肽质量指纹图谱鉴别诊断IgA肾病和非IgA肾病的可行性分析 被引量：2

1

作者 高静 王涌 +3 位作者 温新宇 鲁鸿昊 董振南 田亚平 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1309-1313,共5页

目的探索肽质量指纹图谱(PMF)在IgA肾病和非IgA肾病的分类中是否可行。方法采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)分析IgA肾病和非IgA肾病患者的血清肽质量指纹图谱。结果 IgA肾病和非IgA肾病的血清肽质量指纹图谱具... 目的探索肽质量指纹图谱(PMF)在IgA肾病和非IgA肾病的分类中是否可行。方法采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)分析IgA肾病和非IgA肾病患者的血清肽质量指纹图谱。结果 IgA肾病和非IgA肾病的血清肽质量指纹图谱具有9个差异多肽;其中,最显著的两个多肽峰是4476.46和1968.10,ROC曲线下面积分别为86.18%和79.77%;主因素分析(PCA)表明前8个因素(差异峰)的累积解释变异量超过95%,说明该模型的鉴别诊断能力较MA好L。DI比-T对OF蛋质白谱质技数术据在库Ig,A多肾肽病53和3非8.0I8gA为肾粘病蛋的白分4类同中工,型具的有片可段行;性而,此多技肽术20在82系.7统7为疾α病1-的Ⅱ亚型类胶分原类同中工具型有的广片阔段的。前景结。 展开更多

关键词 IGA肾病 非IgA肾病 肽质量指纹图谱 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱

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Hela细胞蛋白质分离和肽质量指纹谱鉴定方法的建立 被引量：5

2

作者 胡家 李燕英 +3 位作者 孙丽翠 殷爱红 武文琦 贺俊崎 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2009年第3期331-335,共5页

目的研究Hela细胞总蛋白质的分离及利用肽质量指纹谱对蛋白质进行鉴定的方法。方法提取了Hela细胞的总蛋白质,通过双向电泳技术对蛋白质进行了分离,并应用图像扫描仪及图像分析软件获取蛋白质点的数字化信息。对其中不同丰度的蛋白质点... 目的研究Hela细胞总蛋白质的分离及利用肽质量指纹谱对蛋白质进行鉴定的方法。方法提取了Hela细胞的总蛋白质,通过双向电泳技术对蛋白质进行了分离,并应用图像扫描仪及图像分析软件获取蛋白质点的数字化信息。对其中不同丰度的蛋白质点,进行胶内酶切后,通过基质辅助激光解吸/电离直角型飞行时间质谱(MALDIO-TOF-MS)分析,再将检测出的多肽质量数通过Mascot搜索引擎检索NCBInr数据库。结果获得了Hela细胞总蛋白质双向电泳图谱及蛋白质点的数字化信息,通过MALDIO-TOF-MS检测得到的肽质量指纹谱再经过网上公共数据的检索从而获得3个蛋白质点分别是α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase)、γ-肌动蛋白(γ-actin)和过氧化物酶2(peroxiredoxin 2)。结论Hela细胞总蛋白质双向电泳的分离效果较好,肽质量指纹谱法能有效地对Hela细胞的蛋白质斑点进行鉴定。 展开更多

关键词 HELA细胞 蛋白质组 2-DE MALDIO-TOF-MS 肽质量指纹图谱

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应用双向电泳和质谱技术筛选口腔扁平苔藓差异蛋白 被引量：13

3

作者 王文梅 蒋文晖 +1 位作者 胡勤刚 郑春兰 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期120-123,共4页

目的:筛选口腔扁平苔藓及正常黏膜组织的差异表达蛋白,为口腔扁平苔藓的发病机制及诊断治疗的研究提供实验室依据。方法:收集口腔扁平苔藓组织及正常口腔黏膜组织,提取组织蛋白,蛋白定量,进行双向电泳,图象分析寻找差异点,基质辅助激光... 目的:筛选口腔扁平苔藓及正常黏膜组织的差异表达蛋白,为口腔扁平苔藓的发病机制及诊断治疗的研究提供实验室依据。方法:收集口腔扁平苔藓组织及正常口腔黏膜组织,提取组织蛋白,蛋白定量,进行双向电泳,图象分析寻找差异点,基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析鉴定表达差异量较大的蛋白质点,确定所分析的蛋白质类型和功能。结果:(1)人口腔扁平苔藓及正常黏膜组织的双向电泳图谱的平均蛋白质点数分别为1576±67和1608±73,同一组织凝胶在蛋白质点位置上重复性较好。(2)通过比较人口腔扁平苔藓与正常黏膜组织的双向凝胶电泳图谱,得到差异表达蛋白质点数为13个,其中7个点在口腔扁平苔藓中为高表达,6个点在口腔扁平苔藓中为低表达。选择10个表达差异量较大的蛋白质点进行质谱和生物信息学分析,鉴定了其中的4个点,包括有锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD),膜联蛋白I,波形蛋白,未知蛋白等。结论:锰超氧化物歧化酶,膜联蛋白I,波形蛋白,未知蛋白可能参与了口腔扁平苔藓的发生和发展,其相关机制尚待进一步阐明。双向电泳-质谱分析技术为口腔扁平苔藓发生发展过程中差异表达蛋白的研究提供了有效的技术手段。 展开更多

