醉茄素A抑制肾近端小管上皮细胞铁死亡

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作者 钱睿 卢守燕 +4 位作者 黄军悦 张鹏 马小梅 杨晓军 薛嵘 《海南医科大学学报》 北大核心 2025年第9期667-674,共8页

目的:本研究旨在探究醉茄素A抑制顺铂对肾近端小管上皮细胞诱导死亡的作用及其分子机制。方法:采用CCK-8细胞活性实验检测顺铂和醉茄素A对细胞活性影响。通过流式细胞仪检测细胞中脂质ROS含量。通过PCR阵列实验分析HK-2细胞及原代肾小... 目的:本研究旨在探究醉茄素A抑制顺铂对肾近端小管上皮细胞诱导死亡的作用及其分子机制。方法:采用CCK-8细胞活性实验检测顺铂和醉茄素A对细胞活性影响。通过流式细胞仪检测细胞中脂质ROS含量。通过PCR阵列实验分析HK-2细胞及原代肾小管上皮细胞经顺铂和醉茄素A处理后的铁死亡相关基因的表达。通过Western blot检测FSP1蛋白的表达。通过小RNA(siRNA)干扰敲低细胞中FSP1基因表达。结果:醉茄素A能够抑制顺铂诱导的肾近端小管上皮细胞毒性。醉茄素A能够抑制顺铂诱导的肾小管上皮细胞铁死亡。在HK-2细胞和原代肾小管上皮细胞中被醉茄素A诱导显著共同上调的基因是NFE2L2和FSP1。其中在两种细胞中上调差异倍数最大的基因都是FSP1。同时发现,醉茄素A能够显著上调FSP1蛋白水平的表达。干扰了细胞中FSP1表达后,醉茄素A的铁死亡保护作用显著降低。结论:醉茄素A通过上调肾近端小管上皮细胞FSP1的表达抑制顺铂诱导的细胞铁死亡,从而抑制顺铂对细胞的毒性。 展开更多

关键词 FSP1 肾近端小管上皮细胞 醉茄素A 顺铂 铁死亡

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缬沙坦对人肾近端小管上皮细胞TGF-β/Smad信号途径的影响 被引量：4

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作者 任韫卓 王晨 +1 位作者 史永红 段惠军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期960-964,共5页

目的观察缬沙坦对TGF-β刺激人肾近端小管上皮细胞表达Smad的影响。方法以人肾小管上皮细胞(HKC)为对象,分为正常对照组;TGF-β1刺激组;缬沙坦组。Western blot检测p-Smad2/3、smad2/3、Smad7以及细胞上清ColⅠ蛋白含量;RT-PCR检测Smad2... 目的观察缬沙坦对TGF-β刺激人肾近端小管上皮细胞表达Smad的影响。方法以人肾小管上皮细胞(HKC)为对象,分为正常对照组;TGF-β1刺激组;缬沙坦组。Western blot检测p-Smad2/3、smad2/3、Smad7以及细胞上清ColⅠ蛋白含量;RT-PCR检测Smad2 mRNA和Smad7 mRNA水平。MTT法检测刺激组及缬沙坦组在不同时间、不同药物浓度对细胞增殖状态的影响。结果①Western blot显示,与TGF-β1刺激组相比,缬沙坦使Smad2/3、p-Smad2/3蛋白的表达下降,ColⅠ分泌显示相同趋势,而Smad7蛋白的表达没有变化。②半定量RT-PCR显示,与TGF-β1刺激组相比,缬沙坦组Smad2 mRNA降低,Smad7 mRNA无变化。③MTT法检测显示不同浓度缬沙坦对TGF-β1刺激所引起的细胞增殖受抑制现象均有改善,并且随药物浓度的增加该作用增强。结论提示缬沙坦的肾脏保护作用可能部分是通过抑制TGF-β/Smads信号途径实现的。 展开更多

关键词 人肾近端小管上皮细胞 SMADS蛋白 Ⅰ型胶原 缬沙坦

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miR-30e*在顺铂诱导的肾近端小管上皮细胞凋亡和线粒体损伤中的作用 被引量：3

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作者 杨玲云 郭燕 +5 位作者 倪佳佳 王荣 林加娟 丁桂霞 黄松明 张爱华 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1060-1065,共6页

