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微小隐孢子虫亲环素型肽脯氨酰顺反异构酶基因克隆与分析
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作者 付芹芹 杨光 +6 位作者 王穗湘 孙小会 郭志云 张丽菊 陈川 刘国宁 荆春霞 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期885-889,共5页
目的克隆微小隐孢子虫(C.parvum)南京株(NJ)亲环素型肽脯氨酰顺反异构酶基因,测序并分析C.parvumNJ株与其他隐孢子虫分离株CyP-type PPIase基因序列的差异以及亲缘关系。方法根据GenBank上C.parvumIowa II株CyP-type PPIase基因序列,设... 目的克隆微小隐孢子虫(C.parvum)南京株(NJ)亲环素型肽脯氨酰顺反异构酶基因,测序并分析C.parvumNJ株与其他隐孢子虫分离株CyP-type PPIase基因序列的差异以及亲缘关系。方法根据GenBank上C.parvumIowa II株CyP-type PPIase基因序列,设计2对引物,应用巢式PCR扩增目的基因,并将其克隆入pMD18-T载体,对重组子进行双酶切和菌落PCR鉴定并测序,应用生物信息学方法分析C.parvum NJ株CyP-type PPIase基因与其它隐孢子虫株的核苷酸和氨基酸序列差异。结果巢式PCR扩增获得特异的目的基因,双酶切和菌落PCR鉴定获得正确的重组子,测序表明,扩增基因组DNA序列为746bp,含有目的基因ORF全长570bp,编码190个氨基酸。序列分析表明,我国C.parvum NJ株与国外分离的Iowa II株CyP-type PPIase基因的氨基酸序列具有99%的同源性。进化树分析表明,C.parvumNJ株与Iowa II株CyP-type PPIase基因之间的亲缘关系最近,与脑膜炎双球菌的亲缘关系最远。结论成功克隆C.parvumCyP-type PPIase基因,C.parvumCyP-type PPIase基因在氨基酸水平高度保守。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 亲环素型肽脯氨酰顺反异构酶基因 克隆
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小球藻亲环蛋白A的酶活性及过表达拟南芥抗盐性分析 被引量:1
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作者 廖栩 何明良 +4 位作者 张素艳 马海燕 王旭辉 罗秋香 管清杰 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期722-729,共8页
在前期研究中分离到噬碳酸盐小球藻(Chlorella sp.X1)的亲环蛋白基因CsCyp1A(登录号:KY207381),编码CsCyp1A蛋白是否具有肽酰脯氨酰顺反异构酶(PPIase)活性功能是进一步研究它参与小球藻耐盐生物学过程的基础。通过His标签的p QE-30-CsC... 在前期研究中分离到噬碳酸盐小球藻(Chlorella sp.X1)的亲环蛋白基因CsCyp1A(登录号:KY207381),编码CsCyp1A蛋白是否具有肽酰脯氨酰顺反异构酶(PPIase)活性功能是进一步研究它参与小球藻耐盐生物学过程的基础。通过His标签的p QE-30-CsCyp1A原核蛋白表达载体,经IPTG诱导它的E.coli M15菌株表达融合蛋白,Nitra-柱纯化后获得纯化的30 kDa左右的His-CsCyp1A融合蛋白质,Western杂交检测到His CsCyp1A蛋白的杂交信号。酶活性分析显示,HisCsCyp1A融合蛋白中生色基团的产生速度明显快于对照,表明CsCyp1A蛋白可以催化底物N-succinyl-Xaa-Pro-Phe-p-nitroanilide中Xaa-Pro肽键的顺反折叠,说明纯化的CsCyp1A蛋白具有PPIase活性。典型的亲环蛋白家族成员具有肽酰脯氨酰顺反异构酶(PPIase)活性,参与折叠和转运、信号转导、免疫调节、细胞凋亡等生物学过程。真空渗入法侵染转化的拟南芥在35S启动子驱动下超表达CsCyp1A基因,耐盐性研究表明它提高了过表达株系对NaCl胁迫的耐性,揭示小球藻CsCyp1A基因的抗盐性功能,它将成为抗逆育种的基因资源。本研究也为探索小球藻亲环蛋白A的抗盐碱胁迫生物学作用和分子育种奠定了基础。 展开更多
关键词 噬碳酸盐小球藻 盐碱地 亲环蛋白A 肽脯氨酰顺反异构酶 原核表达蛋白
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木薯MeHsfB3b转录因子与MeFKBP20蛋白互作关系验证
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作者 王超群 李琳琳 +3 位作者 陈银华 张肖飞 姚远 耿梦婷 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第3期450-458,共9页
