植物胚胎发育晚期丰富蛋白的结构与功能 被引量：11

1

作者 周丽 姬向楠 +2 位作者 何非 潘秋红 段长青 《热带生物学报》 2012年第2期191-196,共6页

胚胎发育晚期丰富蛋白(LEA蛋白)是植物在逆境条件下生成的一类应激蛋白,它可以通过稳定细胞膜、结合金属离子等机制提高植物的抗逆性。笔者对植物LEA蛋白的分类及其相应的结构,以及LEA蛋白响应干旱、低温及其他胁迫响应中功能的研究进... 胚胎发育晚期丰富蛋白(LEA蛋白)是植物在逆境条件下生成的一类应激蛋白,它可以通过稳定细胞膜、结合金属离子等机制提高植物的抗逆性。笔者对植物LEA蛋白的分类及其相应的结构,以及LEA蛋白响应干旱、低温及其他胁迫响应中功能的研究进展进行了综述。 展开更多

关键词 植物抗逆性 胚胎发育晚期丰富蛋白 结构 功能

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海马齿胚胎发育晚期丰富蛋白基因SpLea5的克隆与表达分析 被引量：2

2

作者 付桂 范伟 +1 位作者 畅文军 张治礼 《热带作物学报》 CSCD 2011年第1期89-93,共5页

根据筛选文库时获得的EST序列信息,利用RACE技术从海马齿根中分离获得了一个海马齿胚胎发育晚期丰富蛋白基因的全长cDNA,命名为SpLea5。序列分析结果表明,SpLea5基因cDNA全长685 bp,含有一个294 bp的完整开放阅读框,编码97个氨基酸残基... 根据筛选文库时获得的EST序列信息,利用RACE技术从海马齿根中分离获得了一个海马齿胚胎发育晚期丰富蛋白基因的全长cDNA,命名为SpLea5。序列分析结果表明,SpLea5基因cDNA全长685 bp,含有一个294 bp的完整开放阅读框,编码97个氨基酸残基;推测编码的氨基酸序列与柽柳、杨木樨、烟草、甜橙、温州蜜柑、麻风树和陆地棉中相应基因的氨基酸序列一致性为54%、52%、48%、47%、47%、46%、44%、41%,在聚类分析时与高等植物聚为一类。SpLea5在海马齿植株中呈组成型表达,但根中表达最为丰富,茎和叶次之;海水、NaCl、PEG、ABA处理均能够诱导根部SpLea5基因的表达。这些结果表明,SpLea5基因可能参与了海马齿对盐和干旱胁迫的分子响应。 展开更多

关键词 海马齿 胚胎发育晚期丰富蛋白基因 表达分析

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花生胚胎发育晚期丰富蛋白基因AhLEAL的克隆及其在非生物胁迫下的表达分析 被引量：1

3

作者 陈娜 程果 +8 位作者 陈明娜 姜健美 潘丽娟 陈静 王通 王冕 杨珍 迟晓元 禹山林 《花生学报》 北大核心 2018年第2期6-12,共7页

低温、高盐和干旱等非生物胁迫严重影响花生的生长和产量,而花生中有关非生物胁迫的研究及抗性基因的挖掘较少。胚胎发育晚期丰富蛋白(Late embryogenesis abundant,LEA)是一类亲水性蛋白,其功能主要是参与调控植物应答脱水相关的非生... 低温、高盐和干旱等非生物胁迫严重影响花生的生长和产量,而花生中有关非生物胁迫的研究及抗性基因的挖掘较少。胚胎发育晚期丰富蛋白(Late embryogenesis abundant,LEA)是一类亲水性蛋白,其功能主要是参与调控植物应答脱水相关的非生物胁迫包括耐盐、抗旱和抗冻等。本研究以花生品种花育33号为试验材料,根据cDNA文库中已知的胚胎发育晚期丰富蛋白基因全长序列设计引物,通过RT-PCR克隆到该基因。该基因全长为555bp,开放阅读框为291bp,编码97个氨基酸。核苷酸序列比对表明,该基因与花生中已注册基因AhARG2(XM_016113504)同源性为100%,与AhLEA6-1(HM543588)同源性为99%。蛋白序列比对分析表明,该基因编码的蛋白与Genbank上已经注册的沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)、牧豆树(Prosopis juliflora)和柠条锦鸡儿(Caragana korshinskii)等植物中的胚胎发育晚期丰富蛋白同源性达到近65%。我们将该基因命名为AhLEAL(Arachis hypogaea Late Embryogenesis Abundant Like)。预测该基因编码的蛋白可能定位于细胞液、线粒体、内质网和叶绿体中。荧光定量PCR结果显示,AhLEAL在花生叶片和根中的表达受低温和高盐胁迫的强烈诱导,在根中受干旱胁迫的强烈诱导,说明该基因可能参与了花生对三种非生物胁迫的适应性调控;此外,AhLEAL在花生叶片和根中的表达也明显受ABA的诱导,说明该基因对花生逆境胁迫的调控可能是以依赖ABA的方式进行的。 展开更多

