miR-16-5p靶向抑制CXCL10表达减轻脂多糖诱导的HK-2人肾小管上皮细胞损伤 被引量：1

1

作者 程创 石中全 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期218-223,共6页

目的探讨微小RNA-16-5p(miR-16-5p)对脂多糖(LPS)诱导的肾小管上皮细胞损伤和CXC趋化因子配体10(CXCL10)表达的影响。方法体外培养HK-2人肾小管上皮细胞,采用LPS诱导模拟急性肾损伤,细胞分为对照组、LPS组、LPS联合miR-NC组和LPS联合miR... 目的探讨微小RNA-16-5p(miR-16-5p)对脂多糖(LPS)诱导的肾小管上皮细胞损伤和CXC趋化因子配体10(CXCL10)表达的影响。方法体外培养HK-2人肾小管上皮细胞,采用LPS诱导模拟急性肾损伤,细胞分为对照组、LPS组、LPS联合miR-NC组和LPS联合miR-16-5p组。实时荧光定量PCR分析miR-16-5p的表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测HK-2细胞的相对存活率,ELISA检测培养细胞上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-12的含量,二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测活性氧(ROS)水平,试剂盒检测丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测CXCL10以及凋亡相关胱天蛋白酶3(caspase-3)和caspase-9的蛋白表达水平。生物信息学预测miR-16-5p和CXCL10相互作用靶点,双荧光素酶报告基因实验验证miR-16-5p和CXCL10的靶向关系。结果与对照组相比,LPS组HK-2细胞miR-16-5p表达、相对细胞存活率和SOD含量均明显降低,而ROS水平、MDA、TNF-α、IL-6和IL-12的含量以及细胞凋亡率、CXCL10、caspase-3和caspase-9的蛋白表达均明显升高;与LPS组相比,过表达miR-16-5p逆转以上各指标变化。miR-16-5p能够靶向调控CXCL10的表达。结论过表达miR-16-5p靶向抑制CXCL10的表达减轻LPS诱导的HK-2肾小管上皮细胞损伤。 展开更多

关键词 miR-16-5p hk-2细胞 肾小管上皮细胞 CXC趋化因子配体10(CXCL10) 急性肾损伤

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中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白对肾小管上皮HK-2细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制 被引量：3

2

作者 张吟眉 张捷 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1297-1300,1305,共5页

目的观察中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)在HK-2肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤中的作用以及对自噬的调控作用。方法设计并合成3组NGAL基因的特异性短发夹RNA(shRNA)序列并转入HK-2细胞,实时定量PCR检测HK-2细胞中NGAL mRNA水平、... 目的观察中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)在HK-2肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤中的作用以及对自噬的调控作用。方法设计并合成3组NGAL基因的特异性短发夹RNA(shRNA)序列并转入HK-2细胞,实时定量PCR检测HK-2细胞中NGAL mRNA水平、Western blot法检测NGAL蛋白水平,筛选抑制效率最佳的一组用于后续实验。对NGAL敲减的HK-2细胞进行缺氧/复氧处理,检测微管相关蛋白1轻链3(LC-3)Ⅱ和beclin-1表达水平,并用Cell Titer-Blue细胞活性检测系统和CCK-8法检测细胞活力。结果成功构建3组NGAL基因沉默shRNA质粒,转染HK-2细胞后NGAL mRNA和蛋白水平表达均低于空白载体对照;缺氧/复氧处理后,NGAL敲减的HK-2细胞LC-3Ⅱ和beclin-1表达水平低于空白载体对照,而外加400 ng/m L NGAL的HK-2细胞LC-3Ⅱ及beclin-1水平高于缺氧/复氧对照;用Cell Titer-Blue和CCK-8法检测NGAL敲减组的细胞活力均低于空白载体对照组。结论 NGAL在HK-2肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤起一定保护作用,可能与增强自噬相关。 展开更多

关键词 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 自噬 肾小管上皮hk-2细胞 缺氧/复氧损伤

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替米沙坦对尿酸盐刺激下HK-2肾小管上皮细胞干预研究 被引量：2

