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苯并[a]芘和1-羟基芘诱导人胚胎干细胞分化心肌细胞ROS、CYP基因表达和DNA损伤 被引量：4
1
作者 吴彬彬 晏斌 +2 位作者 胡梅 陈曦 梁岩 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期96-103,共8页
多环芳烃(PAHs)化合物中的苯并[a]芘和PAHs暴露检测标志物1-羟基芘与心脏功能障碍有关,但其生物学机制尚不清楚。为研究苯并[a]芘和1-羟基芘对心脏的毒性作用,基于人胚胎干细胞分化心肌细胞(hESC-CM)研究了苯并[a]芘和1-羟基芘对心肌细... 多环芳烃(PAHs)化合物中的苯并[a]芘和PAHs暴露检测标志物1-羟基芘与心脏功能障碍有关,但其生物学机制尚不清楚。为研究苯并[a]芘和1-羟基芘对心脏的毒性作用,基于人胚胎干细胞分化心肌细胞(hESC-CM)研究了苯并[a]芘和1-羟基芘对心肌细胞活性氧(ROS)生成、CYP基因表达和DNA损伤等的影响。结果表明,苯并[a]芘和1-羟基芘对h ESC-CM活性无影响,但能显著增强细胞ROS水平,诱导DNA损伤。此外,苯并[a]芘还能诱导细胞线粒体促凋亡基因的表达。研究表明,苯并[a]芘和1-羟基芘能通过诱导氧化应激和DNA损伤事件导致h ESC-CM损伤,在一定程度上解释了多环芳烃暴露导致心脏疾病的分子机制。 展开更多
关键词 多环芳烃 胚胎干细胞分化心肌细胞 DNA损伤
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小鼠胚胎干细胞分化心肌细胞过程中基因表达情况和电生理特性研究 被引量：4
2
作者 于艳秋 段亚琦 +3 位作者 张义侠 唐明 J.Hesheler 张海鹏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期666-669,共4页
目的:探讨小鼠胚胎干细胞在体外分化心肌样细胞过程中αMHC、Anf、MLC2v基因的表达情况以及分化的心肌样细胞的电生理特点。方法:将转染PαMHC-EGFP小鼠D3胚胎干细胞系,体外诱导分化心肌样细胞,应用RT-PCR检测0d、3d、5d、7d、10d、14d... 目的:探讨小鼠胚胎干细胞在体外分化心肌样细胞过程中αMHC、Anf、MLC2v基因的表达情况以及分化的心肌样细胞的电生理特点。方法:将转染PαMHC-EGFP小鼠D3胚胎干细胞系,体外诱导分化心肌样细胞,应用RT-PCR检测0d、3d、5d、7d、10d、14d拟胚体(EB)细胞中αMHC、Anf、MLC2v基因的表达情况,同时应用膜片钳技术,观察心肌样细胞的电生理特性。结果:在EB形成的7d和8d可见EB内出现有绿色荧光蛋白表达的心肌样细胞群;RT-PCR结果显示αMHC基因表达在EB体形成第7d,而在10d、14d跳动的心肌样细胞中该基因表达增强(P<0·05),而Anf、MLC2v基因的表达仅出现在心肌样细胞;膜片钳记录的心肌样细胞动作电位显示,73·5%(n=34)的细胞记录到典型心房肌细胞动作电位[APD90=(78·4±3·1)ms];20·5%细胞表现为起搏细胞动作电位[APD90=(112·6±5·5)ms];1个细胞显示了典型的心室肌细胞动作电位的特征(APD90=200ms)。结论:在心肌样细胞分化的早期可见αMHC、Anf、MLC2v基因的表达,这3种基因可为心肌发育过程中的特征性基因并对心肌发育起调节作用。而此干细胞系分化的心肌样细胞主要为心房肌细胞和起搏细胞。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 心肌细胞 细胞分化 基因表达
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小鼠胚胎干细胞分化心肌细胞毒蕈碱受体的表达特征 被引量：1
3
作者 杨洪涛 刘志强 +3 位作者 陈苹 马康涛 周春燕 张永珍 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期637-642,共6页
