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肽基脯氨酰顺反异构酶1对喉癌细胞系Hep-2细胞生物学行为的影响 被引量：2
1
作者 王辉 李章富 +2 位作者 温行 刘剑利 李福才 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期681-689,共9页
目的探讨肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)对喉癌细胞系Hep-2细胞中心体扩增以及生物学行为的影响。方法培养人喉癌细胞系Hep-2细胞,构建、转染Pin1 siRNA并分组。Pin1过表达分为转染pcDNA3.1组(NC组)、转染pcDNA3.1-Pin1组(Pin1组)、转染pc... 目的探讨肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)对喉癌细胞系Hep-2细胞中心体扩增以及生物学行为的影响。方法培养人喉癌细胞系Hep-2细胞,构建、转染Pin1 siRNA并分组。Pin1过表达分为转染pcDNA3.1组(NC组)、转染pcDNA3.1-Pin1组(Pin1组)、转染pcDNA3.1-Pin1后加核转录因子(NF-κB/p65)抑制剂(BAY11-7082)组(Pin1+7082组)。Pin1干扰分为转染阴性对照组(NC组)、转染siRNA组(Si-Pin1组)、转染siRNA后加NF-κB/p65激活剂(IL-1β)组(Si-Pin1+IL-1β组)。Western blotting检测Pin1、CDK2及NF-κB/p65蛋白表达,实时PCR检测Pin1及CDK2基因表达,免疫荧光实验检测细胞中心体扩增及NF-κB/p65核转位,流式细胞仪检测Hep-2细胞周期、凋亡、克隆形成,CCK-8实验检测Hep-2细胞增殖能力,Transwell及划痕实验检测Hep-2细胞的迁移能力。结果Pin1过表达促进中心体复制异常、克隆形成、细胞迁移、细胞周期G1/S转化,NF-κB/p65核转位以及CDK2的表达;NF-κB/p65抑制剂能够减弱这些效应。下调Pin1表达能够抑制中心体异常复制、克隆形成、细胞迁移、细胞周期G1/S的转化,NF-κB/p65入核以及CDK2的表达;NF-κB/p65激活剂能够逆转这些作用。结论Pin1可能经NF-κB通路上调CDK2的表达来影响Hep-2细胞的生物学行为。 展开更多
关键词 肽基脯氨酰顺反异构酶1 喉癌细胞系 生物学行为
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三氧化二砷通过降低Pin1表达及调节Wnt/β-连环素通路抑制肝癌细胞增殖
2
作者 李欣 万迁迁 +1 位作者 黄念 万旭英 《海军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期433-440,共8页
目的探讨三氧化二砷(ATO)在肝癌中对肽基脯氨酰基顺反异构酶NIMA相互作用蛋白1(Pin1)表达的抑制作用及其分子机制。方法使用DepMap数据库和GEPIA数据库中的数据分析Pin1在人肝癌细胞系和肝癌组织中的表达情况。以人肝癌细胞系Huh7和小... 目的探讨三氧化二砷(ATO)在肝癌中对肽基脯氨酰基顺反异构酶NIMA相互作用蛋白1(Pin1)表达的抑制作用及其分子机制。方法使用DepMap数据库和GEPIA数据库中的数据分析Pin1在人肝癌细胞系和肝癌组织中的表达情况。以人肝癌细胞系Huh7和小鼠肝癌细胞系H22为细胞模型,通过ATP法检测ATO对肿瘤细胞活力的影响;通过蛋白质印迹法、免疫荧光染色和qPCR检测ATO对Pin1在蛋白质水平和转录水平表达的作用。用氯喹预处理Huh7细胞抑制溶酶体途径后,通过蛋白质印迹法和免疫荧光染色检测ATO对Pin1表达的调控作用。通过皮下荷瘤小鼠模型和免疫组织化学染色验证ATO在体内对肝癌细胞生长和Pin1表达的影响。采用RNA测序分析ATO可能影响的信号通路,并通过蛋白质印迹法和qPCR验证。结果在DepMap数据库23种人肝癌细胞系和GEPIA数据库人肝癌组织中,Pin1的表达均呈现较高水平。在体外实验中,ATO处理后Huh7和H22细胞的细胞活力均降低,细胞中Pin1在蛋白质和转录水平的表达均降低,但用氯喹抑制溶酶体途径逆转了ATO对Pin1表达的影响。在皮下荷瘤小鼠模型中,ATO表现出一定的抗肿瘤效果,免疫组织化学染色显示ATO处理后Pin1表达和肿瘤细胞增殖受到抑制。在ATO处理的H22细胞中Wnt/β-连环素通路相关基因富集,抑制H22细胞中Pin1的表达后β-连环素表达减少。结论ATO通过溶酶体途径抑制Pin1表达,以及影响Wnt/β-连环素信号通路来抑制肝癌细胞增殖。 展开更多
关键词 三氧化二砷 肽基脯氨酰基顺反异构酶NIMA相互作用蛋白1 肝癌 Wnt/β-连环素
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慢病毒介导的shRNA对A549细胞Pin1表达的干扰作用 被引量：3
3
作者 赵帅 董文斌 +5 位作者 张婵 李清平 康兰 雷小平 郭琳 翟雪松 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期245-249,共5页