3

作者 张继波 龙利 +4 位作者 覃慧群 金晟 余建峰 徐敏 刘浩 《医药导报》 CAS 北大核心 2021年第10期1330-1336,共7页

目的基于过氧化物酶增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)途径探讨替米沙坦对尿酸盐刺激下HK-2肾小管上皮细胞的干预作用。方法培养HK-2肾小管上皮细胞,随机分为7组,分别为对照组(NC组)、模型组(UM组)、替米沙坦组(UT组)、罗格列酮组(UR组)、GW9... 目的基于过氧化物酶增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)途径探讨替米沙坦对尿酸盐刺激下HK-2肾小管上皮细胞的干预作用。方法培养HK-2肾小管上皮细胞,随机分为7组,分别为对照组(NC组)、模型组(UM组)、替米沙坦组(UT组)、罗格列酮组(UR组)、GW9662组(UG组)、替米沙坦+GW9662组(UTG组)和罗格列酮+GW9662组(URG组),除NC组应用培养液外,其余6组在NC组基础上均加入600μmol·L-1尿酸盐溶液培养。培养48 h。流式细胞仪检测HK-2细胞hUAT、PPAR-γ蛋白表达及细胞凋亡率;Q-PCR及Western blotting检测HK-2细胞人生电型尿酸盐转运蛋白(hUAT)、PPAR-γ、转化生长因子-β1(TGF-β1)、环氧合酶2(COX-2)、单核巨噬细胞因子-1(MCP-1)基因及蛋白表达。结果与NC组比较,尿酸盐刺激后UM组细胞凋亡率增加,hUAT及PPAR-γ蛋白阳性细胞率减少(P<0.05);与UM组比较,替米沙坦、罗格列酮均能减少细胞凋亡率及上调hUAT及PPAR-γ蛋白阳性细胞率(P<0.05),PPAR-γ抑制剂后联合替米沙坦、罗格列酮治疗,与UT组、UR组比较,细胞凋亡率增加,hUAT及PPAR-γ蛋白阳性细胞率减少(P<0.05);UTG组与URG组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与UC组比较,UM组hUAT、PPAR-γmRNA及蛋白表达下降,TGF-β1、COX-2、MCP-1 mRNA及蛋白表达增高(P<0.05);与UM组比较,替米沙坦、罗格列酮能上调hUAT、PPAR-γmRNA及蛋白表达,下调TGF-β1、COX-2、MCP-1 mRNA及蛋白表达(P<0.05);PPAR-γ抑制剂后联合替米沙坦治疗,与UT组、UR组比较,hUAT、PPAR-γmRNA及蛋白表达降低,TGF-β1、COX-2、MCP-1 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05);UTG组与URG组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论替米沙坦具有类似罗格列酮激活PPAR-γ受体机制,可通过PPAR-γ途径调节小管细胞凋亡、减少氧化应激及改善间质纤维化而发挥肾脏保护作用。 展开更多

关键词 替米沙坦 罗格列酮 过氧化物酶增殖物受体-γ hk-2肾小管上皮细胞

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T-2毒素对人肾小管上皮细胞HK-2体外增殖和凋亡的影响

4

作者 鲜婷婷 韩小敏 +4 位作者 韩春卉 李凤琴 徐文静 张宏元 屠康 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期86-92,共7页

探讨T-2毒素对人肾小管上皮细胞HK-2体外增殖和凋亡的影响。将体外培养的HK-2细胞,经不同浓度的T-2毒素作用72 h后,分别测定T-2毒素对HK-2细胞增殖抑制率、细胞形态、DNA片段化、细胞凋亡率、细胞周期分布和caspase-3活性的影响。结果表... 探讨T-2毒素对人肾小管上皮细胞HK-2体外增殖和凋亡的影响。将体外培养的HK-2细胞,经不同浓度的T-2毒素作用72 h后,分别测定T-2毒素对HK-2细胞增殖抑制率、细胞形态、DNA片段化、细胞凋亡率、细胞周期分布和caspase-3活性的影响。结果表明,T-2 毒素对HK-2细胞具有增殖抑制作用,抑制率随浓度升高而增大,IC 50 值为49.34 nmol/L。T-2毒素在10~40 nmol/L可剂量依赖性的诱导HK-2细胞凋亡,且20 nmol/L下HK-2细胞即可出现染色质固缩等凋亡细胞的典型特征。同时,10~40 nmol/L,T-2毒素可通过引起G 2 /M期阻滞影响细胞的周期分布。此外,T-2毒素在10~40 nmol/L下可引起caspase-3活性剂量依赖性增强,与对照组相比,最大可提高1.93倍( P <0.05)。因此,该研究为阐明T-2毒素的肾脏毒性作用机制提供了理论依据。 展开更多