为了探讨胚胎干细胞分化心肌细胞(ESCM)毒蕈碱受体的表达规律及β肾上腺素能系统对M2受体表达的影响,采用10-4mol/L维生素C体外诱导小鼠M13胚胎干细胞分化为心肌细胞,用RT-PCR检测到分化后的细胞表达心肌细胞特异性基因Nkx2.5和β肌球... 为了探讨胚胎干细胞分化心肌细胞(ESCM)毒蕈碱受体的表达规律及β肾上腺素能系统对M2受体表达的影响,采用10-4mol/L维生素C体外诱导小鼠M13胚胎干细胞分化为心肌细胞,用RT-PCR检测到分化后的细胞表达心肌细胞特异性基因Nkx2.5和β肌球蛋白重链;用免疫荧光法检测到分化后的细胞表达心肌细胞特异性标志物α辅肌动蛋白.小鼠胚胎干细胞分化前表达M1和M2毒蕈碱受体,在分化过程中,M1受体表达逐渐下降,M2受体表达在第3d显著下降,此后表达逐渐增加,在第14d达到高峰;Western印迹结果显示,异丙肾上腺素明显抑制M2受体的表达,选择性β1肾上腺素受体拮抗剂CGP20712A明显上调其表达,而选择性β2肾上腺素受体拮抗剂ICI118551对其表达无影响.本实验表明,小鼠胚胎干细胞分化心肌细胞表达毒蕈碱受体,β肾上腺素能系统对M2受体表达有调控作用. 展开更多
关键词 胚胎干细胞 心肌细胞 毒蕈碱受体
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小鼠胚胎干细胞分化心肌细胞血管紧张素Ⅱ 1型和2型受体的表达特征 被引量：1
4
作者 崔京京 杨洪涛 +5 位作者 贾竹青 阎丽辉 张晨光 杨黄恬 周春燕 张永珍 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期643-650,共8页
胚胎干细胞(ESC)具有无限增殖和分化为体内3个胚层来源的各种类型组织细胞的潜能,经过体外诱导能够分化为心肌细胞,亦称为胚胎干细胞分化心肌细胞(ESCM).本研究探讨了ESC诱导分化心肌细胞过程中血管紧张素Ⅱ受体(ATR)的亚型AT1R和AT2R... 胚胎干细胞(ESC)具有无限增殖和分化为体内3个胚层来源的各种类型组织细胞的潜能,经过体外诱导能够分化为心肌细胞,亦称为胚胎干细胞分化心肌细胞(ESCM).本研究探讨了ESC诱导分化心肌细胞过程中血管紧张素Ⅱ受体(ATR)的亚型AT1R和AT2R的表达特征.10-4mol/L维生素C体外诱导小鼠R1胚胎干细胞分化为自发搏动的心肌细胞,用免疫荧光法检测分化后的细胞表达心肌细胞特异性标志物α辅肌动蛋白.小鼠胚胎干细胞在诱导分化为心肌细胞以后,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时定量RT-PCR(Real-timeRT-PCR)方法检测到ESCM表达AT1R,并且呈时间依赖性逐渐增加的特点,在第14d达到高峰.Western印记法检测AT1R表达特征与RT-PCR结果相符.Western印记法的结果显示,血管紧张素Ⅱ(10-6mol/L)可作为AT1R激动剂激活AT1R,并使其下游的细胞外信号调节激酶(ERK1/2)磷酸化水平上调,预孵育AT1R抑制剂Losartan(10-6mol/L),此作用被抑制.RT-PCR方法显示,与新生小鼠心室肌细胞相比,ESCM的AT2R表达水平较低. 展开更多
关键词 胚胎干细胞 心肌细胞 血管紧张素Ⅱ 1型和2型受体 细胞外信号调节激酶
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动物胚胎干细胞定向诱导分化为生殖细胞的研究进展
5
作者 祝晋轩 巨向红 《广东畜牧兽医科技》 2025年第3期63-70,共8页
胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)具有自我更新及无限分化潜能,理论上可以分化为生殖细胞。目前,在人及鼠中已有体外诱导ESCs分化为成熟精子以及卵母细胞的报道。该文系统总结了体外诱导ESCs分化为生殖细胞的内源性与外源性因素... 胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)具有自我更新及无限分化潜能,理论上可以分化为生殖细胞。目前,在人及鼠中已有体外诱导ESCs分化为成熟精子以及卵母细胞的报道。该文系统总结了体外诱导ESCs分化为生殖细胞的内源性与外源性因素及诱导分化方法,并就目前国内外诱导胚胎干细胞向生殖细胞分化的最新研究进展及应用前景进行了综述,期望为从事相关研究的学者提供参考。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 生殖细胞 诱导分化 定向分化
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丹参诱导pαMHC-EGFP小鼠转基因胚胎干细胞向心肌细胞分化的作用 被引量：7
6