关键词 口腔 扁平苔藓 双向凝胶电泳 蛋白质组 肽质量指纹图谱 锰超氧化物歧化酶 膜联蛋白I 波形蛋白 未知蛋白

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家蚕精巢蛋白质的双向电泳及质谱分析 被引量：5

4

作者 聂红毅 钟晓武 +3 位作者 邹勇 衣启营 赵萍 夏庆友 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期369-378,共10页

精巢是雄性家蚕Bombyxmori的生殖腺,它的主要功能是产生精子,全面检测和鉴定精巢器官的蛋白分布将为分析家蚕雄性个体的发育和繁殖奠定基础。本研究利用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白硝酸银染色技术对家蚕5龄第5天幼虫的精巢组织进行了... 精巢是雄性家蚕Bombyxmori的生殖腺,它的主要功能是产生精子,全面检测和鉴定精巢器官的蛋白分布将为分析家蚕雄性个体的发育和繁殖奠定基础。本研究利用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白硝酸银染色技术对家蚕5龄第5天幼虫的精巢组织进行了蛋白检测,利用基质辅助激光解析质量飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）对表达量较高的蛋白点进行了肽质量指纹图谱鉴定。结果表明：家蚕精巢蛋白质可以检测出1000个以上的蛋白点,这些蛋白点主要集中在分子量为15~90kD区域,等电点3.5~9之间,其中60个蛋白点得到了成功鉴定,按照已知或推测的蛋白功能,将其分为8类,包括：细胞骨架和细胞结构蛋白,膜蛋白或信号相关蛋白,大量应激反应蛋白（伴侣蛋白）,线粒体和能量产生相关蛋白,转录调控和翻译及DNA/RNA结合相关蛋白,酶和少量血液组成蛋白。其中很多蛋白可能在鞭毛形成、能量代谢及减数分裂过程中有重要作用。这些结果为进一步认识家蚕精子形成过程提供了重要的生物学信息。 展开更多

关键词 家蚕 精巢 精子形成 蛋白质 双向电泳 肽质量指纹图谱鉴定 质谱分析 生物信息学分析

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小细胞肺癌及其配对的正常肺组织差异表达蛋白质的双相电泳-飞行时间质谱研究 被引量：3

5

作者 杨拴盈 张王刚 +7 位作者 张潍 周斌 田应选 南岩东 卜丽娜 阮禹松 孙秀珍 杨德昌 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期533-537,共5页

目的应用比较蛋白质组学方法分析小细胞肺癌(SCLC)与其配对的正常肺组织差异表达蛋白质,为阐明SCLC发病机制、筛选其早期诊断标志物提供有益的思路。方法应用双相电泳(2-DE)分离6例SCLC及其配对的正常肺组织可溶性总蛋白;应用基质辅助... 目的应用比较蛋白质组学方法分析小细胞肺癌(SCLC)与其配对的正常肺组织差异表达蛋白质,为阐明SCLC发病机制、筛选其早期诊断标志物提供有益的思路。方法应用双相电泳(2-DE)分离6例SCLC及其配对的正常肺组织可溶性总蛋白;应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获得差异蛋白点的肽质量指纹图谱(PMF);通过Mascot软件查询NCBI或SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质。结果每张图谱约检测到800多个蛋白质点。经匹配分析,肺癌组织之间和正常肺组织之间凝胶图像的匹配率分别为75.5%和78.2%;选择14个背景清晰、重复性及分辨率较好、蛋白表达差异明显的点进行质谱分析,结合表观分子量及等电点(pI),初步鉴定了11种(六类)蛋白质:①与蛋白质降解通路有关的蛋白质:蛋白酶体α亚单位3型、蛋白酶体β亚单位2型及β亚单位5型;②自由基/抗氧化剂类:锰-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、过氧化氢酶(CAT)和黄素还原酶(FR);③细胞骨架类:原肌球蛋白-3(Tpm-3);④与能量代谢有关的蛋白质:硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX1);⑤分子伴侣:抑制素(PHB),内质网蛋白ER29(Erp29);⑥其他:可溶性NSF黏附蛋白(alpha SNAP)。结论应用2-DE及MALDI-TOF-MS方法分离并初步鉴定了11种(六类)蛋白质;这些蛋白质与SCLC发生发展密切相关,部分可能成为SCLC诊断及治疗的分子靶点。 展开更多