关键词 花生 胚胎发育晚期丰富蛋白 克隆 非生物胁迫 荧光定量PCR

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沙冬青胚胎晚期发生丰富蛋白基因序列及表达特性分析 被引量：10

4

作者 师静 刘美芹 +3 位作者 史军娜 赵晓鑫 卢存福 尹伟伦 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期114-119,共6页

从沙冬青叶片EST文库中获得了胚胎晚期发生丰富蛋白(LEA)基因cDNA全长序列,命名为AmLEA14。序列分析表明该基因全长579bp,含有一个459bp编码152个氨基酸的开放阅读框,推测编码的蛋白质分子质量为16.6ku。二级结构预测显示此编码蛋白属于... 从沙冬青叶片EST文库中获得了胚胎晚期发生丰富蛋白(LEA)基因cDNA全长序列,命名为AmLEA14。序列分析表明该基因全长579bp,含有一个459bp编码152个氨基酸的开放阅读框,推测编码的蛋白质分子质量为16.6ku。二级结构预测显示此编码蛋白属于第4类LEA蛋白。系统发生分析表明,此编码蛋白与大豆LEA14蛋白(P46519.1)的亲缘关系最近。荧光定量PCR结果显示,AmLEA14的表达量在低温、干旱、盐胁迫条件下升高,但是主要在低温胁迫后期富集。推测AmLEA14基因可能在沙冬青抵御低温、干旱、盐胁迫中发挥作用,主要是参与沙冬青的低温防御机制。 展开更多

关键词 沙冬青 胚胎晚期发生丰富蛋白 序列分析 表达分析

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巴西橡胶树胚胎晚期丰富蛋白基因的克隆及序列分析 被引量：4

5

作者 喻修道 王真辉 +1 位作者 袁坤 杨礼富 《热带作物学报》 CSCD 2011年第7期1304-1308,共5页

根据抑制性消减杂交文库分离的EST片段,采用3'-RACE技术从巴西橡胶树胶乳中获得HbLEA14基因的全长cDNA序列,其ORF长456 bp,编码151个氨基酸,预测HbLEA14蛋白分子量为16.58 ku,等电点为5.10。同源性比对显示,HbLEA14与蓖麻RcLEA14、... 根据抑制性消减杂交文库分离的EST片段,采用3'-RACE技术从巴西橡胶树胶乳中获得HbLEA14基因的全长cDNA序列,其ORF长456 bp,编码151个氨基酸,预测HbLEA14蛋白分子量为16.58 ku,等电点为5.10。同源性比对显示,HbLEA14与蓖麻RcLEA14、乳浆大戟EeLEA14、陆地棉GhLEA14、大豆GmLEA14、拟南芥AtLEA14、番茄SlER5的同源性分别为88%、80%、75%、73%、65%和61%,属于非典型第2组LEA蛋白。RT-PCR结果显示,死皮植株胶乳中HbLEA14的表达量明显高于健康树。 展开更多

关键词 巴西橡胶树:胚胎晚期丰富蛋白 基因克隆 序列分析 RT—PCR

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莲种胚发育过程中胚胎晚期丰度蛋白基因表达量与种子含水量相关性分析 被引量：2

6

作者 盛江源 张荻 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2020年第3期75-81,120,共8页