作者 于艳秋 李昆 +3 位作者 卢晓梅 金玉楠 云伟 杜莉莉 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期150-152,共3页
目的:观察丹参对pαMHC-EGFP小鼠转基因胚胎干细胞向心肌细胞分化的诱导作用。方法:采用悬浮法,从拟胚体形成的第4、5、6、7d起在培养液中加入不同浓度的丹参诱导pαMHC-EGFP小鼠转基因胚胎干细胞向心肌细胞分化,计数第8、9、10、11、12... 目的:观察丹参对pαMHC-EGFP小鼠转基因胚胎干细胞向心肌细胞分化的诱导作用。方法:采用悬浮法,从拟胚体形成的第4、5、6、7d起在培养液中加入不同浓度的丹参诱导pαMHC-EGFP小鼠转基因胚胎干细胞向心肌细胞分化,计数第8、9、10、11、12d心肌细胞的分化率。用RT-PCR方法检测分化的心肌细胞αMHC、Anf、MLC2v基因的表达。结果:10、30、50、70mg/ml丹参在拟胚体形成的第10、11、12d均可明显提高心肌细胞的分化率(P<0.01)。RT-PCR结果αMHC、Anf、MLC2v基因在分化的心肌细胞中表达。结论:丹参可以体外提高pαMHC-EGFP小鼠转基因胚胎干细胞向心肌细胞的分化率。 展开更多
关键词 丹参 胚胎干细胞 心肌细胞 分化
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胚胎干细胞体外分化为心肌细胞诱导因素的探讨 被引量：17
7
作者 刘兰英 杨琨 +6 位作者 朱振宇 刘玉川 余细勇 银巍 汤建 马涧泉 顾军 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期389-392,共4页
目的：用胚胎干细胞（ＥＳＣ）体外诱导分化为心肌细胞，从分子水平上研究早期心脏发育相关基 因及其功能。方法：（１）胚胎干细胞的培养。（２）胚胎于细胞的分化培养。（３）被分化的心肌细胞鉴定：ＲＮＡ的 提取；心脏特异性引物的... 目的：用胚胎干细胞（ＥＳＣ）体外诱导分化为心肌细胞，从分子水平上研究早期心脏发育相关基 因及其功能。方法：（１）胚胎干细胞的培养。（２）胚胎于细胞的分化培养。（３）被分化的心肌细胞鉴定：ＲＮＡ的 提取；心脏特异性引物的合成和ＲＴ－ＰＣＲ反应；探针标记、纯化和比放射活性测定；ＲＮＡ斑点杂交。结果：用最 适条件培养液对ＦＳＣ定向诱导分化，可使８０％以上的ＥＳＣ分化为心肌细胞。心肌细胞以同步的方式进行收缩。 反转录ＰＣＲ和斑点杂交的结果显示：心肌在早期发育就开始表达其特异性基因。结论：胚胎干细胞体外能诱导 分化为心肌细胞。胎牛血清、二甲基亚砜和维甲酸的浓度及它们之间的组成不同，对ＥＳ细胞定向诱导为心肌 细胞均有影响。最佳诱导条件是用２ｎｍｏｌ／Ｌ维甲酸、０．６％二甲基亚砜和２０％胎牛血清组成的条件培养液。 展开更多
关键词 胚胎 干细胞 基因表达 心肌细胞 ESC
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体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的初步研究 被引量：10
8
作者 王秀丽 王常勇 +4 位作者 虞星炬 郭希民 段翠密 赵云山 董灵芝 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期441-445,共5页
目的 :5 -氮胞苷作为分化诱导剂 ,初步探讨其单独或联合全反式维甲酸应用时对小鼠胚胎干细胞(mESC)分化为心肌细胞的影响 ,旨在建立一种体外诱导mESC分化为心肌细胞的实验方法。方法 :采用MTT法确定 5 -氮胞苷的非细胞毒性参考剂量。设... 目的 :5 -氮胞苷作为分化诱导剂 ,初步探讨其单独或联合全反式维甲酸应用时对小鼠胚胎干细胞(mESC)分化为心肌细胞的影响 ,旨在建立一种体外诱导mESC分化为心肌细胞的实验方法。方法 :采用MTT法确定 5 -氮胞苷的非细胞毒性参考剂量。设计不同条件培养基 (5 -氮胞苷单独或配伍全反式维甲酸应用 )对mESC进行诱导分化 ,并通过免疫组化技术及RT -PCR方法等对分化细胞进行鉴定。结果 :5 -氮胞苷的非细胞毒性参考剂量为 8μmol/L ,能够诱导mESC分化为心肌合胞体 (与阴性对照组比较 ,P <0 0 1) ,诱导分化率可达 5 0 %。配伍全反式维甲酸持续诱导的结果等同于单独应用全反式维甲酸的作用效果 (P >0 0 5 ) :即对ESC向心肌细胞的诱导分化没有促进作用。结论 :5 -氮胞苷能够诱导mESC分化为心肌合胞体 ,从而得以建立一种体外诱导mESC分化为心肌细胞的方法。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 心肌 分化 阿扎胞苷 维甲酸
