期刊文献+
共找到8篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
人工蛋白XXA促进人源肿瘤抑素Tumstatin可溶性表达
1
作者 敖龙 朱玲玉 +7 位作者 庞欣 辛瑜 郭忠鹏 朱瑞 李默影 顾正华 郭自涛 张梁 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期1-8,共8页
为实现人源肿瘤抑素Tumstatin在大肠杆菌中的可溶性表达,构建了5种不同促溶性融合标签与tumstatin基因融合表达的重组大肠杆菌BL21(DE3),利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导重组菌进行摇瓶发... 为实现人源肿瘤抑素Tumstatin在大肠杆菌中的可溶性表达,构建了5种不同促溶性融合标签与tumstatin基因融合表达的重组大肠杆菌BL21(DE3),利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导重组菌进行摇瓶发酵,利用SDS-PAGE和Western-Blot分析并筛选出能可溶性表达Tumstatin蛋白的重组菌。构建的重组菌中BL21/pGEX-6p-1-Tum(含谷胱甘肽巯基转移酶标签—GST标签)、BL21/pET28a-MBP-Tum(含麦芽糖结合蛋白标签—MBP标签)、BL21/pET28a-Tum(无标签)都是以包涵体的形式表达融合蛋白Tumstatin,只有重组菌BL21/pET28a-XXA-Tum(含抗冻蛋白的反向蛋白—XXA标签)能以可溶性的形式表达融合蛋白且目的蛋白占菌体总蛋白45%以上。利用亲和层析对目的蛋白进行纯化并进行Western-Blot分析,得到分子质量为50.9 kDa的目的条带,与理论分子质量一致。进一步对重组菌BL21/pET28a-XXA-Tum的诱导剂添加浓度、诱导剂添加时间、诱导温度、诱导时间诱导条件进行优化。最终选择Tumstatin融合蛋白诱导条件为:诱导剂浓度0.1 mmol/L、2 h添加诱导剂、诱导温度16℃、诱导时间36 h。人源肿瘤抑素在大肠杆菌中可溶性表达为大量制备可溶性人源肿瘤抑素奠定了基础,可为功能性多肽在大肠杆菌中的可溶性表达提供借鉴。 展开更多
关键词 人源肿瘤抑素 大肠杆菌 可溶性表达 融合标签 抗冻蛋白的反向蛋白
在线阅读 下载PDF
肿瘤抑素T_7肽及其衍生物T_7-NGR载体构建及表达 被引量:9
2
作者 贺欣 赵启仁 +1 位作者 宋娜玲 颜廷东 《生物医学工程与临床》 CAS 2008年第3期240-244,共5页
目的为了提高作用靶向性,将导向肽NGR与肿瘤抑素T_7肽的C端连接,获得T_7肽及其衍生物T_7-NGR的载体。方法通过PCR和合成基因序列方法分别构建了肿瘤抑素T_7肽及T_7-NGR的克隆载体pMD-T_7和pMD-T_7N,经酶切和测序鉴定后,将2种载体分别双... 目的为了提高作用靶向性,将导向肽NGR与肿瘤抑素T_7肽的C端连接,获得T_7肽及其衍生物T_7-NGR的载体。方法通过PCR和合成基因序列方法分别构建了肿瘤抑素T_7肽及T_7-NGR的克隆载体pMD-T_7和pMD-T_7N,经酶切和测序鉴定后,将2种载体分别双酶切,经低熔点琼脂糖凝胶电泳分离后,切下目的片段与酶切回收的质粒载体pET28a在低熔点琼脂糖中直接进行连接反应。阳性克隆经酶切和测序鉴定,转化感受态E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。结果酶切和测序鉴定结果正确,分别成功构建表达载体pET-T_7和pET-T_7N,经IPTG诱导,完成了表达条件的优化。Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,当IPTG浓度为1mmol/L时,25℃诱导8h,分别获得了T_7肽和T_7-NGR的表达产物。结论已经成功构建T_7肽和T_7-NGR的表达载体,获得了表达产物,为下一步的小肽活性实验奠定了基础。 展开更多
关键词 肿瘤抑素T7肽 T7-NGR 导向肽 基因克隆表达
在线阅读 下载PDF
人肿瘤抑素Tumstatin基因慢病毒表达载体的构建及其蛋白表达
3
作者 焦伊胜 王永来 王桂玲 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第11期18-20,共3页
目的构建Tumstatin基因慢病毒表达载体,进一步研究Tumstatin基因的功能及其在肿瘤治疗中的应用。方法采用PCR技术从含有Tumstatin基因的质粒pSPORT1-Sfi扩增目的基因Tumstatin,并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒pGC-FU[含增强型绿色荧... 目的构建Tumstatin基因慢病毒表达载体,进一步研究Tumstatin基因的功能及其在肿瘤治疗中的应用。方法采用PCR技术从含有Tumstatin基因的质粒pSPORT1-Sfi扩增目的基因Tumstatin,并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒pGC-FU[含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因]中,构建慢病毒载体表达质粒pGC-FU-Tum,通过酶切、测序验证Tumstatin基因后,将pGC-FU-Tum质粒和包装质粒pHelper1.0、pHelper2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带Tumstatin基因和EGFP基因的重组慢病毒GC-FU-Tum,并转染人脐静脉血管内皮细胞HUVEC,Wstern blot检测目的蛋白Tumstatin的表达。结果pGC-FU-Tum中携有正确的Tumstatin基因;pGC-FU-Tum共转染包装细胞293T能产生高浓度的重组慢病毒GC-FU-Tum;目的基因Tumstatin能被重组慢病毒高效地转导入HUVEC,荧光显微镜下能直接观察到EGFP,Western blot能检测到Tumstatin蛋白在靶细胞中的表达。结论成功构建了携带Tumstatin基因的重组慢病毒载体;其蛋白表达与EGFP一致。。 展开更多
