细胞外信号调节蛋白激酶5/凋亡调节蛋白信号途径在低温诱导心肌细胞损伤及凋亡中的调控作用 被引量：7

1

作者 王耀晟 程晓曙 +2 位作者 洪葵 吴宗贵 李毅刚 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2014年第7期540-544,共5页

目的:探讨低温刺激诱导心肌细胞损伤及凋亡,以及细胞外信号调节蛋白激酶5(ERK5)/凋亡调节蛋白Bim途径的调控作用。方法:基于乳鼠原代心肌细胞,低温培养箱施加低温刺激;使用特异性小干扰RNA(siRNA)下调ERK5或Bim的表达;细胞凋亡使用流式... 目的:探讨低温刺激诱导心肌细胞损伤及凋亡,以及细胞外信号调节蛋白激酶5(ERK5)/凋亡调节蛋白Bim途径的调控作用。方法:基于乳鼠原代心肌细胞,低温培养箱施加低温刺激;使用特异性小干扰RNA(siRNA)下调ERK5或Bim的表达;细胞凋亡使用流式细胞仪检测;各蛋白表达水平通过Western blot检测;细胞内钙离子、活性氧簇(ROS)水平、线粒体膜电位(ΔΨm)通过荧光标记及流式细胞仪检测。结果:在低温刺激下的心肌细胞中,ERK5 siRNA可加剧Bim蛋白表达;Bim siRNA不影响ERK5,但减轻p-ERK5表达;ERK5 siRNA导致更高的细胞凋亡率,Bim siRNA则可减弱ERK5 siRNA的促凋亡作用;ERK5 siRNA加重了细胞内钙离子超载、ROS激活、线粒体膜电位破坏,Bim siRNA则可对抗上述损伤性作用。结论:在低温干预下的心肌细胞中,下调ERK5可释放对Bim的表达抑制,加重凋亡、细胞内钙离子超载、ROS爆发,造成更严重的线粒体膜电位破坏,而下调Bim则产生反向的保护作用。结果显示ERK5/Bim途径在低温诱导心肌细胞损伤中的重要调控作用。 展开更多

关键词 低温刺激 心肌细胞 细胞外信号调节蛋白激酶5 凋亡调节蛋白Bim

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胞外信号调节激酶5与动脉粥样硬化关系的研究进展 被引量：2

2

作者 王建茹 刘萍 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2016年第9期2126-2129,共4页

动脉粥样硬化是病因多样性和病机复杂性的疾病,其病理改变涉及炎症反应、内皮细胞功能障碍、巨噬细胞功能障碍、平滑肌细胞增殖等。胞外信号调节激酶5(extracellular-regulated kinase 5,ERK5)是丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)家族中的成员... 动脉粥样硬化是病因多样性和病机复杂性的疾病,其病理改变涉及炎症反应、内皮细胞功能障碍、巨噬细胞功能障碍、平滑肌细胞增殖等。胞外信号调节激酶5(extracellular-regulated kinase 5,ERK5)是丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)家族中的成员之一。ERK5信号通路通过三级酶促级联反应将氧化应激、剪切力、缺血、低氧、炎症等刺激信号传到细胞核内,调控着内皮细胞、巨噬细胞、血管平滑肌细胞等多种细胞的增殖、迁移、分化、衰老、凋亡等,与动脉粥样硬化的发生、发展有着十分密切的关系。就ERK5与动脉粥样硬化关系的研究进展进行综述。 展开更多

关键词 胞外信号调节激酶5 动脉粥样硬化 信号转导

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拮抗触液核细胞外信号调节蛋白激酶5对吗啡依赖大鼠戒断行为的影响

3

作者 王春光 郭淑琴 +4 位作者 张志强 丁彦玲 殷树欣 陈宏伟 张励才 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期225-229,共5页

目的探讨触液核磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶5（ERK5）在吗啡依赖大鼠戒断行为中的作用。方法成年♂sD大鼠48只，体质量230-270g，采用随机数字法，将大鼠随机分为两组（n=24）：吗啡-纳洛酮-DMSO组（A组）和吗啡-纳洛酮-BIX02188组（... 目的探讨触液核磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶5（ERK5）在吗啡依赖大鼠戒断行为中的作用。方法成年♂sD大鼠48只，体质量230-270g，采用随机数字法，将大鼠随机分为两组（n=24）：吗啡-纳洛酮-DMSO组（A组）和吗啡-纳洛酮-BIX02188组（B组）。采用剂量递增法皮下注射吗啡以建立大鼠吗啡依赖模型，d 6上午经腹腔注射纳洛酮，催促戒断症状出现，即建立吗啡戒断模型。采用行为药理学方法结合免疫荧光技术，侧脑室内注射ERK5特异性抑制剂BIX02188，观察其对吗啡依赖大鼠戒断行为、戒断所致痛觉过敏及触液核p-ERK5表达的影响。结果与吗啡-纳洛酮-DMSO组相比，吗啡一纳洛酮．BIX02188组大鼠跳跃、咬牙、湿狗样抖动、腹泻及体重减轻等戒断症状明显缓解（P〈0．05），而扭体、流涎无改善（P〉0．05）；戒断所致痛觉过敏明显减轻（P〈0．05）。与吗啡一纳洛酮-DMSO组相比，吗啡一纳洛酮-BIX02188组大鼠触液核p-ERK5阳性神经元数量明显减少（P〈0．05）。结论拮抗触液核ERK5可减轻吗啡依赖大鼠戒断症状，提示触液核ERK5参与吗啡依赖大鼠戒断症状的表达。 展开更多