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与胎儿心肌细胞共同培养诱导人胚胎干细胞发生心肌样分化 被引量：6
9
作者 常静 雷寒 +1 位作者 陈建斌 贾锋鹏 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第15期1465-1468,共4页
目的了解与胎儿心肌细胞共同培养对人胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESCs）向心肌方向分化的影响。方法通过酶消化法从流产胎儿中分离培养出胎儿心肌细胞及成纤维细胞，将后者用丝裂霉素处理后制备成滋养层；收集辅助生育中心施行... 目的了解与胎儿心肌细胞共同培养对人胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESCs）向心肌方向分化的影响。方法通过酶消化法从流产胎儿中分离培养出胎儿心肌细胞及成纤维细胞，将后者用丝裂霉素处理后制备成滋养层；收集辅助生育中心施行试管婴儿后所剩余的健康胚胎，取内细胞团接种在滋养层上分离培养出人ESCs。用荧光原位杂交（fluorescent in situ hybridzation，FISH）方法来检测上述两种细胞的XY染色体，选用不同性别的胎儿心肌细胞与2—5代人ESCs以1：2的比例混合，然后以5×10^4／cm^2的密度接种于培养皿中进行共同培养，诱导其向心肌方向的分化。将未与胎儿心肌细胞混合的人ESCs以相同密度接种于培养皿中作为阴性对照。至第5天收集共同培养的细胞，进行双重染色，即FISH染色及心肌特异性蛋白Desmin或cTnⅠ免疫组化染色。结果在与胎儿心肌细胞共同培养5d后，40％～50％的人ESCs在心肌细胞的诱导下表达心肌特异性蛋白Desmin或cTnⅠ，而没有进行共同培养的人ESCs不表达上述蛋白。结论与胎儿心肌细胞的共同培养能诱导人ESCs发生向心肌方向的分化，人ESCs有望成为心肌干细胞移植的细胞材料。 展开更多
关键词 胎儿心肌细胞 人胚胎干细胞 共同培养 心肌样分化
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成熟心肌细胞诱导胚胎干细胞定向分化为心肌样细胞 被引量：6
10
作者 蒋芳萍 张晓刚 +2 位作者 丘彦 李卫东 常静 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期1030-1033,1037,共5页
目的:拟证实成熟心肌细胞对胚胎干细胞(ESCs)定向分化的诱导作用。方法:分离培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,以DAPI(4’6-联眯-2-苯基吲哚)染核作为细胞标记。取昆明小鼠3.5-4d的囊胚培养后分离出ESCs,以1和(或)2代的小鼠ESCs细胞团与心肌细胞... 目的:拟证实成熟心肌细胞对胚胎干细胞(ESCs)定向分化的诱导作用。方法:分离培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,以DAPI(4’6-联眯-2-苯基吲哚)染核作为细胞标记。取昆明小鼠3.5-4d的囊胚培养后分离出ESCs,以1和(或)2代的小鼠ESCs细胞团与心肌细胞共培养。录像动态观察ESCs向心肌细胞分化的情况;分别于共培养后3、7、14d对ESCs行肌钙蛋白T(cTnT)免疫荧光染色检测。结果:1代或2代的ESCs和/或细胞团与心肌细胞共培养约7d左右出现成节律搏动的心肌样细胞;最好实验批次,可计数到1/4以上的ESCs和/或ESCs细胞团出现节律性搏动。心肌细胞共培养体系中添加0.6%DMSO时,节律搏动的心肌样细胞分化率未见提高。心肌细胞诱导组,记录已搏动和未搏动ESCs诱导分化后心肌样细胞cTnT蛋白荧光染色阳性;ESCs与心肌成纤维细胞共培养诱导组,分化的细胞cTnT蛋白荧光染阴性;0.6%DMSO诱导组约3%的细胞cTnT蛋白荧光染色阳性;DMSO联合心肌细胞诱导组,结果与单纯心肌细胞诱导组相似。结论:未经建系操作的ESCs可直接诱导分化为节律搏动的心肌细胞;成熟心肌细胞与ESCs共培养状态下,成熟心肌细胞是ESCs定向分化较强的诱导因素。 展开更多