关键词 肿瘤抑素 慢病毒载体 转移 基因
在线阅读 下载PDF
肿瘤抑素Tum5对人脐静脉血管内皮细胞血管生成活性以及碱烧伤诱导大鼠角膜新生血管的抑制作用
4
作者 郑嘉琳 贾育蓉 +4 位作者 郭星艺 张琰 漆晨 孙靖 张红 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2018年第5期434-439,共6页
目的研究肿瘤抑素Tum5对人脐静脉血管内皮细胞血管生成活性以及碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管的抑制作用。方法取对数生长期人脐静脉血管内皮细胞分为4组:正常对照组:无任何处理的人脐静脉血管内皮细胞;rAd-GFP组:人脐静脉血管内皮细胞... 目的研究肿瘤抑素Tum5对人脐静脉血管内皮细胞血管生成活性以及碱烧伤诱导的大鼠角膜新生血管的抑制作用。方法取对数生长期人脐静脉血管内皮细胞分为4组:正常对照组:无任何处理的人脐静脉血管内皮细胞;rAd-GFP组:人脐静脉血管内皮细胞经rAd-GFP感染并培养;rAd-Tum5组:人脐静脉血管内皮细胞经rAd-Tum5感染并培养;rAd-Tum5+VEGF组:人脐静脉血管内皮细胞经rAd-Tum5感染后经外源性VEGF处理。通过CCK-8活性检测试剂盒、Transwell实验、Matrigel实验分别检测细胞增殖率、迁移细胞数及管腔形成情况。取雄性健康清洁级SD大鼠64只采用随机数字表法将大鼠分为:正常对照组、碱烧伤组、碱烧伤+rAd-GFP组、碱烧伤+rAd-Tum5组,每组16只,除正常对照组外其余各组建立角膜碱烧伤模型。其中正常对照组无任何处理,碱烧伤组、碱烧伤+rAd-GFP组、碱烧伤+rAd-Tum5组于烧伤后分别经结膜下注射等量无菌生理盐水、rAd-GFP、rAd-Tum5病毒,记录碱烧伤后第1天、第7天、第14天角膜新生血管相对面积及浸润炎性细胞数。结果 CCK-8实验结果显示rAd-Tum5组较正常对照组、rAd-GFP组细胞增殖率降低(均为P<0.01);而rAd-Tum5+VEGF组细胞增殖率较rAdTum5组显著升高(P=0.004),rAd-Tum5+VEGF组与正常对照组和rAd-GFP组相比差异均无统计学意义(均为P>0.05)。Transwell实验结果显示rAd-Tum5组相对于正常对照组、rAd-GFP组每个视野细胞迁移数显著降低(均为P<0.01);而rAdTum5+VEGF组相对于rAd-Tum5组显著升高(P=0.000),但其迁移能力尚未恢复到正常水平,与正常对照组和rAd-GFP组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Matrigel实验结果显示rAd-Tum5组相对于正常对照组、rAd-GFP组每个视野细胞成管数显著降低(均为P<0.01);而rAd-Tum5+VEGF组相对于rAd-Tum5组显著升高(P=0.001)。大鼠角膜碱烧伤后第1-14天,各组角膜新生血管密度及数量逐渐增高,但是碱烧伤+rAd-Tum5组第7天、第14天角膜新生血管相对面积均显著低于碱烧伤组和碱烧伤+rAd-GFP组,提示Tum5能降低角膜新生血管生长速率并减少新生血管密度,抑制大鼠碱烧伤诱导的新生血管的形成。碱烧伤后第7天、第14天,正常对照组角膜完整、细胞排列有序,无炎性细胞浸润;碱烧伤后第7天,碱烧伤组、碱烧伤+rAd-GFP组上皮结构紊乱,角膜水肿,炎性细胞浸润明显,而碱烧伤+rAd-Tum5组每个视野炎性细胞浸润数较碱烧伤组、碱烧伤+rAd-GFP组明显减少,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。碱烧伤后第14天,碱烧伤组、碱烧伤+rAd-GFP组和碱烧伤+rAd-Tum5组每个视野炎性细胞浸润数较第7天显著下降,同时碱烧伤+rAd-Tum5组角膜上皮结构整齐,水肿消退,每个视野炎性细胞浸润数显著低于碱烧伤组以及碱烧伤+rAd-GFP组,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。结论 Tum5可能经VEGF通路抑制人脐静脉血管内皮细胞血管生成活性;Tum5可显著抑制碱烧伤诱导的角膜新生血管生成及炎性细胞浸润。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 抗血管生成活性 角膜新生血管 肿瘤抑素 转染
在线阅读 下载PDF
重组NuBCP-9/Tumstatin(74-98)融合多肽的构建、表达和活性研究
5
作者 杨家森 邹佳宁 +2 位作者 方威 邢莹莹 奚涛 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期364-369,共6页
目的:构建抗肿瘤融合肽NuBCP-9/Tumstatin(74-98)(简称NT)原核表达载体并转化大肠杆菌BL21(DE3),获得具有多靶点抗肿瘤活性的融合肽。方法:将抗肿瘤小肽NuBCP-9和Tumstatin(74-98)用柔性肽(G4S)3连接,根据大肠杆菌偏爱密码子,采用重叠延... 目的:构建抗肿瘤融合肽NuBCP-9/Tumstatin(74-98)(简称NT)原核表达载体并转化大肠杆菌BL21(DE3),获得具有多靶点抗肿瘤活性的融合肽。方法:将抗肿瘤小肽NuBCP-9和Tumstatin(74-98)用柔性肽(G4S)3连接,根据大肠杆菌偏爱密码子,采用重叠延伸PCR技术扩增融合肽序列,并将其克隆至pET32a(+)质粒中,构建pET32a-NT表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白表达量并优化表达条件,经亲和色谱、酶切和超滤等方法分离、纯化得到重组融合肽;采用MTT法测定融合肽对人脐静脉内皮细胞ECV304和人肺癌细胞A549的抑制活性影响。结果:成功构建了重组表达载体pET32a-NT,优化表达条件获得了25%的可溶性蛋白表达量。活性研究表明,在融合肽终浓度为20μmol/L时,对ECV304和A549的抑制率分别为60.8%和65.2%。结论:融合肽初步表现出抗肿瘤活性,为进一步药效药理学研究奠定了基础。 展开更多