通过莲胚形态观察、生理指标测定、蛋白质谱鉴定与基因表达量分析,筛选出莲胚脱水成熟过程中显著富集的LEA蛋白(late embriogenesis abundant protein),并分析其基因表达量与含水量的相关性。结果表明,莲胚发育成熟共需约30 d,形态发育1... 通过莲胚形态观察、生理指标测定、蛋白质谱鉴定与基因表达量分析,筛选出莲胚脱水成熟过程中显著富集的LEA蛋白(late embriogenesis abundant protein),并分析其基因表达量与含水量的相关性。结果表明,莲胚发育成熟共需约30 d,形态发育15~18 d,随后进入脱水成熟阶段。在种胚脱水阶段种胚含水量由80%下降到6.7%,细胞内蛋白含量上升2.75倍。对不同脱水阶段莲胚进行蛋白单向电泳,筛选出7条显著富集的蛋白条带,其中包含7种LEA家族蛋白:EMB564-like、Dehydrin Rab18、Lea14-A与4种D-34类蛋白。Dehydrin Rab18、D-34、D-34-like-1表达量随莲胚脱水而递增,与种子含水量呈负相关;EMB564-like、Lea14-A、D-34-like-2、D-34-like-3基因表达水平呈单峰曲线,在莲胚发育20 d时达到峰值。其中Dehydrin Rab18、EMB564-like与D-34-like-2在莲胚脱水阶段上调表达幅度最大,表达量分别是莲胚脱水前的38.7、11.5、19.0倍,可能与莲胚的逆境保护与耐储存机制相关。 展开更多

关键词 莲胚 脱水成熟 胚胎发育晚期丰度蛋白 质谱鉴定 基因定量

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丹参晚期胚胎蛋白基因SmLEA的克隆及表达分析 被引量：4

7

作者 刘丛玲 王喆之 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期80-84,共5页

对丹参EST序列进行Blast分析,发现一条序列与晚期胚胎丰富蛋白(late embryogenesis abundant)基因有较高的相似性,在此基础上设计引物,分别从cDNA和gDNA水平克隆到该基因的全长(Genbank注册号:AY725206),命名为SmLEA。该序列全长739 bp... 对丹参EST序列进行Blast分析,发现一条序列与晚期胚胎丰富蛋白(late embryogenesis abundant)基因有较高的相似性,在此基础上设计引物,分别从cDNA和gDNA水平克隆到该基因的全长(Genbank注册号:AY725206),命名为SmLEA。该序列全长739 bp,无内含子,包含1个长为495 bp的开放阅读框,编码164个氨基酸。序列比对结果显示,该序列与番茄的晚期胚胎丰富蛋白Lemmi9有较高的相似性(69%),推测该编码蛋白属于晚期胚胎蛋白LEA14家族成员。生物信息学显示,SmLEA所编码蛋白SmLEA的相对分子质量为17.34 kD,理论等电点为4.51,富含天冬氨酸及AS、IP、KV、VS、TIP肽段,定位于细胞质中,为稳定类蛋白。实时荧光定量PCR结果显示,该基因在丹参的根、茎、叶中均有表达,为组成型表达基因。 展开更多

关键词 晚期胚胎丰富蛋白 生物信息学 组成型基因 丹参

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野生茄托鲁巴姆LEA蛋白基因的克隆与序列分析 被引量：4

8

作者 叶雪凌 周宝利 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第3期30-34,共5页

野生茄托鲁巴姆高抗黄萎病,是研究茄子黄萎病抗性的理想试材。胚胎发育晚期丰富蛋白(LEA蛋白)是植物在逆境条件下生成的一类应激蛋白。研究以1个受黄萎病菌诱导的托鲁巴姆EST为种子序列,结合电子克隆及RT-PCR验证的策略,获得了LEA蛋白... 野生茄托鲁巴姆高抗黄萎病,是研究茄子黄萎病抗性的理想试材。胚胎发育晚期丰富蛋白(LEA蛋白)是植物在逆境条件下生成的一类应激蛋白。研究以1个受黄萎病菌诱导的托鲁巴姆EST为种子序列,结合电子克隆及RT-PCR验证的策略,获得了LEA蛋白基因的全长cDNA序列,命名为StLEA1。该基因的完整开放阅读框为291 bp,编码96个氨基酸,编码蛋白的分子量为10.748 kDa,等电点为9.913。经序列分析,StLEA1为水溶性蛋白,不存在信号肽,具有LEA5家族的典型结构域和保守序列,预测含有多个磷酸化位点。表达分析表明,托鲁巴姆受黄萎病菌侵染后,StLEA1在根系中上调表达。为探讨野生茄托鲁巴姆抗黄萎病分子机制提供了素材。 展开更多

