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体外探究脱落酸对肺腺癌细胞系Spc-A1自噬的影响 被引量:2
1
作者 邵丽洁 江子丰 刘荣玉 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第4期387-391,共5页
目的观察脱落酸(ABA)作用于肺腺癌细胞株Spc-A1引起自噬方面的变化,研究ABA对Spc-A1细胞自噬的影响。方法以人肺腺癌细胞系Spc-A1为研究对象,ABA给药浓度分别为0.8、20、100μmol/L,采用MTT法检测ABA作用后Spc-A1细胞的活力;激光共聚焦... 目的观察脱落酸(ABA)作用于肺腺癌细胞株Spc-A1引起自噬方面的变化,研究ABA对Spc-A1细胞自噬的影响。方法以人肺腺癌细胞系Spc-A1为研究对象,ABA给药浓度分别为0.8、20、100μmol/L,采用MTT法检测ABA作用后Spc-A1细胞的活力;激光共聚焦显微镜观察ABA作用于Spc-A1细胞后自噬现象;提取培养细胞mRNA及蛋白质,分别采用荧光实时定量PCR、蛋白印迹法检测自噬相关基因Beclin-1及LC3-Ⅱ的表达。结果 ABA作用后,肺腺癌细胞Spc-A1活力随着ABA浓度的增高而下降,各处理组之间差异具有统计学意义(P<0.001);ABA可诱导Spc-A1细胞自噬,自噬现象随药物浓度增高而增加;ABA处理后Bec-lin-1及LC3-Ⅱ的mRNA表达量随着ABA浓度的增加而增高,各处理组表达量差异具有统计学意义(P<0.05);蛋白表达结果显示ABA 100μmol/L处理组与对照组Beclin-1表达量差异具有显著性(P=0.04);ABA 100μmol/L处理组与对照组LC3-Ⅱ表达量差异具有显著性(P=0.005),ABA 0.8μmol/L组与ABA 100μmol/L组之间LC3-Ⅱ表达量差异具有显著性(P=0.039),余处理组表达量两两之间未见显著性差异。结论 ABA可通过调节自噬信号转导通路中相关基因的表达诱导肺腺癌细胞Spc-A1自噬,随着自噬的增加,可能抑制肿瘤的生长。 展开更多
关键词 脱落酸 肺腺癌细胞系spc-a1 自噬 BECLIN-1 LC3
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尿刊酸修饰的壳聚糖介导野生型p53基因转染对人肺腺癌细胞系H1299增殖和凋亡的影响 被引量:1
2
作者 王伟 姚静 +2 位作者 周建平 李夷平 陶磊 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期440-444,共5页
目的:研究尿刊酸修饰的壳聚糖(UAC)介导野生型p53(wt-p53)基因转染对人肺腺癌细胞系H1299(p53基因缺失)的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法:UAC介导wt-p53基因转染H1299细胞后,采用荧光显微术、RT-PCR法和West-ernblot法分别检测细胞内绿... 目的:研究尿刊酸修饰的壳聚糖(UAC)介导野生型p53(wt-p53)基因转染对人肺腺癌细胞系H1299(p53基因缺失)的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法:UAC介导wt-p53基因转染H1299细胞后,采用荧光显微术、RT-PCR法和West-ernblot法分别检测细胞内绿色荧光蛋白(GFP)、wt-p53mRNA和蛋白的表达,并通过MTT法分析基因转染对细胞的生长抑制作用,DAPI染色法和琼脂糖凝胶电泳法评价其对细胞的诱导凋亡作用。结果:UAC介导wt-p53基因转染H1299细胞后,大量细胞表达GFP,细胞内wt-p53mRNA和蛋白表达水平明显上调,细胞生长受到显著地抑制,凋亡细胞数量明显增加,并有清晰的DNA梯状条带出现。结论:UAC介导wt-p53基因转染能够显著地抑制人肺腺癌细胞系H1299的增殖,并诱导其凋亡。 展开更多
关键词 尿刊酸修饰的壳聚糖 野生型P53 癌细胞 增殖 凋亡
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内皮素-1对人肺腺癌细胞SPC-A1生长的影响
3
作者 叶倩君 周娟 张为民 《中国肺癌杂志》 CAS 2007年第1期1-4,共4页