目的构建Pin shRNA慢病毒载体,建立稳定抑制肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)表达的A549细胞系。方法根据查阅文献获得Pin1shRNA干扰靶点序列并插入pLenR-GPH载体,构建pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体,随后转入人胚肾HEK293T细胞中,收集其上... 目的构建Pin shRNA慢病毒载体,建立稳定抑制肽基脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)表达的A549细胞系。方法根据查阅文献获得Pin1shRNA干扰靶点序列并插入pLenR-GPH载体,构建pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体,随后转入人胚肾HEK293T细胞中,收集其上清进行病毒滴度测定,再行慢病毒的包装,将获得的慢病毒毒液感染A549细胞。通过实时定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测Pin1在不同组的表达抑制情况。结果经限制性内切酶鉴定及测序分析,成功构建了pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体质粒,包装并得到高滴度的病毒颗粒。通过qRT-PCR和Western blot法检测显示,与对照组相比,pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒载体感染的A549细胞中Pin1的表达在mRNA和蛋白水平均有所下降。结论慢病毒介导的shRNA能够有效下调A549细胞中Pin 1的表达。 展开更多
关键词 肽基脯氨酰顺反异构酶1(pin1) 慢病毒载体 A549细胞 基因表达
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Pin1在宫颈癌中过表达及其与Ki67关系的研究 被引量：7
4
作者 李红雨 石小燕 +4 位作者 徐茜 邓东锐 王世宣 卢运萍 马丁 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期181-185,共5页
目的:探讨宫颈癌中肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1表达、与Ki67的相关性及其临床意义。方法:应用RT-PCR和免疫组化技术检测宫颈癌组织中Pin1mRNA和蛋白表达水平及其与Ki67蛋白表达的相关性。结果:1)宫颈癌组织中Pin1mRNA表达明显高于正常宫... 目的:探讨宫颈癌中肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1表达、与Ki67的相关性及其临床意义。方法:应用RT-PCR和免疫组化技术检测宫颈癌组织中Pin1mRNA和蛋白表达水平及其与Ki67蛋白表达的相关性。结果:1)宫颈癌组织中Pin1mRNA表达明显高于正常宫颈组织(P<0.05);2)从正常宫颈到CIN再到浸润癌Pin1蛋白表达逐渐增强(P<0.05);3)Pin1蛋白过表达与临床分期、病理分级、淋巴结转移无明显相关(P>0.05);但宫颈腺癌Pin1表达明显高于宫颈鳞癌(P<0.05);4)Pin1过表达与Ki67表达呈显著正相关(P<0.05)。结论:1)Pin1过表达与宫颈癌细胞增殖有关,参与宫颈癌发生发展;2)Pin1过表达可作为宫颈癌诊断的辅助指标。 展开更多
关键词 肽基脯氨酰顺反异构酶pin1 子宫颈癌 KI67
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益智健脑颗粒对快速老化小鼠SAMP8海马Pin1和HMGB1 mRNA表达的影响 被引量：7
5
作者 王慧玲 董克礼 +2 位作者 李广诚 彭贤文 朱宏 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期63-66,共4页
目的:研究益智健脑颗粒对快速老化小鼠SAMP8海马肽基脯氨酰顺反异构酶(peptidylprolyl-cis-trans isomerase A,Pin1)和高迁移率族蛋白B1(high mobility group box1,HMGB1)mRNA表达的影响。方法:6月龄快速老化小鼠SAMP8随机分为中药治疗... 目的:研究益智健脑颗粒对快速老化小鼠SAMP8海马肽基脯氨酰顺反异构酶(peptidylprolyl-cis-trans isomerase A,Pin1)和高迁移率族蛋白B1(high mobility group box1,HMGB1)mRNA表达的影响。方法:6月龄快速老化小鼠SAMP8随机分为中药治疗组和模型组,6月龄正常老化小鼠SAMR1为正常对照组。中药组以益智健脑颗粒浓缩液灌胃;正常对照组和模型组以双蒸水灌胃。8周后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测海马组织中Pin1和HMGB1 mRNA的表达。结果:与模型组比较,中药治疗组Pin1 mRNA相对表达量上调(P<0.05);HMGB1mRNA相对表达量下调(P<0.05)。结论:益智健脑颗粒可能通过上调Pin1 mRNA表达,下调HMGB1 mRNA表达,来达到防治阿尔茨海默病的作用。 展开更多
关键词 益智健脑颗粒/中药 阿尔茨海默病 肽基脯氨酰顺反异构酶 高迁移率族蛋白B1
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Pin1:肿瘤形成的催化分子和潜在的治疗靶点 被引量：1
6
作者 曹启军 陶振 陈元 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第2期201-204,共4页