关键词 野生茄托鲁巴姆 黄萎病 胚胎发育晚期丰富蛋白

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OsLEA5c在大肠杆菌中的表达、纯化及对蛋白质的保护效应研究

9

作者 胡廷章 陈再刚 +1 位作者 秦娟 黄小云 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第12期11-14,共4页

为了研究OsLEA5c蛋白对其他蛋白的保护效应,在大肠杆菌DL21中异源表达OsLEA5c蛋白,采用HiTrap^(TM) chelating HP层析柱纯化OsLEA5c蛋白。纯化的OsLEA5c蛋白用于高温、脱水和冻融胁迫下对乳酸脱氢酶的保护效应研究。结果表明,在PBS缓冲... 为了研究OsLEA5c蛋白对其他蛋白的保护效应,在大肠杆菌DL21中异源表达OsLEA5c蛋白,采用HiTrap^(TM) chelating HP层析柱纯化OsLEA5c蛋白。纯化的OsLEA5c蛋白用于高温、脱水和冻融胁迫下对乳酸脱氢酶的保护效应研究。结果表明,在PBS缓冲体系中,50℃处理10、20、30 min后,乳酸脱氢酶的活性分别残留43.20%、24.53%、17.55%;而按1∶1的质量比加入纯化的OsLEA5c蛋白后,乳酸脱氢酶活性分别保留85.77%、74.24%、65.27%。干燥脱水5 h后,乳酸脱氢酶活性仅保留2.55%~4.19%;按2∶1、5∶1和10∶1的质量比加入OsLEA5c蛋白,乳酸脱氢酶活性分别保留17.59%、24.73%、36.39%。反复冻融5次,乳酸脱氢酶活性残留9.41%~12.14%;而按2∶1、5∶1和10∶1的质量比加入纯化的OsLEA5c蛋白,乳酸脱氢酶活性分别保留28.09%、69.44%、95.16%。表明OsLEA5c蛋白对其他蛋白质具有保护作用,能减少高温、脱水和冻融胁迫对蛋白质的损伤。 展开更多

关键词 胚胎发育后期丰富蛋白 OsLEA5c蛋白 乳酸脱氢酶 蛋白质活性

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棉花种子特异表达的LEA启动子克隆及功能验证 被引量：9

10

作者 刘峰 汪小东 +1 位作者 赵彦鹏 孙杰 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期310-317,共8页

以棉花品种新陆早33号为材料,克隆获得其胚胎发育晚期丰富蛋白LEA基因的种子特异性启动子。启动子序列全长为1228bp;作用元件分析表明该区域除了具有启动子核心调控序列外,还含有多个与组织特异性、激素、逆境等表达相关的顺式作用元件,... 以棉花品种新陆早33号为材料,克隆获得其胚胎发育晚期丰富蛋白LEA基因的种子特异性启动子。启动子序列全长为1228bp;作用元件分析表明该区域除了具有启动子核心调控序列外,还含有多个与组织特异性、激素、逆境等表达相关的顺式作用元件,如E-box、ABRE元件、A-box等。与已报道的棉花品种Coker 201的LEA基因D34的5'端上游调控序列1212bp相比,两者具有97%的一致性。拟南芥遗传转化的功能分析结果表明,所克隆的序列能驱动GUS基因在种子中特异表达,且GUS主要在转基因植物的种子发育后期表达;其表达强度要弱于组成型的CaMV35S启动子。研究结果不仅有助于进一步深入认识棉花LEA基因功能及其表达调控规律,也为植物遗传转化提供组织特异性的启动子。 展开更多

关键词 棉花 种子特异性启动子 胚胎发育晚期丰富蛋白

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番木瓜干旱胁迫相关CpDHN1基因的克隆与分析 被引量：3

11

作者 郭静远 邹智 +2 位作者 孔华 贺萍萍 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2021年第12期3492-3499,共8页