背景与目的内皮素-1(endothelin-1,ET-1)是强大的细胞促有丝分裂素,在一些肿瘤细胞生长和肿瘤血管新生中起重要作用。本研究的目的是探讨ET-1对人肺腺癌细胞SPC-A1生长的影响。方法采用细胞体外培养技术,四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimet... 背景与目的内皮素-1(endothelin-1,ET-1)是强大的细胞促有丝分裂素,在一些肿瘤细胞生长和肿瘤血管新生中起重要作用。本研究的目的是探讨ET-1对人肺腺癌细胞SPC-A1生长的影响。方法采用细胞体外培养技术,四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide,MTT]显色分光光度法测细胞增殖,流式细胞仪测细胞周期。结果ET-1(1×10^-15-1×10^-9mol/L)具有促进SPC-A1细胞增殖作用,作用呈浓度依赖性,在1×10-11mol/L时作用呈饱和状态;ET-1(1×10^-10mol/L)促SPC-A1细胞增殖作用可被内皮素受体A(endothelin receptor A,ETA)拮抗剂BQ123(1×10^-7mol/L)阻断,但不受内皮素受体B(endothelin receptor B,ETB)拮抗剂BQ788(1×10^-7mol/L)影响;用乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)(0.4mmol/L)去除细胞外钙离子及电压依赖型Ca2+通道阻滞剂硝苯地平(nifedipine,1μmol/L)能抑制ET-1诱导的肺腺癌细胞增殖。ET-1(1×10^-10mol/L)对SPC-A1细胞周期没有显著影响。结论ET-1为促SPC-A1细胞生长因子,ET-1促肺腺癌细胞生长的作用主要通过SPC-A1细胞表面ETA受体实现,细胞外钙离子通过电压依赖型Ca^2+通道内流在ET-1促肺腺癌细胞生长中起重要作用。 展开更多
关键词 内皮素-1 癌细胞 细胞增殖
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重组人白细胞介素-4对人肺腺癌细胞SPC-A_1/TAX化疗增敏研究
4
作者 林安华 李羲 《中国肺癌杂志》 CAS 2005年第3期233-235,共3页
关键词 癌细胞spc-a1 细胞介素-4 化疗增敏 细胞多药耐药性 TAX 重组人 rhIL-4 化疗药物 癌细胞分化 上升趋势 综合治疗 化疗失败 逆转方法 产生机制 肿瘤细胞 死亡率 发病率 可替代 针对性 敏感性 MDR 严重 临床
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RAB5A对人肺腺癌细胞系侵袭转移作用的研究 被引量:3
5
作者 王春梅 李钰 +3 位作者 高凌寒 刘芳莉 傅松滨 李璞 《中国肺癌杂志》 CAS 2002年第5期326-329,共4页
目的 探讨RAB5A基因在人肺腺癌细胞系侵袭和转移中的作用。方法 采用体外重建基底膜侵袭实验和癌细胞粘附能力、癌细胞趋化性运动能力、癌细胞分泌明胶酶的能力及活性的测定 ,分析RAB5A正义真核表达载体转染后的AGZY83 a和反义RNA转... 目的 探讨RAB5A基因在人肺腺癌细胞系侵袭和转移中的作用。方法 采用体外重建基底膜侵袭实验和癌细胞粘附能力、癌细胞趋化性运动能力、癌细胞分泌明胶酶的能力及活性的测定 ,分析RAB5A正义真核表达载体转染后的AGZY83 a和反义RNA转染后的Anip973细胞的侵袭、转移能力的改变。结果 RAB5A正义表达载体PcDNA3.1 RAB5A转染的AGZY83 a重建基底膜侵袭能力明显增强 ,统计学意义显著 (P <0 .0 0 0 5 ) ,细胞趋化性运动能力显著增高 (P <0 .0 0 0 5 ) ,对基底膜成分的粘附能力增大 (P <0 .0 5 ) ,以及明胶酶分泌及活性增强等一系列趋向Anip973的变化。PcDNA3 AntiRAB5A反义RNA表达载体对Anip973重建基底膜侵袭力明显下降 (P <0 .0 0 2 5 ) ,趋化性运动能力显著降低 (P <0 .0 0 5 ) ,对基底膜成分粘附能力降低 (P <0 .0 5 ) ,以及明胶酶分泌减少等一系列趋向AGZY83 a的变化。结论 RAB5A在肺腺癌侵袭转移表型形成中发挥重要的作用。 展开更多
关键词 1RAB5A 癌细胞 肿瘤转移 反义RNA
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紫杉醇诱导人肺腺癌多药耐药细胞系的建立及DNA polβ、mdr1、mrp1、GST-πl、rp和topo Ⅱ基因的表达 被引量:4
6
作者 王志举 樊红琨 +2 位作者 李敏 赵国强 董子明 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期358-363,共6页