关键词 吗啡依赖 戒断症状 触液核 远位触液神经元 细胞外信号调节蛋白激酶5 BIX02188

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细胞外信号调节蛋白激酶1/2抑制药对慢性阻塞性肺疾病小鼠气道高分泌黏蛋白5ac的作用机制 被引量：9

4

作者 覃英娇 周向东 +2 位作者 钟有清 王杰 刘峰 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第9期1122-1126,共5页

目的探讨细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)抑制药对慢性阻塞性肺病(COPD)小鼠气道高分泌黏蛋白5ac(muc5ac)的作用机制。方法检测不同药物干预7 d后各组小鼠肺功能指标,白细胞介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)水平,HE染色观察肺组织病理... 目的探讨细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)抑制药对慢性阻塞性肺病(COPD)小鼠气道高分泌黏蛋白5ac(muc5ac)的作用机制。方法检测不同药物干预7 d后各组小鼠肺功能指标,白细胞介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)水平,HE染色观察肺组织病理学变化,RT-qPCR检测肺组织muc5ac、ERK1/2 mRNA表达水平,Western blot检测肺组织muc5ac、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达水平。结果与模型组比较,抑制药组和西药组的低0.3 s用力呼气量(FEV0.3)、用力肺活量(FVC)、FEV0.3/FVC、IL-4水平升高,IFN-γ水平、muc5ac mRNA表达量、muc5ac、p-ERK1/2蛋白表达量降低(P <0.05),且肺组织病理学变化改善。结论 ERK1/2抑制药通过抑制ERK1/2信号通路,下调muc5ac表达改善COPD症状。 展开更多

关键词 细胞外信号调节蛋白激酶1/2 慢性阻塞性肺病 小鼠 气道 黏蛋白5AC

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大鼠细胞外信号调节激酶1基因3'非编码区双荧光素酶报告载体的构建及rno-miR-15b-5p对其活性的影响

5

作者 罗汉将 徐云峰 +2 位作者 李晓晓 杨予涛 徐志卿 《中国康复理论与实践》 CSCD 北大核心 2017年第2期166-172,共7页

目的以大鼠细胞外信号调节激酶1(ERK1)基因3'非编码区(UTR)为研究对象,构建含有ERK1基因3'UTR区的野生型以及突变型重组双荧光素酶报告载体,通过分析双荧光素酶报告载体的活性,明确rno-miR-15b-5p对报告载体的调节作用。方法采... 目的以大鼠细胞外信号调节激酶1(ERK1)基因3'非编码区(UTR)为研究对象,构建含有ERK1基因3'UTR区的野生型以及突变型重组双荧光素酶报告载体,通过分析双荧光素酶报告载体的活性,明确rno-miR-15b-5p对报告载体的调节作用。方法采用miRNeasy Mini Kit提取大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞的总RNA,以PC12细胞的c DNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)将ERK1基因3'UTR克隆到pmiR-RB-Report^(TM) vector中。利用重叠延伸PCR,将ERK1基因3'UTR中的rno-miR-15b-5p潜在的靶序列TGCTGCT分别突变成CGAACGT和GTACACG,并将突变的ERK1基因3'UTR克隆到pmiR-RB-Report^(TM) vector中。结果成功构建了包含ERK1基因3'UTR区的野生型报告载体pmiR-ERK1 3'UTR和突变型报告载体pmiR-ERK1-mut 3'UTR。利用荧光素酶活性检测系统,发现rno-miR-15b-5p mimic可以降低野生型报告载体的活性(P<0.001),但不影响突变型报告载体的活性。结论成功构建ERK1基因3'UTR区野生型和突变型双荧光素酶报告载体,初步证明ERK1基因3'UTR区是rno-miR-15b-5p的结合靶点。 展开更多

关键词 rno-miR-15b-5p 细胞外信号调节激酶1 重叠延伸聚合酶链式反应 pmiR-erk1 3'UTR pmiR-erk1-mut 3'UTR 荧光素酶活性检测

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荒漠甲虫小胸鳖甲胞外信号调节激酶ERK基因的克隆与低温表达谱分析 被引量：2

6

作者 孟闪闪 李洁琼 +2 位作者 阮梦鸽 陆雪莹 马纪 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期987-995,共9页