关键词 T-2毒素 人肾小管上皮细胞hk-2 体外细胞增殖 细胞凋亡

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硫化氢对TGF-β1诱导的HK-2细胞上皮间充质转化的抑制作用 被引量：3

5

作者 曹慧霞 牛福坤 +3 位作者 尤冠巧 阎磊 朱清 邵凤民 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2012年第5期654-657,共4页

目的:观察硫化氢(H2S)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人近端肾小管上皮细胞转分化的影响,并初步探讨其作用的可能机制。方法:以体外培养的HK-2细胞为研究对象,分别用10μg/LTGF-β1、100μmol/LNaHS(H2S的供体)及2者联合作用进行干... 目的:观察硫化氢(H2S)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人近端肾小管上皮细胞转分化的影响,并初步探讨其作用的可能机制。方法:以体外培养的HK-2细胞为研究对象,分别用10μg/LTGF-β1、100μmol/LNaHS(H2S的供体)及2者联合作用进行干预,以正常培养的细胞作正常对照。孵育0、15、30及60min后,Westernblot检测4组细胞磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)和Smad2蛋白的表达;孵育48h后,观察细胞形态变化,Westernblot检测4组细胞E-cadherin、α-SMA蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,TGF-β1组细胞发生梭形变,E-cadherin蛋白表达下降(F=1262.535,P<0.001),α-SMA蛋白表达上调(F=1456.030,P<0.001);NaHS+TGF-β1组细胞发生梭形变的程度较TGF-β1组明显减轻,E-cadherin蛋白表达增加(F=65.330,P<0.001),α-SMA蛋白表达下降(F=288.300,P<0.001)。TGF-β1组细胞在15、30及60min时p-Smad2/3表达均较正常对照组增加,而NaHS+TGF-β1组细胞p-Smad2/3的表达较TGF-β1组降低(P<0.05)。结论:H2S可抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞转分化,该作用可能部分通过影响Smad2/3磷酸化程度来完成。 展开更多

关键词 硫化氢 肾小管上皮细胞 TGF-Β1 上皮间充质转化 hk-2细胞

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穿心莲内酯减轻脂多糖诱导的肾小管上皮细胞铁死亡机制 被引量：2

6

作者 张艺馨 黄铭 +4 位作者 曹国栋 曾佑成 林靓 王晓悦 程青虹 《中国感染控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期568-573,共6页

目的探讨穿心莲内酯(AG)对脂多糖(LPS)诱导的脓毒症肾小管上皮细胞(HK-2细胞)铁死亡的影响及其作用机制。方法采用LPS处理HK-2细胞,模拟脓毒症HK-2损伤体外模型,进一步用5、10、20、40μmol/L的AG进行干预,将细胞随机分为对照组(Control... 目的探讨穿心莲内酯(AG)对脂多糖(LPS)诱导的脓毒症肾小管上皮细胞(HK-2细胞)铁死亡的影响及其作用机制。方法采用LPS处理HK-2细胞,模拟脓毒症HK-2损伤体外模型,进一步用5、10、20、40μmol/L的AG进行干预,将细胞随机分为对照组(Control)、LPS组、LPS+二甲亚砜(DMSO)组、AG组。采用CCK-8法检测细胞活力,筛选出最适LPS和AG浓度;比较各组中细胞形态变化,肾损伤标志物中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤分子-1(KIM-1)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和活性氧(ROS)水平,以及铁死亡调控蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和铁蛋白(Ferritin)的表达水平,评估AG处理对细胞的保护作用。结果与Control组相比,10μg/mL LPS诱导的HK-2细胞中细胞活力及GSH含量下降,细胞皱缩、贴壁能力差,氧化产物MDA和ROS含量以及肾损伤标志物NGAL和KIM-1水平明显升高,SLC7A11、GPX4蛋白表达水平降低,Ferritin蛋白表达水平增高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。而在使用AG干预后,与LPS组相比,细胞活力升高,GSH含量、SLC7A11和GPX4蛋白表达水平升高,而Ferritin蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);MDA含量和ROS荧光强度以及肾损伤标志物NGAL和KIM-1水平下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论AG对LPS诱导的HK-2细胞损伤具有保护作用,其机制可能是激活SLC7A11/GPX4通路,减少氧化应激,上调抗氧化酶活性,减轻细胞铁死亡。 展开更多