关键词 NuBCP-9 肿瘤抑素 融合多肽 肿瘤 原核表达
在线阅读 下载PDF
Tumstatin-EGFP真核表达载体构建及稳定转染CHO细胞系的建立
6
作者 姚丽娟 罗以勤 +4 位作者 孔建新 赵亮 常珍 濮跃晨 马筱玲 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第34期27-30,共4页
目的构建重组tumstatin-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的分泌型真核表达载体质粒,建立稳定转染的中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-K1)。方法利用重叠多聚酶链反应(PCR)技术从pGEM-T/STL质粒和pEGFP-C2质粒中扩增出STL-EGFP,用DNA重组技术将片段定向... 目的构建重组tumstatin-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的分泌型真核表达载体质粒,建立稳定转染的中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-K1)。方法利用重叠多聚酶链反应(PCR)技术从pGEM-T/STL质粒和pEGFP-C2质粒中扩增出STL-EGFP,用DNA重组技术将片段定向插入pIRESneo3质粒中,经酶切和序列验证正确后,用lipo-fectamine 2000转染CHO-K1细胞,通过G418筛选建立稳定转染的CHO细胞系,用逆转录-PCR、Western blot检测tumstatin-EGFP的表达,用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。结果重组真核表达载体正确构建并在CHO细胞获得稳定表达,tumstatin-EGFP基因整合入细胞基因组DNA,培养液上清有融合蛋白tumstatin-EGFP的分泌,绿色荧光蛋白的表达高达95%以上。结论成功构建了质粒PIRESneo3-STL-EGFP,获得稳定表达tumstatin-EGFP的细胞系。 展开更多
关键词 肿瘤抑素 增强型绿色荧光蛋白 融合蛋白 表达载体
在线阅读 下载PDF
EFFECT OF SOMATOSTATIN ON THE EXPRESSION OF TNF α mRNA IN MULTIORGANS OF RATS WITH ACUTE HEMORRHAGIC NECROTIC PANCREATITIS
7
作者 秦仁义 肖雪明 +2 位作者 邹声泉 吴在德 裘法祖 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 1998年第3期134-137,共4页
Objectives.To study the expression of TNF α mRNA and the effect of somatostatin on the expression of TNF α mRNA in multiorgans of rats with acute hemorrhagic necrotic pancreatitis(AHNP). Methods.AHNP in the rat was ... Objectives.To study the expression of TNF α mRNA and the effect of somatostatin on the expression of TNF α mRNA in multiorgans of rats with acute hemorrhagic necrotic pancreatitis(AHNP). Methods.AHNP in the rat was induced by retrograde injection of 5% sodium taurocholate into the bile-pancreatic duct. Somatostatin octapeptide (SS-OP) (2μg/kg)was injected into the femoral vein imme- diately in rats of the treatment group after inductive AHNP. Rats of the sham operative group received in- jection of saline. Sixty animals of the AHNP and sham operative groups at the designated time(0. 2h, 0. 5 h, 2h, 4h, 8h, after the operation,six animals at each time point)and tweleve animals of treatment group at 4h after the operation were sacrificed for samples of pancreas, liver and lung. The expressions of TNF α mRNA within the pancreas, liver and lung were established by RT-PCR. Results. TNF α mRNA became detectable in the pancreas as early as 0. 2h after inductive AHNP, while it was undetectable in other organs until 0. 