目的:观察顺铂诱导肾近端小管细胞损伤过程中mi R-30e*的表达变化,并探讨其在顺铂诱导的小管细胞凋亡和线粒体损伤中的作用。方法:实时定量PCR(q RT-PCR)检测顺铂处理后的小管细胞mi R-30e*的表达水平;使用重组慢病毒载体感染细胞,稳定... 目的:观察顺铂诱导肾近端小管细胞损伤过程中mi R-30e*的表达变化,并探讨其在顺铂诱导的小管细胞凋亡和线粒体损伤中的作用。方法:实时定量PCR(q RT-PCR)检测顺铂处理后的小管细胞mi R-30e*的表达水平;使用重组慢病毒载体感染细胞,稳定高表达或低表达mi R-30e*;使用流式细胞仪检测细胞凋亡,观察mi R-30e*在顺铂诱导的小管细胞凋亡中的作用;q RT-PCR检测线粒体DNA(mt DNA)拷贝数,JC-1检测线粒体膜电位变化,探究mi R-30e*在顺铂引起的线粒体损伤中的作用。结果:1顺铂处理肾小管上皮细胞后,mi R-30e*的表达呈时间依赖性和剂量依赖性下调;2使用q RT-PCR检测重组慢病毒载体制备的稳定高表达或低表达mi R-30e*的小管细胞株中mi R-30e*的表达,过表达组增高了7倍,敲低表达组降低了近50%;3加入顺铂后,与对照组相比小管细胞凋亡增加,过表达mi R-30e*对凋亡起保护作用,敲低mi R-30e*则加重凋亡;4通过检测mt DNA的拷贝数发现顺铂诱导的线粒体损伤在48 h时有意义,迟于mi R-30e*表达的下调,线粒体膜电位检测JC-1提示过表达mi R-30e*对线粒体有保护作用。结论:顺铂处理小管细胞可降低其mi R-30e*的表达;体外过表达mi R-30e*对顺铂引起的小管细胞的凋亡和线粒体损伤具有保护作用,敲低mi R-30e*会加重顺铂诱导的肾近端小管细胞凋亡和线粒体损伤。 展开更多

关键词 miR-30e* 顺铂 肾近端小管上皮细胞 线粒体损伤

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氨磷汀通过上调PKM2表达增强肾近端小管上皮细胞抵抗顺铂毒性

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作者 薛嵘 马金刚 +5 位作者 李莹屏 张健 高佩娟 黄文辉 杨晓军 李小丽 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期433-440,共8页

目的探究氨磷汀缓解顺铂肾毒性的分子机制。方法在肾近端小管上皮细胞系HK-2及原代细胞中,采用CCK-8细胞活性实验检测氨磷汀对顺铂细胞毒性的抑制作用。通过在线数据库tabula-muris分析肾脏组织各细胞亚群PKM2的表达。通过流式细胞术检... 目的探究氨磷汀缓解顺铂肾毒性的分子机制。方法在肾近端小管上皮细胞系HK-2及原代细胞中,采用CCK-8细胞活性实验检测氨磷汀对顺铂细胞毒性的抑制作用。通过在线数据库tabula-muris分析肾脏组织各细胞亚群PKM2的表达。通过流式细胞术检测细胞凋亡比例。通过荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测细胞中PKM2基因表达。通过小RNA干扰技术敲低细胞中PKM2基因表达。结果氨磷汀显著增强HK-2细胞和原代肾近端小管上皮细胞抵抗顺铂的毒性。在顺铂处理的细胞中,随着氨磷汀浓度的增加,细胞的活力从0.37增加到0.45至0.77(P<0.001)。另外,随着氨磷汀浓度的增加,HK-2细胞中PKM2基因表达依次增加,在1μmol/L浓度时增加到8.76倍(P<0.001)。在HK-2细胞中干扰PKM2基因表达,氨磷汀对顺铂的细胞毒性的保护作用显著受到抑制。顺铂诱导的细胞凋亡比例、标志蛋白Cleaved-PARP和Cleaved-caspase3的表达被氨磷汀显著抑制。单细胞数据分析的结果表明,相对于肾脏组织其他细胞亚群,PKM2在肾近端小管上皮细胞中表达最低。结论氨磷汀通过上调肾近端小管上皮细胞PKM2的表达抑制顺铂诱导的细胞凋亡,从而缓解顺铂的细胞毒性。 展开更多

关键词 氨磷汀 肾近端小管上皮细胞 PKM2 顺铂 毒性

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人肾近端小管上皮细胞的原代培养、传代及鉴定方法研究 被引量：17

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作者 毛慧娟 王笑云 +1 位作者 徐昌芬 程宝庚 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期561-564,共4页

目的:创建一种重复性好、细胞量多的人肾近端小管细胞(PTC)培养方法.方法:取新鲜正常人肾组织分离纯化,用含10%新生牛血清等营养充分的DMEM/F12(1:1)液进行近端小管细胞的原代培养及传代,并以免疫组化、酶化学染色、透射电镜鉴定.结果:... 目的:创建一种重复性好、细胞量多的人肾近端小管细胞(PTC)培养方法.方法:取新鲜正常人肾组织分离纯化,用含10%新生牛血清等营养充分的DMEM/F12(1:1)液进行近端小管细胞的原代培养及传代,并以免疫组化、酶化学染色、透射电镜鉴定.结果:培养5～6天后融合成单层细胞,形态呈鹅卵石样,可传代7～9代,鉴定确定为人肾近端小管细胞,重复培养10次,均能稳定获得同样细胞,每克肾皮质可分离培养出(6～12)×106个PTC.结论:此培养方法可在7天内获得人肾近端小管细胞,且重复性好,细胞数量多,为进行肾小管细胞治疗提供必需的细胞,也为研究肾小管病变提供实验平台. 展开更多