热激转录因子MeHsfB3b是调控木薯抗细菌性枯萎病的重要节点,前期通过酵母双杂交技术获得MeHsfB3b的候选互作蛋白MeFKBP20,该蛋白属于FKBP型肽脯氨酰顺反异构酶基因家族。本研究克隆获得MeFKBP20基因全长为561 bp,编码186个氨基酸,蛋白... 热激转录因子MeHsfB3b是调控木薯抗细菌性枯萎病的重要节点,前期通过酵母双杂交技术获得MeHsfB3b的候选互作蛋白MeFKBP20,该蛋白属于FKBP型肽脯氨酰顺反异构酶基因家族。本研究克隆获得MeFKBP20基因全长为561 bp,编码186个氨基酸,蛋白质分子质量为19.99 kDa,具有FKPB_C结构域。表达模式分析发现:MeFKBP20基因在木薯成熟叶片及根部高表达,在幼叶和叶柄的表达量较低;并能够迅速响应病原菌XpmCHN11诱导,持续保持较高的表达丰度,推测其参与了木薯响应病原菌侵染的过程。利用酵母双杂交点对点、双分子荧光互补实验证明MeHsfB3b蛋白通过在201~241 aa区域与MeFKBP20蛋白作用。本研究结果有助于进一步解析MeHsfB3b基因调控木薯对细菌性枯萎病的抗病机理。 展开更多
关键词 热激转录因子 FKBP型肽脯氨酰顺反异构酶 酵母双杂交 双分子荧光互补
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亲环素A抑制剂研究进展 被引量:8
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作者 李剑 陈玲 +2 位作者 柳红 沈旭 蒋华良 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期195-200,共6页
亲环素A是亲环素家族重要成员,是重要的免疫抑制药物环孢素A的体内结合蛋白,除了具有肽脯氨酰顺反异构酶活性,亲环素A在一系列生物途径中发挥作用,如蛋白折叠、装配、转运、神经生长调节和HIV病毒复制。总结了天然产物抑制剂、肽类抑制... 亲环素A是亲环素家族重要成员,是重要的免疫抑制药物环孢素A的体内结合蛋白,除了具有肽脯氨酰顺反异构酶活性,亲环素A在一系列生物途径中发挥作用,如蛋白折叠、装配、转运、神经生长调节和HIV病毒复制。总结了天然产物抑制剂、肽类抑制剂和有机合成分子等亲环素A抑制剂的发现和发展历程,对亲环素A抑制剂的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 亲环素A 肽脯氨酰顺反异构酶 抑制剂
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Cyclophilin研究进展
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作者 张志龙 武建国 《医学研究生学报》 CAS 1997年第3期258-261,共4页
关键词 环孢素A 环孢素A结合蛋白 脯氨顺反异构
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石斛多糖DOP-1-1的制备及其体外促进骨形成的机制
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作者 申雄成 蔡小军 +3 位作者 董革辉 黄家恺 张晗祥 何斌 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第9期1360-1366,共7页
目的制备石斛多糖(DOP-1-1)并探讨其对前成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化作用。方法从铁皮石斛多糖(DOP)中系统分离纯化获得了一种均质多糖(DOP-1-1),并通过高效凝胶渗透色谱法、单糖分析、红外光谱、甲基化分析、GC-MS和核磁共... 目的制备石斛多糖(DOP-1-1)并探讨其对前成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化作用。方法从铁皮石斛多糖(DOP)中系统分离纯化获得了一种均质多糖(DOP-1-1),并通过高效凝胶渗透色谱法、单糖分析、红外光谱、甲基化分析、GC-MS和核磁共振光谱研究了DOP-1-1的结构。体外实验分别通过MTT法、ALP活性测定和茜素红S染色检测DOP-1-1对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响。同时,采用Western blot测定DOP-1-1对MC3T3-E1细胞中骨相关蛋白质(Pin1、BMP2、RUNX2)的表达影响。结果DOP-1-1是一种均质多糖,其相对分子量为3611,由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成。DOP-1-1在低浓度下促进成骨细胞增殖的活性,其中2.0、4.0μmol/L DOP-1-1的作用相当于阳性对照17β-雌二醇(E2)。与对照组比较,E2和DOP-1-1(4.0、8.0μmol/L)使MC3T3-E1细胞中ALP活性和矿化率增加(P<0.01)。特别是,DOP-1-1(8.0μmol/L)的ALP活性和矿化率高于阳性对照E2(P<0.001)。此外,DOP-1-1组MC3T3-E1细胞中Pin1、BMP2、RUNX2蛋白表达高于对照组(P<0.05)。结论DOP-1-1体外能促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化和矿化,作用机制与激活Pin1/BMP2信号通路相关。 展开更多
关键词 铁皮石斛多糖 结构鉴定 前成骨细胞 肽脯氨酰顺反异构酶 骨形态发生蛋白-2
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