关键词 心肌细胞 胚胎干细胞 细胞分化
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诱导体外培养小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞方法的研究 被引量：10
11
作者 曾秋棠 曹林生 祝武强 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第7期628-631,共4页
目的 :采用布法罗大鼠肝细胞条件培养基代替重组LIF ,建立在不加任何化学诱导剂的情况下诱导体外培养小鼠胚胎干细胞 (ES细胞 )分化为心肌细胞的方法。方法 :在诱导分化实验前 ,应用BRL条件培养基来维持ES细胞生长和抑制其分化 ,并采取... 目的 :采用布法罗大鼠肝细胞条件培养基代替重组LIF ,建立在不加任何化学诱导剂的情况下诱导体外培养小鼠胚胎干细胞 (ES细胞 )分化为心肌细胞的方法。方法 :在诱导分化实验前 ,应用BRL条件培养基来维持ES细胞生长和抑制其分化 ,并采取将悬滴培养法和聚集培养法结合起来 ,分三步诱导ES细胞分化的方法。结果 :分化细胞中可见节律性收缩的细胞 ,经超微结构分析和免疫细胞学鉴定为心肌细胞。结论 :本法无需添加化学诱导剂 ,为一种简便、经济的诱导体外培养小鼠ES细胞分化为心肌细胞的方法。 展开更多
关键词 体外培养 小鼠 胚胎干细胞 心肌细胞 细胞分化 成纤维细胞
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比较体外不同条件诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞的实验研究 被引量：4
12
作者 钱海燕 李庚山 +3 位作者 徐红新 吕菁君 蒋雯 王晶 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期2198-2201,共4页
目的比较体外不同分化条件下胚胎干细胞(ESC)分化为心肌细胞的分化比率。方法用布法罗大鼠肝细胞(BRL)条件培养基抑制ESC分化及保持其增殖,以维甲酸(RA)、二甲基亚砜(DMSO)、转化生长因子β1(TGF-β1)及激活素-A(activin-A)为分化诱导剂... 目的比较体外不同分化条件下胚胎干细胞(ESC)分化为心肌细胞的分化比率。方法用布法罗大鼠肝细胞(BRL)条件培养基抑制ESC分化及保持其增殖,以维甲酸(RA)、二甲基亚砜(DMSO)、转化生长因子β1(TGF-β1)及激活素-A(activin-A)为分化诱导剂,组合成6种分化培养基,采用悬滴悬浮、贴壁三步法诱导ESC分化为心肌细胞,比较各组分化比率。结果6种分化条件均能使ESC分化为心肌细胞,其中以TGF-β1(2μg/L)、activin-A(20μg/L)及20%胎牛血清(FCS)组成的分化培养基可以使高达9280%±222%的ESC分化为心肌细胞,分化比率显著高于其它各组(P<001)。结论以BRL条件培养基培养,TGF-β1、activin-A作分化诱导剂可作为一种理想的ESC体外分化体系。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 心肌 细胞 分化
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仿生电刺激在心肌细胞诱导胚胎干细胞向心肌样细胞分化中的作用 被引量：4
13
作者 郑丽娜 张晓刚 +2 位作者 杨梁 张辉 王佳南 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期804-807,共4页
目的探讨仿生电刺激对离体心肌微环境诱导胚胎干细胞(ESCs)向心肌样细胞分化的作用。方法原代分离培养SD大鼠乳鼠心肌细胞及昆明小鼠ESCs,根据是否给予ESCs仿生电刺激及心肌微环境诱导分为5组:对照组、电刺激组、心肌细胞组、电刺激+心... 目的探讨仿生电刺激对离体心肌微环境诱导胚胎干细胞(ESCs)向心肌样细胞分化的作用。方法原代分离培养SD大鼠乳鼠心肌细胞及昆明小鼠ESCs,根据是否给予ESCs仿生电刺激及心肌微环境诱导分为5组:对照组、电刺激组、心肌细胞组、电刺激+心肌细胞条件培养液组、电刺激+心肌细胞组。分别于实验第5、7、14天在相差显微镜下观察各组细胞生长情况,实验结束时行肌钙蛋白T(cTnT)免疫荧光染色检测,计算cTnT阳性细胞百分率。结果与其他组相比,电刺激+心肌细胞组ESCs分化而来的心肌样细胞搏动更快,更趋于一致,ESCs诱导分化后的心肌样细胞cTnT蛋白荧光染色阳性率最高,约为40.0%±2.39%,显著高于对照组(2.00%±1.60%)、电刺激组(3.00%±2.00%)、心肌细胞组(28.70%±4.06%)及电刺激+心肌细胞条件培养液组(17.10%±2.23%,P<0.05)。结论模拟心脏跳动的仿生电刺激有助于ESCs在体外心肌微环境下分化为功能完备的心肌样细胞。 展开更多