目的体外建立人肺腺癌细胞多药耐药细胞系,观察其生物学特性并探讨其细胞内DNA polβ和多药耐药基因mdr1、mrp1、GST-πl、rp和topo Ⅱ的表达及意义。方法以紫杉醇为诱导药,采用间歇逐步增加剂量法建立人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20... 目的体外建立人肺腺癌细胞多药耐药细胞系,观察其生物学特性并探讨其细胞内DNA polβ和多药耐药基因mdr1、mrp1、GST-πl、rp和topo Ⅱ的表达及意义。方法以紫杉醇为诱导药,采用间歇逐步增加剂量法建立人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20;MTT法检测A549/TXL20对紫杉醇、顺铂、长春新碱、5-氟尿嘧啶和丝裂霉素的耐药指数(RF);细胞克隆形成法测定A549/TXL20对紫杉醇的敏感性;高效液相色谱测定细胞内紫杉醇的浓度;RT-PCR法测定人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20中DNA polβ、mdr1、GST-π、mrp1l、rp和topo Ⅱ的基因表达。结果①A549/TXL20形态不规则,较亲本细胞略小,核/浆比增加,倍增时间没有明显变化;②A549/TXL20对紫杉醇的RF为19.3,对顺铂的RF为67.4,对长春新碱、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素和顺铂等抗癌药物有不同程度的耐药性;③A549/TXL20对紫杉醇的敏感性降低,其紫杉醇的含量较亲本细胞下降;④A549/TXL20细胞中DNA polβ、mdr1、GST-π、mrp1l、rp的基因表达量分别较A549细胞中的表达量明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论建立了相对稳定的人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TXL20,其耐药机制可能与mdr1、GST-π、mrp1l、rp和DNA polβ基因的高表达有关。 展开更多
关键词 癌细胞 多药耐药 紫杉醇 DNA聚合酶Β
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不同培养方式中肺腺癌细胞系A549表达E-钙粘素的差异及其意义 被引量:3
7
作者 黄海辉 胡绍毅 +2 位作者 边志衡 何建明 梁后杰 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第24期2185-2187,共3页
目的 初步探讨E 钙粘素在肿瘤群集耐药中的可能机制。方法 采用旋转培养瓶结合台式水浴恒温振荡器旋转培养的方法 ,进行肺腺癌细胞A5 49体外立体培养 ,同时进行普通平面培养 ,通过流式细胞技术、Westernblot、原位细胞凋亡检测试剂盒... 目的 初步探讨E 钙粘素在肿瘤群集耐药中的可能机制。方法 采用旋转培养瓶结合台式水浴恒温振荡器旋转培养的方法 ,进行肺腺癌细胞A5 49体外立体培养 ,同时进行普通平面培养 ,通过流式细胞技术、Westernblot、原位细胞凋亡检测试剂盒、四唑盐 (MTT)比色法及血球计数器计数法检测细胞周期 ,E 钙粘素的表达 ,细胞凋亡率及对阿霉素(ADM)敏感性。结果 ①立体培养细胞存在E 钙粘素的高表达 ;②同平面培养比较 ,立体培养细胞出现细胞周期G1 期阻滞、细胞凋亡率低、对ADM敏感性低等表现 ,给予E 钙粘素阻滞剂SHE78 7后 ,两者差异明显缩小。结论 E 钙粘素介导的细胞 细胞粘附作用可通过调控细胞周期以及细胞凋亡 ,影响肺腺癌A5 49细胞对ADM的敏感性 ,在肿瘤群集耐药中发挥作用。 展开更多
关键词 癌细胞 A549 E-钙粘素 细胞周期 细胞凋亡 群集耐药
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人肺腺癌细胞系A549细胞双向电泳-飞行时间质谱研究 被引量:4
8
作者 杨拴盈 田应选 +3 位作者 南岩东 卜丽娜 霍树芬 阮禹松 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期422-426,共5页
目的初步分析人肺腺癌细胞系A549细胞蛋白质表达情况,从蛋白组水平探讨肺腺癌发病的分子机制。方法应用2-DE技术对人肺腺癌细胞系A549细胞总蛋白进行分离,获得蛋白质表达谱;应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)结合生... 目的初步分析人肺腺癌细胞系A549细胞蛋白质表达情况,从蛋白组水平探讨肺腺癌发病的分子机制。方法应用2-DE技术对人肺腺癌细胞系A549细胞总蛋白进行分离,获得蛋白质表达谱;应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)结合生物信息学进行蛋白质鉴定。结果3块胶平均蛋白斑点数为1 138±49,平均匹配点数为986±32,匹配率为85.8%。随机选取背景清晰、分辨清楚、蛋白含量较高的20个斑点进行MALDI-TOF-MS分析,共获得了18个肽质量指纹图谱(PMF)。将PMFs质量数据通过Aldente软件查询SWISS-PROT数据库,根据匹配片段及氨基酸序列覆盖率等,初步鉴定出15种蛋白质。根据功能,这些蛋白质可分为:①基本代谢相关的酶类:果糖2-磷酸醛缩酶、视网醛脱氢酶1(RALDH1)、吡多醛激酶;②细胞骨架类:蛋白细胞角蛋白8(CK8)、-β2链微管蛋白;③应激相关蛋白:蛋白二硫化物异构酶A3(PDIA3);④信号转导分子:膜联蛋白1(ANX1)、膜联蛋白4(ANX4);⑤分子伴侣:热休克蛋白60(HSP60)、热休克蛋白-β1、抑制素(PHB);⑥转录及翻译相关蛋白:不均一性核糖核蛋白H(hnRNP H);⑦杂类:Rgr protein、NPM、PCBP1。结论应用2-DE/MALDI-MS方法获得了较为理想的人肺腺癌细胞系A549细胞2-DE蛋白质表达谱,初步鉴定了15种蛋白质。 展开更多