番木瓜(Carica papaya L.)隶属于番木瓜科番木瓜属,是一种营养价值高的热带果树,广泛种植于热带和亚热带地区。作为全年结果的典型热带作物,番木瓜易受寒害、旱害等非生物胁迫的影响。然而,目前有关番木瓜的抗逆研究主要集中于导致绝产... 番木瓜(Carica papaya L.)隶属于番木瓜科番木瓜属,是一种营养价值高的热带果树,广泛种植于热带和亚热带地区。作为全年结果的典型热带作物,番木瓜易受寒害、旱害等非生物胁迫的影响。然而,目前有关番木瓜的抗逆研究主要集中于导致绝产的病毒病,鲜见针对非生物胁迫的报道。脱水素又名第二类胚胎发育晚期丰富蛋白,属于亲水性高、富含甘氨酸、复杂度低的非结构蛋白,因其与生物的抗逆性密切相关而受到广泛关注。为解决番木瓜生产在地域上的局限性,并进一步提高其品质和产量,积极筛选和鉴定参与非生物胁迫响应的关键基因具有重要的理论意义和应用价值。本研究基于转录组获得的CpDHN1转录本序列,以‘台农二号’番木瓜组培苗叶片为材料,提取总RNA进行反转录,结合RT-PCR技术克隆了该基因636 bp的全长编码区序列,在此基础上对其进行序列、表达特性以及原核表达分析。结果显示,CpDHN1编码211个氨基酸,其理论分子量为24.09 kDa,等电点为5.05,总平均疏水指数为–1.584,不稳定系数为66.51,属于不稳定、高度亲水的细胞核定位蛋白。CpDHN1蛋白富含谷氨酸、赖氨酸和丝氨酸,含有3个保守区域,即2个K片段和1个S片段,符合脱水素蛋白的基本结构特征,属于SKn型脱水素。生物信息学分析表明CpDHN1无跨膜螺旋,其二级结构中以α-螺旋结构占主导。表达分析显示,该基因在根、叶片和韧皮部树液中均有表达,且其表达水平受干旱胁迫调控。同源分析表明,CpDHN1与拟南芥AtLEA4序列相似性最高,为46.8%,而与番木瓜中已报导的另一个脱水素CpDHN的相似性仅为19.4%。研究还构建了CpDHN1的原核表达载体,根据SDS-PAGE结果,CpDHN1在40 kDa处有条中强度的诱导条带,而在55 kDa处有条高亮的诱导条带,可能与其无规结构有关。这些结果为进一步的功能分析与应用奠定了坚实的基础。 展开更多

关键词 番木瓜 胚胎发育晚期丰富蛋白 脱水素 干旱胁迫 原核表达

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水稻干尖线虫Ab-lea基因在高渗透压下的表达 被引量：2

12

作者 陈俏丽 王峰 +2 位作者 李丹蕾 零雅茗 张瑞芝 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期652-657,共6页

【目的】水稻干尖线虫(Aphelenchoides besseyi)在侵染寄主以前,能够以变渗隐生状态在土壤和种子中的高渗透压环境下长期存活,使防治该线虫极为困难。通常,非生物胁迫下,胚胎发育晚期丰富蛋白(late embryogenesis abundant protein,LEA... 【目的】水稻干尖线虫(Aphelenchoides besseyi)在侵染寄主以前,能够以变渗隐生状态在土壤和种子中的高渗透压环境下长期存活,使防治该线虫极为困难。通常,非生物胁迫下,胚胎发育晚期丰富蛋白(late embryogenesis abundant protein,LEA)的基因表达量会显著上调。作为逆境表达蛋白,LEA能在逆境下保护生物。为探究水稻干尖线虫LEA编码基因(Ab-lea)在高渗透压胁迫下的表达模式及功能,【方法】根据转录组数据克隆到Ab-lea。以无机溶剂饱和Mg SO4·7H2O溶液为高渗透压胁迫剂,对水稻干尖线虫进行高渗透压胁迫,240 min后该线虫进入变渗隐生。通过RT-PCR验证Ab-lea在线虫进入变渗隐生及维持变渗隐生过程中的表达特性。使用RNAi技术,探究该线虫Ab-lea沉默后,高渗透压胁迫下存活率变化。【结果】RT-PCR结果表明,Ab-lea在进入变渗隐生前期及维持变渗隐生过程中表达量上调。Ab-lea沉默后,水稻干尖线虫在进入变渗隐生后存活率显著下降。【结论】表明该基因可能参与调控水稻干尖线虫变渗隐生。本研究为进一步探究该线虫抗高渗透压胁迫的生理机制奠定基础,为防治该线虫提供新思路。 展开更多