关键词 穿心莲内酯 肾小管上皮细胞 hk-2 铁死亡 SLC7A11 Xc-系统 机制

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线粒体未折叠蛋白反应在棕榈酸诱导肾小管上皮细胞脂质聚集中的作用 被引量：1

7

作者 温睿智 杜晓刚 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期419-427,共9页

目的探讨线粒体未折叠蛋白反应(mitochondrial unfolded protein reaction,UPR^(mt))对肾小管上皮细胞(human kidney 2,HK-2)脂代谢的影响。方法采用棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导HK-2细胞内脂质聚集,分别予siRNA抑制UPR^(mt)或巴多索隆... 目的探讨线粒体未折叠蛋白反应(mitochondrial unfolded protein reaction,UPR^(mt))对肾小管上皮细胞(human kidney 2,HK-2)脂代谢的影响。方法采用棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导HK-2细胞内脂质聚集,分别予siRNA抑制UPR^(mt)或巴多索隆(the 2-cyano-3,12-dioxooleana-1,9-dien-28-oic acid,CDDO)增强UPR^(mt)。油红染色观察细胞内脂质聚集情况,线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)测定线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),Mito-SOX测定线粒体内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,Western blotting检测HSP60、LONP1、CLPP、ACOX1、PPARα、PGC1α、CPT1α蛋白表达。结果PA诱导HK-2细胞脂质聚集、MMP降低、ROS产生增多及UPR^(mt)关键蛋白HSP60、LONP1表达降低;抑制UPR^(mt)可加剧PA导致的脂质聚集、MMP降低、ROS产生增多,HSP60、LONP1表达进一步降低;增强UPR^(mt)可缓解PA导致的脂质聚集、MMP降低、ROS产生增多以及HSP60、LONP1表达降低。结论PA诱导的HK-2细胞脂质聚集可能与线粒体功能障碍有关,UPR^(mt)在该过程中对HK-2细胞具有保护作用。 展开更多

关键词 线粒体未折叠蛋白反应(UPR^(mt)) 棕榈酸(PA) 肾小管上皮细胞(hk-2) 脂质聚集 活性氧(ROS)

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清肾颗粒含药血清通过抑制氧化应激介导的NF-κB信号通路减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化 被引量：11

8

作者 张磊 金华 +3 位作者 王东 程梦 李卓娅 王亿平 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期1234-1245,共12页

目的:探讨清肾颗粒含药血清是否能通过抑制氧化应激介导的NF-κB信号通路的活化,从而减轻高糖诱导的HK-2细胞转分化。方法:使用高效液相色谱法分析清肾颗粒中的活性成分。选用同代HK-2细胞随机分为7组,包括空白对照组,渗透压对照组,高糖... 目的:探讨清肾颗粒含药血清是否能通过抑制氧化应激介导的NF-κB信号通路的活化,从而减轻高糖诱导的HK-2细胞转分化。方法:使用高效液相色谱法分析清肾颗粒中的活性成分。选用同代HK-2细胞随机分为7组,包括空白对照组,渗透压对照组,高糖组,低、中、高剂量清肾颗粒组,以及吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)组。采用倒置相差显微镜观察细胞形态学改变;MTT法测定各组细胞活性;流式细胞术检测HK-2细胞中活性氧(ROS)含量,ELISA法检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;电泳迁移率变动分析(EMSA)检测HK-2细胞中NF-κB p65的DNA结合活性变化;Western blot法检测HK-2细胞中NF-κB p65、p-IκBα、IKKα、MCP-1和ICAM-1的蛋白水平;免疫荧光法检测HK-2细胞中NF-κB p65和α-SMA的蛋白表达情况。结果:通过高效液相色谱法初步明确清肾颗粒中含有绿原酸、盐酸小檗碱、大车前苷、滨蒿内酯、6,7-二甲氧基香豆素、表小檗碱、黄连碱、丹酚酸B、巴马汀、益母草碱、大黄酸和丹参酮IIA。高糖诱导的HK-2细胞与空白对照组比较ROS和MDA水平显著升高(P<0.05),SOD活性显著降低(P<0.05),NF-κB p65、p-IκBα、IKKα、MCP-1、ICAM-1和α-SMA蛋白水平显著升高(P<0.05)。清肾颗粒含药血清干预后高糖诱导的HK-2细胞中ROS和MDA水平显著下降(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05),NF-κB p65、p-IκBα、IKKα、MCP-1、ICAM-1和α-SMA蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论:清肾颗粒含药血清能通过抑制氧化应激介导的NF-κB信号通道的活化,减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化。 展开更多