关键词 癌细胞 蛋白质组学 双向电泳 基质辅助激光解吸离子化电离飞行时间质谱 肽指纹图谱
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Ad-ING4联合放疗抑制肺腺癌SPC-A1细胞移植瘤的生长 被引量:1
9
作者 赵大国 黄锦宏 +4 位作者 金钧 谢宇峰 盛伟华 杨吉成 凌春华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期166-171,共6页
目的:研究腺病毒介导的肿瘤生长抑制因子4(inhibitor of growth family 4,ING4)联合放疗对肺腺癌SPC-A1细胞移植瘤生长的抑制作用。方法:制备SPC-A1细胞荷瘤小鼠模型,随机分为PBS组、Ad组、Ad-ING4组、放疗组、Ad-ING4+放疗组。测量各... 目的:研究腺病毒介导的肿瘤生长抑制因子4(inhibitor of growth family 4,ING4)联合放疗对肺腺癌SPC-A1细胞移植瘤生长的抑制作用。方法:制备SPC-A1细胞荷瘤小鼠模型,随机分为PBS组、Ad组、Ad-ING4组、放疗组、Ad-ING4+放疗组。测量各组荷瘤小鼠移植瘤的体积变化,治疗15 d后摘取瘤块,称质量并计算抑瘤率;H-E染色观察瘤体组织细胞的形态学变化,免疫组化法检测瘤体组织中Bax、caspase-3、Bcl-2、VEGF等因子的表达。结果:治疗后第15天SPC-A1移植瘤体积:Ad-ING4组为(1 136.03±151.58)mm3、单纯放疗组为(1 035.67±86.27)mm3、Ad-ING4+放疗组为(743.84±109.06)mm3,联合组可有效抑制肿瘤生长(P<0.01);此外,联合组抑瘤率也显著高于单纯Ad-ING4组或放疗组(69.62%vs 33.17%、35.41%,P<0.01),呈现放疗增敏协同作用(Q=1.22)。免疫组化结果显示,Ad-ING4及其联合放疗组能明显上调Bax、caspase-3等蛋白的表达,下调Bcl-2、VEGF等蛋白的表达,且Ad-ING4+放疗组对这些蛋白表达的调节作用强于Ad-ING4组、单纯放疗组(P<0.01)。结论:Ad-ING4联合放疗可有效抑制肺腺癌SPC-A1细胞移植瘤的生长。 展开更多
关键词 spc-a1细胞 移植瘤 生长抑制因子4 放疗 生长抑制
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CIK细胞联合多西紫杉醇对肺腺癌耐药细胞SPC-A1/DTX的体内外杀伤作用的实验研究 被引量:8
10
作者 刘鹏英 陈龙邦 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1079-1083,共5页
目的:探讨正常人细胞因子诱导的杀伤(Cytokine induced-killer,CIK)细胞联合多西紫杉醇对肺腺癌多西紫杉醇耐药细胞SPC-A1/DTX的体内外杀伤作用。方法:取健康人外周血单个核细胞,经IFN-γ、IL-2、抗CD3单抗联合诱导CIK细胞,用四甲基偶... 目的:探讨正常人细胞因子诱导的杀伤(Cytokine induced-killer,CIK)细胞联合多西紫杉醇对肺腺癌多西紫杉醇耐药细胞SPC-A1/DTX的体内外杀伤作用。方法:取健康人外周血单个核细胞,经IFN-γ、IL-2、抗CD3单抗联合诱导CIK细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定多西紫杉醇、CIK细胞及两者联合对耐药细胞SPC-A1/DTX体外的细胞毒活性。用肺腺癌耐药细胞SPC-A1/DTX建立裸鼠皮下移植瘤模型,2周后腹腔给予生理盐水(对照组)、多西紫杉醇(单纯化疗组)、CIK细胞和CIK细胞联合多西紫杉醇(联合治疗组),观察它们对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。结果:体外实验表明,SPC-A1/DTX对多西紫杉醇的耐受性(IC50为110.5μg/ml)较亲代敏感株SPC-A1(IC50为8.5μg/ml)增加了13倍。CIK细胞对人肺腺癌多西紫杉醇耐药细胞SPC-A1/DTX的杀伤活性,明显高于其亲代敏感株SPC-A1(P<0.05)。经CIK细胞作用后的SPC-A1/DTX细胞,仅10μg/ml的DTX即可使CIK:SPC-A1/DTX效靶比为5:1组中的联合杀伤率比单纯加DTX(同等剂量)组增加6.1倍,比单纯加CIK(相同效靶比)细胞杀伤率增加1.4倍,联合杀伤率的大小随效靶细胞比值和DTX浓度的升高呈依赖性增加。体内实验表明,CIK细胞联合多西紫杉醇可明显抑制裸鼠皮下肺腺癌耐药细胞移植瘤的生长,联合治疗组肿瘤生长缓慢,肿瘤组织坏死、淋巴细胞浸润明显。结论:CIK细胞联合多西紫杉醇能够显著抑制体内外肺腺癌多药耐药细胞SPC-A1/DTX的生长,为临床上应用CIK细胞联合化疗治疗放、化疗等无效的中晚期耐药肺癌患者提供了实验依据。 展开更多