昆虫属变温生物,冷胁迫是其最常见的环境刺激。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路与细胞应对外界刺激密切相关,为了解MAPK信号通路在荒漠甲虫小胸鳖甲耐寒机制中的作用,从小胸鳖甲4℃转录组数据中筛选出胞外信号调节激酶(ERK)基因的全长... 昆虫属变温生物,冷胁迫是其最常见的环境刺激。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路与细胞应对外界刺激密切相关,为了解MAPK信号通路在荒漠甲虫小胸鳖甲耐寒机制中的作用,从小胸鳖甲4℃转录组数据中筛选出胞外信号调节激酶(ERK)基因的全长c DNA,命名为Mp ERK。生物信息学分析表明,Mp ERK全长1125 bp,编码374个氨基酸。Mp ERK的理论分子量是43 k Da,含有ERK激酶所共有的磷酸化位点,属于MAPK超家族,与其它物种ERK的一致性达80%以上。实时定量PCR检测Mp ERK基因在低温下的表达谱发现,4℃处理1 h后,Mp ERK基因的表达上调为对照的7.5倍,5 h时达到高峰,为对照的15倍。-4℃处理1 h后,Mp ERK基因的表达上调为对照的8.4倍,5 h时达到高峰,为对照的13.75倍。研究结果表明Mp ERK基因是冷响应的,可能在小胸鳖甲应对低温时发挥信号转导作用。 展开更多

关键词 MAPK通路 胞外信号调节激酶 小胸鳖甲 低温 erk信号通路

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黄芩素通过抑制胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)促进HeLa细胞凋亡 被引量：5

7

作者 王永周 夏纪毅 +4 位作者 唐小平 唐利 毛熙光 张宇骄 喻小兰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1507-1512,共6页

目的探讨黄芩素和U0126对人宫颈癌He La细胞凋亡的影响及机制。方法 He La细胞先用(1、2、5、10、20、50、100、200、300)μmol/L黄芩素,(1、2、5、10、20、30)μmol/L U0126处理24 h后,CCK-8法筛选最佳的处理浓度。而后分别用200μmol/... 目的探讨黄芩素和U0126对人宫颈癌He La细胞凋亡的影响及机制。方法 He La细胞先用(1、2、5、10、20、50、100、200、300)μmol/L黄芩素,(1、2、5、10、20、30)μmol/L U0126处理24 h后,CCK-8法筛选最佳的处理浓度。而后分别用200μmol/L黄芩素、10μmol/L U0126、200μmol/L黄芩素联合10μmol/L U0126处理He La细胞24 h,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)法检测细胞凋亡指数;实时定量PCR检测He La细胞胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、Bax和Bcl-2的mRNA水平、Western blot法检测ERK1/2、Bax和Bcl-2蛋白水平。结果 He La细胞经不同浓度的黄芩素或经不同浓度的U0126处理后,CCK-8法证明黄芩素最佳抑制浓度为200μmol/L,U0126最佳抑制浓度为10μmol/L;He La细胞经200μmol/L黄芩素处理24 h后,G0/G1期细胞比例明显增多,S期细胞比例明显下降,采用200μmol/L黄芩素联合10μmol/L U0126处理He La细胞24 h,S期细胞比例显著降低;10μmol/L U0126和200μmol/L黄芩素单独处理He La细胞,引起明显细胞凋亡,二者联合处理凋亡更明显;He La细胞经200μmol/L黄芩素或10μmol/L U0126单独处理或联合处理24 h后,ERK1/2和Bcl-2的mRNA表达水平明显降低、而Bax的mRNA水平升高;蛋白水平上,ERK1/2的磷酸化水平明显降低,Bax蛋白水平增加,Bcl-2的蛋白水平降低。结论黄芩素和U0126均可抑制He La细胞增殖、诱导细胞凋亡,增加G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例,联合应用效果更明显。 展开更多

关键词 黄芩素 U0126 宫颈癌 HELA细胞 凋亡 胞外信号调节激酶1/2(erk1/2)

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BMPs-ERK5信号通路调控人牙周膜干细胞成骨分化的研究 被引量：8

8

作者 蒋琳 周鹏飞 +1 位作者 王佳 张燕 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期718-725,共8页