关键词 肾 近端肾小管上皮细胞 原代培养 人

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尿本周氏蛋白及转化生长因子β_1对肾近端小管上皮细胞增殖的影响 被引量：2

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作者 周振海 李幼姬 +5 位作者 陈运贤 李小银 余学清 李娟 罗绍凯 原耀光 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期1257-1260,共4页

目的 :研究多发性骨髓瘤 (MM)患者尿本周氏蛋白 (BJP)及转化生长因子 β1(TGF - β1)在体外对肾近端小管上皮细胞 (PTC)增殖的影响。方法 :将自MM患者尿中提取的λ型BJP和 /或TGF - β1与大鼠NRK .5 2E株PTC共同培养 ,用 [3 H]TdR掺入研... 目的 :研究多发性骨髓瘤 (MM)患者尿本周氏蛋白 (BJP)及转化生长因子 β1(TGF - β1)在体外对肾近端小管上皮细胞 (PTC)增殖的影响。方法 :将自MM患者尿中提取的λ型BJP和 /或TGF - β1与大鼠NRK .5 2E株PTC共同培养 ,用 [3 H]TdR掺入研究PTC增殖。并用ELISA法测定BJP与PTC培养上清液中的TGF - β1含量。结果 :①10 0 - 80 0 μmol/LBJP以浓度依赖方式抑制PTC增殖 ,当浓度≥ 4 0 0 μmol/L与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,当加入 2 μg/LTGF - β1共同培养 ,在BJP浓度为 4 0 0 μmol/L时 ,[3 H]TdR掺入低于单用BJP(P <0 .0 5 ) ,但与单用BJP浓度为 80 0 μmol/L无显著差异 ;② 10 0 - 80 0 μmol/LBJP与PTC共同培养液中的TGF - β1含量均增加 ,尤以BJP为 4 0 0μmol/L明显大于对照组 (P <0 .0 5 ) ;③外源性 0 .5 - 10 μg/LTGF - β1与PTC共同培养 ,[3 H]TdR掺入随TGF - β1浓度增加而减少。结论 :MM患者λ型BJP可抑制PTC的增殖 ,其部分机理可能与其促进对PTC增殖也有抑制作用的TGF- 展开更多

关键词 本周蛋白 转化生长因子Β 近端肾小管上皮细胞

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人近端肾小管上皮细胞的原代培养 被引量：8

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作者 严玉澄 钱家麒 +1 位作者 戴慧莉 许雁萍 《上海第二医科大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期388-391,共4页

目的应用组织块培养法建立人近端肾小管上皮细胞的原代培养方法。方法取肾皮质组织块,应用无血清培养液进行原代培养,融合后用胰蛋白酶-EDTA消化传代。取第三代细胞检测细胞角蛋白、波形蛋白、碱性磷酸酶、结蛋白、Ⅷ因子、α-肌动蛋白... 目的应用组织块培养法建立人近端肾小管上皮细胞的原代培养方法。方法取肾皮质组织块,应用无血清培养液进行原代培养,融合后用胰蛋白酶-EDTA消化传代。取第三代细胞检测细胞角蛋白、波形蛋白、碱性磷酸酶、结蛋白、Ⅷ因子、α-肌动蛋白的表达,应用扫描电镜和透射电镜观察细胞的超微结构。结果融合的上皮单层细胞呈铺路石样表现,伴圆顶(dome)形成。细胞角蛋白、波形蛋白和碱性磷酸酶染色阳性,α-肌动蛋白、Ⅷ因子相关抗原、纤维连接蛋白和结蛋白染色阴性。细胞存在极性,细胞尖端存在短的微绒毛,细胞之间连接紧密。结论应用组织块培养法结合无血清培养液可以成功建立原代人近端肾小管上皮细胞系。 展开更多

关键词 细胞培养 近端肾小管上皮细胞 无血清培养液 细胞角蛋白 波形蛋白 碱性磷酸酶

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糖化白蛋白诱导人近端肾小管上皮细胞产生损伤与炎性反应的表达 被引量：5

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作者 段楠 刘怡 +1 位作者 李海霞 焦莉莉 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第2期289-294,共6页

目的探讨在糖化白蛋白(glycated albumin,GA)刺激下,人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞系)中肾损伤分子-1(kidney injury molecule-1,KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)及炎性反应... 目的探讨在糖化白蛋白(glycated albumin,GA)刺激下,人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞系)中肾损伤分子-1(kidney injury molecule-1,KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)及炎性反应相关细胞因子的表达情况。方法分别采用不同浓度的GA与白蛋白(albumin,Alb)刺激HK-2细胞12 h、24 h及48 h,通过real-time PCR和酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunesorbent assay,ELISA)分别检测NGAL、KIM-1的mRNA表达与蛋白释放水平,并运用流式液相多重蛋白定量技术检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)和可溶性细胞间黏附分子-1(soluble intercellular cell adhesion molecule-1,sICAM-1)等细胞因子的浓度。结果与对照组与Alb组比较,GA刺激HK-2细胞12 h、24 h和48 h均能显著上调KIM-1和NGAL的mRNA表达(P<0.05)以及KIM-1和NGAL蛋白的释放(P<0.05);GA组sICAM-1、VEGF与IL-8水平在各时间点均高于Alb组和对照组(P<0.05)。结论 GA能上调KIM-1和NGAL mRNA的表达与蛋白的释放,并促进炎性细胞因子的分泌从而对肾小管造成损伤,提示GA可反映糖尿病肾脏受累情况。 展开更多