关键词 多药耐药 过继性细胞免疫治疗 细胞因子诱导的杀伤细胞 癌耐药细胞spc-a1/DTX
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白藜芦醇抑制A549人肺腺癌细胞增殖与IGF-ⅠR的关系 被引量:2
11
作者 朱剑武 夏蕾 +6 位作者 杨剑 罗维 李娟 周芊 曾林立 王东 杨镇洲 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第24期2567-2570,共4页
目的探讨白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制效应及其与IGF-ⅠR的关系。方法以人肺腺癌A549细胞株为研究对象,采用MTT方法测定细胞增殖,用RT-PCR与免疫印迹方法测定IGF-Ⅰ受体mRNA与蛋白表达水平。结果 2.5~15 nmol/L IGF-Ⅰ可显著... 目的探讨白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制效应及其与IGF-ⅠR的关系。方法以人肺腺癌A549细胞株为研究对象,采用MTT方法测定细胞增殖,用RT-PCR与免疫印迹方法测定IGF-Ⅰ受体mRNA与蛋白表达水平。结果 2.5~15 nmol/L IGF-Ⅰ可显著促进A549细胞增殖(P<0.05),给予12.5、25.0、50μmol/L白藜芦醇对A549细胞增殖具有明显抑制作用(P<0.05)。白藜芦醇(6.25~50μmol/L)与10 nmol/L IGF-Ⅰ共作用于A549细胞,均可抑制IGF-Ⅰ的促A549细胞增殖作用,其中尤以25、50μmol/L白藜芦醇的抑制增殖作用显著(P<0.05),白藜芦醇可有效降低IGF-ⅠR mRNA与蛋白表达。结论白藜芦醇可通过降低IGF-ⅠR mRNA与蛋白表达有效抑制IGF-Ⅰ介导的A549肺癌细胞增殖。 展开更多
关键词 白藜芦醇 胰岛素样生长因子-1 胰岛素样生长因子-1受体 癌细胞A549
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低氧对人肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-1α和低氧诱导因子-2α的差异性调控作用 被引量:2
12
作者 贺承健 邓立普 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第33期3833-3836,共4页
目的探讨低氧对肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-lα(HIF-lα)和低氧诱导因子-2α(HIF-2α)的差异性调控作用及其原因。方法体外培养肺腺癌细胞系SPCA-1细胞在常氧、低氧条件下培养不同时间,采用RT-PCR和Western blot检测低氧对HIF-2α和H... 目的探讨低氧对肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-lα(HIF-lα)和低氧诱导因子-2α(HIF-2α)的差异性调控作用及其原因。方法体外培养肺腺癌细胞系SPCA-1细胞在常氧、低氧条件下培养不同时间,采用RT-PCR和Western blot检测低氧对HIF-2α和HIF-lα基因的激活作用。通过加入线粒体活性氧族阻断剂观察低氧对HIF-2α和HIF-lα蛋白表达的影响,探讨其表达调控的机制。结果正常氧条件下,SPCA-1整细胞提取物和细胞核提取物中,HIF-1α几乎不表达,HIF-2α在整细胞提取物中有少量表达,但在细胞核提取物中无明显表达。经低氧(0.5%O2)处理4 h后,HIF-2α和HIF-1α蛋白均明显增多;HIF-2α和HIF-1α蛋白与细胞浓度、氧浓度有关;HIF-1α蛋白在低氧4 h后增加,6 h后显著降低,而HIF-2α蛋白低氧4 h增加后并保持于此水平。HIF-1αmRNA水平在低氧6~12 h时降低,而HIF-2αmRNA表达持续升高;经线粒体活性氧族阻断剂鱼藤酮、二亚苯基碘鎓和粘噻唑菌醇处理4 h后,HIF-2α和HIF-lα蛋白水平明显降低。结论低氧可在肺腺癌细胞诱导HIF-1α和HIF-2α基因表达;HIF-2α与HIF-1α的mRNA和蛋白水平在细胞低氧适应反应的不同时段有所不同,翻译后修饰在低氧对HIF-1α和HIF-2α的诱导中发挥重要作用;低氧很可能是通过相同的信号通路发挥对HIF-2α和HIF-1α的诱导调控作用。 展开更多
关键词 低氧诱导因子-1Α 低氧诱导因子-2α 癌细胞 细胞低氧
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RASSF1A基因转染对人肺腺癌细胞株A549增殖的抑制作用 被引量:1