目的比较骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMP)2、7、9对人牙周膜干细胞﹙human periodontal ligament stem cells,h PDLSCs﹚成骨分化的诱导作用,探讨BMPs-ERK5信号通路在成骨分化中的作用。方法首先采用组织块酶消化法分... 目的比较骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMP)2、7、9对人牙周膜干细胞﹙human periodontal ligament stem cells,h PDLSCs﹚成骨分化的诱导作用,探讨BMPs-ERK5信号通路在成骨分化中的作用。方法首先采用组织块酶消化法分离培养原代h PDLSCs并鉴定,利用腺病毒载体介导的GFP、BMP2、BMP7和BMP9(Ad-GFP、Ad-BMP2、Ad-BMP7、Ad-BMP9)分别感染h PDLSCs,通过早期成骨分化指标碱性磷酸酶活性定性和定量检测、茜素红染色检测晚期成骨分化指标钙盐结节沉积情况、qRT-PCR检测细胞成骨分化相关基因骨钙蛋白和骨桥蛋白mRNA表达,比较发现BMP9对细胞成骨分化的作用最强;采用Ad-BMP9感染h PDLSCs 24 h后,检测BMP9作用PDLSCs后对ERK5磷酸化水平的影响和ERK5信号通路特异性抑制剂BIX02189预处理后BMP9-ERK5通路对h PDLSCs成骨分化的影响。结果 1分离培养的h PDLSCs为成纤维细胞样,呈漩涡状生长,抗波形蛋白表达阳性,抗角蛋白表达阴性,具有间充质属性和克隆形成能力。2BMP2、BMP7和BMP9均有促进细胞成骨分化作用,其中3组的碱性磷酸酶定量结果和成骨分化相关基因相对表达量与GFP组比较,差异具有统计学意义(P<0.05),且BMP9效力最强。3Western blot检测显示BMP9增强p-ERK5的表达。而抑制剂BIX02189呈剂量依赖性地抑制p-ERK5的表达。BIX02189预处理细胞后、感染Ad-BMP9的结果显示,BMP9对细胞的促成骨作用较未处理组明显降低,其中BMP9组的碱性磷酸酶定量分析结果与成骨分化相关基因相对表达量与BIX02189处理组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 BMP9具有较强的促h PDLSCs成骨分化作用,ERK5信号转导途径在BMP9诱导h PDLSCs成骨分化过程中发挥了正向调节作用。 展开更多

关键词 骨形态发生蛋白 牙周膜干细胞 成骨分化 细胞外信号调节激酶5

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ERK5信号通路参与BMP9诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞的分化

9

作者 耿雪静 陈沅 +2 位作者 陈露 孙文静 刘书霞 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期661-665,共5页

目的:研究细胞外信号调节激酶5(extracellular signal-regulated kinase 5,ERK5)信号通路在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化中的作用。方法:用AdBMP9和AdGFP转染C3H10T1/2细胞,... 目的:研究细胞外信号调节激酶5(extracellular signal-regulated kinase 5,ERK5)信号通路在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化中的作用。方法:用AdBMP9和AdGFP转染C3H10T1/2细胞,流式细胞术检测转染效率,Western blot检测磷酸化ERK5(phosphorylation ERK5,p-ERK5)和ERK5的表达水平,免疫荧光检测p-ERK5在细胞内的表达位置;ERK5特异性抑制剂BIX02189预处理细胞再经AdBMP9诱导,Western blot检测pERK5和ERK5表达水平,RT-qPCR检测心肌特异性基因肌细胞增强因子(myocyte enhancer factor,MEF)2C、GATA结合蛋白4(GATA binding protein 4,GATA4)表达,Western blot检测心肌特异性蛋白缝隙连接蛋白43(connexin 43,CX43)、心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)表达。结果:AdGFP与AdBMP9的转染效率达50%左右,经AdBMP9诱导后的细胞p-ERK5表达明显增高(P<0.01),免疫荧光结果显示BMP9组p-ERK5表达明显增强且主要集中于胞核;15μmol/L BIX02189可完全抑制pERK5的表达(P<0.01),且明显降低了由AdBMP9诱导的C3H10T1/2细胞GATA4、MEF2C基因与CX43、cTnT蛋白表达(P=0.000)。结论:BMP9可以通过激活ERK5信号通路调控C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化。 展开更多

关键词 细胞外信号调节激酶5 骨形态发生蛋白9 心肌样细胞 肌细胞增强因子2C

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ERK5信号通路介导流体剪切力对MC3T3-E1成骨细胞MMPs、TIMPs表达的影响 被引量：5

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作者 杨全增 张成俊 +2 位作者 丁宁 李忠浩 夏亚一 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期588-593,共6页

目的观察流体剪切力(fluid shear stress,FSS)作用下,MC3T3-E1成骨细胞中细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)和基质金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)的表达情况,并探讨ERK5信号通路... 目的观察流体剪切力(fluid shear stress,FSS)作用下,MC3T3-E1成骨细胞中细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)和基质金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)的表达情况,并探讨ERK5信号通路在其中的作用。方法对MC3T3-E1成骨细胞进行不同的处理,分为正常组、XMD8-92组、FSS组和FSS+XMD8-92组,对FSS组施加12 dyn/cm^2流体剪切力,采用蛋白免疫印迹法分别检测P-ERK5、ERK5、MMPs和TIMPs蛋白水平的变化。结果生理强度(12 dyn/cm^2)的流体剪切力作用于MC3T3-E1成骨细胞45 min后能显著上调MMPs的表达,下调TIMPs的表达,但此效应可被ERK5高选择性抑制剂XMD8-92阻断。结论 ERK5信号通路调控流体剪切力对成骨细胞MMPs、TIMPs蛋白的表达。 展开更多

关键词 流体剪切力 MC3T3-E1细胞 细胞外信号调节激酶5 基质金属蛋白酶 基质金属蛋白酶抑制剂

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冠心康含药血清通过活化ERK5对ox-LDL负载的巨噬细胞胞葬作用的影响 被引量：4