关键词 小细胞肺癌 蛋白质组学 双相电泳 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 肽质量指纹图谱

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基于质谱和生物信息学分析的小菜蛾蛋白质鉴定 被引量：3

6

作者 谢苗 成娟 +2 位作者 尤民生 杨广 蔡敬轩 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1206-1212,共7页

本研究以非模式昆虫小菜蛾Plutella xylostella为材料,对比2,3,4龄幼虫的蛋白质组双向电泳图谱,得到24个蛋白质差异点,从中选取了编号为1111的差异表达蛋白质点进行质谱鉴定和生物信息学分析。采用胶内酶解的多肽进行MALDI-TOF/TOF分析... 本研究以非模式昆虫小菜蛾Plutella xylostella为材料,对比2,3,4龄幼虫的蛋白质组双向电泳图谱,得到24个蛋白质差异点,从中选取了编号为1111的差异表达蛋白质点进行质谱鉴定和生物信息学分析。采用胶内酶解的多肽进行MALDI-TOF/TOF分析,获得该点的肽质量指纹图谱(PMF)及串联质谱(MS/MS)图谱。将获得的PMF分别用MASCOT和ProFound等常用软件在NCBInr的Metazoa蛋白质数据库进行搜索,匹配结果不理想。进一步用PMF+MS/MS谱图搜索NCBInr的Metazoa蛋白质数据库,以及小菜蛾EST数据库。在NCBInr库中匹配结果为拟暗果蝇Drosophila pseudoobscura中的一种假定蛋白GA18218-PA,而用EST库搜索的结果为家蚕Bombyx mori的ATP合酶的亚基。为验证搜索结果,将该蛋白质点进行磺基异硫氰酸苯酯(SPITC)化学衍生后de novo测序,最后确认该点可能为ATP合酶的一个亚基。最后着重讨论了蛋白质的质谱鉴定与生物信息学分析的联合使用,希望据此选择出最适合于非模式昆虫蛋白质组学鉴定的方法。 展开更多

关键词 小菜蛾 蛋白质 肽质量指纹图谱 串联质谱 denovo测序 生物信息学

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电泳和质谱技术研究4种胰脏铁蛋白的亚基类型和等电点特性 被引量：1

7

作者 林志超 林青 +1 位作者 朱峰 黄河清 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期96-101,共6页

采用电泳和质谱技术对所制备的鸡、鸭、牛和猪胰脏铁蛋白的亚基类型和等电点特性进行了研究。采用天然聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）技术研究的结果表明，上述4种铁蛋白呈现不同的迁移率，据此可知鸡胰铁蛋白的相对分子质量（Mr）〉鸭胰... 采用电泳和质谱技术对所制备的鸡、鸭、牛和猪胰脏铁蛋白的亚基类型和等电点特性进行了研究。采用天然聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）技术研究的结果表明，上述4种铁蛋白呈现不同的迁移率，据此可知鸡胰铁蛋白的相对分子质量（Mr）〉鸭胰铁蛋白的Mr〉黄牛胰铁蛋白的Mr〉猪胰铁蛋白的Mr，而且均大于马脾铁蛋白（HSF）的Mr。采用十二烷基硫酸钠（SDS）-PAGE技术研究的结果表明，上述4种铁蛋白均由H（heavychain）和L（1ightchain）类型的亚基组成，但H和L亚基的相对数量（即H／L亚基数量的比值）有差别。采用肽指纹图谱技术分别鉴定各铁蛋白的H和L亚基。选用变性等电聚焦方法研究发现，上述4种铁蛋白分别由3～6种不同等电点的亚基聚合体组成，说明铁蛋白的H和L亚基之间呈现复杂的相互作用和不同的聚合体。不同陆生动物胰脏铁蛋白亚基之间相互作用的强度和聚合态存在着差异，这一差异特性可能与调控铁蛋白释放铁的速率有关，也与动物对铁的需求和铁解毒速率有关。 展开更多