13
作者 邓征浩 周建华 +2 位作者 曹慧秋 沈明 文继舫 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期193-196,共4页
目的:观察外源性RASSF1A基因对人肺腺癌细胞A549增殖及NF κB亚单位P65表达的影响。方法:利用脂质体转染技术将真核表达重组体pcDNA3. 0 RASSF1A质粒和空载体pcDNA3. 0质粒分别导入A549细胞,经G418筛选后获得稳定转染细胞克隆,Westernbl... 目的:观察外源性RASSF1A基因对人肺腺癌细胞A549增殖及NF κB亚单位P65表达的影响。方法:利用脂质体转染技术将真核表达重组体pcDNA3. 0 RASSF1A质粒和空载体pcDNA3. 0质粒分别导入A549细胞,经G418筛选后获得稳定转染细胞克隆,Westernblotting检测RASSF1A基因表达。采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法、流式细胞仪分析转染细胞的生物学行为。RT PCR和Westernblotting检测基因转染对P65表达的影响。结果:经脂质体转染和筛选,建立了稳定表达RASSF1A基因的A549细胞系。与未转染组和转染空白载体组比较,转染RASSF1A基因的细胞生长速度明显减慢(P<0. 05),细胞周期中G1 /G0期比例明显增加(P<0. 05),而S期比例减少;转染组细胞核内P65蛋白表达明显降低(P<0. 05),而全细胞P65蛋白及mRNA表达未见明显变化。结论:RASSF1A基因可能通过抑制P65活性而抑制人肺腺癌细胞A549的生长。 展开更多
关键词 基因转染 细胞株A549 RASSF1A基因 抑制作用 癌细胞A549 增殖 blotting Western pcDNA3 真核表达重组体 脂质体转染技术 四甲基偶氮唑盐 流式细胞仪分析 A549细胞 RT-PCR mRNA表达 P65 生物学行为 B亚单位
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缺氧对肺腺癌细胞A549MMP-9、TIMP-1表达的影响
14
作者 徐丹 文富强 +3 位作者 汪涛 应斌武 王可 胡晓波 《实用医学杂志》 CAS 2008年第1期7-9,共3页
目的:研究缺氧条件下基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的表达变化规律。方法:人肺腺癌细胞A549常氧/缺氧培养,酶谱法测定培养基中MMP-9酶活性,免疫细胞化学、免疫印迹技术分别检测MMP-9及TIMP-1原位蛋白... 目的:研究缺氧条件下基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的表达变化规律。方法:人肺腺癌细胞A549常氧/缺氧培养,酶谱法测定培养基中MMP-9酶活性,免疫细胞化学、免疫印迹技术分别检测MMP-9及TIMP-1原位蛋白及分泌蛋白表达量。结果:MMP-9、TIMP-1的阳性染色颗粒主要呈胞浆着色。缺氧48h内,MMP-9酶活性、原位蛋白及分泌蛋白表达均无显著变化;随缺氧时间延长,TIMP-1原位蛋白及分泌蛋白表达均有升高趋势(P<0.05)。结论:缺氧24h内MMP-9表达不增加,可能与癌基因、激酶活化引发的细胞筛选有关;TIMP-1在缺氧状态下表达增多,可能与其多种功能相关。 展开更多
关键词 缺氧 明胶酶B 癌细胞 金属蛋白酶组织抑制因子-1
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呼吸道合胞病毒M_(2-1)基因转染人肺腺癌细胞(PAa)后的电镜观察
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作者 陈杭薇 夏永宏 +2 位作者 邬光惠 尤兰华 张利群 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期519-522,共4页
目的:探讨呼吸道合胞病毒(RSV)M2 1基因致癌的超微形态学依据。方法:应用超薄切片电镜技术对比观察RSVM2 1基因转染前后人肺腺癌细胞(PAa)的超微结构改变。结果:转染后肺腺癌细胞(PAa M2 1)呈现低分化超微结构特征:细胞膜表面微绒毛减... 目的:探讨呼吸道合胞病毒(RSV)M2 1基因致癌的超微形态学依据。方法:应用超薄切片电镜技术对比观察RSVM2 1基因转染前后人肺腺癌细胞(PAa)的超微结构改变。结果:转染后肺腺癌细胞(PAa M2 1)呈现低分化超微结构特征:细胞膜表面微绒毛减少或缺如;细胞核明显增大,核浆比例增大,多见畸形核和双核,并可见巨大或多个核仁。核膜不规则,呈锯齿状或佛手状,核质富含常染色质。癌细胞胞浆少,以游离核糖体为主,其他细胞器稀少。偶见癌细胞凋亡。未转染肺腺癌细胞(PAa)呈现高分化超微结构特征:细胞表面有许多微绒毛;胞浆内有较多发育完好的细胞器。结论:RSVM2 1基因的转染和表达可诱导和促进PAa细胞去分化,其变化的分子机理有待进一步探讨。 展开更多