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作者 王建茹 张一凡 +3 位作者 毛美娇 杜文婷 徐华英 刘萍 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期289-302,共14页

目的:探讨冠心康通过活化ERK5抗动脉粥样硬化的潜在分子机制.方法:用ERK5抑制剂(ERK5-IN-1和XMD8-92)干预RAW264.7细胞,探讨ERK5失活对巨噬细胞胞葬作用的影响.用ox-LDL干预RAW264.7细胞建立巨噬细胞胞葬作用功能受损的细胞模型,然后在... 目的:探讨冠心康通过活化ERK5抗动脉粥样硬化的潜在分子机制.方法:用ERK5抑制剂(ERK5-IN-1和XMD8-92)干预RAW264.7细胞,探讨ERK5失活对巨噬细胞胞葬作用的影响.用ox-LDL干预RAW264.7细胞建立巨噬细胞胞葬作用功能受损的细胞模型,然后在存在或不存在XMD8-92干预的情况下,用冠心康含药血清处理该细胞模型.流式细胞仪检测巨噬细胞的胞葬率,RT-qPCR和Western blot法检测巨噬细胞ERK5和C1qA的mRNA和蛋白的表达.结果:ERK5抑制剂XMD8-92和ERK5-IN-1均可抑制RAW264.7细胞的胞葬作用,抑制ERK5的活化和C1q A mRNA和蛋白的表达.冠心康含药血清可增强ox-LDL导致的受损的巨噬细胞胞葬作用,这一作用与冠心康活化ERK5和上调C1q A mRNA和蛋白的表达有关.结论:ERK5激酶的失活可通过下调C1qA的表达损伤巨噬细胞胞葬作用;冠心康可通过活化ERK5上调C1qA的表达,促进ox-LDL负载的巨噬细胞胞葬作用. 展开更多

关键词 动脉粥样硬化 胞葬作用 巨噬细胞 胞外信号调节激酶5(erk5)

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人肝癌多药耐药细胞中ERK5的表达 被引量：4

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作者 闫峰 王效民 潘超 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期483-486,共4页

目的检测人肝癌多药耐药细胞(hepG2/ADM和BEL-7402/5-FU)及亲本细胞(hepG和BEL-7402)中ERK5的表达,探讨其对肝癌细胞多药耐药的影响。方法MTT法测定人肝癌多药耐药细胞株多种化疗药物的交叉耐药性,实时荧光定量PCR检测ERK5在人肝癌多药... 目的检测人肝癌多药耐药细胞(hepG2/ADM和BEL-7402/5-FU)及亲本细胞(hepG和BEL-7402)中ERK5的表达,探讨其对肝癌细胞多药耐药的影响。方法MTT法测定人肝癌多药耐药细胞株多种化疗药物的交叉耐药性,实时荧光定量PCR检测ERK5在人肝癌多药耐药细胞及亲本细胞中mRNA水平的表达,western-blotting检测ERK5蛋白水平的表达。结果hepG2/ADM对ADM、5-FU、CDDP的耐药指数分别为12.34、5.74、3.81;BEL-7402/5-FU对5-FU、VCR、OHP、MTX和ADM的耐药指数分别为15.32、10.08、5.85、6.74和3.26。与亲本细胞相比较,在hepG2/ADM细胞中ERK5mRNA和蛋白表达均升高,而在BEL-7402/5-FU细胞中ERK5mRNA表达降低,ERK5蛋白表达升高。结论ERK5的表达与人肝癌多药耐药的发生密切相关,为逆转治疗肝癌细胞多药耐药研究提供了新思路。 展开更多

关键词 肝癌 多药耐药 细胞外信号调节激酶5

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ERK5和JNK参与BMP9诱导的C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化 被引量：4

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作者 耿雪静 刘书霞 陈沅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期829-832,840,共5页

目的研究细胞外信号调节激酶5(ERK5)和c-Jun N端激酶(JNK)在骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导的C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化中的作用。方法利用重组腺病毒将BMP9基因导入C3H10T1/2细胞,Western blot法检测加入BMP9及不同浓度ERK5特异性抑制... 目的研究细胞外信号调节激酶5(ERK5)和c-Jun N端激酶(JNK)在骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导的C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化中的作用。方法利用重组腺病毒将BMP9基因导入C3H10T1/2细胞,Western blot法检测加入BMP9及不同浓度ERK5特异性抑制剂BIX02189或JNK特异性抑制剂SP600125后ERK5和JNK的激活情况;实时定量PCR(qRT-PCR)检测BMP9诱导1周后心肌特异性基因肌细胞增强因子2C(MEF2C)、GATA结合蛋白4(GATA4)表达;Western blot法检测经BMP9诱导3周后心肌特异性蛋白缝隙连接蛋白43(CX43)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)表达和免疫荧光技术检测CX43、cTnT在细胞内的表达。结果在转染效率达50%左右的情况下,BMP9可过度激活ERK5和JNK,使其磷酸化水平显著增高(P<0.05);BIX02189抑制ERK5激活后,BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的心肌分化标志物MEF2C、GATA4、CX43、cTnT均受到显著抑制(P<0.05),JNK特异性抑制剂SP600125也可抑制MEF2C、GATA4、CX43、cTnT表达,但对MEF2C及GATA4的抑制不如BIX02189显著(P<0.05)。结论 ERK5和JNK的过度激活参与了BMP9诱导的C3H10T1/2细胞向心肌样细胞的分化。 展开更多