5h. Expression of TNF α mRNA in each tissue increased continuously and reached a peak at 4h,demonstrating a significant difference compared with that at 0. 5h and 8h. Expressions of TNF α mRNA from pancreas, liver and lung were decreased 50-80% in the treat- ment group, the pancreatic necrosis was also attenuated dramatically. Conclusion. TNF α mRNA was detectable in pancreas,liver and lung tissues at the early stage of AH- NP.SS-OP can significantly inhibit the expression of TNF α mRNA and attenuate the pancreatic necrosis. We feel that this may be an important mechanism of SS-OP in the treatment of AHNP. 展开更多
关键词 acute hemorrhagic necrotic pancreatitis somatostatin-octapeptide TNF α mR- NA gene expression
在线阅读 下载PDF
THE CORRELATIONS OF RETINOIC ACID RECEPTOR-α AND ESTROGEN RECEPTOR EXPRESSION IN HUMAN BREAST CANCER CELL LINES AND TUMORS
8
作者 余黎明 邵志敏 +2 位作者 蔡三军 韩企夏 沈镇宙 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 1998年第3期154-157,共4页
Retinoic acid receptor-α (RAR α) plays a major role in the growth inhibitory effect of retinoic acid on human breast cancer cells, may be it could serve as an indicator to guide the treatment and prevent of breast c... Retinoic acid receptor-α (RAR α) plays a major role in the growth inhibitory effect of retinoic acid on human breast cancer cells, may be it could serve as an indicator to guide the treatment and prevent of breast cancer with retinoic acid in clinic. All previous researchs were based on observing the changes of RAR α mRAN expression. In this study, the expression of RAR α in human breast cell lines was studied by Northern Blot, Western Blot and Immunohistochemistry in mRNA level and protein level. Results showed that RAR α protein expression was correlated with RAR α mRNA expression. RAR α mRNA ex- pression was higher in estrogen receptor (ER)-positive human breast cancer cell lines than in ER-negative ones. So was RAR a protein expression. Both RAR α mRNA amd RAR α protein expression were associ- ated with ER status. The expression of RAR α and the relationship between RAR a and ER status were al- so determined by immunohistochemistry in 58 human primary breast cancer tumors. 37 (63. 8% ) tumors were ER-positive and of these 28 (75. 7% ) were also RAR α -positive. The coexpression of ER and RAR a was statistically significant (P<0. 01, by X^2 contingency analysis). It was reported that RAR α expres- sion in cultured breast cancer cells was regulated by estrogen acting via the ER. Our study demonstrated that RAR α expression may be modulated in breast cancer in vivo by estrogen via ER. 展开更多
关键词 breast tumor gene expression nuclear receptor
在线阅读 下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部