关键词 转染 M2-1基因 癌细胞 呼吸道合胞病毒 胞浆 RSV PA 细胞 超微形态 超微结构特征
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小鼠肺腺癌细胞系(LA-795)高、低转移亚系染色体核型比较研究
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作者 张海伟 王惠华 戴云 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 1995年第4期1-7,共7页
对小鼠肺腺癌细胞系(LA-795)高、低转移亚系(LA-795-C_6和LA-795-C_7)体外培养第20及30代细胞染色体G显带核型进行比较,结果高转移亚系细胞染色体众数较低转移亚系细胞具有不稳定性的特点,表明转... 对小鼠肺腺癌细胞系(LA-795)高、低转移亚系(LA-795-C_6和LA-795-C_7)体外培养第20及30代细胞染色体G显带核型进行比较,结果高转移亚系细胞染色体众数较低转移亚系细胞具有不稳定性的特点,表明转移潜能的差异和遗传物质的稳定程度密切相关.高、低转移亚系出现相同及不同的标志染色体和异常染色体,其中,高转移亚系出现标志染色体8种及del(8)q ̄(ter),del(12)q ̄(ter),11P ̄+,13P ̄+,tri(2M4),dic(2M5),M6:7q ̄+?;而低转移潜能亚系出现标志染色体12种及del(8)q ̄(ter),del(12)q ̄(ter),r(15),dic(M6;2M7),M8:7q ̄_?t(2:2),t(2:15),t(15:M10),t(15:M11),t(5:M12).表明来源于同一母系而转移潜能不同的亚系染色体核型具有本质上的差异,转移潜能与其密切相关.另外,分析低转移亚系出现t(2:2);t(C2:15)t(15:M10);t(15:M11); t(5:M12);r(15)等现象,推测高、低转移潜能亚系细胞可能存在本身H-2系统及CD44抗元表达的差异,这很可能? 展开更多
关键词 核型 癌细胞 染色体 低转移亚
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过表达水通道蛋白1(AQP1)促进A549人肺腺癌细胞的增殖并抑制β联蛋白(β-catenin)磷酸化 被引量:2
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作者 王会峰 董辉 +2 位作者 吴媛媛 乔立娇 金向明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期413-418,共6页
目的探讨水通道蛋白1(AQP1)基因的过表达对A549人肺腺癌细胞增殖的影响及可能机制。方法构建和包装AQP1慢病毒过表达载体,感染A549细胞,实时荧光定量PCR检测AQP1 mRNA水平,Western blot法检测AQP1蛋白水平。在A549细胞过表达AQP1后,噻唑... 目的探讨水通道蛋白1(AQP1)基因的过表达对A549人肺腺癌细胞增殖的影响及可能机制。方法构建和包装AQP1慢病毒过表达载体,感染A549细胞,实时荧光定量PCR检测AQP1 mRNA水平,Western blot法检测AQP1蛋白水平。在A549细胞过表达AQP1后,噻唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖,细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,并以Western blot法检测细胞β联蛋白(β-catenin)磷酸化水平。结果成功构建AQP1过表达慢病毒载体,病毒滴度为(2.87±0.54)×10~8 IU/mL;慢病毒载体感染A549细胞后,细胞AQP1 mRNA和蛋白水平显著增加;细胞增殖能力显著提高,细胞克隆形成数显著上升;β-catenin总蛋白水平增加,但β-catenin磷酸化显著降低。结论过表达AQP1促进A549细胞增殖并抑制β-catenin的磷酸化。 展开更多
关键词 水通道蛋白1(AQP1) 细胞增殖 A549人癌细胞
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OrfA与E2F5的互作关系及其对肺腺癌细胞增殖的影响
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作者 穆璐 张潇筠 +3 位作者 韩宝泉 陈昱光 张智英 徐坤 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2021年第12期11-17,27,共8页