关键词 电刺激 胚胎干细胞 肌细胞 心脏 细胞分化
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Junctophilin 1在小鼠胚胎干细胞定向分化心肌细胞及大鼠胚胎心肌发生中的表征 被引量：2
14
作者 梁星光 吴博文 +3 位作者 张维晨 周立民 朱丹雁 楼宜嘉 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期359-365,共7页
目的:评价膜连接蛋白Junctophilin 1(JP1)亚型在哺乳动物心肌发生过程中,基因转录和蛋白表达特征,为心肌发育生物学及心脏再生医学相关生命现象本质提供实验依据。方法:小鼠胚胎干(embryonic stem,ES)细胞相继制成单细胞悬液和悬滴,收... 目的:评价膜连接蛋白Junctophilin 1(JP1)亚型在哺乳动物心肌发生过程中,基因转录和蛋白表达特征,为心肌发育生物学及心脏再生医学相关生命现象本质提供实验依据。方法:小鼠胚胎干(embryonic stem,ES)细胞相继制成单细胞悬液和悬滴,收集拟胚体转至培养皿中悬浮分化培养。每隔2 d收集细胞供分子生物学评价,并于心肌分化成熟期(第17天),免疫荧光成像原位检测JP1与心肌小节蛋白α-Actinin和Troponin-T是否呈共表达,流式细胞术定量确认JP1阳染率。另以大鼠胎心为研究对象,大鼠受精后第14天起,每隔2 d取胎心直至分娩新生鼠,供RT-PCR和免疫印迹实验用。结果:ES细胞分化过程中,JP1在基因转录层面全程表达,至第11天达高峰。蛋白层面呈一过性表达,在第9天达高峰,此后迅速下降,至分化培养第15天消失,分化成熟期未见表达。大鼠胎心表达趋势与ES细胞分化过程基本一致,但JP1蛋白表达持续在出生后。在分化终端,流式细胞术显示JP2和肌小节蛋白双染率达16.59%,而未见JP1阳染细胞。结论:JP1基因在小鼠ES细胞定向分化心肌细胞全程均有转录,但JP1仅在分化早期有一过性表达。大鼠胎心JP1表达趋势与ES细胞分化过程基本相一致。 展开更多
关键词 Junctophilin 1 胚胎干细胞 连接蛋白类 心肌/生长和发育 心肌/细胞学 细胞分化 定向分化 大鼠胚胎 心肌发生
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抗坏血酸诱导体外培养小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞 被引量：2
15
作者 李捷 张宜明 +2 位作者 刘颖 夏晖 于长海 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第18期1722-1725,共4页
目的探讨采用抗坏血酸诱导体外培养小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cell,mESC)分化为心肌细胞的可行性。方法未分化ES细胞在滋养层上长至汇合,胰酶消化成单个细胞经旋转生物反应器(RCCS)制备拟胚体(em-bryoid bodies,EBs),EBs贴... 目的探讨采用抗坏血酸诱导体外培养小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cell,mESC)分化为心肌细胞的可行性。方法未分化ES细胞在滋养层上长至汇合,胰酶消化成单个细胞经旋转生物反应器(RCCS)制备拟胚体(em-bryoid bodies,EBs),EBs贴壁后用抗坏血酸诱导分化为心肌细胞。通过光镜观察跳动的心肌细胞,采用免疫组织化学、激光共聚焦显微镜(CLSM)和RT-PCR的方法鉴定心肌细胞。结果抗坏血酸能有效地诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞的分化,诱导效率为90%;分化的心肌细胞自发而有节律地收缩,心肌肌钙蛋白T(cTnT)、α-辅肌动蛋白(α-actinin)、肌动蛋白(actin)表达阳性。此外,分化的心肌细胞还表达调控心肌发育的基因α-MHC、β-MHC。结论抗坏血酸能有效地诱导体外培养小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 心肌细胞 抗坏血酸 细胞培养