关键词 糖化白蛋白 近端肾小管上皮细胞 肾损伤分子-1 中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白 细胞因子

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质粒表达型siRNA对人近端肾小管上皮细胞cubilin表达的抑制作用 被引量：1

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作者 林静 何娅妮 +6 位作者 杨聚荣 李新伦 梁海君 吴劲松 李开龙 丁涵露 张建国 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期471-474,共4页

目的观察cubilinsiRNA真核表达载体对人近端肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular epithelial cell line,HKC)cubilin基因的特异性抑制作用。方法针对人cubilin基因设计并构建siRNA真核表达载体pSUPER EGFP-C1和pSUPER EGFP-C2... 目的观察cubilinsiRNA真核表达载体对人近端肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular epithelial cell line,HKC)cubilin基因的特异性抑制作用。方法针对人cubilin基因设计并构建siRNA真核表达载体pSUPER EGFP-C1和pSUPER EGFP-C2,转染HKC,经荧光定量PCR(FQ-PCR)检测cubilin mRNA的表达、不同浓度的人血清白蛋白(HSA)刺激正常HKC及转染重组质粒的HKC24h后cubilin mRNA的表达,并通过激光共聚焦扫描荧光显微镜观察HKC对白蛋白摄取情况的变化。结果FQ-PCR显示HSA刺激正常HKC后cubilin mRNA表达具有剂量依赖性。与正常对照组相比,两个重组质粒均可部分抑制HKC cubilin表达,抑制效率分别为66%和37%,HSA刺激转染pSUPER EGFP-C1、pSU-PER EGFP-C2的HKC后cubiin mRNA水平较正常对照组比较分别下降50%、34%,转染了重组质粒的HKC对白蛋白的摄取明显减少。结论成功地构建了针对人cubilin基因的RNA干扰真核表达载体,表达型siRNA可抑制肾小管上皮细胞cubilin基因的表达及对白蛋白的摄取。 展开更多

关键词 CUBILIN RNA干扰 SIRNA 人近端肾小管上皮细胞

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葡萄糖、胰岛素和尿酸对猪近端肾小管上皮细胞株血红素氧合酶-1的影响

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作者 孙珲 李晓苗 +3 位作者 宋白利 刘新平 药立波 姬秋和 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期566-568,589,共4页

目的观察不同浓度葡萄糖、胰岛素和尿酸的培养条件下猪近端肾小管上皮细胞株(LLC-PK1)血红素氧合酶(HO-1)活性的改变,以探讨代谢相关因素在细胞水平对肾小管上皮细胞的影响。方法以LLC-PK1为研究对象,观察葡萄糖浓度为5、10、22、33 mmo... 目的观察不同浓度葡萄糖、胰岛素和尿酸的培养条件下猪近端肾小管上皮细胞株(LLC-PK1)血红素氧合酶(HO-1)活性的改变,以探讨代谢相关因素在细胞水平对肾小管上皮细胞的影响。方法以LLC-PK1为研究对象,观察葡萄糖浓度为5、10、22、33 mmol/L,胰岛素浓度为0、10-9、10-8、10-7mol/L,尿酸浓度为0、0.1、0.2、0.4 mmol/L培养48 h条件下,LLC-PK1细胞HO-1活性的改变。结果0.1 mmol/L0、.2 mmol/L和0.4 mmol/L尿酸刺激48 h后,LLC-PK1的HO-1活性增加,并呈剂量依赖关系,而上述浓度的葡萄糖和胰岛素刺激48 h对LLC-PK1的HO-1活性无影响。结论一定浓度的尿酸可使LLC-PK1的HO-1活性升高,提示尿酸在细胞水平对肾小管上皮细胞的氧化应激过程产生影响。 展开更多

关键词 尿酸 葡萄糖 胰岛素 血红素氧合酶 猪近端肾小管上皮细胞株

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人近端肾小管上皮细胞诱导表达吲哚胺2,3-加双氧酶的实验研究

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作者 侯卫平 袁发焕 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期329-332,共4页