关键词 细胞外信号调节激酶5 C-JUN N端激酶 骨形态发生蛋白9 心肌样细胞 肌细胞增强因子2C

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ERK5抑制剂对巨噬细胞胞葬作用及ProS、Axl表达的影响 被引量：4

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作者 王建茹 刘萍 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期93-98,共6页

目的:观察ERK5抑制剂对巨噬细胞胞葬作用及相关信号分子ProS、Axl表达的影响.方法:体外常规培养RAW264.7巨噬细胞,并用ERK5抑制剂(XMD8-92和ERK5-IN-1)干预细胞,实验分为正常对照组、XMD8-92组和ERK5-IN-1组;流式细胞仪检测巨噬细胞的... 目的:观察ERK5抑制剂对巨噬细胞胞葬作用及相关信号分子ProS、Axl表达的影响.方法:体外常规培养RAW264.7巨噬细胞,并用ERK5抑制剂(XMD8-92和ERK5-IN-1)干预细胞,实验分为正常对照组、XMD8-92组和ERK5-IN-1组;流式细胞仪检测巨噬细胞的胞葬率,RT-qPCR和Western blot法检测巨噬细胞ProS和Axl的mRNA和蛋白的表达.结果:与正常对照组相比,XMD8-92组和ERK5-IN-1组巨噬细胞胞葬率下降(P<0.05),ProS和Axl的mRNA和蛋白的表达水平下调(P<0.05).结论:ERK5抑制剂可以抑制巨噬细胞的胞葬作用,下调胞葬作用相关信号分子ProS和Axl的mRNA和蛋白的表达,提示ERK5激酶的失活可能通过下调ProS、Axl的表达导致巨噬细胞胞葬作用受损. 展开更多

关键词 胞葬作用 胞外信号调节激酶5 Gas6/ProS-TAM系统 巨噬细胞

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siRNA 沉默 ERK5基因对 MC3 T3-E1成骨细胞增殖及BMP2／BMP7的影响 被引量：1

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作者 滕元君 陈少龙 +7 位作者 赵良功 姜金 崔兆辉 夏亚一 汪静 王翠芳 安丽萍 马靖琳 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1055-1058,共4页

目的观察ERK5信号通路对MC3T3-E1成骨细胞的增殖,及功能分化蛋白BMP2/BMP7的影响。方法应用小RNA分子干扰技术(siRNA)沉默ERK5基因,分别将浓度为20、40、60、80 nmol/L的ERK5 siRNA干预MC3T3-E1成骨细胞,筛选ERK5 siRNA转染的最佳浓度... 目的观察ERK5信号通路对MC3T3-E1成骨细胞的增殖,及功能分化蛋白BMP2/BMP7的影响。方法应用小RNA分子干扰技术(siRNA)沉默ERK5基因,分别将浓度为20、40、60、80 nmol/L的ERK5 siRNA干预MC3T3-E1成骨细胞,筛选ERK5 siRNA转染的最佳浓度。噻唑蓝实验(MTT)检测转染后12 h、24 h、36 h和48 h细胞的增殖情况,实时荧光定量PCR检测ERK5、BMP2和BMP7 mRNA的表达。Westernblot检测不同干预组BMP2及BMP7蛋白的表达变化。结果当ERK5siRNA浓度为60 nmol/L时,MC3T3-E1成骨细胞的ERK5 mRNA的表达下降最为显著,沉默率为76.8±2.2%(P<0.01)。ERK5 siRNA转染后12 h、24 h、36 h,成骨细胞的增殖受到明显抑制(P<0.05),但48 h转染组未发现明显变化(P>0.05)。ERK5 siRNA转染24 h后,实时荧光定量PCR结果显示:空白组与对照siRNA组成骨细胞的BMP2/BMP7 mRNA变化水平无显著性差异(P>0.05),但ERK5 siRNA转染组的BMP2/BMP7 mRNA明显降低(P<0.05);Westernblot结果显示,空白组与对照siRNA组成骨细胞的BMP2/BMP7蛋白未发现明显变化(P>0.05),但转染组成骨细胞的BMP2/BMP7显著降低(P<0.05)。结论 ERK5 siRNA对MC3T3-E1成骨细胞的增殖以及骨形态蛋白BMP2和BMP7的表达有明显抑制作用。 展开更多

关键词 成骨细胞 细胞增殖 骨形态蛋白 小RNA分子干扰 细胞外信号调节激酶5

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miR-508-5p慢病毒过表达载体构建及对MAPK1/ERK信号通路靶向抑制作用的研究