肽基脯氨酰异构酶1(peptidyl-prolyl isomerase1,Pin1)能特异性地催化磷酸化的丝/苏-脯氨酸基序发生异构,改变底物蛋白的构象,调节底物蛋白的功能。Pin1含有两个结构功能域:一个是N端的色氨酸-色氨酸中心区WW,另一个是C端的肽基脯氨酰... 肽基脯氨酰异构酶1(peptidyl-prolyl isomerase1,Pin1)能特异性地催化磷酸化的丝/苏-脯氨酸基序发生异构,改变底物蛋白的构象,调节底物蛋白的功能。Pin1含有两个结构功能域:一个是N端的色氨酸-色氨酸中心区WW,另一个是C端的肽基脯氨酰异构酶PPlase活性区。Pin1在非肿瘤组织中呈低表达或无表达,但在多种肿瘤组织中呈过表达,并受到以E2F(腺病毒E2启动子相关细胞转录因子)为主的转录水平的调节。Pin1作用于多种底物如p53、c-Jun、cyclinD1等,通过催化异构改变底物的结构和功能,促进细胞增殖和肿瘤形成,阻断它的表达可以抑制肿瘤细胞的增殖,促进调亡。 展开更多
关键词 肽基脯氨酰顺反异构酶 pin1 肿瘤
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Pin1基因真核表达载体的构建及在宫颈癌HeLa细胞中的表达
7
作者 李红雨 朱涛 +6 位作者 周金华 徐茜 胡春霞 邓东锐 王世宣 卢运萍 马丁 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期633-636,共4页
目的构建一种含人肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1的质粒,以绿色荧光蛋白作为报告基因,观察其在宫颈癌HeLa细胞中的表达。方法从人宫颈癌HeLa细胞中,以RT-PCR方法扩增出人Pin1基因全长cDNA序列(CDS),插入增强绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1,脂... 目的构建一种含人肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1的质粒,以绿色荧光蛋白作为报告基因,观察其在宫颈癌HeLa细胞中的表达。方法从人宫颈癌HeLa细胞中,以RT-PCR方法扩增出人Pin1基因全长cDNA序列(CDS),插入增强绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1,脂质体法转染HeLa细胞,荧光显微镜下观测绿色荧光蛋白的表达,免疫印迹法检测GFP-Pin1蛋白的表达。结果RT-PCR扩增出人Pin1基因;构建pEGFP-C1-Pin1重组质粒,体外成功转染入宫颈癌HeLa细胞,在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白的表达,免疫印迹法证实存在GFP-Pin1蛋白高表达;经G418筛选获得单细胞克隆。结论重组质粒pEGFP-Pin1体外转染HeLa细胞后,目的基因能够在细胞内有效表达,检测方法简便可靠,为利用转染该目的基因的细胞进行下一步研究提供了实验基础。 展开更多
关键词 肽基脯氨酰顺反异构酶pin1 质粒构建 基因转染
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Pin1，CyclinD1在宫颈癌中的表达及与HPV16/18感染的关系 被引量：4
8
作者 石玲玲 唐娜 +2 位作者 崔艳艳 贡雪 李建华 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期21-25,共5页
研究肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1,CyclinD1在宫颈液基细胞上皮内病变和宫颈癌中的表达与HPV16/18感染的关系,探讨其对宫颈上皮内病变和宫颈癌诊断的意义。经液基细胞学筛查,采用原位杂交方法对80例宫颈上皮内病变和宫颈癌,13例正常组织进... 研究肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1,CyclinD1在宫颈液基细胞上皮内病变和宫颈癌中的表达与HPV16/18感染的关系,探讨其对宫颈上皮内病变和宫颈癌诊断的意义。经液基细胞学筛查,采用原位杂交方法对80例宫颈上皮内病变和宫颈癌,13例正常组织进行HPV检测分型,同时对HPV16/18阳性的标本进行Pin1,CyclinD1免疫组化。在正常宫颈组织、CINⅠ,CINⅡ-Ⅲ,浸润癌组织中Pin1表达率分别为7.7%(1/13)、57.1%(12/21)、68.4%(13/19)、85%(34/40)(P<0.05);CyclinD1表达率分别为0%、9.52%(2/21)、20.5% (4/19)、55%(22/40)。HPV16/18的表达率也随着宫颈病变的升级而升高,分别为15.4%(2/13)、42.9%(9/ 21)、57.9%(11/19)、82.5%(33/40)。Pin1和HPV16/18在宫颈病变中的表达高度相关(r_0=1.0,P<0.05);而CyclinD1的表达与HPV16/18相关性较小(r_0=0.4,P<0.05)。认识Pin1,cyclinD1和HPV16/18三者之间的关系及对宫颈上皮内病变和宫颈癌的筛查诊断具有重要意义。 展开更多
关键词 人乳头状瘤病毒16 18型 宫颈癌 原位杂交 肽基脯氨酰顺反异构酶pin1 细胞周期素D1
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