目的了解培养的人近端肾小管上皮HK2细胞株吲哚胺2,3-加双氧酶(IDO)的诱导表达情况及其影响因素。方法实验分为不同浓度(0、500、1000、2000U/ml)γ-干扰素(IFN-γ)刺激培养组和IFN-γ2000U/ml刺激12、24、48、72h不同时点培养组,以10%... 目的了解培养的人近端肾小管上皮HK2细胞株吲哚胺2,3-加双氧酶(IDO)的诱导表达情况及其影响因素。方法实验分为不同浓度(0、500、1000、2000U/ml)γ-干扰素(IFN-γ)刺激培养组和IFN-γ2000U/ml刺激12、24、48、72h不同时点培养组,以10%胎牛血清DMEM培养基作为正常对照组。RT-PCR检测不同培养条件下HK2细胞IDOmRNA的表达,免疫细胞化学染色检测24h后HK2细胞IDO的表达,高效液相色谱法检测培养基中犬尿氨酸、色氨酸浓度。结果正常HK2细胞不表达IDOmRNA和IDO蛋白。不同浓度IFN-γ刺激后,HK2细胞IDO mRNA的表达呈剂量依赖性升高,与正常对照组相比差异显著(P<0.05),同时IDOmRNA表达还呈时间依赖性地增高,以48h为最佳刺激时间。免疫组化染色显示,经IFN-γ刺激24h后,HK2细胞IDO蛋白表达增强,高效液相色谱检测显示刺激组培养基上清中犬尿氨酸特异性代谢率升高,表明表达的IDO具有生物活性,并且其活性呈IFN-γ剂量依赖性地升高。结论IFN-γ刺激培养的HK2细胞IDO表达升高并具有活性,推测病理状态下人肾小管上皮细胞诱导表达的IDO有可能参与了肾小管-间质的病理损害过程。 展开更多

关键词 吲哚胺2 3-加双氧酶 干扰素Ⅱ型 人近端肾小管上皮细胞

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miR-377调控THEM4对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞EMT的作用

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作者 谭德敏 曾雨如 +3 位作者 向海燕 张明霞 刘珊 张瑶 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1302-1307,共6页

目的:探讨微小RNA-377(miR-377)对硫酯酶超家族成员4(THEM4)的靶向作用及对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞上皮间充质转化(EMT)的影响。方法:将人近端肾小管上皮细胞HK-2分为正常葡萄糖组(NG组:5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG组:30 mmol/... 目的:探讨微小RNA-377(miR-377)对硫酯酶超家族成员4(THEM4)的靶向作用及对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞上皮间充质转化(EMT)的影响。方法:将人近端肾小管上皮细胞HK-2分为正常葡萄糖组(NG组:5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG组:30 mmol/L葡萄糖)、HG+miR-NC组(HG+转染miR-NC)、HG+miR-377组(HG+转染miR-377)、HG+antimiR-NC组(HG+转染anti-miR-NC)、HG+anti-miR-377组(HG+转染anti-miR-377)、HG+miR-377+pcDNA3.1组(HG+共转染miR-377+pcDNA3.1)、HG+miR-377+pcDNA3.1-THEM4组(HG+共转染miR-377+pcDNA3.1-THEM4)、HG+miR-377+si-NC组(HG+共转染miR-377+si-NC)和HG+miR-377+si-THEM4组(HG+共转染miR-377+si-THEM4)。qPCR检测miR-377表达,Western blot检测Vimentin、E-cadherin、THEM4蛋白表达,生物信息学预测和双荧光素酶实验分析miR-377与THEM4的靶向关系。结果:与NG组相比,HG诱导的HK-2细胞中miR-377表达量、Vimentin蛋白表达量明显增加,E-cadherin蛋白水平显著降低(P<0.05)。与HG+miR-NC组相比,HG+miR-377组HK-2细胞的miR-377表达量、Vimentin蛋白表达量显著升高,E-cadherin蛋白水平显著降低(P<0.05)。与HG+anti-miR-NC组相比,HG+anti-miR-377组HK-2细胞中miR-377表达量、Vimentin蛋白水平显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达量显著升高(P<0.05)。miR-377靶向调控THEM4表达。与HG+miR-377+pcDNA3.1组相比,HG+miR-377+pcDNA3.1-THEM4组HK-2细胞中THEM4、E-cadherin蛋白水平明显升高,Vimentin蛋白表达量显著降低(P<0.05)。与HG+miR-377+si-NC组相比,HG+miR-377+si-THEM4组HK-2细胞的THEM4、E-cadherin蛋白表达量明显降低,Vimentin蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论:miR-377通过靶向THEM4调控高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞EMT。 展开更多

关键词 miR-377 THEM4 高糖 人近端肾小管上皮细胞 EMT

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PEA3在白蛋白诱导肾小管上皮细胞损伤中的作用 被引量：1

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作者 林加娟 白咪 +5 位作者 庄一波 宋瑞花 张园园 张爱华 黄松明 丁桂霞 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期923-927,共5页