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nesprins基因在胚胎干细胞分化为心肌细胞过程中的表达 被引量：1
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作者 王芳洁 易岂建 +3 位作者 郭鹏飞 刘晓燕 张秋萍 Shanahan C 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期652-656,共5页
目的:探讨nesprins基因在小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)分化为心肌细胞过程中的表达及作用。方法:体外培养小鼠ESC,采用5-氮杂胞苷为诱导剂诱导ESC分化为心肌细胞,并进行心肌细胞鉴定;RT-PCR检测分化过程中各时间点(d7、d7+3... 目的:探讨nesprins基因在小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)分化为心肌细胞过程中的表达及作用。方法:体外培养小鼠ESC,采用5-氮杂胞苷为诱导剂诱导ESC分化为心肌细胞,并进行心肌细胞鉴定;RT-PCR检测分化过程中各时间点(d7、d7+3、d7+6、d7+9、d7+20)nesprin-1、nesprin-2基因mRNA的表达;免疫荧光检测各时间点nesprin-1蛋白的细胞定位。结果:nesprin-1、nesprin-2基因mRNA在ESC分化为心肌细胞过程中均有表达;nesprin-1基因mRNA在d7、d7+3、d7+6均表达较高,无显著性差异,随后表达呈下降趋势,在d7+20时表达最低(P<0.05);nesprin-2基因mRNA在d7时表达最高,与d7+3、d7+6组间均有显著性差异(P<0.05),且随着分化时间的延长表达逐渐下降,在d7+20时表达最低;nesprin-1蛋白在ESC分化过程中均有表达,定位于核被膜及核周间隙。结论:nesprin-1、nesprin-2基因表达高峰在生心细胞的诱导和特化时期,推测nesprins对维持心肌细胞发育,使ESC更完全的向心肌细胞分化起重要作用。 展开更多
关键词 NESPRINS 胚胎干细胞 心肌细胞 分化 小鼠
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白藜芦醇通过上调小鼠胚胎干细胞过氧化物酶体增殖激活受体γ共激活子1α表达促进其分化为心肌细胞 被引量：4
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作者 方海琴 赵君 +6 位作者 崔亚雄 袁海涛 杨嵘 荣靖 赵增明 何俊 彭双清 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期156-162,共7页
目的观察白藜芦醇对小鼠胚胎干细胞(ESC)分化为心肌细胞的调节作用,并探讨其机制。方法 采用悬滴悬浮培养法培养ESC。白藜芦醇0.44,4.4和44μmo.lL-1处理ESC 96 h。光学显微镜下记录每组自发心肌搏动数;透射电镜观察细胞内线粒体结构;... 目的观察白藜芦醇对小鼠胚胎干细胞(ESC)分化为心肌细胞的调节作用,并探讨其机制。方法 采用悬滴悬浮培养法培养ESC。白藜芦醇0.44,4.4和44μmo.lL-1处理ESC 96 h。光学显微镜下记录每组自发心肌搏动数;透射电镜观察细胞内线粒体结构;实时PCR方法测定α-肌球蛋白重链(α-MHC)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、PPARγ共激活子1α(PGC-1α),核呼吸因子-1(NRF-1)、线粒体转录因子A(mtTFA)和线粒体呼吸链复合体Ⅳ(COXⅣ)的基因表达;Western蛋白印迹法检测PPARγ,α辅肌动蛋白和PGC-1α蛋白表达。结果 与正常对照组相比,白藜芦醇0.44和4.4μmo.l L-1可增加ESC细胞分化为自发搏动的心肌细胞数,并明显上调分化的ESC心肌特异性基因α-MHC表达,约分别为正常对照组的5.6和3.7倍;上调心肌细胞特定标识蛋白α辅肌动蛋白的表达,约为正常对照组的1.7和2.1倍;提示白藜芦醇可以促进ESC分化为心肌细胞。白藜芦醇干预各组均可上调PPARγ基因和蛋白表达,同时白藜芦醇0.44和4.4μmo.lL-1可以明显上调线粒体生物合成相关因子基因表达;白藜芦醇4.4μmo.lL-1处理组线粒体数目增多,提示线粒体生物合成可能是ESC分化为心肌细胞的重要机制。结论 白藜芦醇可以通过激动PPARγ受体并上调由PGC-1α介导的线粒体生物合成,从而促进ESC分化为心肌细胞。 展开更多