【目的】确认大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤病毒(WDSV)辅助因子OrfA与转录因子E2F5的互作关系,以及OrfA对肿瘤细胞增殖的影响。【方法】采用重组DNA技术构建orfA与E2F5基因过表达载体;通过Western Blot试验,检测对比HEK293T、Hela229宫颈癌细胞、A... 【目的】确认大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤病毒(WDSV)辅助因子OrfA与转录因子E2F5的互作关系,以及OrfA对肿瘤细胞增殖的影响。【方法】采用重组DNA技术构建orfA与E2F5基因过表达载体;通过Western Blot试验,检测对比HEK293T、Hela229宫颈癌细胞、A375恶性黑色素瘤细胞、SMMC-7721肝癌细胞和SPC-A-1肺腺癌细胞中E2F5的表达量;通过酵母双杂交和免疫共沉淀试验,验证OrfA与E2F5的互作关系;采用CCK-8试剂盒和PI单染色法,检测过表达orfA基因对SPC-A-1细胞增殖的影响;采用RT-qPCR,检测过表达orfA基因对SMAD4和caspase-3基因表达的影响。【结果】成功构建了orfA与E2F5基因过表达载体pLenti-EF1α-orfA和pLenti-EF1α-E2F5;在5种细胞系中,以SPC-A-1细胞E2F5蛋白表达量最高;酵母双杂交和免疫共沉淀试验结果均证明,OrfA与E2F5可以直接相互作用;过表达orfA基因对SPC-A-1细胞增殖具有显著促进作用,同时能够增强SMAD4基因的表达,抑制caspase-3基因的表达。【结论】WDSV OrfA与E2F5有相互作用,且能促进SPC-A-1肺腺癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 逆转录病毒周期蛋白(OrfA) E2F5转录因子 spc-a-1癌细胞 细胞增殖
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水通道蛋白在人肺腺癌细胞株中的表达和意义 被引量:8
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作者 陈杰 白春学 +2 位作者 张敏 任振义 胡洁 《中国肺癌杂志》 CAS 2004年第3期199-201,共3页
目的 探讨水通道蛋白在人肺腺癌细胞株SPC A 1中的表达及其意义。方法 利用半定量逆转录PCR和免疫组织化学染色分析水通道蛋白 1、3、4、5在SPC A 1细胞中的表达。结果 免疫组化染色显示水通道蛋白 3和水通道蛋白 5在SPC A 1细胞膜... 目的 探讨水通道蛋白在人肺腺癌细胞株SPC A 1中的表达及其意义。方法 利用半定量逆转录PCR和免疫组织化学染色分析水通道蛋白 1、3、4、5在SPC A 1细胞中的表达。结果 免疫组化染色显示水通道蛋白 3和水通道蛋白 5在SPC A 1细胞膜上呈阳性染色 ,而水通道蛋白 1和水通道蛋白 4未见阳性染色。半定量逆转录PCR结果显示SPC A 1细胞水通道蛋白 3和水通道蛋白 5mRNA表达阳性 ,后者表达水平显著高于前者 (P <0 .0 1) ;水通道蛋白 1和水通道蛋白 4mRNA未见表达。结论 人肺腺癌细胞株SPC A 1中有水通道蛋白 3和水通道蛋白 5表达 。 展开更多
关键词 水通道蛋白 癌细胞 spc-a-1细胞
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羟基喜树碱联合放射对人肺腺癌细胞协同杀伤作用的实验研究 被引量:5
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作者 马胜林 戴惠芳 +1 位作者 陈旭峰 冯建国 《中国肺癌杂志》 CAS 2000年第5期344-347,共4页
目的 研究羟基喜树碱联合放射对人肺腺癌细胞的协同杀伤作用。方法 应用四唑盐比色试验 (MTT)检测细胞抑制百分比 ,DNA琼脂糖电泳检测DNA“Ladder”及流式细胞术检测细胞周期及凋亡峰的比例。结果 羟基喜树碱对该细胞的抑制呈剂量及... 目的 研究羟基喜树碱联合放射对人肺腺癌细胞的协同杀伤作用。方法 应用四唑盐比色试验 (MTT)检测细胞抑制百分比 ,DNA琼脂糖电泳检测DNA“Ladder”及流式细胞术检测细胞周期及凋亡峰的比例。结果 羟基喜树碱对该细胞的抑制呈剂量及时间依赖关系 ,且明显阻滞细胞于S期 ,低浓度的羟基喜树碱 (1μg/ml)作用 48小时 ,细胞开始出现凋亡小峰 ,高浓度的羟基喜树碱 (5 0 μg/ml)作用 2 4小时就出现明显的凋亡小峰。单纯放射 (6Gy)后 48小时细胞出现DNA“Ladder”条带 ,单纯羟基喜树碱 (1μg/ml)作用后 2 4~ 72小时 ,细胞出现DNA“Ladder”条带及凋亡小峰 ,细胞经羟基喜树碱联合放射作用后的 0~ 72小时均出现DNA“Ladder”条带及凋亡小峰。 展开更多
关键词 羟基喜树碱 放射 癌细胞 协同作用
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