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成年狨猴肾脏细胞体外培养体系的建立及CRISPR/Cas9基因编辑的应用
1
作者
丛日旭
佟巍
+5 位作者
向志光
张丽芳
刘先菊
阮研硕
郭智
刘云波
《中国比较医学杂志》
CAS
北大核心
2019年第8期50-54,共5页
目的建立成年狨猴肾脏细胞体外培养的培养体系,并将Cas9编辑系统初步应用于所培养的狨猴肾脏细胞,建立检测sgRNA切割活性的体系。方法取成年的狨猴肾脏,采用贴壁法、消化法得到狨猴肾脏细胞。对细胞进行生长曲线测定、转染试剂(Viafect...
目的建立成年狨猴肾脏细胞体外培养的培养体系,并将Cas9编辑系统初步应用于所培养的狨猴肾脏细胞,建立检测sgRNA切割活性的体系。方法取成年的狨猴肾脏,采用贴壁法、消化法得到狨猴肾脏细胞。对细胞进行生长曲线测定、转染试剂(Viafect和Lipo2000)及抗性(嘌呤霉素和杀稻瘟菌素)浓度筛选,将SIRT1的sgRNA质粒和Cas9质粒共转染狨猴细胞,提取基因组并对基因修饰目的片段扩增,并将扩增产物进行测序。结果建立狨猴肾脏细胞体外培养体系;ViaFect转染试剂转染率大于60%;细胞抗性筛选适宜浓度嘌呤霉素4μg/mL,杀稻瘟菌素8μg/mL;测序结果表明,从sgRNA的PAM序列附近开始出现突变峰,证明sgRNA成功引入突变。结论成功建立了狨猴肾脏细胞的体外培养、细胞转染和抗性筛选体系;CRISPR/Cas9可以用于狨猴肾脏细胞编辑,为基因修饰狨猴靶点选择提供依据。
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关键词
狨猴
肾脏细胞培养
Cas9基因编辑
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题名
成年狨猴肾脏细胞体外培养体系的建立及CRISPR/Cas9基因编辑的应用
1
作者
丛日旭
佟巍
向志光
张丽芳
刘先菊
阮研硕
郭智
刘云波
机构
中国医学科学院医学实验动物研究所
出处
《中国比较医学杂志》
CAS
北大核心
2019年第8期50-54,共5页
基金
北京市科技计划(Z161100000216154)
国家重点研究计划(2017YFA0105201)
文摘
目的建立成年狨猴肾脏细胞体外培养的培养体系,并将Cas9编辑系统初步应用于所培养的狨猴肾脏细胞,建立检测sgRNA切割活性的体系。方法取成年的狨猴肾脏,采用贴壁法、消化法得到狨猴肾脏细胞。对细胞进行生长曲线测定、转染试剂(Viafect和Lipo2000)及抗性(嘌呤霉素和杀稻瘟菌素)浓度筛选,将SIRT1的sgRNA质粒和Cas9质粒共转染狨猴细胞,提取基因组并对基因修饰目的片段扩增,并将扩增产物进行测序。结果建立狨猴肾脏细胞体外培养体系;ViaFect转染试剂转染率大于60%;细胞抗性筛选适宜浓度嘌呤霉素4μg/mL,杀稻瘟菌素8μg/mL;测序结果表明,从sgRNA的PAM序列附近开始出现突变峰,证明sgRNA成功引入突变。结论成功建立了狨猴肾脏细胞的体外培养、细胞转染和抗性筛选体系;CRISPR/Cas9可以用于狨猴肾脏细胞编辑,为基因修饰狨猴靶点选择提供依据。
关键词
狨猴
肾脏细胞培养
Cas9基因编辑
Keywords
marmosets
kidney cell culture
Cas9 editing
分类号
R-33 [医药卫生]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
成年狨猴肾脏细胞体外培养体系的建立及CRISPR/Cas9基因编辑的应用
丛日旭
佟巍
向志光
张丽芳
刘先菊
阮研硕
郭智
刘云波
《中国比较医学杂志》
CAS
北大核心
2019
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