关键词 胚胎发育晚期丰富蛋白 水稻干尖线虫 高渗透压胁迫 变渗隐生 基因干涉

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植物非生物胁迫应答的分子机制 被引量：22

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作者 杨献光 梁卫红 +2 位作者 齐志广 马闻师 沈银柱 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期158-161,共4页

非生物胁迫因子是制约植物生长发育、影响作物产量和质量的关键因子。这些非生物胁迫的共同点是它们都会导致植物细胞缺水,使细胞的水分平衡紊乱,还可以引起蛋白质等大分子变性,破坏植物细胞内的膜结构等。为了生存,植物在遇到非生物胁... 非生物胁迫因子是制约植物生长发育、影响作物产量和质量的关键因子。这些非生物胁迫的共同点是它们都会导致植物细胞缺水,使细胞的水分平衡紊乱,还可以引起蛋白质等大分子变性,破坏植物细胞内的膜结构等。为了生存,植物在遇到非生物胁迫时不得不在形态和生理生化代谢上进行一些调整,以适应或忍耐环境胁迫。揭示植物胁迫应答分子机理是人们长期以来探索的重大课题。非生物胁迫引起的应答非常复杂并且常常相互关联,干旱、高盐、低温等胁迫可以引起相似的应答反映,如积累大量的渗透调节剂、重建细胞内离子动态平衡、修复被破坏的膜系统、清除活性氧自由基等等。近年来,胁迫应答的分子机理研究成果颇丰,结合笔者等的研究,本文简要进行了综述。 展开更多

关键词 植物 非生物胁迫 信号转导 蛋白激酶 胚胎晚期丰富蛋白 转录因子

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荧光定量PCR检测干旱胁迫下长春花Crlea基因的相对表达(英文) 被引量：5

14

作者 祖元刚 聂明珠 +2 位作者 房思良 于景华 郭晓瑞 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期405-410,共6页

首次从长春花中克隆了Crlea（Crlea for Catharanthus roseus late embryogenesis abundant）的全长基因,采用荧光定量PCR方法对干旱胁迫下长春花叶片和根部Crlea基因的表达模式进行监测,结果表明,在0.5～8h的胁迫时间中,叶片和根部的Cr... 首次从长春花中克隆了Crlea（Crlea for Catharanthus roseus late embryogenesis abundant）的全长基因,采用荧光定量PCR方法对干旱胁迫下长春花叶片和根部Crlea基因的表达模式进行监测,结果表明,在0.5～8h的胁迫时间中,叶片和根部的Crlea基因表现出相似的积累模式.长春花Crlea基因的表达随着胁迫时间的延长而表达增强.在叶片中,在6 h和8 h的干旱处理后,Crlea基因表达显著提高,分别是未处理材料的9.984和20.431倍.在根部, 在8 h的处理后,Crlea基因的表达量显著提高（2.831倍于对照）.初步结果表明Crlea基因的表达没有组织特异性,并且为干旱胁迫正调控. 展开更多

关键词 长春花 干旱胁迫 晚期胚胎丰富蛋白 荧光定量 相对表达

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花生中三个LEA基因的克隆与表达分析 被引量：12

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作者 赵小波 张廷婷 +5 位作者 闫彩霞 李春娟 王娟 张浩 石程仁 单世华 《花生学报》 北大核心 2016年第4期14-19,共6页

胚胎发生晚期丰富蛋白(LEA)是一类受发育阶段及脱水信号调节的脱水保护蛋白,在响应植物干旱、低温、高盐等逆境胁迫中具有重要功能。本研究在转录组数据分析时,发现3个LEA基因在花生干旱胁迫时大量上调表达。利用RACE技术以及生物信息... 胚胎发生晚期丰富蛋白(LEA)是一类受发育阶段及脱水信号调节的脱水保护蛋白,在响应植物干旱、低温、高盐等逆境胁迫中具有重要功能。本研究在转录组数据分析时,发现3个LEA基因在花生干旱胁迫时大量上调表达。利用RACE技术以及生物信息学方法,发现这三个基因分别属于LEA2、LEA3以及LEA4。通过序列比对进行进化分析,结果表明其均与Arachis duranensis,A.ipaensis相关基因具有极高相似度,印证了栽培花生来源于Arachis duranensis和A.ipaensis的研究结果。通过表达分析发现,正常状态下这三个基因在花生根、茎、叶中均有表达;干旱胁迫状态下,花生根部的LEA基因大量表达,暗示其在花生抗旱机制中发挥重要作用。本研究结果可为筛选新的抗旱花生种质提供理论依据。 展开更多