关键词 清肾颗粒 NF-ΚB信号通路 hk-2细胞 上皮-间充质转化 氧化应激

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倒心盾翅藤对肾小管上皮细胞损伤的保护作用 被引量：6

9

作者 宋美芳 李宜航 +3 位作者 李学兰 张忠廉 吕亚娜 李光 《医药导报》 CAS 2016年第3期249-252,共4页

目的考察傣药倒心盾翅藤不同极性部位在体外对草酸钠致肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的保护作用,研究其治疗尿石症的物质基础。方法以草酸钠损伤HK-2细胞模型体外活性筛选为导向,MTT法检测倒心盾翅藤不同极性部位对草酸钠致HK-2细胞损伤的... 目的考察傣药倒心盾翅藤不同极性部位在体外对草酸钠致肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的保护作用,研究其治疗尿石症的物质基础。方法以草酸钠损伤HK-2细胞模型体外活性筛选为导向,MTT法检测倒心盾翅藤不同极性部位对草酸钠致HK-2细胞损伤的保护作用,初步确定活性部位。结果倒心盾翅藤不同溶剂提取液可不同程度提高草酸钠损伤后细胞活力,0.5和1 mg·mL-1水提液组细胞活力分别上升至86.17%和95.42%;0.5和1 mg·mL-150%醇提液组细胞活力分别上升至93.59%和84.77%;95%醇提液各剂量组细胞活力均上升至81.56%以上,与模型对照组比较,均差异有统计学意义;0.5和1 mg·mL-195%醇提乙酸乙酯部位组细胞活力分别上升至82.53%和91.58%;0.5和1 mg·mL-195%醇提正丁醇部位组细胞活力分别上升至77.24%和87.22%;0.5和1 mg·mL-1水部位组细胞活力分别上升至95.46%和81.36%,与模型对照组比较,均差异有统计学意义,其余部位各剂量组细胞活力与模型对照组比较,差异无统计学意义。结论倒心盾翅藤水提液和醇提液对草酸钠导致的HK-2细胞损伤有明显保护作用,其中乙酸乙酯部位、正丁醇部位以及水部位作用显著,可能是其体外抗结石活性的有效部位。 展开更多

关键词 倒心盾翅藤 草酸钠 hk-2细胞 损伤 上皮细胞 肾小管 提取 不同溶剂

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不同微囊冷冻保存HK-2细胞效果比较 被引量：1

10

作者 潘广林 任宏涛 +1 位作者 顾玉兰 孙志杰 《动物医学进展》 CSCD 2008年第10期31-35,共5页

观察不同类型微囊冻存细胞的效果,为微囊冻存选择合适的冷冻保护剂。应用高压脉冲静电液滴发生器制作液化的海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊和海藻酸钠-钙胶珠包被人肾小管上皮细胞(HK-2);用二甲基亚砜和甘油作为冷冻保护剂冷冻... 观察不同类型微囊冻存细胞的效果,为微囊冻存选择合适的冷冻保护剂。应用高压脉冲静电液滴发生器制作液化的海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊和海藻酸钠-钙胶珠包被人肾小管上皮细胞(HK-2);用二甲基亚砜和甘油作为冷冻保护剂冷冻未包被的HK-2细胞、APA微囊包被的HK-2细胞、胶珠包被的HK-2细胞;解冻后用MTT法测定细胞活性、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量、Hochest33258荧光染料测定DNA含量。结果表明,解冻后液化微囊内HK-2细胞的细胞活性、蛋白质含量、DNA含量均显著高于胶珠内细胞(P<0.05),但与未包被组差异不显著(P>0.05)。DMSO作为冷冻保护剂,细胞活性及细胞蛋白质含量均高于甘油组(P<0.05),但两者在DNA含量上无差异(P>0.05)。液化微囊与DM-SO合用时,细胞活性及细胞蛋白质含量、DNA含量均高于液化微囊与甘油合用时(P<0.05)。液化微囊解冻后稳定性优于胶珠。液化微囊冷冻保存效果优于胶珠,DMSO适于微囊冷冻。 展开更多

关键词 微囊化 冷冻保存 人肾小管上皮细胞hk-2

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KIM-1对AGEs诱导的肾小管上皮细胞EMT和凋亡的影响及其机制 被引量：1