目的:探讨PEA3在白蛋白诱导的肾近端小管上皮细胞损伤中的作用及机制。方法:体外培养小鼠近端肾小管上皮细胞,实验组分为对照组、空载对照组、PEA3过表达组、白蛋白造模组和PEA3处理组。实时荧光定量PCR检测PEA3转染效率。应用Annexin V... 目的:探讨PEA3在白蛋白诱导的肾近端小管上皮细胞损伤中的作用及机制。方法:体外培养小鼠近端肾小管上皮细胞,实验组分为对照组、空载对照组、PEA3过表达组、白蛋白造模组和PEA3处理组。实时荧光定量PCR检测PEA3转染效率。应用Annexin V-FITC/PI双染和Hoechst染色检测细胞凋亡。Western blot法和RT-PCR检测肾小管上皮细胞标志物E-cadherin、α-SMA及Vimentin的蛋白和m RNA变化水平。结果:1PEA3质粒转染后,过表达组的PEA3表达水平增高了2.5倍;2加入白蛋白刺激后,与对照组相比小管细胞凋亡增加,过表达PEA3显著抑制白蛋白诱导的小管细胞凋亡;3白蛋白刺激降低E-cadherin的表达,而增加了α-SMA和Vimentin的表达,PEA3过表达阻断白蛋白对E-cadherin的抑制作用,并降低α-SMA和Vimentin的表达。结论:PEA3可抑制白蛋白诱导的小管上皮细胞凋亡和上皮-间充质转分化。 展开更多

关键词 PEA3 白蛋白 肾近端小管上皮细胞 凋亡 上皮-间充质转分化

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多毛孢菌菌粉抑制庆大霉素诱导的猪肾小管上皮细胞凋亡及纤维化生长因子的表达 被引量：1

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作者 杨汝春 程晓霞 +3 位作者 毛俐婵 王军 鲁盈 王永钧 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2003年第5期557-560,共4页

目的 :研究人工培养的多毛孢菌菌粉水提物对庆大霉素诱导的近端肾小管上皮细胞损伤、凋亡的保护作用及对碱性纤维化生长因子 (basicfibro blastgrowthfactor,bFGF)mRNA表达的影响。方法 :将猪近端肾小管上皮细胞株 (LLCPK)复苏培养 ,分... 目的 :研究人工培养的多毛孢菌菌粉水提物对庆大霉素诱导的近端肾小管上皮细胞损伤、凋亡的保护作用及对碱性纤维化生长因子 (basicfibro blastgrowthfactor,bFGF)mRNA表达的影响。方法 :将猪近端肾小管上皮细胞株 (LLCPK)复苏培养 ,分成正常对照组、庆大霉素组和多毛孢菌组 ,除对照组外 ,用庆大霉素刺激 ,多毛孢菌组同时加多毛孢菌菌粉水提物干预。以MTT法观测存活细胞数 ;并测定细胞上清液N 乙酰 β D 氨基糖苷酶 (NAG)浓度 ;荧光标记细胞表面AnnexinⅤ ,以细胞流式法测定其表达 ;RT PCR检测细胞碱性纤维化生长因子mRNA的表达。结果与结论 :庆大霉素可引起细胞存活率的显著降低 ,N 乙酰 β D 氨基糖苷酶浓度显著增高 ;并提高细胞AnnexinV的表达 ,即诱导白细胞调亡 ,和诱导LLCPK细胞bFGFmRNA的表达。多毛孢菌菌粉水提物能提高肾小管上皮细胞LLCPK存活率 ,降低细胞调亡数 。 展开更多

关键词 药效学 庆大霉素 近端肾小管上皮细胞 细胞凋亡 纤维生长因子 多毛孢菌

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鸢尾素通过激活AMPK抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞线粒体损伤 被引量：3

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作者 赵艺璇 彭薇 +4 位作者 田蓓晨 柯琳 蔡阳 韩敏 邓元俊 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期340-344,共5页

目的探究鸢尾素(Irisin)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用及可能机制。方法体外培养近端肾小管上皮细胞(renal proximal tubule cells,TKPTs),细胞分为正常对照(NG)组、高渗对照(MA)组、高糖(HG)组、高糖+鸢尾素(HG+Irisin)组... 目的探究鸢尾素(Irisin)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用及可能机制。方法体外培养近端肾小管上皮细胞(renal proximal tubule cells,TKPTs),细胞分为正常对照(NG)组、高渗对照(MA)组、高糖(HG)组、高糖+鸢尾素(HG+Irisin)组。利用蛋白印迹法测定肾损伤分子1(kidney injury molecular1,KIM-1)、电压依赖性阴离子通道1(recombinant voltage dependent anion channel protein1,VDAC1)、线粒体裂变相关蛋白1(dynamin-related protein 1,DRP1)、线粒体融合蛋白2(mitofusin2,MFN2)及AMP活化蛋白激酶(AMP-activatedproteinkinase,AMPK)表达;通过MitoTracker^(TM) RedCMXROs染色观察细胞内线粒体的形态。结果与NG组相比,HG组KIM1、p-DRP1616表达增加,VDAC1、MFN2、p-AMPK表达减少(均P<0.05);其细胞内线粒体分裂增加,线粒体呈短棒状或颗粒状。与HG组相比,加入Irisin干预后,近端肾小管上皮细胞KIM1、p-DRP1616表达减少,VDAC1、MFN2、p-AMPK表达增加(均P<0.05),细胞内线粒体的分裂明显减少,短棒状或颗粒状线粒体结构减少。结论Irisin对高糖诱导的近端肾小管上皮细胞损伤具有保护作用,其机制可能与激活AMPK,维持线粒体裂变-融合平衡,改善线粒体功能有关。 展开更多