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作者 白静 范维宁 +3 位作者 邢译文 张涛 周林林 徐广贤 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期34-39,共6页

目的:构建能高效表达成熟miR-508-5p小分子的慢病毒过表达载体,研究其对MAPK1/ERK信号通路靶向调控作用。方法:利用化学合成miR-508-5p茎环结构RNA,并将其克隆入线性化的pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定;同时构建与miR-508-5p互补靶基... 目的:构建能高效表达成熟miR-508-5p小分子的慢病毒过表达载体,研究其对MAPK1/ERK信号通路靶向调控作用。方法:利用化学合成miR-508-5p茎环结构RNA,并将其克隆入线性化的pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定;同时构建与miR-508-5p互补靶基因MAPK1的3'非翻译区,将其克隆入线性化的Report载体中。利用脂质体转染试剂将鉴定阳性的pSicoR-miR-508-5p重组质粒转染HEK-293T细胞,进一步通过Relative luciferase activity、Western blot及real-time PCR试验检测MAPK1蛋白和mRNA相对表达水平。结果:酶切及测序结果证明成功构建pSicoR-miR-508-5p及Report-MAPK1 3'-UTR重组质粒,并通过实验证实miR-508-5p过表达明显抑制MAPK1的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05);抑制miR-508-5p的表达,又明显上调MAPK1的蛋白表达水平及mRNA相对含量(P<0.05)。结论:成功构建pSicoR-miR-508-5p慢病毒过表达载体,证实miR-508-5p直接靶标MAPK1的表达,在转录后水平对其进行负调控,为进一步研究miRNA对细胞通路和细胞周期的调控作用奠定了基础。 展开更多

关键词 miR-508-5P 细胞通路 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK1) 细胞外信号调节激酶(erk)

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西地那非通过上调ERK1/ERK2磷酸化增强5-羟色胺的促肺动脉平滑肌细胞增殖作用

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作者 李冰冰 姜桢 沈建颖 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期687-691,共5页

目的探讨西地那非增强5-羟色胺引起的肺动脉平滑肌细胞增殖作用的可能机制。方法体外原代培养猪肺动脉平滑肌细胞,取第3～5代细胞用于实验。细胞随机分为4组：对照组（CON）、5-羟色胺组（HT）、西地那非组（SIL）、西地那非和5-羟色胺... 目的探讨西地那非增强5-羟色胺引起的肺动脉平滑肌细胞增殖作用的可能机制。方法体外原代培养猪肺动脉平滑肌细胞,取第3～5代细胞用于实验。细胞随机分为4组：对照组（CON）、5-羟色胺组（HT）、西地那非组（SIL）、西地那非和5-羟色胺联合干预组（S-HT）。细胞传代培养的第3天,给予含0.2%胎牛血清的培养基饥饿72 h,CON组、HT组、SIL组分别给予PBS、10μmol/L 5-HT、1μmol/L西地那非干预;S-HT组提前20 min给予1μmol/L西地那非干预,再给予10μmol/L 5-羟色胺处理。细胞干预60 min后采用Westernblot法测定各组细胞外信号调节激酶（ERK1/ERK2）的磷酸化水平;加入5-羟色胺24 h后,流式细胞法测定细胞周期并计算S期细胞占细胞总数的比例;加入5-羟色胺72 h后MTT法检测细胞增殖程度。结果与CON组相比,HT组ERK1/ERK2的磷酸化水平、S期细胞比例及细胞增殖率明显增加（P〈0.05）,S-HT组ERK1/ERK2的磷酸化水平、S期细胞比例及细胞增殖率较HT组进一步增加（P〈0.05）;各组间总ERK1/ERK2水平差异无统计学意义（P〉0.05）。结论西地那非增强5-羟色胺引起的肺动脉平滑肌细胞DNA合成和增殖,可能与ERK1/ERK2的磷酸化水平上调有关。 展开更多

关键词 细胞外信号调节MAP激酶类 磷酸二酯酶抑制剂 血管平滑肌 肺动脉 5-羟色胺

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ERK5对体外血小板活化及在体血栓的影响 被引量：5

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作者 高稳 李剑 +2 位作者 倪唤春 刘俊岭 罗心平 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1958-1963,共6页