关键词 花生 胚胎发生晚期丰富蛋白 干旱 转录组

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水稻OsLEA19a基因在大肠杆菌中的表达和抗逆性分析 被引量：4

16

作者 胡廷章 杨俊年 +1 位作者 吴应梅 陈再刚 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第6期1-4,共4页

根据胚胎发育后期丰富蛋白基因OsLEA19a的读码框序列设计引物,PCR扩增目的基因后,利用基因重组技术成功构建原核表达载体pET30a-OsLEA19a,并将重组质粒转化到E.coli BL21中。优化诱导OsLEA19a表达的条件,使目的蛋白可在E.coli BL21中高... 根据胚胎发育后期丰富蛋白基因OsLEA19a的读码框序列设计引物,PCR扩增目的基因后,利用基因重组技术成功构建原核表达载体pET30a-OsLEA19a,并将重组质粒转化到E.coli BL21中。优化诱导OsLEA19a表达的条件,使目的蛋白可在E.coli BL21中高效表达。OsLEA19a融合蛋白的SDS-PAGE电泳分析表明,诱导蛋白表达的最适条件是37℃、4 h,融合蛋白的大小大约为30 kDa。抗逆性分析表明,OsLEA19a的表达能增强大肠杆菌对高盐、高渗透压、高温和低温等非生物胁迫的抗性。 展开更多

关键词 胚胎发育后期丰富蛋白 OsLEA19a 蛋白表达 大肠杆菌 抗逆性

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扁蓿豆MrLEA2基因的克隆和原核表达 被引量：5

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作者 马超 沈迎芳 +1 位作者 吴小培 王海庆 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1944-1950,共7页

从扁蓿豆(Medicago ruthenica L.)幼苗中克隆到一个编码晚期胚胎发生丰富蛋白的基因MrLEA2,Pfam数据库检索表明其编码产物属于LEA_2蛋白家族。半定量RT-PCR分析发现MrLEA2在幼苗中表达水平不受非生物胁迫(脱水、高盐和低温)和脱落酸诱... 从扁蓿豆(Medicago ruthenica L.)幼苗中克隆到一个编码晚期胚胎发生丰富蛋白的基因MrLEA2,Pfam数据库检索表明其编码产物属于LEA_2蛋白家族。半定量RT-PCR分析发现MrLEA2在幼苗中表达水平不受非生物胁迫(脱水、高盐和低温)和脱落酸诱导。利用MrLEA2基因构建原核表达载体,在大肠杆菌中实现了过量表达。通过斑点试验和菌落计数实验,对过量表达MrLEA2蛋白的大肠杆菌细胞在高盐(0.5mol/L NaCl和0.5mol/L KCl)、55℃高温和-20℃冷冻胁迫处理下的生长存活情况检测发现,MrLEA2蛋白过量表达能够明显提高大肠杆菌对上述胁迫的耐受性。研究表明,MrLEA2蛋白对高盐和温度胁迫引起的细胞损伤具有保护作用。 展开更多

关键词 扁蓿豆 晚期胚胎发生丰富蛋白 大肠杆菌 过量表达 盐胁迫 温度胁迫

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水稻OsLEA5c基因的克隆、表达和抗逆性分析 被引量：3

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作者 胡廷章 杨俊年 +2 位作者 周大祥 黄小云 陈再刚 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2014年第9期18-23,共6页