关键词 近端肾小管上皮细胞 鸢尾素 AMP活化蛋白激酶 线粒体裂变-融合

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化合物21(C21)抑制晚期糖基化终产物刺激引起的大鼠肾小管上皮细胞的细胞因子分泌

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作者 黎懿慧 左丽 +5 位作者 查艳 吴欣 刘畅 邓文丽 董蓉 达静静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期230-235,共6页

目的研究2型血管紧张素Ⅱ受体(AT2R)激动剂化合物21(C21)对晚期糖基化终产物(AGE)刺激的NRK-52E大鼠近端肾小管上皮细胞分泌的细胞因子的影响及潜在机制。方法培养NRK-52E细胞,分为正常对照组和(25、50、100、200)mg/L AGE-牛血清白蛋白... 目的研究2型血管紧张素Ⅱ受体(AT2R)激动剂化合物21(C21)对晚期糖基化终产物(AGE)刺激的NRK-52E大鼠近端肾小管上皮细胞分泌的细胞因子的影响及潜在机制。方法培养NRK-52E细胞,分为正常对照组和(25、50、100、200)mg/L AGE-牛血清白蛋白(BSA)刺激组。培养48 h后收集细胞,采用实时定量PCR检测NRK-52E细胞白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的表达。间接ELISA检测细胞培养上清液中的IL-6、TNF-α蛋白水平。然后先用25 mg/L AGE-BSA刺激NRK-52E细胞48 h后分别给予(0.01、0.05、0.1)mmol/L C21分别处理24 h,采用实时定量PCR检测细胞蛋白激酶C(PKC)、核因子κB p65(NF-κB p65)及转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的表达,Western blot法检测细胞中PKC、NF-κB p65、TGF-β1蛋白表达。结果不同剂量的AGE-BSA刺激NRK-52E细胞均可明显增加IL-6、TNF-α的mRNA表达,而以25 mg/L AGE-BSA刺激NRK-52E细胞时,其IL-6、TNF-α的蛋白分泌增加更明显。以25 mg/L AGE-BSA刺激NRK-52E细胞48 h后,(0.01、0.05、0.1)mmol/L C21分别处理24 h,均可显著抑制AGE-BSA所诱导的NRK-52E细胞PKC、NF-κB p65及TGF-β1 mRNA和蛋白的表达。结论AGE-BSA促进NRK-52E细胞IL-6、TNF-α、PKC、NF-κB p65及TGF-β1表达,C21则抑制其作用。 展开更多

关键词 晚期糖基化终末产物(AGE) 糖尿病肾病(DKD) NRK-52E大鼠近端肾小管上皮细胞 炎症因子 2型血管紧张素Ⅱ受体(AT2R) 化合物21(C21)

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益肾活血清利方对HK2细胞TEMT过程中Smad4及RhoA mRNA表达作用的实验研究 被引量：3

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作者 孙世竹 孙伟 +2 位作者 刘丽 朱萱萱 赖仁胜 《中华中医药学刊》 CAS 2010年第10期2084-2087,共4页

目的:以益肾活血清利为法组方通过中药含药血清观察中药对HK-2细胞(人肾近端小管上皮细胞)TEMT(肾小管上皮细胞向间质肌成纤维细胞转分化)过程中的信号因子表达的影响。方法:制备中药含药血清,观察含药血清对HK-2细胞在TGF-β1诱导下EM... 目的:以益肾活血清利为法组方通过中药含药血清观察中药对HK-2细胞(人肾近端小管上皮细胞)TEMT(肾小管上皮细胞向间质肌成纤维细胞转分化)过程中的信号因子表达的影响。方法:制备中药含药血清,观察含药血清对HK-2细胞在TGF-β1诱导下EMT过程的阻抑作用。随机分为正常组、模型组、中药低剂量组、中药高剂量组、苯那普利组。观察在TGF-β1诱导下转分化过程中对Smad4及RhoA mRNA表达作用的影响。结果:中药低剂量组、苯那普利组与模型组Smad4的mRNA表达比较有显著差异;中药高剂量组RhoA的mRNA表达与模型组比较P<0.05,差异有显著性;而中药低剂量组、苯那普利组与模型组比较差异不显著。结论:在Smad4 mRNA的表达上中药低剂量组与洛汀新均显示出抑制作用,但洛汀新对RhoA mRNA的表达上无明显作用,而中药高剂量组则有明显的抑制RhoA mRNA表达的作用,说明中药的可探讨性较大,单纯通过剂量调整或许可以达到多信号途径的抑制作用而发挥拮抗EMT的过程。 展开更多

关键词 益肾活血清利方 人肾近端小管上皮细胞 肾小管细胞上皮向间质肌成纤维细胞转分化 SMAD4 RHOA

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血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对人肾小管细胞MCP-1mRNA表达的影响