11

作者 张霄 张睿 +3 位作者 吴妍 李宁 曹雷 张长庚 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期2005-2013,共9页

目的:探讨肾损伤分子1(KIM-1)对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导的人近端肾小管上皮HK-2细胞上皮-间充质转化(EMT)和凋亡的影响及其可能的机制。方法:将HK-2细胞分为对照组、AGEs组、AGEs+阴性对照小干扰RNA(NC siRNA)组和AGEs+KIM-1 siRN... 目的:探讨肾损伤分子1(KIM-1)对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导的人近端肾小管上皮HK-2细胞上皮-间充质转化(EMT)和凋亡的影响及其可能的机制。方法:将HK-2细胞分为对照组、AGEs组、AGEs+阴性对照小干扰RNA(NC siRNA)组和AGEs+KIM-1 siRNA组。免疫荧光检测KIM-1蛋白的表达;Western blot检测KIM-1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-cadherin、Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、caspase-3、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白水平;RT-qPCR检测KIM-1 mRNA的表达;MTS检测细胞活力;TUNEL染色和annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)水平。结果:与对照组比较,AGEs处理后的HK-2细胞中KIM-1蛋白、KIM-1 mRNA和α-SMA蛋白表达呈时间依赖性升高,E-cadherin蛋白表达和细胞活力呈时间依赖性降低,凋亡率呈时间依赖性升高,Bcl-2蛋白表达降低,Bax和caspase-3蛋白表达增加,ROS水平和ERK1/2磷酸化水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。转染KIM-1 siRNA能够在AGEs条件下减少HK-2细胞中KIM-1的表达(P<0.01)。与AGEs+NC siRNA组相比,敲减KIM-1的HK-2细胞经AGEs诱导后,细胞α-SMA蛋白表达显著降低,E-cadherin蛋白表达和细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著降低,Bcl-2蛋白表达增加,Bax和caspase-3蛋白表达降低,ROS水平和ERK1/2磷酸化水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:AGEs刺激能够呈时间依赖性地上调HK-2细胞中KIM-1的表达;敲减KIM-1可抑制AGEs诱导的HK-2细胞EMT和凋亡,其机制可能与降低ROS水平和抑制ERK通路的激活有关。 展开更多

关键词 肾损伤分子1 晚期糖基化终末产物 hk-2细胞 上皮-间充质转化 细胞凋亡

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转录因子Sp1促进肾小管上皮间质转化的体外实验研究

12

作者 周美兰 娄未娟 +2 位作者 姬丽华 梁维 何丽洁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1273-1275,共3页

目的:研究转录因子Sp1促进肾小管上皮间质转化(EMT)以及肾脏纤维化的作用和机制。方法:用30 mL/L浓度的低氧培养肾小管上皮细胞HK-2,采用Real-time PCR及Western blot法分别检测细胞中转录因子Sp1,E-cadherin和α-SMA的mRNA和蛋白表达... 目的:研究转录因子Sp1促进肾小管上皮间质转化(EMT)以及肾脏纤维化的作用和机制。方法:用30 mL/L浓度的低氧培养肾小管上皮细胞HK-2,采用Real-time PCR及Western blot法分别检测细胞中转录因子Sp1,E-cadherin和α-SMA的mRNA和蛋白表达水平。构建SP1基因的小干扰RNA载体,并将其转染低氧处理的HK-2肾小管上皮细胞。Real time PCR及Western blot法检测转录因子SP1对HK-2细胞EMT标志物的影响。结果:低氧处理后的HK-2细胞上皮标志物E-cadherin表达显著下降,而间皮标志物α-SMA的表达显著增加,提示HK-2细胞发生EMT。同时发现低氧处理后HK-2中转录因子Sp1的mRNA水平和蛋白水平表达逐渐增加。将Sp1的小干扰RNA载体转染HK-2细胞,得到下调Sp1表达的肾小管上皮细胞系。结果显示,与对照组相比,敲减Sp1的低氧处理的HK-2细胞中上皮细胞标志物E-cadherin表达未见显著下降,而间质细胞标志物α-SMA的表达未见显著增加,提示此时的HK-2细胞未发生EMT。结论:转录因子Sp1可促进HK-2肾小管上皮细胞的EMT。 展开更多

关键词 转录因子SP1 肾小管上皮细胞系hk-2 EMT 纤维化

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