为了研究水稻胚胎发育后期丰富蛋白基因OsLEA5c 的抗逆性，利用 RT PCR技术从水稻中克隆到OsLEA5c的 cDNA。序列分析表明，OsLEA5c基因的读码框为456 bp，编码1个由151个氨基酸残基组成的蛋白。蛋白分子量为16.55 kD，等电点为5.07。OsL... 为了研究水稻胚胎发育后期丰富蛋白基因OsLEA5c 的抗逆性，利用 RT PCR技术从水稻中克隆到OsLEA5c的 cDNA。序列分析表明，OsLEA5c基因的读码框为456 bp，编码1个由151个氨基酸残基组成的蛋白。蛋白分子量为16.55 kD，等电点为5.07。OsLEA5c蛋白的平均亲水系数（GRAVY）为0.020，为疏水蛋白。OsLEA5c蛋白的44－140位氨基酸残基形成 LEA_2结构域。进化树分析表明，OsLEA5 c属于第5组LEA蛋白的C亚组。OsLEA5 c与5 C亚组LEA蛋白的氨基酸一致性为45.14％～61.59％。利用基因重组技术构建的原核表达载体 pET32a Os-LEA5c，转化到E．coli BL21 pLysS菌株中，诱导得到34 kD的融合蛋白。OsLEA5c在大肠杆菌中的表达增加了大肠杆菌对高温、高盐、高渗透压和反复冻融的抗性。OsLEA5c 基因在水稻抗逆和种子成熟脱水过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 水稻 胚胎发育后期丰富蛋白 OsLEA5c基因 表达 抗逆性 ORYZA SATIVA L.

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OsLEA2基因在原核生物中的异源表达和抗性分析 被引量：2

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作者 胡廷章 钟彦 +2 位作者 陈林 杨俊年 黄小云 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期2281-2284,共4页

为了研究胚胎发育后期丰富蛋白基因OsLEA2的功能,利用PCR方法扩增目的基因,采用基因重组、蛋白质表达和抗逆性分析对OsLEA2基因进行研究。结果表明,构建的原核表达载体pET32a-OsLEA2,转化到E.coli BL21中,得到表达OsLEA2融合蛋白的工程... 为了研究胚胎发育后期丰富蛋白基因OsLEA2的功能,利用PCR方法扩增目的基因,采用基因重组、蛋白质表达和抗逆性分析对OsLEA2基因进行研究。结果表明,构建的原核表达载体pET32a-OsLEA2,转化到E.coli BL21中,得到表达OsLEA2融合蛋白的工程菌;SDA-PAGE分析表明融合蛋白的分子量约为29.4 kDa。OsLEA2的表达增强了大肠杆菌对高盐、高温、低温和紫外照射等非生物胁迫的抗性。该研究为进一步改良作物品种、提高农作物的抗逆性奠定基础。 展开更多

关键词 胚胎发育后期丰富蛋白 OsLEA2 异源表达 大肠杆菌 抗逆性

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转CkLEA4基因拟南芥种子萌发期的抗逆性分析 被引量：2

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作者 于秀敏 张燕娜 +4 位作者 岳文冉 杨杞 万永青 李国婧 王瑞刚 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期648-654,共7页

该研究在实验室前期研究的基础上,将受脱水、盐胁迫和ABA诱导的柠条锦鸡儿CkLEA4基因转入野生型拟南芥,并利用实时荧光定量PCR从8株纯合体中筛选出3个表达量不同的株系,比较野生型和转CkLEA4基因过表达拟南芥种子在不同胁迫处理下的萌发... 该研究在实验室前期研究的基础上,将受脱水、盐胁迫和ABA诱导的柠条锦鸡儿CkLEA4基因转入野生型拟南芥,并利用实时荧光定量PCR从8株纯合体中筛选出3个表达量不同的株系,比较野生型和转CkLEA4基因过表达拟南芥种子在不同胁迫处理下的萌发率,以探讨CkLEA4基因在植物抵抗逆境胁迫中的功能。结果发现:(1)在不同浓度NaCl、甘露醇及ABA处理下,转CkLEA4基因过表达拟南芥种子的萌发率均高于野生型,随着NaCl、甘露醇及ABA浓度增加,各株系萌发率均降低,但野生型的萌发率下降幅度均高于3个过表达株系,并且在200mmol/L NaCl和400mmol/L甘露醇处理下,过表达株系子叶绿化率均显著高于野生型。(2)在低浓度ABA处理下,CkLEA4过表达植株子叶的绿化率也高于野生型。研究表明,柠条锦鸡儿CkLEA4基因提高了拟南芥种子萌发阶段对盐、ABA及渗透胁迫的耐受性。 展开更多

关键词 柠条锦鸡儿 胚胎晚期丰富蛋白基因 非生物胁迫 转基因拟南芥

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