目的:探讨细胞外信号调节激酶5(ERK5)对体外血小板聚集及在体血栓的影响及机制。方法:采用Western blot对人血小板中ERK5的表达及其在血小板活化后的磷酸化水平进行检测;采用血小板聚集仪检测ERK5特异性抑制剂XMD8-92对血小板聚集及致... 目的:探讨细胞外信号调节激酶5(ERK5)对体外血小板聚集及在体血栓的影响及机制。方法:采用Western blot对人血小板中ERK5的表达及其在血小板活化后的磷酸化水平进行检测;采用血小板聚集仪检测ERK5特异性抑制剂XMD8-92对血小板聚集及致密颗粒释放的影响;采用Fe Cl3颈动脉血栓模型检测ERK5对在体血栓的影响;采用Western blot检测XMD8-92对蛋白激酶B(Akt)和人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源蛋白(PTEN)磷酸化的影响。结果:人血小板中存在ERK5的稳定表达,其磷酸化水平在血小板活化后显著升高(P<0.05)。XMD8-92可抑制多种血小板激活剂引起的血小板聚集和致密颗粒释放(P<0.05)。Western blot结果表明,XMD8-92可通过下调PTEN Ser370位点磷酸化而增强PTEN的活性,从而抑制Akt的磷酸化,这种抑制效果也通过血小板特异PTEN基因敲除小鼠得到了验证。在体血栓研究表明,XMD8-92经尾静脉给药,可显著延长小鼠第一次颈动脉血栓的形成时间。结论:ERK5可通过影响PTEN的磷酸化调节Akt的活化,进而影响到体外血小板的聚集和在体血栓的形成。 展开更多

关键词 细胞外信号调节激酶5 血小板 血栓 人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源蛋白

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沉默ERK5对乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/ADM耐药性的逆转作用及机制

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作者 张瀚文 张江涛 +3 位作者 庞森 陈俊 徐钰驹 吴向华 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期279-283,共5页

目的研究沉默细胞外信号调节激酶5(extracellular signal regulated kinase 5,ERK5)对乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/ADM耐药性的影响及其潜在机制。方法实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM、乳腺癌非耐药细胞MCF-7和正... 目的研究沉默细胞外信号调节激酶5(extracellular signal regulated kinase 5,ERK5)对乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/ADM耐药性的影响及其潜在机制。方法实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM、乳腺癌非耐药细胞MCF-7和正常乳腺细胞Hs578Bst中ERK5的表达水平。使用携带ERK5-shRNA或阴性对照shRNA的慢病毒载体转染MCF-7/ADM细胞,qRT-PCR检测转染后细胞ERK5沉默效率。同时设立加阿霉素组与不加阿霉素组,CCK-8法检测MCF-7/ADM细胞对药物的敏感性;克隆形成实验检测MCF-7/ADM细胞增殖能力;流式细胞术检测MCF-7/ADM细胞的凋亡及周期分布。结果与乳腺癌非耐药细胞MCF-7和正常乳腺细胞Hs578Bst细胞相比,ERK5在乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM中呈高表达水平(P<0.05)。沉默ERK5可有效抑制阿霉素作用下MCF-7/ADM细胞的增殖,并促进其凋亡(P<0.05)。同时,沉默ERK5还可增强MCF-7/ADM细胞对阿霉素药物的敏感性,并一定程度上使细胞阻滞于G0/G1期,抑制癌细胞的生长。结论ERK5参与乳腺肿瘤耐药性的调控,沉默ERK5可逆转MCF-7/ADM细胞的耐药性。 展开更多

关键词 细胞外信号调节激酶5 乳腺癌 化疗耐药 靶向治疗

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ERK5和MMP-9在骨肉瘤中的表达及其临床意义 被引量：15

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作者 王建澍 移志刚 +6 位作者 蒲彦川 宋建民 耿彬 康雅琼 马淑萍 安丽萍 夏亚一 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2017年第14期689-694,共6页

目的:探讨细胞外信号调节激酶5(extracellular signal-regulated kinase 5,ERK5)蛋白和基质金属蛋白酶-9(matrix metallo proteinase-9,MMP-9)在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义。方法:选取71例骨肉瘤组织和40例正常骨组织,采用免疫组... 目的:探讨细胞外信号调节激酶5(extracellular signal-regulated kinase 5,ERK5)蛋白和基质金属蛋白酶-9(matrix metallo proteinase-9,MMP-9)在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义。方法:选取71例骨肉瘤组织和40例正常骨组织,采用免疫组织化学法检测ERK5和MMP-9的表达,并分析ERK5和MMP-9的表达与骨肉瘤患者临床病理特征及预后之间的关系。结果:骨肉瘤组织中ERK5和MMP-9阳性表达率分别为85.9%(61/71)、74.65%(53/71),均明显高于正常骨组织中阳性表达率12.5%(5/40)、10.0%(4/40),差异均具有统计学意义(均P<0.05)。ERK5和MMP-9的阳性表达与Enneking分期和转移相关(均P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示在骨肉瘤组织中ERK5、MMP-9的阳性表达组患者生存时间均短于阴性表达组(均P<0.05)。单因素Cox回归分析发现,肿瘤大小、Enneking分期、转移、ERK5和MMP-9阳性表达与患者总生存时间相关(均P<0.05);多因素分析证实Enneking分期、转移、ERK5和MMP-9蛋白的阳性表达可作为骨肉瘤患者独立的预后因子(均P<0.05)。结论:ERK5和MMP-9在骨肉瘤组织中高表达,与骨肉瘤的病理特征及预后相关;二者可能在骨肉瘤发生发展的过程中起着重要作用。 展开更多

关键词 骨肉瘤 细胞外信号调节激酶5 基质金属蛋白酶-9 免疫组织化学 预后

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