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作者 刘必成 刘宏 +2 位作者 俞济荣 王艳丽 尹莲芳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期712-713,共2页

关键词 血管紧张素Ⅱ 单核细胞趋化蛋白-1 人近端肾小管上皮细胞

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大鼠嘌呤霉素氨基核苷肾病中肾小球“小管化”现象的观察 被引量：1

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作者 李瑭 陈燕铭 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第17期1858-1861,共4页

目的观察大鼠嘌呤霉素氨基核苷肾病(puromycin aminonucleoside nephrosis,PAN)模型中肾小球"小管化"的现象。方法将30只雄性SD大鼠按随机数字表法分为6组,溶媒对照组(一次性腹腔注射生理盐水2 mL)及注射嘌呤霉素氨基核苷(pur... 目的观察大鼠嘌呤霉素氨基核苷肾病(puromycin aminonucleoside nephrosis,PAN)模型中肾小球"小管化"的现象。方法将30只雄性SD大鼠按随机数字表法分为6组,溶媒对照组(一次性腹腔注射生理盐水2 mL)及注射嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PA)后2、5、10、15、20 d组(均一次性腹腔注射溶于生理盐水的嘌呤霉素氨基核苷15 mg/100 g),每组5只。采用一次性腹腔注射嘌呤霉素氨基核苷15 mg/100 g的方法制作PAN模型。用HE染色、免疫荧光检测和透射电镜观察的方法确定各组大鼠肾小囊壁层上皮细胞的类型,测定各组24 h尿蛋白定量。采用SPSS 13.0统计软件分析各组该现象的发生率和严重度差异。结果大鼠PAN模型肾小囊壁层的立方状上皮细胞的形态学特征和免疫学表型均与近端小管上皮细胞表型一致,即肾小球发生了"小管化"。模型初期,肾小球"小管化"的发生率和严重度随模型进展逐渐加重,10、15 d组较正常组均明显升高(P<0.05),20 d组虽然"小管化"仍较正常组明显升高(P<0.05),但已出现下降的趋势。肾小球"小管化"的发生率(r=0.55,P<0.05)和严重度(r=0.56,P<0.05)与24 h尿蛋白定量正相关。结论大鼠PAN模型发生了肾小球"小管化",并且在模型中呈现动态变化。这一现象有可能为研究足细胞和肾小囊壁层上皮细胞损伤的机制提供新思路。 展开更多

关键词 嘌呤霉素氨基核苷肾病 肾小囊壁层上皮细胞 肾近端小管上皮细胞 肾小球小管化

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CPT1A对糖尿病肾病肾间质纤维化的保护作用 被引量：1

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作者 熊莉 赵景宏 +2 位作者 何婷 肖堂利 刘赤 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期810-816,共7页

目的探讨肉碱棕榈酰转移酶1A(palmitoyl-transferase 1A,CPT1A)在糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)肾间质纤维化中的作用。方法16只4周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为(n=8):对照组(Ctrl组,给予普通饲料喂养)和DKD组[通过高脂饮食联... 目的探讨肉碱棕榈酰转移酶1A(palmitoyl-transferase 1A,CPT1A)在糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)肾间质纤维化中的作用。方法16只4周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为(n=8):对照组(Ctrl组,给予普通饲料喂养)和DKD组[通过高脂饮食联合链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)制备DKD模型]。每4周收集小鼠24 h尿液,检测空腹血糖和体质量。建模16周(小鼠20周龄)后取材并检测2组小鼠血肌酐水平、尿蛋白/尿肌酐比值,PAS和Masson染色观察肾小球病理改变和肾间质纤维化程度,免疫组化染色、Western blot观察CPT1A及纤维化标志物的表达。体外培养人近端肾小管上皮细胞(proximal tubular cell line,HK-2)后分3组:正常对照(Ctrl)组、30 mmol/L高糖(high glucose,HG)组、30 mmol/L甘露醇(mannitol,M)组,孵育48 h后观察CPT1A、纤维化标志物的表达。CPT1A过表达质粒转染HK-2细胞后再予以30 mmol/L高糖处理,观察各组细胞形态和纤维化标志物的表达。结果与Ctrl组小鼠相比,DKD组小鼠肾小球体积增大、系膜基质增多和出现肾间质纤维化,同时血肌酐、尿蛋白/尿肌酐比值显著升高(P<0.05),肾组织CPT1A表达明显降低,而纤维化标志物表达显著升高。体外实验中:高糖导致HK-2细胞失去原有形态、呈长梭形改变,CPT1A表达降低和纤维化标志物表达升高,并与渗透压改变无关。而CPT1A过表达能抑制高糖诱导的HK-2细胞形态改变和纤维化标志物高表达。结论上调CPT1A表达可能对糖尿病肾病肾间质纤维化具有潜在的抑制作用。 展开更多

关键词 肉碱棕榈酰转移酶1A 糖尿病肾病 肾间质纤维化 人近端肾小管上皮细胞

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