Ⅱ 胞外表达 大肠杆菌
在线阅读 下载PDF
利用生物技术开发一种新乳糖酶及其高效生产途径
6
《农业科技通讯》 北大核心 2003年第10期43-44,共2页
关键词 生物技术 技术开发 乳糖酶 生产途径 酶活性 胞外表达 提取工艺
在线阅读 下载PDF
EXPRESSION OF MIDKINE IN BENIGN, PREMALIGNANT AND MALIGNANT VULVAR TUMORS 被引量:4
7
作者 武昕 姚嘉斐 +2 位作者 李祁伟 郑华川 辛彦 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 2002年第3期148-152,共5页
OBJECTIVE: To clarify the role of midkine (MK) in vulvar carcinogenesis though examination of its expression in vulvar lesions including vulvar condyloma acuminata (VCA), vulvar intraepithelial neoplasia (VIN) and vul... OBJECTIVE: To clarify the role of midkine (MK) in vulvar carcinogenesis though examination of its expression in vulvar lesions including vulvar condyloma acuminata (VCA), vulvar intraepithelial neoplasia (VIN) and vulvar squamous cell carcinomas (VSCC), and to analyze the relationship between MK expression and human papilloma virus (HPV) infection. METHODS: Thirty VSCC, 15 VIN and 10 VCA patients were studied by streptavidin-biotin-immunoperoxidase method. MK expression was compared with clinicopathologic features of vulvar tumors. RESULTS: MK was expressed in 26 of 30 VSCC (87%), 3 of 5 VIN III and all VCA samples, whereas no MK expression was detected in the VIN I-II samples or in normal epithelium. The difference of MK expression between VIN III and VSCC was statistically significant (P 展开更多
关键词 MIDKINE vulvar squamous cell carcinoma vulvar condyloma acuminataObjective. To clarify the role of midkine (MK) in vulvar carcinogenesis through examination of its expression in vulvar lesions including vulvar condyloma acuminata (VCA) vulva
在线阅读 下载PDF
Differentiation of mouse embryonic stem cells into insulin-secreting cells in vitro 被引量:1
8
作者 Sui Jing Jiang Fangxu Shi Bingyin 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 2011年第1期1-12,共12页
Regenerative medicine, including cell-replacement strategies, may have an important role in the treatment of type 1 diabetes which is associated with decreased islet cell mass. To date, significant progress has been m... Regenerative medicine, including cell-replacement strategies, may have an important role in the treatment of type 1 diabetes which is associated with decreased islet cell mass. To date, significant progress has been made in generating insulin-secreting 13 cells from pluripotent mouse embryonic stem cells (ESCs).The aim of this study is to explore the potential of regulating the differentiation of ESCs into pancreatic endocrine cells capable of synthesizing the pancreatic hormones including insulin, glucagon, somatostatin and pancreatic polypeptide under proper conditions. Undifferentiated ES cell line was stably transfected with mouse RIP-YFP plasmid construction in serum-free medium using LipofectamineTM 2000 Reagents. We tested pancreatic specific gene expression and characterized these ESC-derived pancreatic endocrine cells. Most of these insulin-secreting cells co-expressed many of the phenotypic markers characteristic of 13 cells such as insulinl, insulin2, Isletl, MafA, insulinoma-associated antigen 1 (IA1) and so on, indicating a similar gene expression pattern to adult islet 13 cells in vivo. Characterization of this population revealed that it consisted predominantly of pancreatic endocrine cells that were able to undergo pancreatic specification under the appropriate conditions. We also demonstrated that zinc supplementation mediated up-regulation of insulin-secreting cells as an effective inducer promoted the development of ESC-derived diabetes therapy. In conclusion, this work not only established an efficient pancreatic differentiation strategy from ESCs to pancreatic endocrine lineage in vitro, but also leaded to the development of new strategies to derive transplantable islet-replacement 13 cells from embryonic stem cells for the future applications of a stem cell based therapy of diabetes. 展开更多
关键词 Embryonic stem cells Pancreatic differentiation Insulin-secreting cells Transcription factors ZINC
在线阅读 下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部