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与胎儿心肌细胞共同培养诱导人胚胎干细胞发生心肌样分化
被引量：
6
1
作者
常静
雷寒
+1 位作者
陈建斌
贾锋鹏
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第15期1465-1468,共4页
目的了解与胎儿心肌细胞共同培养对人胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESCs）向心肌方向分化的影响。方法通过酶消化法从流产胎儿中分离培养出胎儿心肌细胞及成纤维细胞，将后者用丝裂霉素处理后制备成滋养层；收集辅助生育中心施行...
目的了解与胎儿心肌细胞共同培养对人胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESCs）向心肌方向分化的影响。方法通过酶消化法从流产胎儿中分离培养出胎儿心肌细胞及成纤维细胞，将后者用丝裂霉素处理后制备成滋养层；收集辅助生育中心施行试管婴儿后所剩余的健康胚胎，取内细胞团接种在滋养层上分离培养出人ESCs。用荧光原位杂交（fluorescent in situ hybridzation，FISH）方法来检测上述两种细胞的XY染色体，选用不同性别的胎儿心肌细胞与2—5代人ESCs以1：2的比例混合，然后以5×10^4／cm^2的密度接种于培养皿中进行共同培养，诱导其向心肌方向的分化。将未与胎儿心肌细胞混合的人ESCs以相同密度接种于培养皿中作为阴性对照。至第5天收集共同培养的细胞，进行双重染色，即FISH染色及心肌特异性蛋白Desmin或cTnⅠ免疫组化染色。结果在与胎儿心肌细胞共同培养5d后，40％～50％的人ESCs在心肌细胞的诱导下表达心肌特异性蛋白Desmin或cTnⅠ，而没有进行共同培养的人ESCs不表达上述蛋白。结论与胎儿心肌细胞的共同培养能诱导人ESCs发生向心肌方向的分化，人ESCs有望成为心肌干细胞移植的细胞材料。
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关键词
胎儿心肌细胞
人胚胎干
细胞
共同培养
心肌
样分化
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职称材料
胎儿心肌细胞培养方法的建立
被引量：
6
2
作者
杨胜利
何作云
+1 位作者
张华
冯兵
《医学研究生学报》
CAS
2003年第5期321-322,326,F001,共4页
目的 :建立胎儿心肌细胞原代培养和传代培养的方法。 方法 :用 2 g/L胰蛋白酶 (trypsin)和 1g/L胶原酶 (collagenase)进行消化 ,用差速粘附贴壁法纯化心肌细胞 ,用IMDM (Iscove改良的Dulbeccomedium)培养液培养 ,于倒置显微镜下观察 ,...
目的 :建立胎儿心肌细胞原代培养和传代培养的方法。 方法 :用 2 g/L胰蛋白酶 (trypsin)和 1g/L胶原酶 (collagenase)进行消化 ,用差速粘附贴壁法纯化心肌细胞 ,用IMDM (Iscove改良的Dulbeccomedium)培养液培养 ,于倒置显微镜下观察 ,用锥虫蓝 (trypanblue)染色法做心肌细胞质量评价。心肌细胞进行actin免疫组化、myo globin荧光免疫组化和电镜分析。 结果 :心肌细胞存活率为 99% ,2 4h后见有 95 %细胞贴壁 ,心肌细胞达 95 % ,形态为圆形、梭形、椭圆形、棒状、星状及分叉状等 ;actin和myoglobin荧光免疫组化强阳性 ,电镜见心肌细胞结构存在 ;原代培养第 2 0天和传代培养第 5天心肌细胞生长良好。 结论 :本方法可很好地用于胎儿心肌细胞原代培养和传代培养 。
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关键词
胎儿心肌细胞
细胞
培养
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职称材料
题名
与胎儿心肌细胞共同培养诱导人胚胎干细胞发生心肌样分化
被引量：
6
1
作者
常静
雷寒
陈建斌
贾锋鹏
机构
重庆医科大学附属第一医院心血管内科
重庆医科大学附属第一医院血液内科
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第15期1465-1468,共4页
基金
WHO奖学金(2003)~~
文摘
目的了解与胎儿心肌细胞共同培养对人胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESCs）向心肌方向分化的影响。方法通过酶消化法从流产胎儿中分离培养出胎儿心肌细胞及成纤维细胞，将后者用丝裂霉素处理后制备成滋养层；收集辅助生育中心施行试管婴儿后所剩余的健康胚胎，取内细胞团接种在滋养层上分离培养出人ESCs。用荧光原位杂交（fluorescent in situ hybridzation，FISH）方法来检测上述两种细胞的XY染色体，选用不同性别的胎儿心肌细胞与2—5代人ESCs以1：2的比例混合，然后以5×10^4／cm^2的密度接种于培养皿中进行共同培养，诱导其向心肌方向的分化。将未与胎儿心肌细胞混合的人ESCs以相同密度接种于培养皿中作为阴性对照。至第5天收集共同培养的细胞，进行双重染色，即FISH染色及心肌特异性蛋白Desmin或cTnⅠ免疫组化染色。结果在与胎儿心肌细胞共同培养5d后，40％～50％的人ESCs在心肌细胞的诱导下表达心肌特异性蛋白Desmin或cTnⅠ，而没有进行共同培养的人ESCs不表达上述蛋白。结论与胎儿心肌细胞的共同培养能诱导人ESCs发生向心肌方向的分化，人ESCs有望成为心肌干细胞移植的细胞材料。
关键词
胎儿心肌细胞
人胚胎干
细胞
共同培养
心肌
样分化
Keywords
fetal cardiomyocyte
human embryonic stem cells
coculture
cardiac differentiation
分类号
R322.11 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R329.21 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
胎儿心肌细胞培养方法的建立
被引量：
6
2
作者
杨胜利
何作云
张华
冯兵
机构
第三军医大学新桥医院心内科
出处
《医学研究生学报》
CAS
2003年第5期321-322,326,F001,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目 (批准号 :3 0 10 0 0 69)
文摘
目的 :建立胎儿心肌细胞原代培养和传代培养的方法。 方法 :用 2 g/L胰蛋白酶 (trypsin)和 1g/L胶原酶 (collagenase)进行消化 ,用差速粘附贴壁法纯化心肌细胞 ,用IMDM (Iscove改良的Dulbeccomedium)培养液培养 ,于倒置显微镜下观察 ,用锥虫蓝 (trypanblue)染色法做心肌细胞质量评价。心肌细胞进行actin免疫组化、myo globin荧光免疫组化和电镜分析。 结果 :心肌细胞存活率为 99% ,2 4h后见有 95 %细胞贴壁 ,心肌细胞达 95 % ,形态为圆形、梭形、椭圆形、棒状、星状及分叉状等 ;actin和myoglobin荧光免疫组化强阳性 ,电镜见心肌细胞结构存在 ;原代培养第 2 0天和传代培养第 5天心肌细胞生长良好。 结论 :本方法可很好地用于胎儿心肌细胞原代培养和传代培养 。
关键词
胎儿心肌细胞
细胞
培养
Keywords
Human fetal cardiomyocytes
Cell culture
分类号
Q813.11 [生物学—生物工程]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
与胎儿心肌细胞共同培养诱导人胚胎干细胞发生心肌样分化
常静
雷寒
陈建斌
贾锋鹏
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
胎儿心肌细胞培养方法的建立
杨胜利
何作云
张华
冯兵
《医学研究生学报》
CAS
2003
6
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