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瞬时转染SARS-CoVM基因对大鼠肺成纤维细胞生长特性及生物学功能的影响
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作者 刘乾 陈琦 +3 位作者 蒋涛 王震 闫明霞 许祖德 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期595-599,共5页
目的通过观察转染SARS-CoV M基因的大鼠肺间质成纤维细胞(fibrob last,FB)生长及功能的改变,初步探讨SARS病毒通过肺组织损伤而引发肺纤维化的可能机制和途径。方法碱裂解法扩增纯化质粒,酶消化法分离大鼠肺间质成纤维细胞;采用脂质体... 目的通过观察转染SARS-CoV M基因的大鼠肺间质成纤维细胞(fibrob last,FB)生长及功能的改变,初步探讨SARS病毒通过肺组织损伤而引发肺纤维化的可能机制和途径。方法碱裂解法扩增纯化质粒,酶消化法分离大鼠肺间质成纤维细胞;采用脂质体介导的方法瞬时转染M基因入FB;采用RT-PCR法和W estern b lot鉴定转染结果;四唑盐(MTT)比色法和流式细胞技术(FCM)检测转染后的大鼠肺成纤维细胞的生长情况;采用半定量RT-PCR和Realtim e PCR检测转染后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)基因转录水平的变化。结果与转染空载体的成纤维细胞相比,转染M基因的成纤维细胞在转染48 h时生长明显增强,G0/G1期比例下降,S期比例增高;转染M基因后MMP-2的转录明显增强。结论成功地将携带有M基因的真核表达质粒瞬时转染入大鼠肺间质成纤维细胞,目的基因在肺间质成纤维细胞中表达并具有与SARS-CoV M相似的抗原性;SARS-CoV M蛋白可能促进肺间质成纤维细胞生长;并促进MMP-2的表达。 展开更多
关键词 SARS-CoVM蛋白 瞬时转染 基质金属蛋白酶-2 肺间质成纤维细胞 肺纤维化 大鼠
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