关键词 白藜芦醇 胚胎干细胞 氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活子1α 心肌细胞 线粒体生物合成
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TGF-β_1联合内脏内胚层END-2细胞诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞及与凋亡的关系 被引量：1
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作者 曾彬 林国生 +2 位作者 郑和忠 蔡军 罗浩 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1909-1913,共5页
目的:探讨体外诱导胚胎干细胞(ESCs)向心肌细胞分化过程中分化与凋亡的关系,为优化组织工程的种子细胞提供依据。方法:先将ESCs悬浮培养形成2-3 d拟胚体(embryoid bodies,EBs),再向培养液中添加转化生长因子-β1(TGF-β1),以及与内脏内... 目的:探讨体外诱导胚胎干细胞(ESCs)向心肌细胞分化过程中分化与凋亡的关系,为优化组织工程的种子细胞提供依据。方法:先将ESCs悬浮培养形成2-3 d拟胚体(embryoid bodies,EBs),再向培养液中添加转化生长因子-β1(TGF-β1),以及与内脏内胚层样END-2细胞条件培养液共培养联合诱导ESCs向心肌细胞分化。以自然分化为对照组。激光共聚焦显微技术检测心肌细胞特异性肌钙蛋白T(TnT)的表达,透射电镜观察分化心肌细胞的超微结构。用AnnexinⅤ/PI双染后,在流式细胞仪上检测ESCs分化过程中的凋亡情况。结果:EBs经TGF-β1诱导后,有(43.00±2.08)%的拟胚体出现自发节律性收缩,表达心肌细胞特异性蛋白TnT,以及观察到心肌样超微结构,尤其是联合TGF-β1和END-2细胞条件培养液诱导,自发性收缩的拟胚体高达(88.00±1.42)%(P<0.01),收缩区域较大且拥有较成熟的心肌样结构。然而自然分化组发生自发节律性收缩的拟胚体只有(12.00±1.53)%。经2种诱导条件诱导后,检测两者的凋亡率分别为(5.58±0.65)%,(9.60±0.75)%(P<0.05)。结论:联合TGF-β1和内脏内胚层样END-2细胞条件培养液对心肌细胞分化有较高的诱导率,两者发挥协同诱导作用,可能机制是直接诱导ESCs分化或促进不向心肌细胞分化的ESCs凋亡。 展开更多
关键词 END-2细胞 胚胎干细胞 心肌细胞 共同培养
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丹参在胚胎干细胞向心肌细胞分化中的作用 被引量：1
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作者 魏文娟 马玲 +2 位作者 马海英 金玉楠 于艳秋 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第A10期1999-2000,共2页
关键词 胚胎干细胞 肌细胞分化 拟胚体 诱导分化 丹酚酸 心肌细胞 单体成分 流式细胞分析法 辅肌动蛋白 免疫荧光化学
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药物介导小鼠胚胎干细胞体外定向分化为心肌细胞 被引量：1
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作者 楼宜嘉 朱丹雁 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2002年第1期5-5,共1页
关键词 小鼠 胚胎干细胞 体外定向分化 心肌细胞 药物筛选 药物介导
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