关键词 电泳 质谱 肽质量指纹图谱 铁蛋白 胰脏 亚基 鉴定

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家蚕伴性赤蚁sch胚胎期致死特异蛋白差异的研究 被引量：5

8

作者 卢忠燕 侯勇 +2 位作者 赵萍 林英 夏庆友 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期42-46,共5页

利用双向电泳技术分析了家蚕生态致死突变伴性赤蚁sch和正常黑蚁夏芳在常温常湿、高温干燥催青条件下的蚕卵差异表达蛋白质,发现高温敏感伴性致死赤蚁的蚕卵在高温催青处理后,一个分子量50kD左右的蛋白点P34与正常相比有明显差异,高温... 利用双向电泳技术分析了家蚕生态致死突变伴性赤蚁sch和正常黑蚁夏芳在常温常湿、高温干燥催青条件下的蚕卵差异表达蛋白质,发现高温敏感伴性致死赤蚁的蚕卵在高温催青处理后,一个分子量50kD左右的蛋白点P34与正常相比有明显差异,高温干燥处理后该蛋白点浓度较弱,表达量较低;对照黑蚁夏芳的P34蛋白没有明显差异。对P34进行胰蛋白酶消化并测定了其肽质量指纹图谱,通过同源性比较分析发现P34蛋白是一种新的蛋白质。 展开更多

关键词 双向电泳 肽质量指纹图谱 伴性赤蚁(sch) 差异蛋白

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口腔鳞癌组织与口腔正常黏膜组织蛋白质差异表达的初步研究 被引量：4

9

作者 王文梅 郑春兰 +3 位作者 胡勤刚 蒋文晖 黄晓峰 唐巍 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期540-543,共4页

目的:筛选口腔鳞癌及正常口腔黏膜组织的差异表达蛋白质,为研究口腔鳞癌发生机制提供实验依据。方法:收集10例口腔鳞癌组织及正常口腔黏膜组织,进行二维电泳,选择在表达差异量较大的29个点进行质谱和生物信息学分析,确定所分析的蛋白质... 目的:筛选口腔鳞癌及正常口腔黏膜组织的差异表达蛋白质,为研究口腔鳞癌发生机制提供实验依据。方法:收集10例口腔鳞癌组织及正常口腔黏膜组织,进行二维电泳,选择在表达差异量较大的29个点进行质谱和生物信息学分析,确定所分析的蛋白质类型。结果:口腔鳞癌及相应正常口腔黏膜组织凝胶的平均蛋白质点数分别为2325±390和2487±281。双向凝胶电泳图显示,口腔鳞癌及正常口腔黏膜组织的差异表达蛋白质点数为29个,这29个点在癌组织中均为低表达,对其进行了质谱(PMF)和生物信息学分析,鉴定了其中的3个点,它们是:β纤维蛋白(fibrin beta)、磷酸丙糖异构酶(tri-osephosphate isomerase TIM)、unknown蛋白。结论:β纤维蛋白、磷酸丙糖异构酶、unknown蛋白在口腔鳞癌发生发展过程中发生了改变,其机制尚待进一步阐明。 展开更多

关键词 口腔 鳞癌 双向凝胶电泳 蛋白质组 肽质量指纹图谱

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Pten^(L/L)MEFs与Pten^(△/△)MEFs细胞系的差异表达蛋白质组分析

10

作者 段瑞峰 李刚 +2 位作者 胡迎春 吴德昌 霍艳英 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期269-273,共5页

