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大鼠BMP-7重组腺病毒构建及在肾小管上皮细胞中表达
1
作者
杨肃文
王伟
+1 位作者
徐再春
朱芸芸
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第1期71-78,共8页
目的:利用AdEasyTMsystem构建携带大鼠BMP-7基因的重组腺病毒,并鉴定其在原代肾小管上皮细胞中的表达。方法:将BMP-7全长序列分为46个片段分段合成,再采用PCR方法将合成的46个寡核苷酸片段拼接成BMP-7基因,并克隆到测序载体中测序鉴定。...
目的:利用AdEasyTMsystem构建携带大鼠BMP-7基因的重组腺病毒,并鉴定其在原代肾小管上皮细胞中的表达。方法:将BMP-7全长序列分为46个片段分段合成,再采用PCR方法将合成的46个寡核苷酸片段拼接成BMP-7基因,并克隆到测序载体中测序鉴定。经NotI和HindⅢ双酶切后接入pShuttle-CMV穿梭载体,构建重组腺病毒的穿梭质粒pShuttle-BMP-7。EcoRI酶切重组pShuttle-BMP-7,与pAdEasyTMDNA电穿孔共转化BJ5183感受态菌,抽提重组AdBMP-7质粒,PacI酶切线性化重组质粒AdBMP-7后,转染Ad293细胞进行病毒包装和扩增,腺病毒荧光检测试剂盒测定其滴度。用AdBMP-7感染大鼠肾小管上皮细胞,以ELISA法和W estern-blot法检测BMP-7在大鼠肾小管上皮细胞中的表达。RT-PCR方法检测-αSMA mRNA的表达水平,以鉴定重组腺病毒AdBMP-7的生物学活性。结果:构建了BMP-7基因的重组腺病毒载体,并制备出高滴度重组腺病毒保存液。该重组腺病毒在体外能有效转染大鼠肾小管上皮细胞并高表达BMP-7蛋白,所表达的BMP-7蛋白能有效逆转由TGF-β1诱导的α-SMA表达增高。结论:成功地构建了携带大鼠BMP-7基因的重组腺病毒,并初步证实其具有一定的抗肾纤维化功能。
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关键词
骨形态发生蛋白质类/遗传学
重组
遗传
转染
遗传载体
腺病毒科/遗传学
肾小管/细胞学
上皮
细胞
/代谢
肾
硬化症/治疗
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职称材料
题名
大鼠BMP-7重组腺病毒构建及在肾小管上皮细胞中表达
1
作者
杨肃文
王伟
徐再春
朱芸芸
机构
浙江大学医学院附属邵逸夫医院检验科
浙江省生物治疗重点实验室
浙江省立同德医院
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第1期71-78,共8页
基金
浙江省医药卫生科学研究基金(2006B072)
浙江省自然科学基金(Y205281)
文摘
目的:利用AdEasyTMsystem构建携带大鼠BMP-7基因的重组腺病毒,并鉴定其在原代肾小管上皮细胞中的表达。方法:将BMP-7全长序列分为46个片段分段合成,再采用PCR方法将合成的46个寡核苷酸片段拼接成BMP-7基因,并克隆到测序载体中测序鉴定。经NotI和HindⅢ双酶切后接入pShuttle-CMV穿梭载体,构建重组腺病毒的穿梭质粒pShuttle-BMP-7。EcoRI酶切重组pShuttle-BMP-7,与pAdEasyTMDNA电穿孔共转化BJ5183感受态菌,抽提重组AdBMP-7质粒,PacI酶切线性化重组质粒AdBMP-7后,转染Ad293细胞进行病毒包装和扩增,腺病毒荧光检测试剂盒测定其滴度。用AdBMP-7感染大鼠肾小管上皮细胞,以ELISA法和W estern-blot法检测BMP-7在大鼠肾小管上皮细胞中的表达。RT-PCR方法检测-αSMA mRNA的表达水平,以鉴定重组腺病毒AdBMP-7的生物学活性。结果:构建了BMP-7基因的重组腺病毒载体,并制备出高滴度重组腺病毒保存液。该重组腺病毒在体外能有效转染大鼠肾小管上皮细胞并高表达BMP-7蛋白,所表达的BMP-7蛋白能有效逆转由TGF-β1诱导的α-SMA表达增高。结论:成功地构建了携带大鼠BMP-7基因的重组腺病毒,并初步证实其具有一定的抗肾纤维化功能。
关键词
骨形态发生蛋白质类/遗传学
重组
遗传
转染
遗传载体
腺病毒科/遗传学
肾小管/细胞学
上皮
细胞
/代谢
肾
硬化症/治疗
Keywords
Bone morphogenetic proteins/genet
Recombination
genetic
Transfection
Genetic vectors
Adenoviridae/genet
Kidney tubules/cytol
Epithelial cells/metab
Nephrosclerosis/ther
分类号
R692 [医药卫生—泌尿科学]
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作者
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1
大鼠BMP-7重组腺病毒构建及在肾小管上皮细胞中表达
杨肃文
王伟
徐再春
朱芸芸
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010
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