目的研究PtenL/LMEFs与Pten△/△MEFs细胞的蛋白表达差异。方法运用双向电泳技术比较PtenL/LMEFs与Pten△/△MEFs细胞的蛋白表达差异,6个差异蛋白进行胶内酶切后运用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行质谱分析,肽质... 目的研究PtenL/LMEFs与Pten△/△MEFs细胞的蛋白表达差异。方法运用双向电泳技术比较PtenL/LMEFs与Pten△/△MEFs细胞的蛋白表达差异,6个差异蛋白进行胶内酶切后运用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行质谱分析,肽质量指纹图谱检索数据库后5个蛋白得到鉴定。结果同对照PTEN野生型细胞PtenL/LMEFs相比,磷酸甘油酸变位酶1(phosphoglycerate mutase 1,PGAM1)和肽脯氨酰顺反异构酶C(pepti-dyl-prolyl cis-trans isomerase C,cyclophilin C)在Pten△/△MEFs细胞中表达上调而Transgelin 2蛋白在Pten△/△MEFs细胞中表达下调。经鉴定已知蛋白点B和F都是过氧化物氧化还原酶6(Peroxiredoxin-6),蛋白点B在Pten△/△MEFs细胞中表达而在Pten△/△MEFs细胞中检测不到,蛋白点B和F的分子质量相似而等电点不同,可能是由于翻译后修饰。结论同对照PTEN野生型细胞PtenL/LMEFs相比,PTEN缺失的Pten△/△MEFs细胞有明显的差异性蛋白表达谱。PTEN的缺失引起细胞内多种蛋白表达改变,这些表达改变的蛋白可能与PTEN缺失后细胞癌变相关。 展开更多

关键词 PTEN 双向电泳 基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱 肽质量指纹图谱

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适于人表皮组织蛋白质组分析的双向电泳技术

11

作者 聂燕芳 曾耀英 +2 位作者 吴晓萍 刘钧澄 黄秀艳 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期337-341,共5页

【目的】建立适于人表皮组织的双向电泳技术,并应用质谱技术对人表皮组织蛋白质组进行初步分析。【方法】利用组织匀浆法制备人表皮组织总蛋白、固相pH梯度胶条进行双向电泳、PDQuest7.4软件比较和分析电泳图谱,利用质谱技术鉴定部分蛋... 【目的】建立适于人表皮组织的双向电泳技术,并应用质谱技术对人表皮组织蛋白质组进行初步分析。【方法】利用组织匀浆法制备人表皮组织总蛋白、固相pH梯度胶条进行双向电泳、PDQuest7.4软件比较和分析电泳图谱,利用质谱技术鉴定部分蛋白斑点。【结果】成功建立了适用于人表皮组织蛋白质组分析的双向电泳技术,获得和比较了人表皮组织双向电泳四种染色图谱。人表皮组织的蛋白质在pH5～8范围内分布均匀,分子量集中在15～100ku之间。银染图谱获得的蛋白斑点数为586±14;对质谱兼容的几种染色方法进行比较分析,结果表明Neuhoff胶体考染更适合于人表皮组织蛋白质的双向电泳分析,其在上样量为350μg时蛋白斑点数达394±9,匹配率为85.53%。利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术成功获得了Neuhoff胶体考染的两个蛋白斑点的肽质量指纹图谱,并鉴定为Caspase14前体和27ku热激蛋白1。【结论】建立的表皮组织双向电泳技术及其图谱可为皮肤蛋白质组学研究提供参考,为人皮肤蛋白质组学平台的构建奠定良好基础。 展开更多

关键词 人表皮组织 双向电泳 蛋白质组 肽质量指纹图谱

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铜绿微囊藻（Microcystis aeruginosa）蛋白质组学研究方法的初步建立 被引量：2

12

作者 钱方 章军 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期197-200,共4页

参照一些植物蛋白的提取方法，初步确定了铜绿微囊藻总蛋白的提取方法。即TCA-丙酮法，并采用蛋白质组学技术路线，即双向凝胶电泳（2-DPAGE）及基质辅助激光解吸离子化．飞行时间质谱（MALDI-TOF）分析，建立了铜绿微囊藻在对数生长期... 参照一些植物蛋白的提取方法，初步确定了铜绿微囊藻总蛋白的提取方法。即TCA-丙酮法，并采用蛋白质组学技术路线，即双向凝胶电泳（2-DPAGE）及基质辅助激光解吸离子化．飞行时间质谱（MALDI-TOF）分析，建立了铜绿微囊藻在对数生长期的蛋白质组分子解剖图谱。将铜绿微囊藻接种于BG-11培养基28℃培养至对数生长期，提取藻种总蛋白进行双向电泳。从2．DPAGE图谱中随机选取110个蛋白质点进行肽质量指纹图谱（PMF）鉴定，检索发现21个确定为数据库中收录的蓝藻的基因或蛋白，其中10个为数据库中收录的聚球藻Synechococcus sp.PCC6803或微囊藻的基因或蛋白。 展开更多

关键词 蛋白质组学 铜绿微囊藻 双向电泳 肽质量指纹图谱

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